心肌组织匀浆的制备
组织匀浆步骤
组织匀浆步骤
组织匀浆的步骤如下：
1.取组织块（0.1g~0.2g）在冰冷的生理盐水中漂洗，除去血
液，滤纸拭干，准确称重，放入5ml的匀浆管中。
2.按重量（g）:体积（ml）=1:9的比例加入9倍体积的匀浆介质
（一般为pH 7.4, 0.01mol/L Tris-HCl, 1mmol/L EDTA-2Na,
0.01mol/L蔗糖, 0.8%的氯化钠溶液）或者0.86%的生理盐水
于匀浆管中，冰水浴条件下，用眼科小剪尽快剪碎组织块。
3.选择合适的匀浆方式。
手工匀浆是将剪碎的组织倒入玻璃匀浆
管中，用剩余的1/3匀浆介质或生理盐水冲洗残留在烧杯中的碎组织块，一起倒入匀浆管中进行匀浆。
机器匀浆可以使用组织捣碎机或内切式组织匀浆机。
超声粉碎则是用超声波细胞破碎仪进行破碎。
镜检观察取少量组织匀浆作涂片，显微镜下观察细胞是否破碎，若没有则可延长匀浆时间。
4.将制备好的匀浆液用普通离心机或低温低速离心机离心，取上
清液进行测定。
以上步骤仅供参考，具体的实验步骤可能会因实验需求和实验条件的不同而有所调整。
在实验过程中，需要注意保持低温和避免反复
冻融，以保持组织的活性和完整性。
同时，也需要注意实验安全，避免使用过于暴力或不安全的操作方法。
资料-组织匀浆制备
组织匀浆的制备1、取组织块0.2g-1.0g，最少可到2～5mg，在冰冷的生理盐水中漂洗，除去血液，滤纸拭干，称重，放入5或10ml的小烧杯内。
2、用移液管量取预冷的匀浆介质（ph=7.4,0.01mol/L Tris-HCL, 0.0001MOL/LEDTA-2Na,0.01mol/L蔗糖0.8％的氯化钠溶液）或者用0.86％冷生理盐水，匀浆介质或生理盐水的体积总量应该是组织块重量的9倍，用移液管或移液器取总量的2/3的匀浆介质或生理盐水于烧杯中，将盛有组织的小烧杯放入冰水中，用眼科小剪尽快剪碎组织块。
3、用组织捣碎机10000～15000r/min上下研磨制成10％组织匀浆，也可用内切式组织匀浆机制备（匀浆时间10秒/次，间隙30秒，连续3～5次，在冰水中进行），皮肤、肌肉组织等可延长匀浆时间。
超声粉碎：用超声粉碎机进行粉碎，可用Soniprep150型超声波发生器以振幅14微米超声处理30秒使细胞破碎，也可用国产超声波发生仪，用40安培，5秒/次，间隙10秒反复3～5次。
取少量组织匀浆做涂片（直接涂片、染色均可），显微镜下观察细胞是否磨破，若没有破则可以延长匀浆时间。
4、将制备好的10％匀浆用普通离心机或低温低速离心机3000r/min左右离心10～15分钟，将离心好的匀浆留下上清弃下面沉淀。
根据你的实验需要，取适量上清夜进行各种测定。
可溶性抗原(soluble antigen)的制备及鉴定蛋白质、糖蛋白、脂蛋白、酶类、补体、脂多糖、细菌外毒素和核酸等均为可溶性抗原，它们有相当部分来源于组织和细胞，成分复杂。
制备这类免疫原时，首先须将组织和细胞破碎，然后再从组织和细胞匀浆中提取目的蛋白或其他抗原，提纯的抗原需鉴定后才能用做免疫原。
关键词：可溶性抗原可溶性抗原solubleantigen糖蛋白脂蛋白细胞匀浆蛋白质、糖蛋白、脂蛋白、酶类、补体、脂多糖、细菌外毒素和核酸等均为可溶性抗原，它们有相当部分来源于组织和细胞，成分复杂。
wb实验记录标准格式
wb实验记录标准格式1.组织总蛋白样品制备：取适量组织50mg待组织块自行溶解，用滤纸吸去其表面水分，将组织块放入玻璃匀浆器球状部位，用组织剪尽量将其剪碎，将剪碎的心肌组织放入玻璃匀浆器的杆状部，按1m RIPA +10uHMSE100mg组织的比例加入RPA和PMSF。
