布鲁菌病的血清学检验
布鲁氏菌病的血清学分析与细菌学检测方法
布鲁氏菌病的血清学分析与细菌学检测方法布鲁氏菌病是由布鲁氏菌引起的一种人畜共患的传染病，其临床症状多样化且类似于其他感染性疾病，因此需要通过血清学分析和细菌学检测方法来确诊。
本文将对布鲁氏菌病的血清学分析和细菌学检测方法进行介绍。
首先，血清学分析是布鲁氏菌病确诊的重要方法之一。
在感染布鲁氏菌后，人体会产生特异性抗体作为免疫反应的体现。
通过检测患者的血液样本中的抗体水平，可以判断是否存在布鲁氏菌感染。
常用的血清学检测方法包括鲁斯菌血凝试验（RBPT）、红细胞沉降试验（RBT）、血凝凝集试验（CFT）、鲁斯菌凝聚试验（SAT）等。
这些血清学检测方法基于对患者血清中布鲁氏菌抗体进行定性或定量检测，具有灵敏度高、特异性好的特点。
鲁斯菌血凝试验是一种常用的初筛试验，通过观察血清与鲁斯菌悬液的凝集反应来判断是否感染布鲁氏菌。
如果血清中存在布鲁氏菌抗体，凝集反应会发生，并形成凝集现象。
红细胞沉降试验和血凝凝集试验则可以更准确地测定患者血清中布鲁氏菌抗体的滴度，用于判断感染程度。
鲁斯菌凝聚试验则是一种特异性较高的试验，通过将鲁斯菌的抗原与患者血清混合，观察是否会发生凝聚反应，来确定是否感染布鲁氏菌。
除了血清学分析，细菌学检测方法也是布鲁氏菌病确诊的重要手段之一。
细菌学检测方法主要通过从患者的体液（如血液、淋巴结组织等）或粪便中分离和培养布鲁氏菌，然后进行鉴定来确诊。
常用的细菌学检测方法有无菌抽取、培养和染色等步骤。
其中，无菌抽取是从患者体液或组织中取得标本，并采用无菌技术处理，以避免细菌污染。
接着，标本会被接种于培养基上，利用培养基中的营养物条件和条件的控制，使布鲁氏菌得以生长和繁殖。
最后，通过染色技术如格拉姆染色、新西兰染色等，可以观察和鉴定生长在培养基中的细菌是否为布鲁氏菌。
细菌学检测方法的优势在于可以直接检测布鲁氏菌的存在，并可以对感染量进行定量分析。
此外，细菌学检测还可以对分离到的菌株进行药敏试验，以确定该菌株对不同抗生素的敏感性，从而辅助临床治疗的选择。
奶牛布鲁菌病三种血清学诊断方法的比较研究
目前 ， 我 国用 于 布 鲁 菌 病 诊 断 的 常 规 技 术 有病 原分 离 和血清 学诊 断＿ ４ ］ ， 其 中血 清学 诊 断方 法 主要 包 括 虎红 平板 凝集试 验 （ ｒ ｏ ｓ ｅ ｂ ｅ ｎ ｇ ａ ｌ ｔ ｅ ｓ ｔ ， Ｒ Ｂ Ｔ） 、 试 管凝 集 试 验 （ ｓ ｅ ｒ ｏ ａ ｇ ｇ ｌ ｕ ｔ ｉ ｎ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｔ ｅ ｓ ｔ ， Ｓ Ａ Ｔ） 、 全 乳 环 状沉淀反应 （ ｍｉ ｌ ｋ ｒ ｉ ｎ ｇ ｔ ｅ ｓ ｔ ， ＭＲＴ） 、 补 体 结 合 试 验
ＭＲ Ｔ、 Ｃ Ｆ Ｔ、 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 均 属 定 性 检测 ， 而 Ｓ ＡＴ 属 定 量 检 测 。本 研 究 采 用 Ｒ Ｂ Ｔ、 Ｓ ＡＴ 和 Ｃ Ｆ Ｔ 方法 分 别 对
１ ． ２ ． １ 虎 红 平 板 凝 集试 验
按 照 中华 人 民共 和 国
国家 标 准 《 动 物 布 鲁 氏 菌 病 诊 断 技 术 》（ Ｇ Ｂ ／ Ｔ １ ８ ６ ４ ６ －２ ０ ０ ２ ） 进 行试 验 ， 结果判定标准 以 ４ ｍｉ ｎ内 肉 眼可见凝 集 块 且 液 体基 本 透 明为 阳性 （ ＋） ， 未出 现 肉眼可见 凝 集 块 为 阴性 （ 一） 。 同时 设 立 阴 、 阳性
ｍＬ ／ Ｌ红细胞 悬 液 。
１ ． ２ 方 法
ＥＬ Ｉ Ｓ Ａ） 。前 ４种是 中华 人 民共 和 国国家 标 准 （ ＧＢ ／
