12、蛋白质结构测定和分析
蛋白质结构的分析
β-折叠（ β-pleated sheets）又称β—片层、β—结 构，其结构要点如下： （1）多肽链呈锯齿状（或扇面状）排列成比较伸展 的结构； （2）相邻两个氨基酸残基的轴心距离为0.35nm，侧 链R基团交替地分布在片层平面的上下方，片层间 有氢键相连； （3）有平行式和反平行式两种，平行式的折叠其 Φ =–119。，Ψ =+113。。反平行折叠其Φ =–139。， Ψ =+135。
• 蛋白质空间结构要点：
a-螺旋（a-Helix） 又称为3.613螺旋，Φ= -57。， Ψ= -47。 结构要点： (1) 多个肽键平面通过α－碳原子旋转，主链绕一条 固定轴形成右手螺旋。 (2) 每3.6个氨基酸残基上升一圈，相当于0.54nm。
（3）相邻两圈螺旋之间借肽键中C＝O和N-H形成 许多链内氢健，即每一个氨基酸残基中的NH和前 面相隔三个残基的C＝O之间形成氢键，这是稳定 α－螺旋的主要键。 （4）肽链中氨基酸侧链R，分布在螺旋外侧，其形 状、大小及电荷影响α－螺旋的形成。
蛋白质一级结构的测定
蛋白质氨基酸顺序的测定是蛋白质化学研究的基 础。自从1953年F.Sanger测定了胰岛素的一级结 构以来，现在已经知道约十万个不同蛋白质的一 道蛋白质的分子量 。 3 知道蛋白质由几个亚基组成 。
4 测定蛋白质的氨基酸组成；并根据分子量计算每 种氨基酸的个数。
7测定每个肽段的氨基酸顺序。 8确定肽段在多肽链中的次序。利用两套或多套肽 段的氨基酸顺序彼此间的交错重叠，拼凑出整条 多肽链的氨基酸顺序。 9确定原多肽链中二硫键的位置 一般采用胃蛋白 酶处理没有断开二硫键的多肽链，再利用双向电 泳技术分离出各个肽段，用过甲酸处理后，将可 能含有二硫键的肽段进行组成及顺序分析，然后 同其它方法分析的肽段进行比较，确定二硫键的 位置。
蛋白质结构测定实验报告
一、实验目的1. 理解蛋白质结构测定的基本原理和方法。
2. 掌握蛋白质一级结构和三维结构的测定方法。
3. 了解蛋白质结构测定在生物学研究中的应用。
二、实验原理蛋白质是生命活动中的重要分子，其结构决定了其功能。
蛋白质结构测定是研究蛋白质结构和功能的重要手段。
蛋白质结构测定主要包括一级结构测定和三维结构测定。
1. 蛋白质一级结构测定：蛋白质一级结构是指氨基酸的排列顺序。
测定蛋白质一级结构的方法有化学裂解法、蛋白酶水解法、高效液相色谱法等。
2. 蛋白质三维结构测定：蛋白质三维结构是指蛋白质分子在空间中的形态。
测定蛋白质三维结构的方法有X射线晶体衍射法、核磁共振法、冷冻电镜法等。
三、实验材料1. 蛋白质样品：人血清白蛋白（HSA）、牛血清白蛋白（BSA）等。
2. 试剂：硫酸铵、氯化钠、丙酮、乙腈等。
3. 仪器：高效液相色谱仪、核磁共振仪、X射线晶体衍射仪、冷冻电镜等。
四、实验步骤1. 蛋白质一级结构测定（1）将蛋白质样品进行化学裂解，得到多肽片段。
（2）使用高效液相色谱仪对多肽片段进行分离，得到单个多肽。
（3）对单个多肽进行质谱分析，得到氨基酸序列。
2. 蛋白质三维结构测定（1）将蛋白质样品进行X射线晶体衍射实验，得到蛋白质晶体。
（2）对蛋白质晶体进行X射线衍射，得到衍射图谱。
（3）根据衍射图谱，计算蛋白质分子的三维结构。
3. 蛋白质结构分析（1）使用核磁共振仪对蛋白质样品进行NMR实验，得到蛋白质分子的三维结构。
（2）将NMR实验结果与X射线晶体衍射结果进行对比，验证蛋白质结构。
五、实验结果与分析1. 蛋白质一级结构测定通过高效液相色谱仪和质谱分析，成功测定了人血清白蛋白和牛血清白蛋白的氨基酸序列。
2. 蛋白质三维结构测定通过X射线晶体衍射实验，成功得到了人血清白蛋白和牛血清白蛋白的三维结构。
3. 蛋白质结构分析通过NMR实验，成功得到了人血清白蛋白和牛血清白蛋白的三维结构。
与X射线晶体衍射结果进行对比，验证了蛋白质结构。
简述几种测定蛋白质方法及原理
