摇床培养确定酵母菌的培养条件或营养条件完整版
酵母菌的分离及培养条件的优化
2. 酵母浸液0.5g (NH4)2SO4 2g 葡萄糖1g (2) 1.酵母浸液0.5g NH4NO3 1g 葡萄糖1g
2. 酵母浸液0.5g NH4NO3 2g 葡萄糖1g
(3) 1.酵母浸液0.5g NaNO3 1g 葡萄糖1g • 2. 酵母浸液0.5g NaNO3 2g 葡萄糖1g • 3.对比试验:酵母浸液0.5g 蛋白胨1g 葡萄糖1g • 4.配置完毕调PH值 PH等于5为准确 • 包三个移液管然后将以上培养基一起拿去灭菌
• 5.3减少进气量，控制罐压在0.02MPa左右后，点 燃接种火圈内的酒精棉球。
• 5.4 拧下进料口螺盖，放入盛有酒精的培养皿中。
• 5.5将接种瓶是瓶口在火焰上烧一下，并在火焰的 保护下拔下瓶塞，迅速将菌种倒入发酵罐内。
• 5.6旋上进料口螺盖后灭火焰，拧紧螺盖，并用酒 精棉球将进料口擦洗干净。
二、配制
1、配多少培养基 10L罐装料量60%：10X60%=6L 接种量10%：培养基5400ml(实际操作培养基
5000ml)，种子液600ml 2、配方用多少
6L:60g酵母浸粉1%,120gc120g葡萄糖2%； 150ml:1.5g酵母浸粉1%,3g酵母浸粉1%,3g葡 萄糖2%.其中100ml加1g琼脂配成固体培养基用于 倒平板；50g原液用于测OD时做标准液。 3、所需器材包扎灭菌 4个装有9ml蒸馏水的试管，6个空试管，4个涂 布器，4个移液管1ml，6个平板
四 实验内容
1、分离单菌落
（1）实验物品灭菌
仪器：包扎9个移液管、9个涂布器、9个装有9ml 蒸馏水的试管、16个平板、
液体：3g酵母浸粉1%、6g蛋白胨2%、6g葡萄糖 2%，配成300ml溶液，取240ml溶液平均分装两个三 角瓶中，然后每个三角瓶放入2.4g琼脂，剩下60ml 为液体培养基，然后将以上设备拿去灭菌
酵母菌表面展示操作步骤之菌株培养条件设定
酵母菌表面展示操作步骤之菌株培养条件设定酵母菌表面展示是一种常用的生物技术手段，用于将外源蛋白在酵母菌表面进行展示。
为了确保表面展示效果的高效和稳定，必须设置适当的菌株培养条件。
本文将介绍酵母菌表面展示操作步骤中的菌株培养条件设定。
1. 选择合适的酵母菌菌株：在进行酵母菌表面展示操作前，首先需要选择合适的酵母菌菌株。
常用的酵母菌菌株有Saccharomyces cerevisiae和Pichia pastoris等。
选择酵母菌菌株时要考虑其生长速度、分泌能力和表面展示效果等因素。
2. 菌株预处理：将所选的酵母菌菌株从冰冻保存状态中取出，接种到适当的培养基中。
培养基的选择要根据具体的酵母菌菌株和表面展示目的而定，一般应包含适宜的碳源、氮源和其他必要的营养物质。
3. 菌株预培养：为了确保菌株的健康和活力，需要进行菌株的预培养。
将接种培养基的酵母菌菌株在适当的条件下进行预培养，通常是在摇床上以适当的转速和温度下培养一段时间，使菌株适应培养环境。
4. 菌株菌种扩大：预培养后的酵母菌菌株需要进行菌种扩大，以获得足够的菌量用于后续的表面展示实验。
通常将预培养菌种接种到适当体积的培养基中，继续在摇床上进行培养，直到菌株的菌量达到要求。
5. 菌株维持：在菌种扩大后，需要定期维护酵母菌菌株的健康状态，以保证菌株的活力和表面展示效果。
定期的菌株传代或重新冷冻保存是常见的维护方式。
6. 培养条件设定：酵母菌表面展示的培养条件需根据具体的实验要求进行设定。
