项目4生化技术生产生物药物(任务1生化
生物制药工艺学 第13章 生化药物制造工艺(酶类药物讲学课件
经济学基础
第一章 我国的基本经济制度
一个公有制占主体,一个共同富裕,这是我们必须 坚持的社会主义根本原则。
------邓小平
经济学基础
第一章 我国的基本经济制度
(三)公有制主体地位的主要体现
公有制 表 经济为 主 体现
公有资产 在社会总 资产中占 优势
金属辅基与酶活性关系 Cu、Zn-SOD：Zn与分子结构有关，与催化活性无关 Cu与活性有关，对酶活力是必需的 Mn-SOD：Mn对酶活力是必需的 Fe-SOD：Fe对酶活力是必需的
1.以牛血红细胞提取Cu、Zn-SOD的工艺
【收集】
【洗涤】
新鲜牛血 离心
红细胞
2％NaCl
【溶血】
干净红细胞
H2O,30min
再次,有利于增加生产、扩大服务；
最后,有利于积累资金,增加财政收入；
此外，还可以促进经济落后地区、落后行 业的经济发展。
经济学基础
第一章 我国的基本经济制度
（二）多种所有制经济共同发展的意义 讨论
1.根据你的所见所闻说出，多种所有制 经济的发展带来哪些新变化？
2.如何评价一种生产资料所有制结构的 优劣,应该以什么为标准？
经济学基础
第一章 我国的基本经济制度
(二) 坚持公有制的主体地位
我们身边的公有制企业
中国石油
大唐电信
中国国际航空公司
经济学基础
第一章 我国的基本经济制度
(二)坚持公有制的主体地位
第一,建设中国特色社会主义的根本原则; 第二,消灭剥削 ,实现共同富裕的根本保证; 第三,保证其它所有制经济为社会主义服务
生物制药工艺学 第13章 生化 药物制造工艺（酶类药物）
生化药物分析
3. 安全性检查 1）热原检查 2）降压物质检查 3）过敏试验 4）异常毒性试验 5）无菌试验 6）杂质与污染物 7）致突变试验 8）生殖毒性试验
含量（效价） 4. 含量（效价）测定
1）理化分析法： 重量法、滴定法、 电化学法、光谱法 色谱法（HPLC法）
2）生化分析法 酶法： 酶活力测定法 酶分析法 SDS-PAGE法 免疫分析法
3）生物检定法 药物对生物体或离体器官所起的生物活性 测定效价时采用参考品，体内、体 外方法测定活性，计算效价IU 同时测定蛋白含量，计算特异比 （IU/mg）
例：冻干基因工程α1b干扰素制造及检定规程 冻干基因工程 干扰素制造及检定规程
本品系用从健康人白细胞中获得的α1b干扰素基 因重组质粒，传染大肠杆菌，使之高效表达人α1b 干扰素，经高度纯化后冻干制成。用于治疗慢性乙 型肝炎、丙型肝炎和毛细胞白血病等疾病。 主要包括以下内容： 1 菌种 2 发酵 3 收菌 4 菌体裂解与粗制干扰素制备 5 浓缩与纯化 6 稀释、除菌过滤 7 半成品检定 8 除菌半成品检定 9 成品检定 10规格 11保存与效期 12 冻干基因工程α1b干扰素使用说明书
第二章 生物药物的分析
一、概述
1. 生物药物： 生物药物： 利用生物体、生物组织和器官制得的药物 主要包括： 生化药物 生物技术药物 生物制品 生物体分离纯化得到 利用生物技术得到
2. 生术制得 生 化 药 物 生命基本物质及 其衍生物等
氨基酸、Pr类 酶、辅酶类 多糖类 脂类 核酸类
二、检验的程序和方法
收录于《中国药典》 收录于《中国药典》和《中国生物制品规程》 中国生物制品规程》 程序和方法包括： 鉴别、杂质检查、安全性检查、含量 （效价）测定 1.鉴别 1.鉴别 1）理化鉴别法：UV、肽图等 2）生化鉴别法：酶法、电泳法等 3）生物鉴别法：动物试验等