（先加RPA再加PMSF），将玻璃匀浆器插入冰中，匀浆约30分钟。
将组织匀浆转移到离心管中，C12000g离心5分钟，收集上清，样品分装冻存于-20℃备用。
细胞总蛋白样品制备：对于悬浮细胞：离心收集细胞，每10细胞加250u细胞总蛋白提取试剂（在使用前数分钟内加入cooka计磷酸化蛋白酶抑制剂），振荡。
对于贴壁细胞：用TBS冲洗细胞2-3次。
最后一次彻底吸干残留液。
加入适当体积的细胞总蛋白提取试剂（使用前数分内加入蛋白酶抑制剂）于培养板、瓶内35分钟。
期间反复晃动培养板、瓶，使试剂与细胞充分接触。
用细胞刮刀将细胞及试剂刮下，收集到15m离心管中。
冰浴30m irn期间用移液器反复吹打，确保细胞完全裂解。
12000g离心min收集上清，即为总蛋白溶液。
2.测定蛋白浓度：2.1按501配置BCA工作液。
2.2 10uc液（蛋白标准）+90uPBS液稀释成Q5mgm的蛋白标准液。
2.3分别以Q124812.1620u将蛋白标准液加入%孔板的第I8标准孔中，在其他样品孔中加入10u待测样品。
2.4分别加PBS定容至20ul2.5各孔中加入200uBCA工作液，室温放置2小时。
2.6用酶标仪测定蛋白浓度：测定Asc，依标准曲线算出蛋白浓度。
3 SDS-PAGE电泳：3.1制胶：按比例配制分离胶，缓缓地摇动溶液，使激活剂混合均匀，将凝胶溶液平缓地注入两层玻璃极中，再在液面上小心注入一层水，以阻止氧气进入凝胶溶液中，静置40m n同前按比例配制浓缩胶，但混匀溶液时不要过于剧烈以免引入过多地氧气。
吸去不连续系统中下层分离胶上的水分，连续平稳的注入凝胶溶液，然后小心插入梳子并注意不得在齿尖留有气泡，静制60m n以上以保证完全聚合。
组织匀浆的制备
组织匀浆的制备1、取组织块（0.2g~1g）最少可到2～5mg，在冰冷的生理盐水中漂洗，除去血液，滤纸拭干，称重，放入5或10ml的小烧杯内2、用移液管量取预冷的匀浆介质（ph7.4,0.01mol/L Tris-HCL, 0.0001MOL/LEDTA-2Na,0.01mol/L蔗糖0.8％的氯化钠溶液）或者用0.86％冷生理盐水，匀浆介质或生理盐水的体积总量应该是组织块重量的9倍，用移液管或移液器取总量的2/3的匀浆介质或生理盐水于烧杯中，用眼科小剪尽快剪碎组织块（天然时操作要在冰水浴中进行，将盛有组织的小烧杯放入冰水中）。
3、匀浆的方式有多种：手工匀浆、机器匀浆、超声匀浆、反复冻融。
手工匀浆：将剪碎的组织倒入玻璃匀浆管中，再将剩余的1/3匀浆介质或生理盐水冲洗残留在烧杯中的碎组织块，一起倒入匀浆管中进行匀浆，左手持匀浆管将下端插入盛有冰水混合物的器皿中，右手将捣杆垂直插入套管中，上下转动研磨数十次（6～8分钟），充分研碎，使组织匀浆化。
机器匀浆：用组织捣碎机10000～15000r/min上下研磨制成10％组织匀浆，也可用内切式组织匀浆机制备（匀浆时间10秒/次，间隙30秒，连续3～5次，在冰水中进行），皮肤、肌肉组织等可延长匀浆时间。
超声粉碎：用超声粉碎机进行粉碎，可用Soniprep150型超声波发生器以振幅14微米超声处理30秒使细胞破碎，也可用国产超声波发生仪，用40安培，5秒/次，间隙10秒反复3～5次。
反复冻融：培养或者分离的细胞可以用以上的方法匀浆，也可以反复冻溶3次左右（即让细胞加适量的低渗液或者双蒸水放低温冰箱中结冰，溶解，再结冰，再溶解，反复3次左右），但有部分酶活力会受影响。