简述几种测定蛋白质方法及原理蛋白质是生物体内最重要的分子之一，其功能多种多样，涉及到生命的方方面面。
了解蛋白质的性质、结构和功能非常重要。
为了实现这一目标，科学家们开发了多种方法来测定蛋白质的存在和浓度，以及研究其结构和功能。
在本文中，我们将简要介绍几种常见的测定蛋白质方法及其原理。
一、低丰度蛋白质检测方法在复杂样品中，许多蛋白质的浓度很低，因此需要采用高灵敏度的方法进行检测。
以下是两种常见的低丰度蛋白质检测方法。
1. Western blotting方法Western blotting方法是一种常用的蛋白质检测方法，通过将蛋白质转移到固体支持体上，然后使用特异性抗体来探测目标蛋白质的存在。
这个方法的原理是在电泳分离后，将蛋白质转移到聚丙烯腈膜或硝酸纤维素膜上。
样品经过特异性抗体结合，最后通过酶标记二抗或荧光二抗来使目标蛋白质可见。
2. 质谱法质谱法是一种利用质谱仪测定蛋白质质量的方法。
这种方法的原理是将蛋白质分解成肽段，然后通过质谱仪测定这些肽段的物质质量。
质谱法可以提供非常准确和高灵敏度的蛋白质测定结果，适用于分析复杂样本中的低丰度蛋白质。
二、蛋白质浓度测定方法蛋白质的浓度是研究蛋白质的基础，因此准确测定蛋白质浓度非常重要。
以下是两种常见的蛋白质浓度测定方法。
1. 比色法比色法是一种通过测量某种化学试剂与蛋白质之间的化学反应来测定蛋白质浓度的方法。
布拉德福德比色法使用染料染色蛋白质产生吸光度，再根据标准曲线定量测定蛋白质浓度。
这种方法简单、快速且灵敏度较高，适用于大多数蛋白质样品。
2. BCA法BCA法是一种利用受体配合反应来测定蛋白质浓度的方法。
在这种方法中，受体配体（biotin-avidin 或biotin-streptavidin）与蛋白质中的特定残基（如组氨酸等）结合生成复合物，然后通过比色反应测定复合物的吸光度。
BCA法具有高灵敏度和较低的非特异性反应。
三、蛋白质结构分析方法蛋白质的结构直接影响其功能和性质，因此了解蛋白质的结构是非常重要的。
蛋白质结构及其功能鉴定方法介绍
蛋白质结构及其功能鉴定方法介绍蛋白质是生物体中重要的分子组成部分，具有各种重要的功能。
了解蛋白质的结构以及如何准确鉴定其功能对于生物学研究和药物开发具有重要意义。
本文将介绍蛋白质的结构以及常用的功能鉴定方法。
蛋白质的结构通常可分为四个层次：一级结构、二级结构、三级结构和四级结构。
一级结构是蛋白质中氨基酸的排列顺序，二级结构是蛋白质中氨基酸的局部空间排列形式，常见的二级结构有α螺旋和β折叠。
三级结构是整个蛋白质的三维空间结构，可以由蛋白质的二级结构和其他因素共同决定。
四级结构指的是由多个多肽链相互作用而形成的蛋白质复合体。
蛋白质的功能鉴定是指确定蛋白质在生物体中所扮演的具体角色和功能。
常见的蛋白质功能鉴定方法包括结构基因组学、功能基因组学和组学学方法等。
结构基因组学是通过在大规模的、多样化的生物样本中进行蛋白质结构的预测和分类，以了解蛋白质之间的关系以及它们在基因组中的分布情况。
这种方法可以通过比对蛋白质序列和已知结构的蛋白质库，利用生物信息学方法进行结构预测。
结构基因组学的主要目标是预测蛋白质的功能和确定蛋白质家族。
功能基因组学是研究基因组中蛋白质功能的一种方法。
它通过测定蛋白质的特定性状或功能，来揭示蛋白质在细胞和生物体功能中的作用。
功能基因组学的核心是构建蛋白质-蛋白质相互作用网络，以了解蛋白质之间的相互作用和调控机制。
这可以通过利用蛋白质微阵列和蛋白质交互作用实验等方法来实现。
组学学方法是一种研究基因组中蛋白质功能的综合方法。
它通过测定蛋白质组中的所有蛋白质的表达水平、修饰状态和互作关系等信息，来解析蛋白质功能的整体图景。
这种方法可以利用质谱技术测定蛋白质的表达水平和修饰情况，以及利用高通量测序技术分析蛋白质的相互作用等。
总结起来，蛋白质结构及其功能鉴定方法主要包括结构基因组学、功能基因组学和组学学方法等。
结构基因组学通过蛋白质序列比对和结构预测，揭示蛋白质之间的关系和家族分布。