生化药物生产项目策划报告书范本
目录项目一：核酸的生产1.资料查找2.实验方案制定3.PPT展示4.实验报告5.实验过程与结果图片展示项目二：SOD的生产1.资料查找2.实验方案制定3.PPT展示4.实验报告5.实验过程与结果图片展示项目三：卵磷脂的生产1.资料查找2.实验方案制定3.PPT展示4.实验报告5.实验过程与结果图片展示项目四：香菇多糖的生产1.资料查找2.实验方案制定3.PPT展示4.实验报告5.实验过程与结果图片展示1.资料查找1.1核酸相关知识1.1.1核酸简介由许多核苷酸聚合成的生物大分子化合物，为生命的最差不多物质之一。
核酸广泛存在于所有动物、植物细胞、微生物内、生物体内核酸常与蛋白质结合形成核蛋白。
不同的核酸，其化学组成、核苷酸排列顺序等不同。
在一定理化因素作用下，核酸双螺旋等空间结构中碱基之间的氢键断裂，变成单链的现象称为变性。
引起核酸变性的常见理化因素有加热、酸、碱、尿素和甲酰胺等。
变性DNA 在适当条件下，可使两条分开的单链重新形成双螺旋DNA的过程称为复性1.1.2种类核酸同蛋白质一样，也是生物大分子。
核酸的相对分子质量专门大，一般是几十万至几百万。
核酸水解后得到许多核苷酸，实验证明，核苷酸是组成核酸的差不多单位，机组成核酸分子的单体。
一个核苷酸分子是由一分子含氮的碱基（称碱基）、一分子五碳糖（即五碳糖）和一分子磷酸组成的。
依照五碳糖的不同能够将核苷酸分为脱氧核糖核苷酸（DNA）和核糖核苷酸（RNA）。
DNA存在多级结构●DNA的一级结构即由核苷酸聚合而成的生物大分子。
●DNA二级结构即双螺旋结构（double helix structure）。
●DNA三级结构是指DNA链进一步扭曲盘旋形成超螺旋结构。
●DNA的四级结构——DNA与蛋白质形成复合物1.1.3作用核酸在蛋白质的复制和合成中起着储存和传递遗传信息的作用。
核酸不仅是差不多的遗传物质，而且在蛋白质的生物合成上也占重要位置，因而在生长、遗传、变异等一系列重大生命现象中起决定性的作用。
生化药物生产
⽣化药物⽣产-------夏⼩落项⽬⼆核酸的⽣产1、预⽅案2、确定⽅案3、实训过程4、实训报告预⽅案⼀、简单介绍在1869年，F. Mischer从细胞核中分离得到⼀种酸性物质，即现在被称为核酸的物质。
1939年，E. Knapp等第⼀次⽤实验⽅法证实核酸是⽣命遗传的基础物质。
核酸不仅携带有各种⽣物所特有的遗传信息⽽且影响⽣物的蛋⽩质合成和脂肪、糖类的代谢。
核酸包括DNA、RNA两种，DNA主要存在于细胞核中，占总DNA的98%，另2%存在于线粒体和叶绿体：RNA主要存在于细胞质中，约占总RNA的90%，另10%存在于细胞核⾥的核仁、核浆和染⾊体中。
核酸的含量与细胞的⼤⼩⽆关，所以制备核酸时常采⽤⽣长较旺盛的组织，如胰、脾、胸腺等，这类组织⽐同样体积的其他组织，如肌⾁、脑等组织含有更多的细胞数，因⽽就有更⾼的核酸含量。
核酸的组成⼆、核酸类药物的分类及应⽤核酸类药物可分为两⼤类：第⼀类为具有天然结构的核酸类物质，这类药物有助于改善机体的物质代谢和能量代谢平衡，加速受损组织的修复，促使机体恢复正常⽣理机能。
临床上⼴泛使⽤于⾎⼩板减少症、⽩细胞减少症、急慢性肝炎、⼼⾎管疾病、肌⾁萎缩等代谢障碍性疾病。
该核酸类药物有肌苷、ATP、辅酶A等。