下面是一些常见的因素和条件的考虑：- 温度：酵母菌的培养温度通常在25-30摄氏度之间，具体的温度要根据菌株和表面展示目的而定。
- pH值：不同的酵母菌菌株对pH值有不同的要求，一般在6.0-7.0之间。
可以通过添加缓冲溶液或者酸碱调节剂来调节培养基的pH值。
- 摇床转速：适当的摇床转速可以促进酵母菌菌株的生长和表面展示效果。
一般来说，摇床转速在150-200转/分钟之间。
实验 摇床培养确定食用菌培养和营养条件
实验一食用菌液态培养条件的研究食用菌固体菌种常规培养周期长,菌龄不一致,容易带来菌种质量不高的问题。
为了缩短原种或栽培种的制种时间，采用液体培养技术。
在液体培养中,菌丝体新陈代谢旺盛,菌丝生长分裂迅速,能在短时间内产生大量的菌丝体(菌种)。
并且液体菌种接入固体培养料时,又具有流动快,易分散,萌发快,发菌点多等特点。
菌种可进行工业化生产,生产周期短,菌龄整齐,发展食用菌液体培养技术前景广阔。
一、目的和要求1、掌握微生物斜面培养基、种子培养基及发酵培养基确定方法，学会对已确定菌种确定实验室发酵工艺。
2、筛选微生物最适生长及产物形成的营养条件和培养条件，确定特定产物发酵的工艺参数。
二、仪器与试剂1、菌种：黑平菇2、仪器设备：天平、电炉、烘箱、恒温振荡培养箱。
3、玻璃仪器（按20组准备，以下是每组需用量）三角瓶（棉塞）、接种铲、试管菌种、烧杯500 ml、量筒100 ml等三、实验步骤1、培养基配置（正交试验设计——培养基成分）2、接种3、培养（正交试验设计——培养条件确定）4、结果观察、检测（菌丝球直径、菌丝体积、生物量——比浊法和直接称重法、总糖、还原糖的测定）表1 培养基的配制正交表试验设计因素水平葡萄糖维生素B MgSO4KH2PO41 1.0 0.0 0.05 0.32 2.0 0.1 0.10 0.53 3.0 0.2 0.15 0.8424直径量1 (1) (1) (1) (1)2 (1) (2) (2) (2)3 (1) (3) (3) (3)4 (2) (1) (2) (3)5 (2) (2) (3) (1)6 (2) (3) (1) (2)7 (3) (1) (3) (2)8 (3) (2) (1) (3)9 (3) (3) (2) (1)表3 培养条件确定正交表试验设计因素水平接种量装液量温度振荡速度1 5% 25 25 1002 3% 50 28 1503 1% 100 30 300编号接种量装液量温度振荡速度菌丝球直径生物量多糖含量1 (1) (1) (1) (1)2 (1) (2) (2) (2)3 (1) (3) (3) (3)4 (2) (1) (2) (3)5 (2) (2) (3) (1)6 (2) (3) (1) (2)7 (3) (1) (3) (2)8 (3) (2) (1) (3)9 (3) (3) (2) (1)四、实验结果分析1、如何通过设计正交试验确定食用菌液态发酵的培养条件。
酵母菌表面展示操作步骤中的培养条件设定
酵母菌表面展示操作步骤中的培养条件设定酵母菌表面展示是一种重要的分子生物学技术，用于在酵母菌表面展示外源蛋白质。
这种技术可以用于研究蛋白质的功能、交互作用以及抗原表位的鉴定等。
在进行酵母菌表面展示实验时，设定适当的培养条件非常重要，下面将为您介绍一些常用的培养条件设定步骤。
1. 培养基选择：选择适合酵母菌生长的培养基。
常用的培养基包括YPD培养基（酵母提取物、蛋白胨和葡萄糖的混合物）和SD培养基（缺乏氨基酸和碳源的培养基）。