功能基因组学通过蛋白质特性和相互作用实验，定位蛋白质在细胞和生物体中的功能。
蛋白质分析鉴定精品课件
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2. 分析多肽链的氨基酸组成。
将多肽链用酸或酶完全水解，再用离子交换树脂 （或用高效液相色谱）将各种氨基酸分离开，测 定其含量并计算各种氨基酸组成的百分比。下图 表示蛋白质的水解产物通过Moor-Stein Dowex 50 离子交换柱层析的自动分析结果。
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双向电泳：
2-DE技术依然是大多数蛋白质组研究 中分离复杂蛋白质混合物的首选技 术。
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双向电泳分析中的样品制备
制备原则：
应使所有待分析的蛋白样品全部处于溶解状态 （包括多数疏水性蛋白），且制备方法应具有可 重现性。
防止样品在聚焦时发生蛋白的聚集和沉淀。
防止在样品制备过程中发生样品的抽提后化学修 饰（如酶性或化学性降解等）。
a 加入脱水剂除去水膜 b 使pH=pI c 加入电解质使质点表面失去同种电荷。
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五、蛋白质的变性作用
天然蛋白质受到理化因素的影响， 氢键、盐键等次级键维系的高级结构遭 到破坏，分子内部结构发生改变，致使 生物学 性质、理化性质改变的现象。
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物理因素： 加热、紫外线、X—射线、超声波
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双向电泳的分类
非变性2D-PAGE：两向均在非变性条件下 进行，这样分离的蛋白质点的等电点和表观 分子量同生理条件下获得的这些蛋白的值是 一样的
非变性/SDS-2D-PAGE：第一向采用非变性 IEF，之后在2%SDS溶液中平衡；第二向也 在SDS存在的条件下进行。适于分析非共价 键连接的蛋白－蛋白间的相互作用。
蛋白质结构分析方法
蛋白质结构分析方法：X射线晶体衍射分析和核磁共振x 射线衍射法的分辨率可达到原子的水平，使它可以测定亚基的空间结构、各亚基间的相对拓扑布局，还可清楚的描述配体存在与否对蛋白质的影响。
多维核磁共振波谱技术已成为确定蛋白质和核酸等生物分子溶液三维结构的唯一有效手段。
NM R技术最大的优点不在于它的分辨率，而在于它能对溶液中和非晶态的蛋白质进行测量。
蛋白质的序列结构测定:1.到目前为止，最经典的蛋白质的氨基酸序列分析方法是，sarI等人基于Edman降解原理研制的液相蛋白质序列仪，及后来发展的固相和气相的蛋白质序列分析仪。
2.质谱：早期的质谱电离的方式主要是电子轰击电离(EI)，它要求样品的挥发性好，一般与气相色谱联用。
但使用G C／M S分析，肽的长度受到限制，只能分析小的肽段。
近年来，在离子化的技术及仪器方面取得了突破性进展，使得质谱所能测定的分子量的范围大大超出了10k u。
因此，软离子化技术、基质辅助的激光解吸／离子化(MALDI)和电喷雾离子化(E SI)显得尤为有前途。
通过串联质谱技术(MS／MS)和源后衰减基质辅助的激光解吸／离子化(PSD—MAIDI—MS)，人们就可以从质谱分析中获得肽及蛋白质的结构信息。
蛋白质三维结构的研究：1.X射线单晶衍射分析2.核磁共振分析3.蛋白质的二维晶体与三级重构：蛋白质二维结晶及其电子晶体学的结构分析是目前结构生物学最活跃的领域之一。
此法既适用于水溶性蛋白质，也适用于脂溶性膜蛋白的研究。
电子晶体学的结构分析源于早期的电子衍射分析。
与X射线衍射方法类似，电子衍射数据的实验分析得到的只是结构因子的振幅部分，丢掉了相位信息。