这些药物多数是⽣物体⾃⾝能够合成的物质，它们基本上都可以经微⽣物发酵或从⽣物资源中提取⽣产。
第⼆类为⾃然结构碱基、核苷、核苷酸的结构类似物或聚合物，这类药物⼤部分由⾃然结构的核酸类物质通过半合成⽣产，此类药物是治疗病毒、肿瘤、艾滋病的重要药物，也是产⽣⼲扰素、免疫抑制剂的临床药物。
临床上⽤于抗病毒的这类药物有三氟代胸苷、叠氮胸苷等8种。
此外还有氮杂鸟嘌呤、巯嘌呤、氟胞嘧啶、聚肌胞、阿糖胞苷等都已⽤于临床。
三、核酸类药物的⽣产⽅法（1）酶解法酶解法是先⽤糖质原料、亚硫酸纸浆废液或其他原料发酵⽣产酵母，再从酵母菌体中提取核糖核酸(RNA)，提取出的核糖核酸经过青霉菌属或链霉菌属等微⽣物产⽣的酶进⾏酶解，制成各种核（2）半合成法半合成法即微⽣物发酵和化学合成并⽤的⽅法。
生物药生产工艺
生物药生产工艺生物药物生产工艺是指通过使用生物工程技术将微生物、动物或人类细胞作为生产平台，生产用于预防、治疗或诊断疾病的药物。
它与化学药物的生产工艺不同，主要包括以下几个方面：1. 药物的筛选和发现：在生物药物的生产过程中，首先需要筛选和发现具有治疗或预防特定疾病潜力的药物候选者。
这可以通过使用高通量筛选技术或通过理解疾病发生机制来实现。
2. 细胞培养和发酵：生物药物的生产通常需要使用微生物、动物或人类细胞作为生产平台。
这些细胞被培养在合适的培养基中，并提供充足的营养物质和适宜的环境条件，以促进药物的产生。
在发酵过程中，细胞产生的药物会积累在培养液中。
3. 分离和纯化：在生产过程结束后，药物需要从培养液中分离和纯化出来。
这通常需要使用多种技术，包括过滤、沉淀、离心、层析和膜技术等。
通过这些步骤，药物可以从其他杂质中分离出来，得到高纯度的药物制剂。
4. 药物的后处理和包装：分离和纯化后的药物需要进行后处理步骤，如冻干、溶解和调节pH等。
随后，药物被包装成适合使用的形式，如注射剂、口服药片、局部用药剂等。
5. 质量控制和检测：在整个生产过程中，需要对药物进行质量控制和检测。
这包括对原材料和中间产物进行分析、对生产过程进行控制、对最终产品进行质量检测和验证。
这些步骤确保生产的药物是安全有效的。
6. 注册和监管：在药物的生产过程中，需要遵守一系列的法规和规定。
这包括申请药物注册批准，确保生产过程符合质量管理体系，并进行监管和审计。
综上所述，生物药物生产工艺是一个复杂的过程，需要综合运用生物学、生物工程学、化学和药学等多个学科的知识。
通过开发和改进生产工艺，可以提高药物的产量和纯度，并确保药物的质量和安全性。
这对于满足市场需求，提高治疗效果和降低药物成本具有重要意义。
国家开放大学《药事管理与法规》形考任务1-4参考答案
国家开放大学《药事管理与法规》形考任务1-4参考答案形考任务1一、单选题（15题，每题4分，共60分）1.我国《药品管理法》中的药品特指（）。
A.以上都包括B.农药C.人用药品D.兽用药2.（）是《药品管理法》最根本的目的。
A.加强药品管理B.保护和促进公众健康C.保障人体用药安全D.保证药品质量3.从药品的社会价值和社会功能角度分类，我们将药品分为（）。
A.处方药与非处方药B.新药、仿制药、进口药品和医疗机构制剂C.中药和民族药D.国家基本药物、国家储备药品、特殊管理药品等4.（）负责制定药品、医疗器械和化妆品监管制度，负责对药品、医疗器械和化妆品的研制、生产、流通、使用等环节进行监督管理。
