液相色谱串联质谱联用仪检测技术
液相色谱-质谱联用技术及使用注意事项
主要内容
• 液相色谱-质谱联用技术简介 • 我们的仪器 • 测试准备阶段的注意事项 • 结果的解读
• 质谱基本原理
第一章 液相色谱-质谱联用技术 简介
质谱分析法是通过对被测样品离子质荷比的测定来进 行分析的一种分析方法。
电离装置把样品电离为离子 质量分析器把不同质荷比的离子分开 检测器检测
清洁剂和其他表面活性剂会产生离子抑制
不能使用
表面活性剂
缓冲盐
避免使用非挥发性盐，特别是碱金属磷酸盐、硼酸盐、 柠檬酸盐等。 推荐使用甲酸铵、乙酸铵
第一章 LC-MS技术简 介
与质谱联用的液相色谱
• 流动相的流速
Column ID 4.6 mm 3.0 mm 2.1 mm 1.0 mm Capillary
Q 1 q 2 Q 2
MS 1
流量。
高流速需进行分流
需要提高毛细管温度
第一章 LC-MS技术简 介
电喷雾电离源(ESI)
第一章 LC-MS技术简 介
电喷雾电离源(ESI)
第一章 LC-MS技术简 介
大气压化学电离源(APCI)
第一章 LC-MS技术简 介
液质联用仪的离子源
• ESI
• 离子在液态产生 • 有益于热不稳定化合物的分
第一章 LC-MS技术简 介
离子源与液相色谱的流速
• ESI
• APCI
1 μ L/min - 1mL/min 最佳使用流速: 200 μ L/min 一般来说, 高流速需要高的 毛细管温度和鞘气、辅助气
200 μ L/min - 2mL/min 最佳使用流速: 500 μ L/min 一般来说，高流速需要更高 的鞘气和辅助气流量，但不
安捷伦液相色谱串联质谱仪技术参数
安捷伦液相色谱串联质谱仪技术参数安捷伦液相色谱串联质谱仪是一种先进的分析仪器，广泛应用于化学、生物、医药等领域。
它的技术参数包括分辨率、灵敏度、质量准确度、重复性、线性范围等。
下面将详细介绍这些技术参数。
分辨率是液相色谱串联质谱仪的一个重要指标，它衡量了仪器分离相邻两个峰的能力。
分辨率越高，不同组分之间的干扰就越小，分析结果就越准确。
安捷伦液相色谱串联质谱仪的分辨率可以达到非常高的水平，一般在10,000以上。
这一高分辨率使得它能够对复杂样品进行快速、准确的分析。
灵敏度是衡量液相色谱串联质谱仪性能优劣的另一个重要指标。
它表示仪器能够检测到最低浓度的化合物。
安捷伦液相色谱串联质谱仪在灵敏度方面表现出色，它能够检测到非常低浓度的化合物，通常在ppb（10-9）甚至更低的水平。
质量准确度是指液相色谱串联质谱仪测量结果与真实值之间的接近程度。
安捷伦液相色谱串联质谱仪的质量准确度非常高，通常在1%以内。
这一高准确度保证了分析结果的可靠性。
重复性是指同一样品在不同条件下的多次测量结果之间的一致性。
安捷伦液相色谱串联质谱仪具有很好的重复性，它能够进行高通量的样品分析，保证结果的可重复性。
线性范围是指仪器能够测量的化合物浓度范围。
安捷伦液相色谱串联质谱仪具有广泛的线性范围，通常可以测量从ppb到ppm（10-6）乃至更高的浓度范围。
这一宽广的线性范围使得它能够应用于各种样品的分析。
除了以上主要的技术参数外，安捷伦液相色谱串联质谱仪还具有其他一些特殊功能。
例如，它可以进行多重反应监测，即同时监测多个反应物和产物的浓度变化；它还可以进行多级质量分析，使得分析结果更加准确可靠。
总之，安捷伦液相色谱串联质谱仪是一种高性能的分析仪器，具有高分辨率、高灵敏度、高质量准确度、良好的重复性和宽广的线性范围等技术参数。
它可以广泛应用于化学、生物、医药等领域，为科研人员提供准确、可靠的分析结果。
它的不断发展和创新也将进一步推动科学研究的进步。
液相色谱串联四极杆质谱联用仪技术指标