取少量组织匀浆做涂片（直接涂片、染色均可），显微镜下观察细胞是否磨破，若没有破则可以延长匀浆时间或增加冻融次数。
4、将制备好的10％匀浆用普通离心机或低温低速离心机3000r/min左右离心10～15分钟，若检测ATP酶，则只需要1000转/分，离心5分钟，将离心好的匀浆留下上清弃下面沉淀。
实验四-酶的竞争性抑制作用
实验四酶的竞争性抑制作用一、目的要求：通过实验加深对酶的竞争性抑制作用的了解二、实验原理：与底物化学结构类似的抑制剂，能与底物竞争和酶活性中心的结合、抑制酶的活性，这种类型的抑制为竞争性抑制。
竞争性抑制的程度由抑制剂与底物相对浓度决定。
如果底物浓度不变，酶活性被抑制的程度随抑制剂的浓度增加而增强。
反之，如果抑制剂浓度不变，则酶活性随底物浓度的增加而逐渐恢复。
本实验观察丙二酸对琥珀酸脱氢酶的影响。
琥珀酸脱氢酶的活性，在隔绝空气的条件下，可从加入的甲烯蓝褪色情况来观察。
COOH COOH︳︳CH2 琥珀脱氢酶CH︳+ 甲烯蓝——————→‖+ 甲烯白CH2 CH︳︳COOH COOH三、实验材料1、试剂：（1）0.2 mol/L 琥珀酸：称取琥珀酸23.618g，用蒸馏水配成约600ml ,用5mol/L NaOH 调pH至7.4，再加水至1000ml（2）0.02mol/L琥珀酸：用0.2 mol/L 琥珀酸稀释10倍（3）0.2 mol/L 丙二酸：称取丙二酸22.92g ，用蒸馏水配成约600ml ，5mol/L NaOH调pH至7.4，再加水至1 000ml（4）0.02mol/L丙二酸：用0.2 mol/L丙二酸稀释10倍（5）0.1mol/L 磷酸盐缓冲液（pH7.4）：取0.2 mol/L Na2HPO4 19ml ，加蒸馏水至200ml(6) 0.02%甲烯蓝（7）液体石蜡2、器材（1）小试管及试管架（2）吸量管（10ml *1）及滴管（8支）（3）研钵四、实验方法1、心肌匀浆的制备：取动物（鼠、猪等）心肌1g，置研钵中，剪碎，研磨成匀浆，再加入0.1mol/L 磷酸盐缓冲液10ml ，磨匀，备用加入液体石蜡后，室温放置。
观察各管甲烯蓝褪色情况。
五、结果处理记录各管甲烯蓝褪色情况，并解释结果。
六、注意事项1. 心肌要用新鲜的2.注意各种试剂加入的顺序，混匀各管已加入的试剂后马上加入液体石蜡3.及时、仔细观察颜色变化4．观察结果过程中，不要摇动试管，以免溶液与空气接触而使甲烯白重新被氧化变蓝七、思考题在此实验基础上，如何设计实验来观察“增加底物浓度，酶的竞争性抑制作用可以降低或消除”的现象？。
各种组织匀浆样本用于ELISA检测的处理方法
各种组织匀浆样本用于ELISA检测的处理方法大鼠肺组织匀浆制备过程：1.WB法：在组织匀浆器中加入大鼠肺和5体积的匀浆缓冲液进行匀浆，4摄氏度下3000转离心20分钟后，收集上清。
用Coomassie Plus Protein Assay 测定总蛋白浓度. 用等量的样本buffer与20微克样本混合(100 mM Tris-HCl, 2% SDS, 0.02%溴酚蓝,和10%甘油煮几分钟之后电泳.EILSA：肺用5体积的buffer进行匀浆，缓冲液由10 mM HEPES, 10 mM KCl, 0.5 M 蔗糖, 1 mM EGTA, 1 mM DTT构成。
匀浆组织在750 xg 下离心10 分钟分理出细胞核. 含有细胞质部分的上清液储存在–70摄氏度冰箱用于MIP-2蛋白质测定.2.BAL液收集后, 收集左肺做TNF-alpha, MIP-2, 和移行蛋白表达评估. 肺用1mL细胞裂解液在匀浆器中进行匀浆。