A.省级药品监督管理部门B.国家药品监督管理局C.市级药品监督管理部门D.县级药品监督管理部门5.（）是指因国家行政机关及其工作人员违法行使职权，侵犯法人或其他组织的合法权益并造成损害，由国家承担赔偿责任的制度。
A.行政补偿B.行政赔偿C.行政复议D.行政诉讼6.以下关于非处方药给的管理要求描述有误的是（）。
A.非处方药的包装必须印有国家指定的非处方药专有标识B.非处方药的标签和说明书必须经过国家药品监督管理部门批准，用语要科学、易懂，便于消费者自行判断、选择和使用C.非处方药专有标识图案分为绿色和红色，绿色专有标识用于甲类非处方药品，红色专有标识用于乙类非处方药品和用作指南性标志D.非处方药可以在大众媒介上进行广告宣传，但广告内容必须经过审查、批准，不能任意夸大或篡改，以正确引导消费者科学、合理地进行自我药疗7.新药是指（）。
A.与原研药品质量和疗效一致的药品B.未在中国境内上市销售的药品C.未在中国境内外上市销售的药品D.处于临床试验阶段的药品8.甲类非处方药，标识为（）。
A.红底白字B.绿底白字C.白底红字D.白底绿字9.药事管理的概念可以从“宏观”与“微观”两个方面去理解，微观上，（）。
A.是指与药品的安全、有效有关的药品研发、生产、流通、营销、使用、监管等活动。
生化药物的生产
生化药物的生产实训报告学院：常州工程职业技术学院系部：制药与生物工程系班级：生物技术1111指导老师：韦平和小组成员：钱龙朱凯许祥博林志豪制作人：钱龙学号：2011425119实验方案A背景DNA和RNA是存在于细胞中的正常成分。
DNA主要存在于细胞核中，少量（2%）存在于线粒体和叶绿体中；RNA主要存在于细胞质中，少量（10%）存在于核仁、核浆和染色体中。
核酸的含量与细胞大小无关，以生长旺盛的组织细胞中含量较多，如动物胰脏、脾脏、胸腺，植物的茎尖、根尖及各种分生组织等。
1核酸类药物特性又称核苷酸类药物。
由某些动物、微生物的细胞中提取出的核酸(包括核苷酸和脱氧核苷酸)，或者用人工合成法制备的具有核酸结构(包括核苷酸和脱氧核苷酸结构)同时又具有一定药理作用的物质，称为核酸药物或核酸类生化药物。
广义的核酸药物可包括核苷酸药物、核苷药物及含有不同碱基化合物的药物。
核酸药物具有多种药理作用，按其作用特点可分为：(1)抗病毒剂，代表药物有三氮唑核苷、无环鸟苷和6可糖腺苷等，临床上用于抗肝炎病毒、疱疹病毒及其他病毒；(2)抗肿瘤剂，代表药物有用于治疗消化道癌的氟尿嘧啶以及用于治疗各类急性白血病的阿糖胞苷(3)干扰素诱导剂，代表药物为聚肌胞，临床上用于抗肝炎病毒、疱疹病毒等；(4)免疫增强剂，主要用于抗病毒及抗肿瘤的辅助治疗；(5)供能剂，用于肝炎、心脏病等多种疾病的辅助治疗。
药用腺苷三磷酸(ATP)原粉可从酵母RNA为原料制备，也可通过人工合成及发酵生产。
2在食品方面的应用食品工业是核酸的另一消费大户，核酸经酶转化可得到5一肌着酸二钠（STMP）和5-鸟苷酸二钠（5－GMP），二者均为无色至白色结晶或白色结晶性粉末。
可分别用于午餐肉、火腿、咸肉等腌制肉类，最高允许用量一般为500mg ／kg（以5－GMP计），也可按照我国GB2760－88规定，将二者用于混合味精，用量视正常生产需要，但其中味精含量不得低于80％，其鲜味比一般味精高出40－100倍，而且风味更好。
生化教案生化药物
生化教案——生化药物一、教学目标1. 让学生了解生化药物的定义、分类和作用。
2. 使学生掌握生化药物的制备方法和应用领域。