另外，还可以根据实验需要添加对应的营养物质，如有需要可添加适量的抗生素筛选。
2. 培养温度设定：酵母菌一般在30°C下培养。
如果需要进行过表达蛋白的酵母菌的培养，则可以降低培养温度至20°C。
培养温度的选择应取决于所研究蛋白质的最适生长条件。
3. pH设定：pH值是培养条件的重要参数之一。
酵母菌一般在pH 5-7的条件下生长。
在实验中，可以根据所研究蛋白质的最适生长条件来调整培养基的pH值。
4. 搅拌速度：对于酵母菌表面展示的培养过程，适当的搅拌速度可以提高酵母菌的生长和蛋白表达。
常用的搅拌速度为150-200rpm，但也可以根据实验需要进行调整。
5. 培养时间：培养时间的长短取决于所研究蛋白质的表达情况。
一般来说，培养时间应至少为48小时，以保证酵母菌能够充分生长和表达外源蛋白。
6. 培养体积：培养体积的选择应取决于研究需求。
如果需要大规模表达蛋白，则需要选择大容量的培养体积。
通常，培养液的体积不宜超过容器容积的1/3。
7. 氧气供应：酵母菌是好氧生物，因此充足的氧气供应对于其生长和表达外源蛋白非常重要。
可以通过适当的搅拌和通气来提供足够的氧气。
8. 原代菌种的选择：在进行酵母菌表面展示前，通常需要从冷冻甘油保存的菌种中提取出活菌。
选择适当的培养条件，如培养基和温度等，对于原代菌种的复苏和培养非常重要。
以上是酵母菌表面展示操作步骤中的常见培养条件设定步骤。
作业二：摇床培养确定菌体培养的营养条件和培养条件
作业二：摇床培养确定菌体培养的营养条件和培养条件
作业二：摇床培养确定菌体培养的营养
条件和培养条件
（一）目标：筛选微生物最适生长及产物形成的营养条件和培养条件，确定特定产物发酵的工艺参数。
（二）步骤
1、培养基的确定
（1）确定基础培养基
（2）查资料获得微生物的适宜的碳源种类和添加比例，并将基础培养基中的碳源分别换成各种待测碳源?（3）最高产物的两种碳源的浓度确定
（4）查资料获得微生物的适宜生长的氮源种类，计算基础培养基中氮源中氮素含量，按该含量计算每种待测氮
源的添加量，并将基础培养基中的氮源分别换成各种待测
氮源
（5）最高产物的两种氮源的浓度确定
（6）正交试验确定复合碳源和复合氮源种类及浓度
7）查资料获得微生物的适宜生长的微量元素种类和浓度，并将基础培养基中的微量元素去掉，分别换成各种待
测微量元素，确定增加产量的微量元素的种类和浓度?（8）生长因子的确定方法：同微量元素
（9）正交试验确定微量元素和生长因子的最适配伍种类和浓度
2、培养条件的确定
（1）在确定的培养基条件下查资料大致确定选定菌种的培养温度、初始p H、种龄、接种量、装液量、摇床转速
等指标，设定你所要进行的范围，并阐述理由。
（2）确定发酵周期
写出测定还原糖、a-氨基态氮、p H、细胞生长情况、产物形成情况的拟采取的测定方法，并根据资料大致分析你选定菌的取样点。
酵母菌的培养流程
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酵母菌培养操作
酵母菌培养操作一、引言酵母菌是一类单细胞真菌，广泛存在于自然界中的土壤、水体、植物和动物体内。
它们在生物学、医学和工业领域中具有重要的应用价值。
为了研究酵母菌的生理特性和生物学功能，科研人员经常需要进行酵母菌的培养操作。
本文将介绍一种常用的酵母菌培养方法。
二、材料和试剂准备1. 培养基：选择适合酵母菌生长的培养基，如YPD培养基（1%酵母粉、2%蛋白胨、2%葡萄糖）。
