细胞生物实验：小鼠染色体
小鼠染色体实验报告
小鼠染色体实验报告实验目的：本实验旨在通过染色体观察和分析小鼠基因组的结构和功能，以进一步了解小鼠的遗传特征。
实验材料：1. 小鼠样本（小鼠尸体或小鼠细胞）2. 血细胞裂解液3. 显微镜4. 醋酸酒精定影液实验步骤：1. 取得小鼠样本并进行准备。
尸体样本直接取用，细胞样本需要分离提取。
2. 将小鼠样本悬浮于血细胞裂解液中，进行细胞裂解。
3. 用匀浆棒轻轻研磨，使细胞完全裂解。
4. 将细胞溶液滴于清洁平凹玻片上，并用平玻片将其铺平。
5. 将玻片加热至70℃，使细胞DNA捕获在玻片上。
6. 用醋酸酒精定影液浸泡玻片，使细胞核卷曲收缩。
7. 用显微镜观察染色体的形态和数量。
8. 根据染色体的形态、长度和着色特点进行鉴定和分析。
实验结果与讨论：通过对小鼠样本的染色体观察，我们发现小鼠染色体具有一定的结构和着色特征。
根据染色体的长度和形状，我们可以初步判断出小鼠的染色体是否正常。
特定的染色体畸变或缺失可能表明小鼠有某些遗传疾病或突变。
在本实验中，我们可以观察到小鼠的染色体数量一般为40个。
这与小鼠常见的染色体数目相符，进一步证实了样本的正常性。
我们还可以观察到染色体的长度不一致，这是由于染色体上的基因片段的数量和排列不同所致。
通过进一步的染色体分析，我们可以了解小鼠的遗传特征，如基因突变、遗传疾病等。
这对于进一步研究小鼠的遗传学、发育生物学以及相关疾病模型的建立具有重要意义。
结论：通过对小鼠染色体的观察和分析，我们可以初步了解小鼠的遗传特征。
染色体的形态和数量可以为我们提供重要的基因信息，有助于后续的研究和分析。
本实验为进一步研究小鼠的遗传学提供了基础数据。
小鼠骨髓细胞染色体制备与观察
滴片：
➢滴2~3滴于玻片上，吹气， ➢在酒精灯火焰过火8次， ➢做记号，凉干，染色
滴片后，将片子侵入Giemsa染液缸中，10~15分 钟，弃去染液，水洗，晾干，镜检。
作业与思考题
• 1、绘制一个你所观察到的小鼠骨髓细胞染 色体中期分裂相。
• 2、本实验中秋水仙素、低渗液、固定液各 起什么作用？
15
9+16+15=40
4.细胞增殖指数统计
细胞增殖指数=
分裂细胞数
×100%
分裂细胞数+间期细胞数
实验三 细胞器的观察
一、中心体 二、高尔基体
一、中心体（4×10）
• 马蛔虫子宫横切片全貌
中心体（10×10）
中心体（40×10）
二、高尔基体（4×10）
脊神经节切片
高尔基体（10×10）
2.了解小鼠染色体核型。
3.认识秋水仙素对细胞增殖的作用。
• 器材与试剂
• 内容与方法
（一）小鼠骨髓细胞染色体制备
预处理
取材，收集细胞
低渗
染色
滴片
固定、再固定
❖取材前2～3h，向腹腔 内注射秋水仙素。注射 浓度随动物种类不同而 异。秋水仙素的主要作 用是使分裂细胞阻断在 有丝分裂中期，增加中 期分裂相的比例。
• 3、简述实验中应注意那些关键问题？
（二）染色体标本片观察 1.标本片质量评价 （1）细胞密度合适、均匀； （2）背景干净，细胞核和染色体清晰； （3）有较多的分裂相； （4）染色体分散较好。
细胞密度
染色体 分散度
2.染色体形态特征观察
3.染色体计数
40
10
（100×10）
高尔基体（40×10）
小鼠骨髓细胞染色体标本的制备
旋化程度或染色体长短大致一样。在所观察细胞 周围，没有离散单个或多个染色体存在，以免影 响计数。