3. 培养学生对生化药物的研究兴趣和实际操作能力。
二、教学内容1. 生化药物的定义与分类1.1 定义：生化药物的概念及其与生物化学的关系1.2 分类：酶类药物、激素类药物、抗体类药物等2. 生化药物的作用机制2.1 酶类药物的作用机制2.2 激素类药物的作用机制2.3 抗体类药物的作用机制3. 生化药物的制备方法3.1 酶类药物的制备方法3.2 激素类药物的制备方法3.3 抗体类药物的制备方法4. 生化药物的应用领域4.1 临床应用：疾病诊断、治疗和预防4.2 科研应用：生物实验和生物技术领域三、教学方法1. 讲授法：讲解生化药物的定义、分类、作用机制、制备方法和应用领域。
2. 案例分析法：分析具体生化药物的制备过程和应用实例。
3. 讨论法：引导学生探讨生化药物研究的新进展和未来发展。
四、教学准备1. 教材：生化药物相关教材或参考书籍。
2. 课件：制作多媒体课件，展示生化药物的相关图片和制备过程。
3. 实验材料：准备生化药物的制备实验所需材料。
五、教学评价1. 平时成绩：考察学生的课堂表现、提问和讨论参与情况。
2. 实验报告：评估学生在制备实验中的操作能力和实验结果。
3. 期末考试：设置相关试题，检验学生对生化药物知识的掌握程度。
六、教学内容与安排第五章：生化药物的应用案例分析5.1 酶类药物案例：肝素的应用与制备5.1.1 肝素的作用机制与临床应用5.1.2 肝素的制备方法与过程5.2 激素类药物案例：胰岛素的应用与制备5.2.1 胰岛素的作用机制与临床应用5.2.2 胰岛素的制备方法与过程5.3 抗体类药物案例：单克隆抗体的应用与制备5.3.1 单克隆抗体的作用机制与临床应用5.3.2 单克隆抗体的制备方法与过程第六章：生化药物研究的最新进展6.1 生化药物研究的新技术和新方法6.1.1 重组DNA技术在生化药物研究中的应用6.1.2 蛋白质工程在生化药物研究中的应用6.2 生化药物研究的新成果和未来发展6.2.1 生物制药在疾病治疗中的应用6.2.2 生化药物研究的未来发展预测七、教学方法与安排第七章：案例分析与小组讨论7.1 学生分组进行案例分析7.1.1 每组选择一个案例进行深入分析7.1.2 各组展示分析结果并进行讨论7.2 小组讨论：生化药物研究的未来发展趋势7.2.1 各小组针对生化药物研究的未来发展进行讨论7.2.2 分享讨论成果，总结生化药物研究的未来方向八、教学内容与安排第八章：实验教学与实践操作8.1 酶类药物的制备实验8.1.1 讲解实验原理与步骤8.1.2 学生动手进行实验操作8.2 激素类药物的制备实验8.2.1 讲解实验原理与步骤8.2.2 学生动手进行实验操作8.3 抗体类药物的制备实验8.3.1 讲解实验原理与步骤8.3.2 学生动手进行实验操作九、教学方法与安排第九章：课堂互动与知识拓展9.1 学生提问与教师解答9.1.1 学生针对教学内容提出问题9.1.2 教师进行解答与讨论9.2 知识拓展：生化药物与生物技术的关系9.2.1 讲解生化药物与生物技术之间的联系9.2.2 学生进行课堂互动与讨论十、教学评价与安排第十章：教学总结与评价10.1 学生自我评价与反思10.1.1 学生总结学习收获与不足10.1.2 学生反思自己在学习过程中的表现10.2 教师评价与反馈10.2.1 教师对学生的学习情况进行评价10.2.2 教师针对学生的表现给予反馈与建议重点解析一、重点内容1. 生化药物的分类与作用：酶类药物、激素类药物、抗体类药物等，以及它们在临床和科研中的应用。