但从剑桥MRC分子生物学实验室的Klug和DeRo sier建立了三维重构的方法开始，电子晶体学才真正发展成为一种独立的空间结构的分析方法，并从传统的X射线晶体学中脱胎出来。
所谓电镜图像的三维重构是指由样品的一个或多个投影图得到样品中各成分之间的三维关系。
蛋白质一级结构测定详解
蛋白质一级结构测定详解蛋白质一级结构测定是指确定蛋白质分子中氨基酸的序列顺序。
蛋白质的一级结构决定了蛋白质的功能和特性，因此准确测定蛋白质的一级结构对于理解蛋白质的功能和研究蛋白质的生理机制非常重要。
本文将详细介绍几种常用的蛋白质一级结构测定方法。
1.编码方法：蛋白质的氨基酸序列可以通过基因组学技术直接从DNA的序列中获取。
通过DNA的转录和翻译过程，蛋白质的氨基酸序列可以通过基因组学方法快速测定。
这种方法适用于已经测定过基因组的生物。
2.氨基酸分析法：氨基酸分析法是一种传统的蛋白质一级结构测定方法，通过将蛋白质水解成氨基酸，然后使用氨基酸分析仪来测定各种不同的氨基酸的含量和种类。
这种方法可以确定蛋白质中各种氨基酸的相对含量和比例，从而推断出蛋白质的氨基酸序列。
3.编码二维电泳：编码二维电泳是一种结合二维凝胶电泳和质谱技术的方法，可以用来测定蛋白质的一级结构。
首先，将蛋白质进行酶解，然后使用不同标记的肽酶消化蛋白质样品，并通过二维凝胶电泳将消化产物分离。
然后，将二维凝胶电泳的凝胶切割成片段，使用质谱仪进行质谱分析。
最后，根据质谱分析的结果确定蛋白质的氨基酸序列。
4.氨基酸测序法：氨基酸测序法是一种直接测定蛋白质氨基酸序列的方法，通过测定蛋白质中氨基酸的顺序，可以确定蛋白质的一级结构。
氨基酸测序法通常使用肽酶来酶解蛋白质，并使用街染色物质标记氨基酸。
然后，通过比色法或质谱仪等方法测定每个氨基酸的相对含量或精确质量，最终确定蛋白质的氨基酸序列。
综上所述，蛋白质一级结构测定方法有很多种。
不同的方法适用于不同的实验目的和条件。
选择合适的方法来测定蛋白质一级结构非常重要，可以提供宝贵的信息来理解蛋白质的功能和特性。
随着技术的不断发展，蛋白质一级结构测定的准确性也在不断提高，相信将来会有更多的方法被开发出来来解析蛋白质的一级结构。
蛋白质结构与分析方法
蛋白质结构与分析方法蛋白质是生命体中的重要分子之一，其结构对生命活动的进行起着至关重要的作用。
因此，对蛋白质结构的研究成为了生命科学中一项重要的研究领域。
本文将探讨蛋白质结构及其分析方法。
一、蛋白质的结构蛋白质在生物大分子中占据非常重要的位置，其分子结构复杂，通常由氨基酸序列和三级结构组成。
氨基酸序列通常是指蛋白质中氨基酸的排列顺序，而三级结构则是指蛋白质在空间中所形成的特定的结构。
蛋白质的结构可以分为四个层次，即一级结构、二级结构、三级结构和四级结构。
其中，一级结构是指蛋白质分子中氨基酸的排列顺序。
二级结构是在氨基酸序列中的某一段区域内，相邻氨基酸之间的空间构象相同的规则局部结构，包括α-螺旋、β-折叠、β-转角等。
三级结构是指整个蛋白质分子的立体结构，由氨基酸序列和二级结构中相邻段之间的连接方式所决定。
四级结构则是指由两个或多个蛋白质分子组成的复合体。
二、蛋白质分析方法1. X射线晶体学X射线晶体学是研究蛋白质分子结构的主要方法之一。
该方法的核心是通过将蛋白质结晶成晶体，然后进行X射线衍射实验，从而获得蛋白质的高分辨率结构信息。
该方法已经被广泛应用于新药研发中。
2. 核磁共振核磁共振（NMR）技术是蛋白质结构分析的另一种重要方法。
在NMR技术中，蛋白质的解离产物（即单个的多肽链）被置于磁场中，并通过测量其核磁共振信号来测定蛋白质的三维结构。
与X射线晶体学不同，NMR技术可以直接测定溶液中的蛋白质分子结构。
3. 质谱质谱技术是一种高度敏感的分析方法，可以用于分离和测量蛋白质分子和其组成部分的质量。
通过将蛋白质进行裂解，并利用质谱仪对其进行分析，可以得到蛋白质的氨基酸序列和其分子量信息。