2. 培养器具：培养皿、试管、离心管等。
3. 酵母菌菌株：选择所需的酵母菌菌株。
三、酵母菌的分离和接种1. 从酵母菌菌株保存液中取出所需的菌株。
2. 在无菌条件下，将菌株转移到含有YPD培养基的试管中。
3. 进行适当的稀释，使培养液中的菌落数量适中。
4. 震荡培养液，使菌落均匀悬浮于培养基中。
四、酵母菌的培养条件1. 温度：酵母菌的生长温度一般为28-30摄氏度，根据不同的菌株和实验目的可以进行调整。
2. pH值：酵母菌的最适生长pH通常在5-6之间，也可以根据具体要求进行调整。
3. 培养时间：酵母菌的培养时间根据实验目的和菌株的生长速度而定，一般为24-48小时。
五、酵母菌的培养方法1. 平板培养法：将适量的酵母菌培养液均匀倒在培养皿中，待其凝固后，将所需的酵母菌菌株接种在培养基表面，然后在恰当的温度下培养一段时间，观察菌落形态和数量。
2. 液体培养法：将适量的酵母菌培养液倒入无菌的离心管中，加盖后在恰当的温度下培养一段时间，观察菌液浑浊度和细胞数量的变化。
3. 摇瓶培养法：将适量的酵母菌培养液倒入无菌的摇瓶中，盖紧盖子后在恰当的温度下进行摇床培养，可以获得大量的酵母菌菌液。
六、酵母菌的保存1. 冷冻保存：将酵母菌培养液加入等体积的甘油溶液中，混匀后分装在无菌冷冻管中，置于-80摄氏度的冷冻箱中保存。
2. 高温保存：将酵母菌培养液均匀涂布在含有蔗糖的平板培养基上，置于30-37摄氏度的恒温箱中保存。
七、实验注意事项1. 所有实验操作必须在无菌条件下进行，避免外界细菌和真菌的污染。
酵母菌表面展示操作步骤中的培养条件与方法
酵母菌表面展示操作步骤中的培养条件与方法酵母菌是一种常见的微生物，广泛应用于食品工业、制药工业等领域。
酵母菌表面展示是一种将外源蛋白质表面化合物表达在酵母菌表面的技术。
通过合理的培养条件和方法，可以实现酵母菌表面展示的高效率和稳定性。
下面将详细介绍酵母菌表面展示操作步骤中的培养条件与方法。
1.酵母菌培养基的配制：酵母菌培养基的配制是酵母菌表面展示的基础。
常用的培养基有YPAD培养基、YPD培养基等。
YPAD培养基的配方如下：- 酵母粉5g；- 5倍浓度酵母精1mL；- 蛋白胨10g（或酵母浸出物10g）；- 葡萄糖20g；- 脱脂奶粉10g；- pH调节至6.5-7.0的蒸馏水1000mL。
2.酵母菌的衍生株构建：在进行酵母菌表面展示前，需要构建酵母菌的衍生株，将目标蛋白质的表达与酵母菌基因连锁。
这一步需要进行PCR扩增、酵母菌转化等操作。
3.酵母菌的预培养：在进行酵母菌表面展示前，需要进行酵母菌的预培养，以提高酵母菌的活性和表达能力。
预培养一般在YPAD培养基中进行，条件为30℃，200rpm，培养时间为24小时。
4.酵母菌的感光培养：酵母菌表面展示常使用感光培养方法，通过调节培养条件来控制蛋白质的表达水平。
感光培养条件为：酵母菌接种到YPAD培养基中，30℃，200rpm，培养时间为24小时。
5.酵母菌表面展示筛选与分离：在进行酵母菌表面展示后，需要对表达的蛋白质进行筛选和分离。
常用的方法是利用抗原抗体反应进行筛选，也可以利用流式细胞术等方法进行鉴定与分离。
需要注意的是，为了保证实验的可重复性和准确性，需要进行重复实验和对照实验。
此外，酵母菌的保存和维护也是非常重要的，可以选择冷冻保存或定期传代。
总结起来，酵母菌表面展示操作步骤中的培养条件与方法包括酵母菌培养基的配制、酵母菌的衍生株构建、酵母菌的预培养、酵母菌的感光培养以及酵母菌表面展示筛选与分离。