生化药物制造工艺课件
1 基础篇：生物制药工艺基础 2 技术篇： 生物分离工程技术 3 品种篇：重要生物药物制造工艺
•1
生物药物的类别
（一）天然生物药物 1.微生物药物 microbil medicine 2.生化药物（含海洋药物） Biochemical medicine（Marine medicine）
--------提高了产品的纯度和收率
多种层析技术、超速离心等 --------高纯度的生化药物
•8
尿激酶从每1mg蛋白质活力不得少于35，000单 位提高到100，000单位，高于英国药典及欧洲药 典水平（70，000单位），与日本药典相同。
胰岛素，激肽释放酶都与国外先进水平相当。
辅酶A标准从220U/mg提高到250u/mg。
•3
分类
氨基酸类药物 多肽类药物 蛋白质类药物 酶类药物 辅酶类药物 核苷酸与核酸类药物 多糖类药物
脂类药物
•4
特点
1．一般生物学特性：
天然生物药物是生物进化与自然选择的结果、组成
1
结构常较复杂，分子量一般较大，生物活性受到多
种因素影响
来源于生物体或其基因表达产物及其修饰物，活
2
性高，针对性强，具有补充调整、增强、抑制、 替换或纠正代谢失调的功能。一般比化学药物更
L-Asp脱羧酶
转化液A
L-Asp粗品
L-Asp精品
固定化 L-Asp脱羧酶
H3C CH COOH+CO2
H2N
转化液B
L-Ala粗品
L-Ala精品
•24
工艺路线
延胡索 酸氨盐
储 罐
固定化酶 柱子
泵
反应产物
L-Asp
生物化学制药概述生化药物制备技术生化药物制备实例专家讲座
生物化学制药概述生化药物制备技术生化药物制备实例专家讲座
第19页
血浆成份制品
转输蛋白类 免疫球蛋白 凝血系统蛋白 补体系统蛋白 蛋白酶抑制物类
生物化学制药概述生化药物制备技术生化药物制备实例专家讲座
第12页
红细胞制剂
用红细胞代替全血，在国内已经逐步 推广应用。是心脏病、慢性肾病、肝 病患者补充血红蛋白首选品种。
全血和红细胞保留于4±2℃内可保留 35天
冰冻贮藏红细胞，是长久保留红细胞 有效方法，是指地-80℃到-196℃之 间低温进行保留，其优点是能够贮备 多年，重融之后性能很好。缺点是贮 藏费用太高。
a1抗糜蛋白酶（a1X）-----能够保护机体正常细胞不受蛋白酶破坏和损伤，维持机体 内环境恒定。
a间胰酶抑制剂（IaI）----含有制约、中和、去除一些蛋白酶作用，能预防凝血系统 蛋白酶本身消化。
抗凝血酶III（ATIII）------在肝素促进下，与凝血酶形成复合物，使得凝血酶失活， 预防血栓形成。
❖ Ca2+在凝血过程中 作用
❖ 血小板磷脂作用 ❖ 血凝过程正反馈
纤维蛋白对血小 板聚集
凝血酶对血小板 聚集促进作用
凝血酶对本身形 成促进作用
纤维蛋白原(Ⅰ)
纤维蛋白单体 Ca2+
ⅩⅢa
ⅩⅢ
纤维蛋白多聚体
生物化学制药概述生化药物制备技术生化药物制备实例专家讲座
第24页
13种凝血因子
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• (3) 盐析 • 先向溶液中加硫酸铵至盐析曲线的下限， 拌匀，离心除不溶物，清液中补加硫酸铵 至上限，静置，析出结晶，为木瓜蛋白酶 结晶
• 参考工艺：
不溶物除去
提取
木瓜乳汁 木瓜蛋白 酶滤液