液相色谱串联四极杆质谱联用仪技术指标编号LC-MS-MS-011、设备名称：液相色谱串联四极杆质谱联用仪2、主要用途：用于多种农、兽药残留、生物毒素残留、食品添加剂的检测，动物及动植物源食品的残留监控工作，特别是对检测结果为阳性的样品，可进行结果确证，并且可以对预期要开展的检测项目进行检测技术储备，以加强对出口食品、农产品安全卫生质量的监管和控制。
3、工件条件:工作电压：230V±10%温度：18-250C湿度：350-85%4、技术指标：1）超高效液相色谱系统技术要求1.1二元或四元泵*1.1.1压力：0-15,000 psi1.1.2流量：0.001-2.000ml/min, 以0.001ml/min 为增量1.1.3精度：≤0.075％RSD1.1.4流速准确度：±1.0%1.1.5延迟体积：<120μL1.1.6溶剂数量：4种1.1.7设定范围：室温上5 – 60 °C，1°C 步距1.1.8温度控制精度：±0.1oC温度1.2自动进样器1.2.1精度：< 0.5%1.2.2样品交叉污染度：<0.005%1.2.3进样准确度：±1 μL1.2.4进样体积：0.1 ～50μl1.2.5进样线性度: > 0.9991.3在线真空脱气机1.4二极管阵列检测器1.4.1波长范围：190-800nm1.4.2二极管个数：1024个1.4.3光学分辨率：1.2nm1.4.4狭缝宽度：1，2，4，8，16nm1.4.5实时信号:同时输出8个实时信号1.4.6波长精度：1nm1.4.7基线噪音：±1.0 x 10-5 AU,在254nm和750n m(1mL/min甲醇)1.4.8基线漂移: 2 x 10-3AU/hr , 在254nm(1mL/min甲醇)1.4.9数据采集率：〉80Hz2）质谱部分指标*2.1质量范围m/z: MS1及MS2：30－3,000amu2.2分辨率：?2.5M2.3质量数稳定性：≤0.1 amu ／8H2.4电喷雾灵敏度指标(相同绝对量，不同浓度下的灵敏度)：1pg利血平，m/z 609-195，信噪比≥500:12.5ESI负离子：2.5pg氯霉素，m/z321-152，信噪比≥100:12.6正、负离子采集切换速率≤20 ms2.7MRM扫描时间≤5 ms,一个采集通道可MRM定量数≥502.8扫描速率：?5000am u/秒2.9动态范围：?4X1062.10质量精度：≤0.1 amu2.11离子源：大气压离子源是双正交设计，而且离子源和质谱间有隔断阀，锥孔有N2保护气，可容忍不挥发性的缓冲盐。
超高效液相色谱-三重四极杆串联质谱联用仪技术参数
超高效液相色谱-三重四极杆串联质谱联用仪技术参数一、应用范围本设备主要用于食品安全，药物代谢，毒物分析，代谢组学，脂质组学等小分子化合物的快速同步定性、定量分析。
1.工作条件1. 1.1电源电压：230V±10%,50∕60Hz,16Λ1.1.2环境温度：15-27βC（最优：18~21C）1.1.3相对湿度：20-80%二、技术要求1.超高效液相色谱仪1.1二元超高效梯度泵（带真空在线脱气机）1. 1.1流量范围:0~8m1.∕min,步进0.001m1./min▲1.1.2最大压力：≥103.4Mpa1.1.3流量准确度:＜0.1%1.1.4流量精密度：＜0.05%1.1.5梯度混合精确度：＜0.15%1.1.1.6梯度混合类型：二元高压混合1.2.7泵清洗系统：主动式单独流路清洗柱塞1.3.动进样器：1.4.1进样体积：0.01-IOO P1.1.4.2进样体积准确度：0.5%1.4.3交叉污染：0.004%1.5.温箱1.6.1温控范围：5~80°C1.3.2温度准确度：±0.5C1.3.3温度精度±0.1C1.3.4容量：最多12支色谱柱2.质谱部分技术性能2.1.离子源2.1.2离子源：独立的可加热电喷雾离子源（ESI源），全内置式气路电路接口设计，安装离子源时即可实现气路电路连接，自动识别，实现零误操作；▲2.1.2可加热ES1.源，加热温度最高可达550C,不分流的情况下采用纯水作为溶剂，流速为1.u1.-2000μ1.