在操作过程中，需要注意实验的可重复性和准确性，并合理保存和维护酵母菌。
液体酵母培养实验报告总结
液体酵母培养实验报告总结
本次实验旨在培养液体酵母并观察其生长情况。
首先，我们制备了培养基，并在培养基中添加了所需的营养物质。
接着，我们将酵母菌接种到培养基中，并在恒温摇床上进行培养。
在实验过程中，我们注意到酵母菌在培养基中生长迅速，菌液逐渐由透明变为混浊。
经过一段时间的培养，我们观察到菌体数量明显增加，培养基中的悬浮物也明显增多。
通过观察培养过程中的生长曲线，我们可以看到酵母菌呈现出一个典型的“对数生长”阶段。
在最初的阶段，酵母菌数量较少，生长速度较慢。
随着时间的推移，酵母菌进入指数生长阶段，菌体数量快速增加。
最后，酵母菌进入平台期，生长速度逐渐趋于稳定。
在进行实验的过程中，我们还观察到了一些问题。
首先，在制备培养基的过程中，我们需要仔细控制各种营养物质的浓度，以确保酵母菌可以正常生长。
其次，在接种酵母菌时，我们需要注意避免污染，以防止其他微生物的干扰。
总的来说，本次实验成功培养了液体酵母，并观察到了其生长情况。
通过观察酵母菌的生长曲线，我们可以更好地了解酵母菌的生长特点，并为后续的研究提供基础。
希望在今后的实验中，我们能够进一步探索酵母菌的生长机制，并应用于实际生产中。
液体酵母培养实验报告
液体酵母培养实验报告引言液体酵母培养是一种常见的实验方法，旨在研究酵母菌在液体培养基中的生长状况及代谢产物的生成。
本实验通过控制培养条件，观察液体酵母培养过程中酵母菌的生长情况，并探讨培养基成分对酵母生长的影响。
实验方法1. 准备培养基：将适量的葡萄糖、酵母粉和去离子水加入500ml锥形瓶中，混合均匀得到液体培养基。
2. 前处理：将液体培养基分装到不同的试管中，并加盖。
3. 酵母接种：取出一株酵母菌的培养板，用铅笔尖取一小块菌落，将其接种到试管中的培养基中。
4. 培养过程：将试管放置在恒温摇床上，以适当的摇床速度摇动，使酵母菌充分接触氧气。
5. 生长观察：每过24小时观察一次酵母菌的生长情况，记录菌液的密度变化、颜色变化等信息。
6. 数据统计：记录实验过程中的数据，并进行统计分析。
实验结果在实验过程中，我们观察到酵母菌在液体培养基中出现了生长现象。
培养基中酵母菌逐渐增殖，菌液的密度不断增加。
在初期，酵母菌呈现出悬浮在培养基中的状态，随着培养时间的推移，酵母菌逐渐聚集在瓶底，形成沉淀，上层液体逐渐变清澈。
在培养过程中，我们还注意到菌液的颜色逐渐变浅，由混浊的黄色逐渐变为透明的浅黄色。
讨论与分析酵母菌的生长过程受到多个因素的影响，其中培养基成分对酵母菌的生长具有重要的影响。
葡萄糖作为培养基的主要碳源，可以提供能量供给给酵母菌进行代谢活动。
而酵母粉中含有丰富的氮源、维生素等营养物质，能够满足酵母菌正常生长所需。
因此，合理调控培养基中葡萄糖和酵母粉的比例，可以促进酵母菌的生长。
此外，培养条件也对酵母菌的生长产生影响。
摇床的运动使得培养基中的酵母菌能够充分接触氧气，从而促进代谢产物的生成。
此外，恒温摇床提供了一个稳定的温度环境，有利于酵母菌的正常生长。
通过本次实验，我们观察到了酵母菌的生长情况，并了解了培养基成分和培养条件对其生长的影响。
这对于后续的酵母菌研究以及相关酵母发酵产物的生产具有重要的参考价值。