沉淀
上清液（弃去）
木 瓜 酶 沉淀 上清液（弃去）
精制
干燥
沉淀
产品
• 作业： 作业： • • • • 1、酶提取的注意事项有哪些？ 酶提取的注意事项有哪些？ 酶提取的注意事项有哪些 2、木瓜蛋白酶的有哪些用途？ 、木瓜蛋白酶的有哪些用途？ 3、如何收集木瓜乳？ 、如何收集木瓜乳？ 4、如何精制木瓜蛋白酶？ 、如何精制木瓜蛋白酶？
• (1)粗制 粗制 • 将木瓜乳汁倾入搪瓷缸中，在即沉淀，然后静置过夜，离心， 收集沉淀，得木瓜蛋白酶粗品，木瓜凝乳 木瓜凝乳 酶在上清液中。一步将两个酶分离。
• (2) 精制
• 沉淀置于搪瓷缸中，搅拌下加入1倍体积的 0.1％四乙酸L二胺化二钠和0.3％氯化钠溶液，并 加入还原剂0.06mmol／L硫代硫酸钠和O.08mmol ／L半胱氨酸的混合液，然后用0.1 mol／L氢氧化 钠或0.1mol／L，盐酸pH至9.0，搅匀溶解，离心 或过滤除不溶物。清液取1OOmL作硫酸铵盐析曲 线，得出盐析范围，先向溶液中加硫酸铵至盐析 曲线的下限，拌匀，离心除不溶物，清液中补加 硫酸铵至上限，静置，析出结晶，为木瓜蛋白酶 木瓜蛋白酶 结晶。 结晶
项目4 项目4：生化技术生产生物药物
任务1：生化提取法生产木瓜蛋 白酶
教学安排： 教学安排： 1. 员工培训 由老师讲解木瓜蛋白酶生产的理论基础 及应用范围。 及应用范围。 分配实操任务：木瓜蛋白酶的生产。 分配实操任务：木瓜蛋白酶的生产。
2. 学生模拟组建运营一个木瓜蛋白酶生产企 撰写计划书(在理论教学期间完成 在理论教学期间完成)。 业，撰写计划书 在理论教学期间完成 。 市场部：木瓜蛋白酶的结构、功能、 市场部：木瓜蛋白酶的结构、功能、 用途，木瓜蛋白酶市场状况与销售预测， 用途，木瓜蛋白酶市场状况与销售预测， 原料来源状况，竞争对手状况与分析。 原料来源状况，竞争对手状况与分析。 技术部： 技术部：确定木瓜蛋白酶生产的工艺 流程及工艺参数，编制生产操作规程， 流程及工艺参数，编制生产操作规程，确 定生产车间的布局。 定生产车间的布局。
•第一节 生化提取技术基础 第一节
• • • • • • •
一 药用酶的生产来源 （一）药用酶的来源 动植物提取法； 微生物发酵法。 （二）生化制备法 1 原料选择应注意的问题 （1）酶在生物材料中的分布；
• （2）考虑生物的发育阶段及营养状况； • （3）动物组织宰杀后立即取材； • （4）生化制备的综合成本。 • 2 生物材料的预处理 • （1）机械处理 • （2）反复冻融处理
• （4）泡沫和消泡剂； • （5）添加诱导剂和抑制剂。
•第二节 木瓜蛋白酶生产技术 第二节
• 一、结构与性质 • 木瓜蛋白酶为白色、 木瓜蛋白酶为白色、淡褐色无定形粉 末或颗粒。略溶于水、甘油，不溶于乙醚、 末或颗粒。略溶于水、甘油，不溶于乙醚、 乙醇和氯仿。最适温度65℃ 易变性失活； 乙醇和氯仿。最适温度 ℃，易变性失活； 木瓜蛋白酶等电点pI=9.6。半胱氨酸、硫化 木瓜蛋白酶等电点 。半胱氨酸、 亚硫酸盐和EDTA是木瓜蛋白酶激活剂， 是木瓜蛋白酶激活剂， 物、亚硫酸盐和 是木瓜蛋白酶激活剂 巯基试剂和过氧化氢是木瓜蛋白酶的抑制 剂。 • 木瓜蛋白酶是单条肽链， 木瓜蛋白酶是单条肽链，有211个氨基 个氨基 残基组成，相对分子质量为23 残基组成，相对分子质量为 000。 。