Ｔ １ ８ ６ ４ ６ －２ ０ ０ ２ ） 规 定 的布 鲁 菌 病 检 测 方 法 ， Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 是近年来发展 的大规 模抗 体检浸 ４ 技 术 ＿ ９ ｌ 。Ｒ Ｂ Ｔ、
１ ． １ ． ２ 主要 试 剂 布 鲁 菌病 虎 红 平 板 凝 集 试 验 抗
布鲁氏菌病的实验室检查
布病简介
牛种
绵羊附睾种 Brucella
沙林鼠种
犬种
羊种 猪种
布病血清学诊断
标本的采集、保存及运输
1） 血清学诊断需要的标本类型为人及疑似动物 血清。
2） 使用负压采血管或注射器进行采集。 3） 分离到的血清存放到灭菌后的血清管内。 4） 两周内进行实验的血清可4℃冷藏保存。
• 检测试剂需使用R型布鲁氏菌虎红平板凝集抗原。
• 在条件允许的情况下，建议虎红平板凝集抗原 （检测S型布鲁氏菌抗体的虎红平板凝集抗原）和 R型布鲁氏菌虎红平板凝集抗原同时进行检测。
• 器材
试管凝集实验
小试管 试管架 诊断试剂
• 器材
试管凝集实验
加样枪
吸头吸头
操作方法
• 每份血清取6-8支小试管，放于试管架上。 • 血清稀释：第一管加入960ul生理盐水，其余各管
内，放到37℃温箱内培养。
运送
• 采集到的双相血培养瓶尽快送至贵州省疾病预防 控制中心布病实验室，进行培养检测，检测结果 会在一个半月内反馈至县疾控中心。
• 血培养瓶的运输，不需要冷藏，常温运输。
谢 谢！
• 每个方格内加入布病虎红平板凝集抗原30ul，备 检血清30ul。 注意：虎红平板凝集抗原使用前需充分摇匀。
• 使用牙签将两者混匀。 • 旋转摆动玻璃平板，室温5分钟之内观察结果。 • 每个平板需做阴、阳性血清对照，方法同备检血
清。
结果判断
阳性 阴阳性血清对照同时成立，本次实验成立。
阴性
• 因犬种布鲁氏菌为天然粗糙型，所以产生的血清 抗体为粗糙型布鲁氏菌血清抗体。
血清的反复冻融会引起布病抗体效价的降低 5） 检测后的血清-25℃冷冻保存。 6） 使用冷藏箱进行长距离运输。 注意：采集血清需使用红色或者黄色盖子的负压采
布鲁菌病的诊断提示及治疗措施
布鲁菌病的诊断提示及治疗措施布鲁菌病（brucellosis）又称波状热。
是由布鲁菌引起的动物源性传染病，主要病理改变是肝、脾、骨髓、淋巴结的炎性变，以及由此而产生的菌血症及变态反应。
其临床特点是长期发热、多汗、关节痛及肝脾大。
人群普遍易感。
【诊断提示】1.流行病学注意患者的职业情况及与病畜及皮毛接触的程度，尤其是与流产的动物接触史。
2.临床表现潜伏期一般1～3周，最短3d，最长达1年。
起病大多缓慢。
①发热、多汗，开始为低热，以后逐渐加重，以弛张热多见，也可表现为不规则热或持续低热。
发热数周后，体温逐渐消退，经数日或1～2周的缓解期，症状重新出现，反复发作，可迁延数月而形成波浪热型。
多数患者于每日热退时常伴有大汗，是本病的特征之一。
②关节痛，多数患者表现为游走性肌肉和关节疼痛，多见于大关节及脊柱。
③肝、脾、淋巴结肿大。
④生殖系统症状，男性患者可发生睾丸炎、附睾炎。
多为一侧睾丸肿大；女性患者可有子宫内膜炎、输卵管炎、卵巢炎，可致流产。
⑤神经系统症状：主要表现为神经痛，以腰骶神经痛及坐骨神经痛多见，亦可引起脑膜炎。
轻型病人只有低热、乏力、食欲缺乏等。
如病程迁延而进入慢性期，则有消瘦、贫血、关节及肌肉痛，甚至出现关节强直。
3.实验室检查白细胞计数正常或轻度减少，淋巴细胞增高、血沉增快，提示病情活动。
血液、骨髓、乳汁、子宫分泌物等细菌培养可获阳性结果。
血清学检查：血清凝集试验，多在两周出现阳性反应，1：160以上有诊断价值。
补体结合试验，1：16以上即为阳性，对慢性患者有较高的特异性。
皮肤试验，方法是以布鲁菌抗原做皮内试验，阴性有助于排除布鲁菌感染。
阳性仅反映曾有过感染，接种疫苗者可呈阳性。