小鼠骨髓细胞染色体标本的制备
第9页
小鼠骨髓细胞染色体标本的制备
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四、试验步骤(continued)
6.离心：1200rpm离心5分钟后弃去上清液， 7.固定：加8ml固定液并用吸管轻轻吹匀，室温下静 置20分钟，每10分钟时吹打一次。 8.离心：1200rpm离心6分钟，弃上清液。
9.离心：加1.5mL固定液，吸管吹打成细胞悬液。
一、试验目标
1. 经过小白鼠骨髓细胞染色体制备，初 步掌握低渗法制备动物骨髓细胞染色体 方法 2.熟悉染色体形态、种类及小白鼠等动 物染色体数目及特点
小鼠骨髓细胞染色体标本的制备
第1页
二、试验原理
骨髓细胞是含有旺盛分裂能力细胞，从这些分裂细胞 中，可观察处处于分裂中期染色体，能对一个动物染色体 形态特征、数目进行准确观察和分析。
小鼠骨髓细胞染色体标本的制备
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几个动物染色体形态特征
动物名称 染色体数
染色体类型
x染色体形态
y染色体形态
青蛙 小白鼠
பைடு நூலகம்
26
中央、亚中央着丝粒染色 中央着丝粒染色体 中央着丝粒染色体
体
，介于6～7号
，介于8～9号
40
全部为近端着丝粒染色体 大小介于5～6号 大小介于19～20号
大白鼠
42
中央、亚中央近端着丝粒 近端着丝粒染色体 近端着丝粒染色体
10.滴片：用吸管吸收细胞悬液，滴在预冷载玻 片上，室温晾干
11.染色：10% Giemsa染液染色30分钟
实验九小鼠骨髓细胞染色体标本制备
四、实验步骤
1、预处理：实验 。作用：
2、处死动物：断颈处死小白鼠， 解剖小鼠内生殖器官，鉴别雌雄性别
3、取股骨：剥取股骨，剔去肌肉 组织，剪去两端的股骨头。
11、滴片：用吸管吸取细胞悬液， 滴在预冷的载玻片上，在酒精灯火焰 上微微加热，室温晾干。预冷载玻片 的作用：
12、染色：10% Giemsa染液染色30分 钟。
13、镜检：低倍———高倍 。
五、作业
1、选择染色体清晰，分散好的 中期分裂相，计数染色体，显微摄影、 并打印出照片。
2、分析成功或失败的原因。
4、取骨髓：注射器吸取0.6ml生 理盐水, 针头插入股骨一端,反复冲 洗骨髓到10ml的离心管中。
5、低渗：加入4.4ml的 0.075MKCl溶液,在37oC水浴中低渗40 分钟，中间（约20分钟时）用吸轻轻 管吹打，使细胞充分低渗。低渗作用
6、离心：离心之前加1ml固定液 并用吸管轻轻吹匀，进行预固定；
同时秋水仙素作用能使染色体缩短、 变粗。
三、实验材料、器具和药品：
1、材料： 小白鼠 2、器具：
注射器（1ml,5ml）、5号针头、 解剖盘、解剖剪、镊子、玻璃吸管、 10ml刻度的离心管、离心机、载玻片 盖玻片、显微镜、滤纸、擦镜纸、棉 花、量筒、天平、恒温水浴锅等。
3、药品： 0.01%秋水仙素、0.075MKCl、
一、实验目的
1、掌握哺乳动物（小白鼠）骨 髓细胞染色体制片技术。
2、并对动物染色体进行观察。
二、实验原理
1、小鼠四肢骨内骨髓细胞中的造 血干细胞是生成各种血细胞的原始 细胞，具有高度的分裂增殖能力。
实验小鼠骨髓染色体制备和观察
8.小鼠染色体观察： 低倍镜、高倍镜下寻找染色体分散的中
期分裂相.