∕min;2.1.3探针采用60度最优喷雾设计，可在任意位置固定并实现前后直线型、左右圆弧型调节，高低连续可调；2.1.4内置大面积多边形同轴主动排废气设计，消除废气涡流，降低化学噪音，不锈钢排废管路，实现离子源腔体高温自洁净；2.1.5具有雾化气、辅助雾化气、可调式吹扫气（0-151.∕min可调），进一步提高雾化效率和稳定性；2.1.6可拆卸的吹扫挡锥，非对称锥面设计，在富灵敏度的情况下确保长期耐用性；2.1.7内置六通阀，实现流动相自由切换2.2离子传输系统▲2.2.1离子传输系统必须配有离子传输管设计，保护分子涡轮泵，减少真空负担；2.2.2大口径非对称高通量离子传输管，确保更多离子进入质谱系统，提高灵敏度；2.2.3离子传输管双独立加热，最高温度可达400℃,进一步提高脱溶剂效率和确保离子传输系统抗污染能力；2.2.4具有真空隔断阀设计，在移去、清洗离子传输部件时，不需破坏真空即可实现快速更换，待机时不需要消耗氮气；2.3四极杆质量分析器2.3.1碰撞气为高纯高惰性氧气或氮气，确保母离子碎裂效率；2.3.2四极杆分辨率：QI和Q3在全质量范围，分辨率可到0.2amu的高选择性，在只需在方法设定设定界面简单选择即可，无需特殊手动调谐。
液相色谱质谱联用仪技术指标
垦利区检验检测中心食品检测能力提升项目参数液相色谱质谱联用仪技术指标1. 设备名称液相色谱质谱联用仪（LC-MS-MS）2、主要用途用于农副产品、食品、植物样品、动物组织、水产品、环境等样品中农药、兽药、食品添加剂、生物毒素等3000以下分子量的化学污染物定性定量分析。
3、工作条件工作条件及安全性符合中国及国际有关标准或规定3.1 工作电源电压: AC 220V±53.2 工作环境温度: 16～25℃3.3 工作环境相对湿度: 40～80%4、技术指标4.1 硬件4.1.1 超高效（快速高分辨）液相色谱部分4.1.1.1 多元高压梯度系统*4.1.1.1.1 流速范围：大于0 ml/min～5.0 mL/min。
*4.1.1.1.2 流量精度：RSD≤0.05%。
4.1.1.1.3 最高操作压力：大于14000psi。
4.1.1.1.4 延迟体积：≤40µL4.1.1.1.5 溶剂数量：44.1.1.1.6 混合方式：高压混合4.1.1.2 样品管理系统*4.1.1.2.1 自动进样器：2ml样品瓶最少能放105个以上4.1.1.2.2 进样范围：0.01-100ul，增量0.1 ul；可选配更多进样体积4.1.1.2.3 进样精度：RSD≤0.2%。
4.1.1.2.4 自动进样器温控范围：大于4-40摄氏度。
4.1.1.2.5 样品残留：<0.002%。
*4.1.1.2.6均采用避光盖板，便于光敏感样品的长时间放置；具有泄漏传感器，有样品盘和样品自动识别功能。
*4.1.1.2.7 可进行编程进样，用于进行自动柱前衍生，柱前样品自动稀释，自动混合等复杂进样方式。
4.1.1.3 柱温箱系统*4.1.1.3.1 柱温箱温控范围：大于5-90℃。
4.1.1.3.2 柱温箱控温精度：±0.1摄氏度。
4.1.1.3.3 柱容量：大于3根色谱柱，最长可安装30cm色谱柱。
液相色谱质谱联用仪校验SOP
液相色谱质谱联用仪检验作业指导书1.适用范围适用于液相色谱质谱联用仪（LCMS-2020）的期间核查2.校验方法准备1.0ng/μL和100pg/μL的利血平在甲醇中的标准溶液，按液相色谱流动相流速0.8mL/min，ESI+与APCI+模式下流动相：甲醇：水（80:20，体积分数），加入0.1%（体积分数）甲酸；ESI-模式下流动相：甲醇：水（80:20，体积分数），加入0.1%（体积分数）氨水，设置仪器参数，使用全扫描模式（Scan）校准分辨力与质量准确性，使用选择离子模式（SIM）校准信噪比、峰面积重复性、保留时间重复性。