• ②结晶条件的选择 • a 酶液的纯度 越纯越容易形成结晶；有纯 化作用； • b 酶的浓度 浓度越高越容易结晶； • c 温度 低温有利； • d 时间 好的结晶是在生长慢的条件下形 成的；
• • • •
e pH值 选择等电点附近； f 金属离子 许多金属离子有促进作用； g 晶种 h 结晶器皿处理 充分清洗、烘干。
• （5）酶分离和纯化过程应注意的问题 • ① 防止酶蛋白变性 避免高温，避免pH值过
• 高或过低，避免剧烈搅拌，避免与重金属接 触。 • ②防止辅助因子流失 • ③防止酶被蛋白水解酶降解；
（三）微生物发酵法 • • • • • • • 1 高产菌株的选育； 2 发酵工艺的优化； 3 培养方法； 4 影响酶产量的因素； （1）温度； （2）pH值； （3）通气和搅拌；
• • • •
②蛋白质表面变性法； ③选择性变性法； ④降解或沉淀核酸法； ⑤利用结合底物保护法除去杂蛋白。
• （2）脱盐 • ①透析
• ②离子交换法； • • • • • （3）浓缩 ①冷冻干燥法； ②离子交换法； ③超滤法； ④凝胶吸水法；
• • • • • • •
（4）酶的结晶 ①酶的结晶方法 a 盐析法； b 有机溶剂沉淀法； c 复合结晶法； d 透析平衡法； e 等电点法。
• （3）制备丙酮粉 • （4）微生物细胞的预处理 • 3 酶的提取 • （1）水溶液法 • 应考虑的因素：①酶稳定性；②酶的溶 解度；③酶与其它物质结合的性质；
• （2）有机溶剂法； • （3）表面活性剂法。 • • • • 4 酶的纯化 （1）杂质的去除 杂质：杂蛋白、多糖、脂类和核酸。 ①调pH和加热沉淀法；
• 2 粗制提取工艺
• (1)粗制 不锈钢锅中，在搅拌的条件下加 粗制 入含0.1％四乙酸乙二胺化二钠和0.3％氯化 钠溶液，并加入还原剂0.06mmol／L硫代硫 酸钠和0.08mmol／L半胱氨酸的混合液，混 匀后过滤，收集滤液。 • (2)干燥 将滤液置于干燥机中干燥，即得粗 干燥 品。
• 3、精制工艺 、
• 二、生产工艺 • 1、原料采集 、 • 锋利刀片在未成热的青果表面纵割 用锋利刀片在未成热的青果表面纵割 若干条线，深度也应在2mm深以内，环绕 深以内， 若干条线，深度也应在 深以内 茎干装一倒伞形收集盘 接收流下的乳汁。 倒伞形收集盘， 茎干装一倒伞形收集盘，接收流下的乳汁。
• 每个果一次割 条线，4天割一次，每次采 每个果一次割3条线， 天割一次 天割一次， 条线 割时间在清晨或中午下雨 清晨或中午下雨后 选择2.5～ 割时间在清晨或中午下雨后。选择 ～3 月龄已充分长大的青果采割产量最高。 月龄已充分长大的青果采割产量最高。割 乳汁停止流出， 后30～60s乳汁停止流出，把粘在果上的乳 ～ 乳汁停止流出 汁赶入收集盘混合收集。 汁赶入收集盘混合收集。用浸过硫酸钙或 杀菌剂溶液的洁净布擦净 防切口感染。 洁净布擦净， 杀菌剂溶液的洁净布擦净，防切口感染。
品控部：制定木瓜蛋白酶的质量标准， 品控部：制定木瓜蛋白酶的质量标准， 生产取样分析操作规程， 生产取样分析操作规程，质量检测标准和 操作规程。 操作规程。 总经理：协调监督各部工作， 总经理：协调监督各部工作，最后拿 出完整的计划书。 出完整的计划书。
3. 计划书实施。 计划书实施。 计划书要先经过老师的审核， 计划书要先经过老师的审核，然后实 施。 实施过程中考核操作技能。 实施过程中考核操作技能。 实施后及时进行实训报告的撰写也总 结。