资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
小鼠骨髓染色体 10 ×10
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小鼠骨髓染色体 10 ×40
资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
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➢ 数目观察：小鼠2倍体细胞染色
体，数目2n=40条。其中19对为常染 色体，一对为性染色体，染色体的核 型分为4组。雄性 XY, 雌性XX,Y染 色体最小。
➢形态特征观察：端着丝粒染色体
“U”“V”。
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五、注意事项
1．掌握好秋水仙素的浓度和处理时间； 2．离心前需要配平； 3. 小鼠骨髓要冲洗干净，以收集足够的骨髓细胞； 3．低渗处理是实验成败的关键，注意低渗时间； 4．固定液要现配现用，固定要充分； 5．载玻片要洁净并预冷，滴片要有一定的高度； 6. 细胞悬液不能太稀，要呈乳白色； 7. 烤片时温度不能太高。 8. 冲洗染液时水流要缓慢，以免细胞流失过多。
放出来。
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秋水仙素处理：秋水仙素溶液可抑制纺锤体的形 成，使正在分裂的骨髓细胞停止在细胞分裂中期， 积累大量中期分裂相细胞。
低渗作用: 使细胞充分膨胀，减少染色体间的相互 缠绕和重叠。
预固定：终止低渗作用，使细胞离心时不易破裂 ，固定维持细胞形态结构。
高距离滴片：使细胞膜易于破裂，获得中期染色 体标本，在显微镜下观察染色体的结构和数量。
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三、实验器材和试剂
• 1.器材 蜡盘、手术剪、小镊子、平皿、注射
实验五：小鼠骨髓染色体的制备与C带染色
一.小鼠骨髓染色体的制备
【实验目的】 n 学会小鼠骨髓染色体标本的制备
【实验原理】
n 处于分裂期的细胞经秋水仙素处理,由于阻断了 纺锤丝微管的组装,使细胞分裂停止于中期,此 时染色体达到最大收缩,具有典型的形态。
n 本实验所用的小鼠骨髓细胞具有高度的分裂活 性并且数量非常多,经秋水仙素处理后,可使分 裂的细胞阻断在有丝分裂中期,再经低渗、固定、 滴片染色等处理,便可制作较好的小鼠骨髓细胞 染色体标本。
【仪器、材料和试剂】
n （一）仪器 光学显微镜,冰箱,恒温水浴锅。
n （二）材料 n 已制备好的小鼠骨髓染色体载玻片,染色缸,烧杯,镊子
等。 n （三）试剂 n 盐酸(0.2mol/l),5％Ba(OH)2(50℃预热),2×SSC溶液
(60-65℃预热),Giemsa染液
【实验步骤】
1.按上述小鼠骨髓染色体的制备步骤制备染色体
二.染色体C带的制备
【实验目的】 学会小鼠骨髓染色体C带的制备
【实验原理】
n 借助特殊的燃料及染色程序,使染色体的一定部 位呈现深浅不同的带纹,可用来鉴别染色体组, 单个染色体以及深入认识染色体的结构和功能。
n C带可使着丝粒区,端粒区的异染色质及其他染 色体区段的异染色质部分呈Giemsa深染,其他 部分呈淡染。
（三）试剂
n 1．秋水仙素:以1mg/mL的浓度溶于0.85％ 生理盐水中。
n 2．低渗液: 0.075mol/lKCl取5.59gKCl加 到1000mL蒸馏水中,在37℃下预热。