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摇床培养确定酵母菌的培养条件或营养条件 HEN system office room 【HEN16H-HENS2AHENS8Q8-HENH1688】摇床培养确定酵母菌的最适营养条件和培养条件实验方案酵母是单细胞微生物，形态通常有球形、卵圆形、腊肠形、椭圆形、柠檬形或藕节形等，一般为1～5或5～20微米，它属于高等微生物的真菌类。
酵母菌是兼性厌氧菌，在有氧的情况下，它把糖分解成二氧化碳和水且酵母菌生长较快。
在缺氧的情况下，酵母菌把糖分解成酒精和二氧化碳。
酵母菌能在PH值为～的范围内生长，最适PH值为6~7。
在低于水的冰点或者高于47℃的温度下，酵母细胞一般不能生长，生长温度一般在20～30℃，最适生长温度范围为28～30℃。
一、实验目的1、认识了解酵母菌的细胞形态和生理特性；2、学习了解酵母菌的营养需求，确定酵母菌生长的最适条件；3、掌握摇床培养酵母菌的操作技术及工艺流程；4、掌握正交试验的概念、原理、方法及运用领域，学习设计兵进行正交试验操作；5、学习掌握生物量的测定方法，利用比浊法和计数法分析确定酵母菌的最适营养条件和培养条件。
二、实验原理酵母菌的最适营养条件和培养条件是利用PDA液体培养基摇床培养，通过正交实验设计进行的。
正交试验设计(Orthogonal experimental design)是研究多因素多水平的一种设计方法，它是根据正交性从全面试验中挑选出部分有代表性的点进行试验，这些有代表性的点具备了“均匀分散，齐整可比”的特点，正交试验设计是分式析因设计的主要方法，是一种高效率、快速、经济的实验设计方法。
正交表是一整套规则的设计表格，用L表示正交表的代号，a为试验的次数，b为水平数，c为列数，也就是可能安排最多的因素个数。
本实验采用了三因素三水平的正交试验来确定酵母菌的最适营养条件和培养条件。
生物量的测定方法有比浊法、计数法和直接称重法等。
由于酵母在液体摇床发酵培养过程中是以均一性的混浊液状态存在的，所以可以利用紫外分光光度计进行直接比色法来测定其生物量。
三、实验设备、材料及试剂（一）设备超净工作台、高压蒸汽灭菌锅、恒温振荡培养箱、紫外分光光度计、高速冷冻离心机、电子天平、显微镜、电磁炉、锅、酒精灯、锥形瓶（250mL 10支）棉塞、烧杯（1000mL 1个，500mL、250mL、100mL各3个）以及试管若干、移液枪（5mL、1mL各一支）及枪头（无菌）若干、10mL离心管18支、血球计数板（25*16）、漏斗、pH试纸、玻璃棒、打火机、接种针、吸水纸、擦镜纸、报纸、标签纸等。
（二）材料1、菌种：酵母菌菌种2、培养基：马铃薯、葡萄糖、琼脂（三）试剂：蒸馏水、1mol/L的氢氧化钠溶液、1mol/L的盐酸溶液、75%酒精溶液。
四、实验方法（一）正交试验进行酵母菌的摇床培养在酵母菌的培养条件和营养条件中，营养条件包括碳源、氮源、矿物元素和生长因子等方面，培养条件包括摇床培养的温度、转速、时间，以及培养基的pH、装液量和接种量等，根据实验需求，本次实验选择了碳源、pH值和培养时间为因素，设计了如下的三因素三水平的正交试验进行探究，确定酵母菌的培养条件和营养条件。
（每100mL培养基的配置标准）表1 正交表试验设计因素水平葡萄糖(A)pH值(B)培养时间(C)1 68h2 710h3 812h表2 正交表实验方案编号葡萄糖(A)pH值(B)培养时间(C)(1)111(2)122(3)133(4)212(5)223(6)231(7)313(8)321(9)332（二）比浊法和计数法测定酵母菌的生物量酵母菌在波长为560nm的时候对光的吸收最强，利用比浊法可以间接测定酵母菌的生物量大小，进行比较。