得到的组织匀浆在10000Xg下离心10分钟. 上清液储存在–80 摄氏度留用于后面的检测。
3.冻存的的组织样本称重加入匀浆缓冲液（4摄氏度，每100毫克组织中加入1毫升缓冲液），样本进行匀浆和一次冻融,超声10分钟后在4摄氏度孵化一个小时。
最终得到的组织匀浆在120,000 x g下离心. 组织上清液用于细胞因子测定，这些数据用每毫克组织表达。
4. 取三分之一冻存的来源于？在4摄氏度细胞裂解液中孵化1小时的肺进行匀浆，组织匀浆之后超声并在4摄氏度12,000 转下离心10 分钟 . ELISA 检测TNF-alpha, MIP-2, and IL-6 的组织匀浆的内容。
组织匀浆总蛋白采取Bradford法.大鼠脾和肺组织匀浆制备过程：TNF-alpha检测脾和肺组织匀浆过程：冰冻组织样本称重后匀浆（每100毫克组织1毫升缓冲液）。
匀浆后的组织进行一轮冻融后，超声10分钟在4摄氏度下孵化一小时。
组织匀浆方法
组织匀浆方法
组织匀浆方法是一种常见的实验技术，它可以将组织样本破碎并均匀分散在缓冲液中，以便进行后续的实验操作。
下面将介绍一些常用的组织匀浆方法。
1. 切片法
这是一种最常见的组织匀浆方法。
首先将组织样本切成小块或薄片，然后用匀浆器或超声波仪器将其破碎。
这种方法适用于较硬的组织样本，如肌肉、骨骼等。
2. 挤压法
这种方法适用于较软的组织样本，如肝脏、脾脏等。
将组织样本放在筛网上，用匀浆器或手动挤压器将其挤压，使其破碎并均匀分散在缓冲液中。
3. 针刺法
这种方法适用于较小的组织样本，如小鼠肝脏、心脏等。
将组织样本放在离心管中，用针头将其刺破，然后用匀浆器或超声波仪器将其破碎。
4. 酶消化法
这种方法适用于含有细胞的组织样本，如肝脏、胰腺等。
将组织样
本用酶消化液消化，使细胞破裂并释放出细胞质，然后用匀浆器或超声波仪器将其破碎。
无论采用哪种方法，组织匀浆前都需要将匀浆器或超声波仪器消毒，并在操作过程中保持无菌。
此外，匀浆时间和速度也需要根据不同的组织样本进行调整，以避免过度破碎或不充分破碎的情况发生。
组织匀浆方法是一种重要的实验技术，它可以为后续的实验操作提供高质量的组织样本。
在实验操作中，我们需要根据不同的组织样本选择合适的匀浆方法，并注意消毒和无菌操作，以确保实验结果的准确性和可靠性。
小鼠心肌组织rna提取
小鼠心肌组织rna提取
提取小鼠心肌组织的RNA可以采用多种方法，以下是一种常用的方法：
1.准备所需试剂和器材：TRIzol试剂、离心管、枪头、镊子、剪刀
等。
2.剪取小鼠心肌组织：将小鼠处死后，用镊子轻轻取出心肌组织，
并称重。
3.加入TRIzol试剂：将适量的TRIzol试剂加入离心管中，然后加
入剪碎的心肌组织，用剪刀搅拌均匀。
4.彻底破碎细胞：将混匀的TRIzol和心肌组织转移到研钵中，用
研磨棒研磨至匀浆。
5.离心：将匀浆液转移到离心管中，进行离心，以分离细胞碎片
和组织残渣。
6.移除沉淀物：将上清液转移到新的离心管中，并加入等体积的
氯仿，剧烈震荡后静置15分钟。
7.再次离心：将上清液再次转移到新的离心管中，进行离心，以
进一步分离RNA和其他杂质。
8.洗涤RNA：将上清液转移到干净的离心管中，用等体积的异丙
醇洗涤RNA沉淀。
9.晾干RNA：将离心后的RNA晾干，然后溶解在适量的DEPC水
中。
10.测定RNA浓度和质量：使用紫外分光光度计测定RNA浓度和
质量。
提取RNA的过程需要注意无菌操作，避免污染。
另外，为了保证提取的RNA质量和数量符合后续实验的要求，需要控制好提取过程中的一些关键因素，如剪碎组织的程度、加入TRIzol试剂的比例、研磨力度和时间等。