n 3．固定液:甲醇:冰醋酸以3:1配制(新鲜的)
【实验步骤】
1.取雌雄小鼠各一只,注射秋水仙素0。1mL于腹腔中,经3。54h后拉颈椎处死。 2.剪开腹腔,剥离出两条后肢,由股骨关节处剪断,取下后肢(注 意不要将股骨剪断)。 3.将骨骼外面的肌肉尽可能剪掉,剩下附着在骨骼上的少许肌 肉,用棉花或 纱布蘸75％酒精来回搓,直到骨骼外面不带任何肌肉为止。 4.剥离股骨,并将股骨头的两端减去少许,然后用4号针头插入 骨髓腔内,将股骨穿通(注意:不要用力过大,以防骨骼破裂)。
24-小鼠骨髓细胞染色体标本制备与观察-教案
小鼠骨髓细胞染色体标本制备的原理和制备方法，小鼠骨髓细胞染色体的基本特征。
授课难点
小鼠骨髓细胞染色体标本制备的原理和制备方法。
授课形式
小班实验教学，分组操作
授课方法
查阅资料和预实验；板书、板图和PPT，口头讲述，操作示范，针对性辅导。
参考文献
1.翟中和，王喜忠，丁明孝.细胞生物学.高等教育出版社，2011
2.李虹.医学生物学与医学细胞生物学.科学出版社，2007
3.杨保胜，李晓文.医学形态学实验指导—细胞生物学与遗传学分册.人民卫生出版社，2005
4.张光谋，李延兰.医学细胞生物学实验技术.科学出版社，2013
思考题
1.简述小鼠骨髓细胞染色体标本制备的原理和操作过程。
2.绘制小鼠骨髓染色体核型示意图。
新乡医学院教案首页
课程名称
医学细胞生物学实验
授课题目
小鼠骨髓细胞染色体标本制备与观察
授课对象
生物医学各专业一年级本专科生
时间分配
讲解本次实验的目的、原理、方法、注意事项及作业30分钟；学生操作与辅导150分钟；总结20分钟。
课时目标
掌握小鼠骨髓细胞染色体标本制备的原理和方法，掌握小鼠骨髓细胞染色体的基本特征。
5.实验动物：3月龄左右小鼠一只。
6.试剂：
(1)100μg/ml秋水仙素：秋水仙素5mg，加5ml灭菌的生理盐水，即成1mg/ml秋水仙素溶液，于冰箱中闭光保存备用，使用时可用生理盐水稀释到100μg/ml固定液；
(2)固定液：甲醇：冰醋酸=3：1（时间过长会产生沉淀，现配现用）；
(3)低渗液：0.075mol/L KCl（提前37℃预热）；
3．低渗：将离心管置37℃恒温水浴箱中，低渗30 min后取出，使细胞充分吸水膨胀。低渗不好则在制片时细胞不易破裂，染色体不易分散开。
小鼠骨髓染色体实验报告
实验课名称遗传学实验实验名称小鼠骨髓细胞染色体的制备与观察成绩________________姓名王大锤实验报告系列年级学号组别时间温度实验原理及目的实验目的1、学习小鼠骨髓细胞染色体制片程序；2、掌握空气干燥法制片方法；3、观察了解小鼠的端着丝粒染色体的形态。
实验原理1、染色体标本制备染色体标本是细胞遗传学最基本的技术，优良的染色体制片是其它技术（如显带、原位杂交等）的先决条件。
2、骨髓细胞染色体染色体的制备在原则上可以从所有发生有丝分裂的组织和细胞悬浮液中得到。
动物染色体制备最常用的途径是从骨髓细胞、血淋巴细胞和组织培养的细胞中制备染色体。
在骨髓细胞中，有丝分裂的指数很高，可以直接得到中期细胞而不必像血淋巴细胞或其它组织需要经过体外培养。
3、空气干燥法指细胞经过秋水仙素处理、低渗处理、充分固定和滴片等步骤之后，使载片在空气中自然干燥的方法。
实验材料、仪器及试齐U仪器：光学显微镜，2mL注射器，5号针头，10mL刻度离心管，吸管，试管，试管架，载玻片，盖片，离心机，光学显微镜，解剖器具（解剖盘，剪子、镊子）。
材料：小白鼠（Mus musculus 2n=40 ）,体重约18-20g （65-90日龄），雌雄皆可。