3.计量性能指标校验项目仪器类型电离模式要求分辨力单四级杆ESI+≤1u信噪比单四级杆ESI+≥10:1 ESI-APCI+质量准确性单四级杆ESI+≤0.5u峰面积重复性单四级杆ESI+≤10%保留时间重复性单四级杆ESI+≤1.5%4.校验周期校验项目周期分辨力1年信噪比1年质量准确性1年峰面积重复性1年保留时间重复性1年5.校验项目5.1分辨力待仪器运行稳定后，根据校验方法中推荐条件，在ESI+模式下，选择全扫描模式（Scan），将扫描范围设为m/z=606~612，注入1ng/μL的利血平溶液5μL。
观察质谱图，记录m/z=609质谱峰，并计算其50%峰高处的峰宽，得到W1/2，作为分辨力的结果。
5.2质量准确性在ESI+模式下，选择全扫描模式（Scan ），将扫描范围设为604~614，注入1ng/μL 的利血平标准溶液10μL ，观察质谱图，记录特征离子的实测质量数（有效数字取小数点后两位）。
根据公式（1）计算△M ，以△M 的最大值作为质量准确性的结果。
i 理i 测M -M △M =（1）式中：M i 测——第i 个离子的测量值，u M i 理——第i 个离子的理论值，u ；5.3信噪比根据检验方法中条件设置仪器参数，使用选择离子模式（SIM ），分别在ESI+和APCI+模式下：将检测离子m/z 设为609；在ESI-模式下：将检测离子设为607。
安捷伦液相色谱串联质谱仪技术参数
安捷伦液相色谱串联质谱仪技术参数摘要：一、安捷伦液相色谱串联质谱仪概述二、技术参数详解1.离子源2.质谱分析器3.液相色谱柱4.检测器5.数据处理系统三、应用领域四、安捷伦液相色谱串联质谱仪的优点正文：一、安捷伦液相色谱串联质谱仪概述安捷伦液相色谱串联质谱仪是一种高性能的分析仪器，它将液相色谱和质谱技术相结合，可以对复杂的样品进行快速、准确的分析。
这种仪器广泛应用于生物、化学、环境、食品等多个领域。
二、技术参数详解1.离子源：安捷伦液相色谱串联质谱仪采用电喷雾离子源，能够将样品充分离子化，提高分析的灵敏度和准确度。
2.质谱分析器：采用四级杆质谱分析器，可以对离子进行精确的质量分析，同时具有高信噪比和高分辨率的特点。
3.液相色谱柱：根据不同的应用需求，可以选择不同类型的液相色谱柱，例如反相柱、正相柱、离子交换柱等。
4.检测器：采用紫外检测器或者荧光检测器，可以对样品进行快速、准确的检测。
5.数据处理系统：安捷伦液相色谱串联质谱仪配有强大的数据处理系统，可以对数据进行实时处理和分析，提供清晰的数据报告。
三、应用领域安捷伦液相色谱串联质谱仪广泛应用于生物、化学、环境、食品等多个领域，例如蛋白质分析、药物研发、环境监测、食品安全等。
四、安捷伦液相色谱串联质谱仪的优点安捷伦液相色谱串联质谱仪具有以下优点：1.高灵敏度：采用电喷雾离子源，可以对样品进行充分离子化，提高分析的灵敏度。
2.高分辨率：采用四级杆质谱分析器，可以对离子进行精确的质量分析，同时具有高信噪比和高分辨率的特点。
3.灵活性：根据不同的应用需求，可以选择不同类型的液相色谱柱和检测器，提高分析的准确度和效率。
4.易于操作：安捷伦液相色谱串联质谱仪配有友好的用户界面，操作简便，容易上手。
液相色谱-质谱联用技术
液相色谱-质谱联用技术液相色谱-质谱联用技术（LC-MS）是一种结合了液相色谱和质谱两种技术的分析方法。
它通过液相色谱的分离能力和质谱的物质鉴定能力，可以同时获得化合物的分离和结构信息，适用于复杂样品的定性和定量分析。
液相色谱（LC）是一种基于不同化合物在液相中的分离速度差异来分离化合物的方法。
它具有高分离能力、高选择性和易于操作等特点，广泛应用于生物、制药、环境和食品等领域。
液相色谱的核心是通过固定相和流动相之间的相互作用来实现化合物的分离。
而质谱（MS）则是一种基于化合物的质量与电荷比（m/z）来确定化合物结构和组成的方法。
质谱利用化合物在质谱仪内的质荷比来生成化合物的质谱图谱，从而实现化合物的鉴定和定量分析。