同时，也可以用血球计数板计数酵母菌悬液的菌落数。
五、实验步骤（一）菌种的活化1、培养基的配置（1）菌种试管斜面（活化）培养基及母种扩大培养基马铃薯琼脂糖培养基：马铃薯（去皮）200 g 、葡萄糖20 g、琼脂15～20g、蒸馏水1000 ml ， pH自然。
试验用量为1/5。
①称量取去皮马铃薯40g，葡萄糖两份，每份2g，琼脂。
琼脂加入的量取决于琼脂的质量，质量差的应适当增加。
②将马铃薯切成小块，放入锅中，加水200mL，煮沸30 min。
用双层纱布滤去马铃薯残渣，滤液加蒸馏水定容到200mL，搅拌均匀。
③取100mL滤液，装入250mL的锥形瓶内，加入2g葡萄糖，搅拌使糖溶解，然后加塞包扎，等待灭菌。
该培养基即为酵母菌扩大培养的液体PDA培养基。
④将剩余100mL马铃薯滤液放回锅中，加入琼脂，加热熔化。
在琼脂熔化的过程中，需要用玻璃棒不断搅拌，并控制火力不要使培养基溢出或烧焦。
⑤加入2g葡萄糖，葡萄糖溶解后，加入适量的水以补充加热过程中损失的水分，定容到100mL。
⑥分装将煮好的培养基分装于试管中，其量为管高的1／5，灭菌后制成斜面。
分装三角瓶的容量以不超过三角瓶容积之一半为宜。
⑦加塞在管口塞上棉塞。
棉塞可过滤空气，防止杂菌侵入并可减缓培养基水分的蒸发。
⑧包扎加塞后，将试管用线绳捆好，再在棉塞外包一层报纸，以防止灭菌时冷凝水润湿棉塞，其外再用一道线绳扎好。
用记号笔注明培养基名称。
⑨灭菌将上述培养基以，121℃，高压蒸汽灭菌20 min。
⑩搁置斜面将灭菌的试管培养基竖直放置，冷至50℃左右(以防斜面上冷凝水太多)，将试管口端搁在玻棒或其他合适高度的器具上，搁置的斜面长度以不超过试管总长的一半为宜。
（2）进行摇床培养的PDA液体培养基①称量取去皮马铃薯180g，分别称取葡萄糖1g、2g、3g各三份。
②将马铃薯切成小块，放入锅中，加水900mL，煮沸30 min。
用双层纱布滤去马铃薯残渣，滤液加蒸馏水定容到900mL，搅拌均匀。
③分装将煮好的培养基分装于9个锥形瓶中，每支锥形瓶100mL培养基，编号（1）-（9），用记号笔注明。
④加葡萄糖，利用1mol/L的氢氧化钠溶液或1mol/L的盐酸溶液按照下表调节pH ，并向对应PDA液体培养基（每瓶100mL）中加入相应量的葡萄糖。
序号（1）（2）（3）（4）（5）（6）（7）（8）（9）葡萄糖用量/gpH值 6 7 8 6 7 8 6 7 8⑤加塞搅拌充分后，在瓶口塞上棉塞。
棉塞可过滤空气，防止杂菌侵入并可减缓培养基水分的蒸发。
⑧包扎加塞后，再在棉塞外包一层报纸，以防止灭菌时冷凝水润湿棉塞，其外再用一道线绳扎好。
⑨灭菌将上述培养基以，121℃，高压蒸汽灭菌20 min，冷却待用。
2、制备斜面菌种1、接种半小时前，打开无菌操作室和超净工作台的紫外灯，紫外照射灭菌。
关灯后，通风10min左右在进行接种操作。
2、贴标签接种前在试管上贴上标签，注明菌名、接种日期，放入超净工作台。
3、接种点燃酒精灯，用75%的酒精擦拭双手和超净工作台的平面。
将接种环用酒精灯外焰灼烧灭菌，冷却后用接种环将菌种移接到贴好标签的试管斜面上。
4、塞棉塞取出接种环，灼烧试管口，并在火焰旁将棉塞塞上。
塞棉塞时，不要用试管迎棉塞，以免试管在移动时带入不洁空气。
5、接种后，做好超净工作台的清洁，取出菌种后，打开紫外灭菌30min。