试剂及其他：秋水仙素溶液（100卩g/mL）, 2%柠檬酸钠溶液，0.075M KCl，冰醋酸，甲醇，Giemsa原液, 0.01 M 磷酸缓冲液（PBS, pH 7.4）1•预处理生命与环境科学学院实验报告进行秋水仙素处理。
取骨髓前3-4h给小鼠经腹腔注入秋水仙素（100卩g/ mL）0.3-0.4mL。
2. 取骨髓处死动物，立即取后肢骨。
用剪刀剪掉、清除腿部的皮肤和肌肉，然后从股骨两端关节头处剪下股骨，立即用2%柠檬酸钠溶液冲洗干净。
剪掉股骨两端膨大的关节头，使其露出骨髓腔，用吸有适当量的柠檬酸钠溶液注射器，从一端插入注射针头，将骨髓吹入10mL刻度离心管中，可反复吹洗数次，直至股骨变白为止。
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作业与思考题
1.绘制一个细胞分裂相。 2.KCL的作用。 3.实验结果不理想的原因。
6.弃掉股骨，换上4.5号针头，用注射器吸取生理盐水细胞悬液， 以使冲出的骨髓细胞彼此分散开。
7.将悬液以1000r／min离心10分钟。
8.弃上清液，加入9ml37℃预热的0.075MKCL，于恒温水浴箱中 低渗处理30分钟。
9.加入1ml新配制的固定剂，用吸管轻轻混匀。
10.以800r／min速度离心10分钟。
11.弃上清夜加10毫升新固定剂，用吸管将细胞团打散，混匀， 室温下固定15分钟。
12.离心1000转／分，10分钟。
13.弃上清液，重新加入10毫升固定剂，用吸管吹打细胞，制成 骨髓细胞悬液，室温固定30分钟。
14.1000转离心10分钟。
15.弃上清液，加入3-4滴固定剂，制成细胞悬液。
16.滴1-2滴悬液于冰水浸过的 载波片上（距离10-40cm)，对准 液滴吹气，酒精灯上过2-3次，晾干。 17.吉姆萨染色8-10分钟。 18.流水冲去染液，晾干，观察（油镜）。
小鼠骨髓染色体标本制备
实验目的
• 了解哺乳动物染色体标本的制作方法 • 了解小鼠骨髓细胞染色体形态与数目。
实验原理
• 由于小鼠四肢骨内骨髓细胞中的造血干细 胞是生成各种血细胞和原始细胞，具有高 度的分裂能力，本实验采用这一材料，通 过前处理，低渗，固定，制片，染色等步 骤制得染色体标本，可观察到许多处于分 裂中期的染色体，可以进行染色体组型分 析。
实验ห้องสมุดไป่ตู้察
• 观察细胞的标准为： 1．细胞完整，轮廓清晰，染色体分布在同一水平 面上。 2．染色体形态和分布良好。 3．最好无重叠，即使有个别重叠，也要能明确辩 认，以免差错。 4．所观察的细胞处于同一有丝分裂阶段，即染色 体螺旋化程度或染色体长短大致一样。 在所观察的细胞周围，没有离散的单个或多个染 色体存在，以免影响计数。
实验器材
1．材料：小白鼠 2．器具：注射器（1ml,5ml）、5号针头、解剖盘、 解剖剪、镊子、玻璃吸管、10ml刻度的离心管、 离心机、载玻片、盖玻片、显微镜、滤纸、擦镜 纸、棉花、量筒、天平、恒温水浴锅 3．药品：0.01%秋水仙素、0.075MKCl、固定液 （甲醇：冰醋酸=3：1）、Giemsa染液、0.01M 磷酸缓冲液（PH6.8），0.85%生理盐水。
实验过程
1．预处理：实验前2.5-3小时，按每克体重注射0.02ml，给小 白鼠腹腔注射秋水仙素。
2.断髓法杀死小鼠
3.髋关节处断下肢，剥去皮肉，用纱布擦去残肉，膝关节断下 股骨。
4.用解剖针从两端刺透骨髓腔，将股骨一端固定在装有6.5号针 头的1ml注射器上。
5.在装有3ml生理盐水的离心管中用注射器吸取盐水，反复冲洗 骨髓，直至股骨变白。