该方法已经被广泛应用于蛋白质组学领域。
4. 电泳电泳技术是利用电场在非均质介质中移动带电颗粒的技术。
通过将蛋白质在凝胶上进行电泳，可以根据蛋白质分子的质量和电荷特性分离出不同大小和电荷的蛋白质，进而进行进一步的分析。
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低温透射电子显微镜技术
速冻技术
Curr Protoc Protein Sci. 2005 Dec;Chapter 17:Unit 17.2
Physiology 21: 13-18, 2006
优点 • 将样品保留在液相中 • 维持了天然结构 • 高分辨率 • 揭示内部结构
不足 • 设备及操作要求较高 • 信噪比低
基因/基因组 蛋白质/蛋白质组
蛋白质相互作用
细胞器 细胞
组织/器官 及以上层次
认识“蛋白质机器 及其相互作用模式” 是破译生命规律不 可或缺的重要层次
蛋白质结构测定与功能研究同步进行、甚至先行一步， 并非一定在清楚功能的前提下再开展三维结构研究。
结构 ?
功能 OK
传统的做法
结构 ?
功能 ?
现代的做法
生物样品为什么需要低温：
脂质体负染图
脂质体冷冻电镜图
为什么需要低温：冷冻超薄切片举例
为什么需要低温：冷冻负染举例
低温样品制备 VITROBOT - VITRIFICATION ROBOT
Incubation of suspension on grid (holey carbon or Quantifoils) at constant temperature and humidity Automated blotting
解决相位问题的方法：
❖ 同晶置换法 最原始的方法，包括多对同晶置换法和单对同晶置换法。需
要在蛋白质晶体中引入重原子，并且要求引入了重原子的晶体与 未引入重原子的晶体的晶型基本相同。解析过程需要未引入重原 子、引入了重原子，甚至引入了不同重原子的多颗晶体的多套衍 射数据。
❖ 反常散射法 包括多波长反常散射法和单波长反常散射法。通常需要引入
具有较强反常散射能力的原子，如硒原子。不需要多颗晶体但往 往需要同一颗晶体在不同波长X-射线照射下的多套衍射数据。随 着技术的进步，目前蛋白质自身的硫原子也开始被用来作为反常 散射源。
❖ 分子置换法 需要同源性较高的蛋白质分子结构模型，不需要多颗晶体，
不需要多套衍射数据，方便快捷，但不能用来解析全新的结构。
(xyz)
Protein structure
Tracing & Building
Structural Refinement
Φ(hkl)
Phasing & Improvement
Initial Structural Model Computer control & data analysis
Final Structural Model
NMR 不破坏被测样品的内部结构，是一种无损检测方法。
核磁共振谱仪的组成
•Magnet •Probe •Console •Computer
1985 年,维特里希( Kurt Wüthrich）等人公布了第一次利用NMR 法 测定的溶液中蛋白质-蛋白酶抑制剂IIA ( proteinase inhibitor IIA) 的 结构；
透射电子显微镜技术
透射电子显微镜技术是以电子束为光源的显微成像技术， 其成像原理与普通光学显微镜基本一样，但电子束的波长比可 见或紫外光要短得多，因此其分辨率得到很大的提高，目前 TEM的分辨力可达0.2nm。
透射电子显微镜技术
电子枪
c)
样品杆
聚光镜系统 样品杆
阀门
阀门 显示屏
显示屏
仪器示意图
Icosahedral Particle Image Reconstruction Scheme
Expand Data Set
Icosahedral Virus 3D Reconstruction Scheme
Digitize Micrograph
Y
More Data?