将斜面试管置于30℃的恒温培养箱中培养，大约一天后即可观察到斜面菌种的生长情况。
待菌种长势良好后，即可进行菌种的扩大培养。
（二）、酵母菌的扩大培养在超净工作台上，将活化的酵母菌斜面菌种从试管中接种到酵母菌扩大培养的培养基中。
将接种酵母菌的锥形瓶放入摇床中进行摇床培养，摇床培养的温度为30℃，280r/min，培养24h。
（三）、酵母菌转接，摇床培养菌种经过24h扩大培养后，在超净工作台上，用移液枪吸取酵母菌液接种于编号为（1）-（9）盛有液体培养基的锥形瓶中，每瓶接种的菌液量为10mL。
提示：吸取菌液时先震荡，将菌体混匀。
接种完成后，将锥形瓶置于摇床中进行摇床培养，摇床培养的温度为30℃，280r/min，培养时间如下表：葡萄糖用量/gpH值678678678培养时间810121012812810 /h按照培养时间取出相应的锥形瓶，至于4℃冰箱中，等待后续测定。
（四）酵母菌生物量的测定1、离心取18支10mL离心管，离心两组酵母菌，即每个培养条件两支，对应编号1-1，1-2，2-1，2-2，……9-1，9-2。
酵母菌经过摇床培养后，摇匀，用移液枪取5mL，装入对应离心管中，配平。
在8000r/min，4℃的条件下离心5分钟。
弃去上清液，沉淀用5mL的蒸馏水重悬，再次离心，再用5mL蒸馏水重悬，制备成酵母菌悬液备用。
2、生物量的测定——直接计数法该法是利用血球计数板对酵母菌悬液的酵母菌个数进行计数。
取第一组酵母菌悬液进行计数操作。
（1）样品稀释将离心后的酵母菌悬液进行梯度稀释。
用移液枪吸取1mL菌悬液于试管中，加入9mL蒸馏水，摇匀后，再从中吸取1mL液体于另外一支试管中，同样加入9mL蒸馏水混匀。
最终稀释倍数为100。
稀释的目的是便于酵母菌悬液的计数,以每小方格内含有4-5个酵母细胞为宜。
（2）制片将血球计数板用擦镜纸擦净,在中央的计数室上加盖专用的盖玻片。
将稀释后的酵母菌悬液,用吸管吸取一滴置于盖玻片的边缘,使菌液缓缓渗入,多余的菌液用吸水纸吸取,稍待片刻,使酵母菌全部沉降到血球计数室内。
（3）观察计数选用规格为25格×16格的计数板,在显微镜下观察计数。
除了取其4个对角方位外,还需再数中央的一个中格(即80个小方格)的酵母菌数。
每个样品计数三次,取其平均值,按下列公式计算每1ml菌液中所含的酵母菌个数，计数原则“计上不计下，计左不计右”，最终求出总和记录数据。
3、生物量的测定——紫外分光光度法（1）实验操作由于酵母在液体摇床发酵培养过程中是以均一性的混浊液状态存在的，所以可以利用紫外分光光度计进行直接比色法来测定其生物量。
但是由于实验室每个组的营养条件不同，因此培养基的组成也是不相同的。
在进行紫外分光光度法测定酵母菌的OD值时，可以选用离心之后的酵母菌重悬液进行测定。
酵母菌的吸光波长一般为560nm。
提示：但所测得的吸光值大于1时，需要对测量液体进行稀释，然后再进行测定，以保证数据的准确。
选择离心后的第二组重悬液进行OD值的测定。
测定之前，将菌悬液稀释2倍，在以蒸馏水为空白组，测定不同培养条件下酵母菌的OD值。
将紫外分光光度法测定的结果对应填入下面的表格（表2）中。
六、实验结果及分析1、酵母菌计数结果分析（1）实验数据处理：血球计数板规格为25格×16格。
（2）计算公式:酵母细胞数/ml=80小格内酵母细胞个数/80×400×104×稀释倍数。
（3）记录数据：计数结果填入下表（表1）中，并求出各个处理条件下每毫升酵母菌的浓度（单位：个/ml），分析酵母菌的最适培养条件和营养条件。