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心肌组织匀浆的制备缺血30min，再灌注60min后停止主动脉灌流，取下心脏，迅速剪下缺血区组织约0.1g在冰冷生理盐水中漂洗，除去血液，滤纸吸干，放入1.5ml的塑料离心管中，经液氮冷冻后置-70℃冰箱中保存。
实验全部结束后，将所有标本取出，用移液管取预冷生理盐水(生理盐水的体积重量是组织块重量的9倍)，加入盛有组织的塑料离心管中，用眼科小剪尽快剪碎组织块。
继用组织捣碎机10000-15000r/min，离心14min，将心脏制成10%心肌组织生理盐水匀浆，取0.5ml 上清液备用，测定SOD、MDA生化指标。
测定方法按试剂盒说明进行。
2.7 心肌组织超氧化物岐化酶（superoxide dismudase, SOD）活力的测定剪下左心室称重后，在冰冷的匀浆介质生理盐水中制成10%匀浆，先用双缩脲法进行蛋白定量，然后采用黄嘌呤氧化酶法测定SOD的活力。
SOD测定原理：黄嘌呤与黄嘌呤氧化酶反应体系生成超氧阴离子自由基，然后将羟胺氧化成亚硝酸盐，显色以后呈现紫红色，在550 nm处有最大吸收峰，测定吸光度。
当被测样品中含SOD时，通过抑制超氧阴离子自由基，使亚硝酸盐的生成减少，若测定管的吸光度值低于对照管的吸光度值，通过公式计算可求出被测样品中的SOD 活力。
SOD活力的高低可间接反映机体清除氧自由基的能力。
采用南京建成生物工程研究所的SOD检测试剂盒严格按试剂盒说明书操作，测得心肌中的SOD活力（U/mg prot）。
脂质过氧化物中的MDA能与硫代巴比妥酸（TAB）发生缩合反应，生成物呈红色，在532nm处有最大吸收峰，测定被测样品的吸收光度值，根据吸光度值计算出MDA含量。
采用南京建成生物工程研究所的MDA检测试剂盒，按试剂盒说明书进行操作，测得心肌中的MDA（nmol/mg prot）含量。
乳酸在LDH的催化作用下产生丙酮酸，丙酮酸与2,4-二硝基苯肼反应生成丙酮酸二硝基苯腙，碱性溶液中呈棕红色，最大吸收峰在340nm处，测定吸光度值，求出此酶的活力。
采用中生北控生物科技股份有限公司的LDH检测试剂盒进行测定。
实验中于各监测时间点，分别留取心脏灌流漏出液1.5ml，-70℃保存，以备心脏灌流漏出液酶学指标使用。
将留存的灌流心脏漏出液在室温下自然融化，按试剂盒说明书进行操作，计算LDH活力（U/L）。
乳酸脱氢酶比色测定法（L P反应固定时间法）一、原理以氧化型辅酶Ⅰ(NAD+ )作氢受体，乳酸脱氢酶催化乳酸脱氢生成丙酮酸，丙酮酸与2, 4—二硝基苯肼作用生成丙酮酸二硝基苯腙，后者在碱性溶液中显棕红色。
颜色深浅与丙酮酸浓度成正比，由此推算乳酸脱氢酶活性单位。
二、试剂盒组成1．试剂A：底物缓冲液，12 ml, 4℃避光保存1年。
2．试剂B：11.3 mmol/L氧化型辅酶Ⅰ溶液，2 ml, –20℃保存，4℃可保存6周，3．试剂C：1mmol/L 2, 4—二硝基苯肼溶液，10 ml, 4℃避光保存半年以上。
4．丙酮酸钠标准品母液(5 μmol/ml)，0.5 ml, –20℃保存；5．终止试剂：0.6 mol/L NaOH , 30 ml, 常温保存。
三、操作步骤1．取10 μl标准品或样本加入到微孔板中。
2．底物缓冲液与氧化型辅酶Ⅰ溶液以5:1的体积比混合，取60 μl混合液加到各孔，充分混匀；37℃水浴15分钟。
3．加入2, 4—二硝基苯肼溶液50 μl，与标准品或样本充分混合；37℃水浴15分钟。