LC-MS联用技术的基本原理是将液相色谱与质谱相连接，通过在液相色谱柱出口处将待分析的化合物分子引入质谱仪中进行分析。
这样一来，通过液相色谱对样品进行分离，可以避免复杂样品矩阵的干扰，并使待分析化合物逐一进入质谱仪进行离子化和探测。
质谱仪将产生的质谱信号转化为质谱图谱，进而进行化合物的鉴定和定量分析。
整个过程中，液相色谱和质谱的运行参数需要相互匹配和优化，以保证良好的分离效果和质谱信号。
LC-MS联用技术具有许多优点。
首先，它能够提供化合物的分离和结构信息，有效地应对样品复杂性的挑战。
其次，它能够对目标化合物进行快速定性和定量分析，为化合物的鉴定和生物活性评估提供支持。
此外，LC-MS联用技术还具有高灵敏度、高选择性和高分辨率的特点，可以检测并鉴定一些浓度较低的化合物，如药物代谢产物和生物标志物。
此外，LC-MS联用技术还适用于多种化合物类别的分析，如有机物、无机物、生物大分子和药物等。
在实际应用中，LC-MS联用技术被广泛用于药物研究和开发、环境监测、食品安全和生物科学等领域。
例如，在药物研究中，LC-MS联用技术可以用于药物的代谢研究、药物动力学研究、药物质量控制和药物残留分析等。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
液相色谱串联质谱联用仪检测技术实验指导（2014、2015级）课程内容（一个实验8学时）：（1）AB Sciex Qtrap 4500 三重四级杆/离子阱液相色谱串联质谱联用仪的结构原理、操作及定性定量应用。
（2）利用液相色谱串联质谱联用仪快速测定水果中7种农药的残留量。
吉林农业大学农业部参茸质检中心2017.03实验一AB Sciex Qtrap 4500 三重四级杆/离子阱液相色谱串联质谱联用仪的结构原理、操作及定性定量应用一.实验目的和意义通过学习液质联用仪的构成和使用方法，及其在定性、定量分析中的应用，培养学生使用液质联用仪进行仪器分析的能力，并培养学生严谨的科学态度、细致的工作作风、实事求是的数据报告和良好的实验习惯（准备充分、操作规范，记录简明，台面整洁、实验有序，良好的环保和公德意识）。
培养培养学生的动手能力、理论联系实际的能力、统筹思维能力、创新能力、独立分析解决实际问题的能力、查阅手册资料并运用其数据资料的能力以及归纳总结的能力等。
（一）检测仪器1、仪器名称高效液相色谱串联质谱联用仪（简称LC-MS-MS）。
型号：4500 QTRAP（美国Applied Biosystems公司）。
2、仪器组成液相色谱部分：岛津LC-30A，配有在线脱气机、超高压二元泵、自动进样器；串联质谱部分：QTRAP4500，配有ESI离子源、串联四级杆/线性离子阱。
3、主要性能指标离子化方式：ESI电离质量范围：（5 ~ 1700）amu 分辨率：> 6900 质量稳定性：0.1 amu/12h 灵敏度：1pg reserpine, ESI+, MRM扫描（m/z : 609/195），信噪比S/N > 120:1 扫描速度：4000 amu/sec 质量准确度：< 0.01%（全质量数范围）4、方法原理高效液相色谱二元泵将流动相泵人系统并混合，自动进样器将待测样品注入流动相中，随流动相进入色谱柱，由于样品不同组分在色谱柱中保留时间不同，各组分被分开，依次进入离子源。
在离子源中，各组分以ESI或APCI方式电离，被加速后进入质量分析器。
4500QTRAP 的质量分析器主要由Q1、Q2、Q3三组四级杆串联组成。
Q1可将分子离子按质荷比（m/z）大小分开；Q2是碰撞室，可将母离子进一步破碎为碎片离子；Q3具有四级杆和线性离子阱两种功能，作为四级杆时可将分子离子或碎片离子按质荷比大小分开，作为离子阱还可富集离子从而提高检测灵敏度。
各组分的不同离子在质量分析器中被破碎、分离，并按质荷比大小依次抵达监测器，经记录即得到按不同质荷比排列的离子质谱图。