Resample Rebox
生物信息学
第10讲 蛋白质结构测定和分 析
Why protein structures? 仅仅限于药物研发吗？
各种蛋白质原子结构：解释了生命的本质
细胞维持基本生命特征 适应内外环境
进化选择了一套精巧的分子机制
细胞内几乎每个生物学过程 均包含多个蛋白质相互作用
细胞：精巧的“生化工厂”
细胞是生命的基本单位
X-射线+晶体
X-射线+晶体
原子核 核外电子
仅考虑核外电子的作用，忽略原子核的作用。 蛋白质晶体内部结构抽象为充满了电子云的三维空间。 晶体衍射即为以晶胞内电子云为散射体产生的相干次生波的干涉现 象
X-ray 360 °衍 射图：
晶 体 衍 射 数 据
|F(hkl)|
修正
相角问题求解
…… 各种方法获得初始相角
Initial 3D Model
Compute 3DR
Monitor Data Quality Y
N
Refine?
N Done?
Auto3dem
Y
Visualize & Interpret 3D Structure
Archive Data
HPV58 VLP 低温电镜结构重建
Digitize Micrograph Box Particles
透射电子显微镜技术
负染技术
Curr Protoc Protein Sci. 2005 Dec;Chapter 17:Unit 17.2
优点 • 对比度好 • 信噪比高 • 操作简便 • 耐电子辐射
不足 • 由于脱水作用而变形失真 • 由于染色剂的pH和离子强度而变形失真 • 仅显示外围轮廓 • 成像依赖染色的质量 • 周围背景过高 • 分辨率有限
生物大分子三维结构研究方法：
①核磁共振波谱学 ②X-射线晶体学பைடு நூலகம்③低温电镜技术
测定生物大分子结构重要手段
具有不同结构特征的原子核间距、肽键二面角、肽键的动态特性等都具 有特征的核磁共振谱线；
1H,13C,15N是核磁共振检测的主要对象,各有不同的共振频率,从而形成核 磁共振氢谱、碳谱和氮谱三部分；
并改善其品质
电子密度计算
最终模型
(xyz)
初始模型 Tracing
关键问题：相位解决
蛋白质分子结构，即根据蛋白质电子密度构建的分子模型。
(xyz ) 1
| F(hkl) | cos[2(hx ky lz) (hkl)]
V hkl
参考 f(x) = A cos(2x – )
上式也可表示为：
O
X
晶体的产生—结晶相
影响因素：
： ❖物理因素 温度、压力、震
动、溶剂清洁度、试剂纯度、 重力、外加物理场等
： ❖生物化学因素 pH、离子强
度、沉淀剂/添加剂的类型和浓 度等
： ❖其他 溶液过饱和度、纯度
等
晶体内部结构可以抽象为称 为单位晶胞（a,b,c,α,β,γ)的
单位平行六面体的密堆积。 a
Technical Roadmap from gene to protein by SR X-ray crystallography
Bioinformatics
Gene sequence Biological Story
Computer control & data analysis Raw genomic data
Xplore3D
单颗粒重构 断层图像重构
图像整合
Localization and)
Argos
compute 3D maps from 2D images
In electron microscope
In our program
3D virus in real world
2D images
3D map in computer
(xyz )
1 V
|
hk l
F(hkl)
|
exp[ 2
i( hx
ky
lz)
i(hkl)]
❖ 为电子密度，xyz 为实空间坐标
k
❖ V 为晶胞体积
❖ |F(hkl)|2 = I(hkl)，I 代表衍射点的强
度，hkl 为衍射点坐标
h
❖ 代表初始相角
f(x) = A cos(2x – )
=0
0
1
2
SR X-ray source
Diffraction Data |F(hkl)|
Protein Crystal
X-射线晶体学
X-射线的产生
电子被高能设备如X射线发生器 或同步加速器从低能轨道激发跃迁到 高能轨道后，会自然衰减并回迁到低 能级轨道，在电子的减速和回迁过程 中发射出X射线。
X-射线发生方法
X射线
阴极(cathode)
真空
负高亚(negative high tension)
阴极的热电子在负 高压的作用下高速 撞击阳极的金属靶， 大部分能量转化为 热能，小部分能量 转换为X射线。
X-射线发生方法
同步辐射
带电粒子（electron或positron）以接近光速的速度在储存环中循环运动。当 粒子束被迫改变方向时，被朝着环心加速并发射出电磁波。
~1400 micrographs ~6000 particles
HPV58 VLP 低温电镜结构重建
Pre-Process Images
Remove blemish, Remove Gradient Normalize means/variances, Apodize
Determine CTF parameters Create Initial Parameter Files
封闭的X射线管 旋转阳极X射线管
封闭的X射线管工作原理示意图
旋转阳极X射线 管的出现主要是为 了解决散热问题， 使得X射线管的工 作功率大大增加。