4．加入150 μl 终止试剂，充分混合。
5．室温放置3分钟后，440nm波长处测定。
四、标准曲线的制作临用前将丙酮酸钠标准品母液用底物缓冲液稀释成2.5、2、1.5、1、0.5、0.25、0.125 μmol/ml 7 个浓度，稀释液4℃可保存一周。
丙酮酸钠浓度与乳酸脱氢酶活力单位的对应关系见下表。
丙酮酸钠浓度(μmol/ml) 0 0.125 0.25 0.5 1 1.5 2 2.5 相当于乳酸脱氢酶活力单位0 125 250 500 1000 1500 2000 2500 丙酮酸钠0 μmol/ml的孔只加10 μl底物缓冲液，以此孔作为空白孔调零，440nm波长处读取各孔吸光度，与其相应的酶活力单位作图，得出标准曲线。
五、样本处理一）体液处理血清用生理盐水作1：10稀释；脑脊液内乳酸脱氢酶活力较低，直接以原液测定即可；其他体液也需1：10稀释后测定。
二）细胞处理细胞用1% Triton X-100裂解，取10 μl细胞裂解液用于测定；细胞培养基可直接用于测定。
六、单位定义每100m1血清中的LDH在37℃与底物作用15分钟，能生成一微摩尔丙酮酸者即为一个乳酸脱氢酶活力单位。
以第四管为例，丙酮酸含量为0.005微摩尔，如稀释后的血清测定结果相当于第四管的光密度时，因稀释前的血清用量为0.001ml，换算成100ml时就相当于乳酸脱氢酶活力500单位／dl；如果血清未经稀释，测定结果相当于第四管光密度时，说明0.01ml血清在37℃与基质作用15分钟生成0.005微摩尔丙酮酸，换算成100ml血清就相当于产生了50微摩尔丙酮酸，乳酸脱氢酶活力单位为50U/dl, 即测得的酶活力单位除以稀释倍数10得实际的酶活力单位。
七、结果处理440nm波长处读取样本孔吸光度，根据标准曲线算出酶活力单位，即为测定的酶活力单位。
一）体液作1：10稀释后测定的体液的实际酶活力单位即是测定的酶活力单位；未经稀释的体液的实际酶活力单位=测定的酶活力单位/10；二）细胞活力计算细胞活力用LDH释放率来表示，后者值越大，表示细胞活力越差，受损程度越严重。
细胞LDH释放率（%）=细胞培养基中测定的酶活力单位/（细胞裂解液测定的酶活力单位+细胞培养基测定的酶活力单位）×100%八、参考值人血清LDH：190~310U/dl九、注意事项1．红细胞内乳酸脱氢酶活力较血清内约高100倍．故标本有轻微的溶血．测定的结果会比实际的结果高数倍。
2. 草酸盐可抑制乳酸脱氢酶活力，故不能用草酸盐抗凝血浆测定。
3．测定结果超过2500U时，应将样本继续稀释后重新测定。
4．该方法以乳酸盐和NAD+为底物，其优点是乳酸盐及NAD+ 底物液稳定，冰箱保存时可稳定半年以上，反应的线性范围较宽【资料简介】乳酸脱氢酶（Lactate Dehydrogenase，LDH）试剂盒说明书分光光度法50 管/24 样测定意义：LDH（EC 1.1.1.27）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，是糖酵解途径的末端酶，催化丙酮酸与乳酸之间的可逆反应，伴随着NAD+/NADH 之间互变。
测定原理：LDH 催化NAD+氧化乳酸生成丙酮酸，丙酮酸进一步与2, 4 - 二硝基苯肼作用生成丙酮酸二硝基苯腙，在碱性溶液中显棕红色，颜色深浅与丙酮酸浓度成正比。
需自备的仪器和用品：可见分光光度计、恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1 mL 玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