4500QTRAP通过串联四级杆/线性离子阱两种不同质谱技术的结合，可以在单次分析中对复杂样本中的单个成分同时进行定性和定量，也可以对多个化合物进行定量分析。
整台仪器的控制、数据采集、数据处理、结果输出均由PC计算机Windows操作系统支持下的Analyst软件控制完成。
（二）样品1、样品要求本仪器适合分子量在5 ~ 1700 amu范围内的有机样品的定性及定量分析。
待测样品必须能溶解于水或其它有机溶剂中。
若样品或配制的样品溶液发生沉淀、挥发、变质等异常现象时，应重新取样或重新配制溶液。
2、试剂要求所有的试剂均选用色谱纯级，所用水的电导率应大于18KΩ。
流动相必须用0.2µm 或0.45µm滤膜过滤后方可使用。
3、分离条件要求在液相色谱仪上确定分离条件，使待测组分能完全分离，且该色谱条件中流动相不应含有不挥发性盐，如磷酸盐。
（三）、操作步骤实施检测操作的人员，必须熟悉该仪器的操作规程，仪器的工作状态、包括检测灵敏度和分辨率，必须满足检测项目的要求。
1、开机前准备开机前应检查仪器室内电、气的供应情况及空调机的工作状态是否稳定，检查真空机械泵泵油是否需要更换。
只有当UPS工作正常，Gas1/Gas2、Curtain Gas和Exhaust Gas的压力分别稳定在0.35、0.35和0.7 Mpa，环境温度为10~30℃，相对湿度小于70%时才能开机。
2、开机1) 打开真空机械泵上的电源开关。
2) 真空机械泵继续工作至少15分钟后，打开MS电源主开关。
3) 等真空度达到2×10-5Torr（绿色指示灯不闪）后，打开PC计算机电源3、仪器调谐（四）、方法建立1.在Analyst软件Tools菜单中选择Project→Create Project。
在Project name项下输入新建的Project 名称。
注意，不要点选窗口中的其他按钮！点击OK，确认新建Project。
2.在Analyst软件界面下，双击导航栏内Hardware Configuration。
在弹出窗口中选择MassOnly，点击Activate Profile，激活MassOnly（只联接质谱主机）。
3.在导航栏内单击Tune and Calibrate，进入调谐模式。
点击上方工具条中的T钮。
此时，应注意到主机有“扑”声音，表明进入调谐状态。
此时右下角质谱状态显示绿色。
双击Manual Tuning，进入质谱参数设置及运行窗口。
4.使用1mL玻璃进样针吸取适当标准溶液，置于进样针座上。
点击MS Method下拉菜单，选择Syringe Pump Method，设定针泵流速Flow Rate为10μL/min。
5.点击Start Syringe Pump按钮开针泵进样。
6.返回MS Method，选择扫描模式Scan Type为Q1 MS，设定扫描速度Scan Rate为10Da/s，设定扫描范围Start——Stop设定为50——化合物分子量。
DP预输入60。
7.点击start开始采集数据。
运行稳定后，注意观察是否有预期的母离子出现，并控制其响应值在约E4以下。
点击stop，选择第一个峰（后面是同位素峰）的平稳段，双击，选中母离子。
点击右键，选择Delete Pane。
8.设定Scan type为产物离子扫描Product Ion（Ms2），扫描速度200Da/s，选择扫描正/负离子，输入母离子（product of），设定扫描范围start——stop为50——MW+20，覆盖可能的子离子质量范围，点击compoud标签，设定（DP）60，（CE）5。
9.点击start，开始采集数据，注意观察是否有预期的母离子出现。
手动调节CE，以5eV为步长，逐渐增加。
每次增加后稍作等待，直至目标化合物的子离子清晰看见。
选择平稳的一段，双击，选择子离子。
10.选择Scan Type为MRM。
设定参数表格中的Q1对应的母离子，Q3对应的子离子，time（ms）为50，ID值设为名称1（定量），名称2（定性）。
11.点击Edit Ramp，在Parameter下选择Collision Energy，点击OK。
点击start开始采集数据，记录每个MRM通道的最佳CE电压。
在MRM参数设定表中，右键点击。
选择Collision Energy CE，调出表格中的CE列，输入每个MRM通道的最佳CE电压值，精确到个位数。
重复以上步骤，在Parameter项下选择Declustering Potential，优化并保存DP。
完成后选择菜单File/Save保存采样方法，[文件名].dam。
（五）LCMS方法的建立：1、连接仪器：打开HPLC质谱电源，将HPLC系统接上柱子，将6号出口管线与离子源连好。
调离子源喷雾针位置到2mm处，双击Hardware Configure，在硬件配置菜单下单击LCMS ( 液相与质谱联用)，单击Activate profile激活仪器，会听到笛的一声，说明仪器已经连接上。
2、确认液质同步：选择项目（之前优化方法的时候已经建立的项目）；双击Build acquisition method新建方法，弹出新建方法模板。
在模板左侧点击acquisition method，模板右边显示对应的参数，确认synchronization mode选择LC Sync,表示液质同步。
3、设置MRM参数：点击方法模板左侧的MRM, 在模板右侧Scan Type下选择MRM；在polarity 下选择化合物极性：Positive(正离子)、Negative（负离子）；Duration为15min(与液相分离相同的时间)；表格中Q1：母离子分子量，Q3(Da)：子离子分子量，Time（msec）：50，ID栏：化合物名称（离子对名称后空格加1为定量，空格加2为定性），在表格中右键分别单击DP、CE，点击工具栏的OPEN打开之前优化的方法参数，调出DP,CE值，选中整行，Ctrl+c(复制)参数，关闭窗口，再Ctrl+v(粘贴)参数）；最后点击Edit parameter设置离子源参数：Source/Gas项用以下推荐值：CUR 35，IS:5500(正离子) 或-4500（负离子），TEM 600，GS1 60，GS270，点击OK。
4、设置液相参数：点击模板左边的shimadzu LC system，①在右边的pumps栏下，设置stop time（运行时间）为15min，flow流速为1mL/min，A为水相设为95%，B为有机相设为5%（设置时改B，A自动），泵最大压力为50；点击time program设置液相梯度：例咪唑类梯度设置：②接着在右边的Auto sampler栏下，设置清洗时间，在Rinse mode 下选择Before and after(前后都洗)，并设置清洗时间为5s，清洗液用50%甲醇水。
最后点击保存按钮,在保存窗口输入该方法的名称。
（五）数据处理双击打开Multiquilt，选择项目，点击File下的荧光棒型图标，点击sample，选择需要的标准品和样品数据，点击next，create new method，为方法命名，点击next，选择一个有代表性的样品（一般选择浓度较大的标品数据），设置分组（同一物质定量离子和定性离子设置为一组），并指定内标，next，对每个物质进行积分。
设置积分参数：CausianSmoth（平滑）：一般是0，如有毛刺可改成1或2；Expeceted Time（保留时间）:一般不动Expected time范围：一般30s，表示在保留时间±15s范围最小峰宽最小峰高背景噪音扣除：可调整目标峰基线以下被积分的面积，比例越高积分越往下，必要时调整。
分峰因子：峰有分叉时设置，如有两个分叉，设置为2，峰分叉不能大于2单位：设置单位，勾选Apply units to all可将此单位用于所有化合物点击next，点击finish。
在新跳出窗口内将标准品选定，输入浓度。