试剂的组成和配制：提取液：30mL×1 瓶，4℃保存；试剂一：液体15 mL×1 瓶，4℃保存；试剂二：粉剂×1 支，-20℃保存，用时加入 1.3 mL 蒸馏水充分溶解备用，配好后-20℃保存，可保存两周，禁止反复冻融；试剂三：液体15 mL×1 瓶，4℃保存；试剂四：液体50 mL×1 瓶，4℃保存；血清（浆）样品：直接检测。
测定步骤：1、分光光度计预热30min 以上，调节波长至450nm，蒸馏水调零。
2、样本测定（在EP 管中加入下列试剂）试剂名称(μL) 测定管对照管样本50 50试剂一250 250试剂二50蒸馏水50充分混匀，37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）水浴15min试剂三250 250充分混匀，37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）水浴15min试剂四750 750充分混匀，室温静置3 分钟，450 nm 下测定吸光度，计算ΔA=A 测定管-A对照管。
每个测定管需要设一个对照管。
LDH 活力单位的计算：1、标准条件下测定的回归曲线，y = 0.725x (x 为标准品浓度，umol/mL；y 为对吸光度)。
2、血清（浆）LDH 活力的计算单位的定义：每mL 血清（浆）每分钟催化产生1nmol 丙酮酸定义为一个酶活力单位。
LDH（U/mL）=ΔA÷0.725÷T×103=92×ΔA南京建成生物工程研究所超氧化物歧化酶（SOD）测试盒说明书（货号：A001-3：WST-1法）一、实验仪器：96孔板、微量移液器（单道移液器、多道移液器）、37℃恒温孵育箱、酶标仪（450nm波长）二、适用范围：本试剂盒采用黄嘌呤氧化酶法(羟胺法)测定SOD活力。
可测血清(浆)、脑脊液、胸水、腹水、肾透析液、尿液、精液、红细胞、白细胞、血小板、心肌培养细胞、肿瘤培养细胞、各种动植物细胞、及亚细胞水平(线粒体、微粒体)中的SOD活力，并可检测微生物、药物、食品、饮料、化妆品中的SOD活力。
三、操作表：对照孔对照空白孔测定孔测定空白孔待测样本（μl）- - 20 20双蒸水（μl）20 20 - -酶工作液（μl）20 - 20 -酶稀释液（μl）- 20 - 20底物应用液（μl）200 200 200 200混匀，37℃孵育20分钟，450 nm处酶标仪读数[注]：对照、对照空白、测定空白一批实验只需要各做1～2孔。
四、技术参数：测定波长450nm 反应温度37℃对照OD值≥0.2批内CV5.05%批间CV 3.32% 检出限0.5U/ml五、计算公式：(A - A) -(A - A)SOD 100(A - A)( %) =×对照测定对照空白测定空白对照对照空白抑制率1、血清（浆）、培养液等液体标本计算公式：SOD 50%( U/ml) (%)SODmlml=÷××活力抑制率反应体系样本测试前0.24（）0.02稀释倍数稀释倍数2、组织标本，用蛋白表示结果计算公式：SOD 50%( U/mgprot) (%)mgprotmlSODmlml=÷×÷活力抑制率反应体系待测样本蛋白浓度0.24（）0.02稀释倍数（/）3、全血/红细胞标本，用血红蛋白表示结果，计算公式SOD 50%( U/mgHb) (%)mgHbmlSODmlml=÷×÷活力抑制率反应体系待测样本血红蛋白浓度0.24（）0.02稀释倍数（/）4、植物组织标本，用植物组织重表示结果计算公式：。