【防治措施】1.病原治疗急性期及病情活动时采用抗菌治疗，需联合用药：多西环素200mg/d，分2次口服，加利福平600～900mg/d，空腹分2次服，疗程6周，复发率15%。
亦可选用多西环素联合复方磺胺甲噁唑或利福平联合氟喹诺酮类药物。
畜间布鲁氏菌病的血清学检测方法
2021年第1期 吉林畜牧兽医·经验交流·JingYan JiaoLiu畜间布鲁氏菌病的血清学检测方法白 翠1，马晓媛1，王 楠1，曹东阳1，胡泽宇1，李海燕2，郑 聪3，刁鹏翔41.吉林省动物疫病预防控制中心，吉林长春 130062；2.吉林省通化市二道江区畜牧兽医总站，吉林通化 134000；3.吉林省吉林市龙潭区江北乡畜牧兽医站，吉林吉林市 132000；4.吉林省吉林市昌邑区两家子乡畜牧兽医站，吉林吉林市 132000布鲁氏菌病（简称布病）是由布鲁氏菌引起的人畜共患的传染、变态反应性疾病。
病原体可以通过体表皮肤黏膜、呼吸道、消化道进入机体。
人感染布病主要是与职业、饮食和生活习惯有关。
由于布鲁氏菌感染一周后可出现特异性血清抗体，因此，国内外均用血清学试验检测该病。
方法主要有虎红平板凝集、试管凝集试验、胶体金免疫层析试验和酶联免疫吸附试验。
1 虎红平板凝集试验虎红平板凝集试验操作简单，价格便宜，但有时会产生假阳性和假阴性，适合大量样品的初筛。
1.1 材料准备1.1.1 虎红平板凝集抗原、标准的阳性和阴性血清，按说明书使用。
1.1.2 被检血清应新鲜，无明显蛋白凝块，无溶血和无腐败气味。
1.1.3 洁净的玻璃板，其上划分成4 cm2 的方格。
1.2 操作方法1.2.1 试验前，将血清和抗原在室温恢复30 min。
1.2.2 在玻璃板上加入25 µL的被检血清。
1.2.3 被检血清旁加入等量的抗原。
1.2.4 用牙签类小棒混合均匀，在4 min内观察结果。
1.3 结果判定1.3.1 在阴阳对照成立的条件下，试验成立。
1.3.2 被检血清在4 min内出现肉眼可见凝集现象，为阳性（+）， 无凝集现象，呈均匀粉红为阴性（-）。
2 试管凝集试验操作时间比虎红凝集试验长，比较繁琐，但特异性较好，实用性也比较强，多用于复核。
2.1 操作过程2.1.1 血清的稀释牛、马、骆驼一般从1:50开始，稀释4个滴度；猪、狗和羊从1:25开始稀释，同样是4个稀释度。
规模化奶牛场布鲁菌病的血清学调查
但 尚有少 数抗 原不 凝 ， 在管 底 中心形 成 小点 。 ＋＋ ： 约有半 数 抗 原 凝 集 ， 管 底 铺 成 薄 膜 ， 在 面 积 较小 ， 不凝 集 的抗原 在管 底 中心 聚成 小 圆点 。 ＋： 只有 少数 抗原 凝集 ， 凝 集 的抗 原 在 管底 中 不 心 聚成小 圆盘状 ， 凝集 的抗 原 在此小 圆盘周 围 。 不凝 集 ， 原沉 于管 底 ， 一 圆盘 ， 反应 板 抗 成 将
５ Ｌ至第 ３孔 ， 换枪 头用 移 液 器 如 前 述 方 法 进 Ｏ肚 更 行第 ３ 混合 。按 前述 方法 将 ５ Ｌ混 合液 加入 第 孔 Ｏ ４孔 ， 如此倍 比稀释 至第 ６孔 ， ６孔 用移 液 器 吸取 第
１ １ 试 剂 虎红 平板凝 集 试验抗 原 、 ． 试管 凝集 试验 抗原 、 阳性 血 清和 阴性 血清 ， 自中国兽 医药 品监察 购 所， 按说 明 书使 用 。生 理盐 水 、 ． 石 碳 酸 生 理盐 ０５
减 少等 。近几年 在我 国奶 牛优 势 区域布 鲁菌 病疫 情
１ ６ ９ 孔 微 量凝 集试 验 对 虎 红平 板 凝 集试 验 阳 ． ６ 性 牛再 进行 微量 凝集 试验 复检 。 １ ６ １ 操 作方 法 ．． 受 检 血 清 的稀 释 ： ９ 在 ６孔 微 量
板 上 ２ ６孔 用 移 液 器 加 入 ０ ５ 石 碳 酸 生 理 盐 水 ～ ．
（ ． 国农 业 大 学 动 物 医 学 院 ， 京 海 淀 １０ ９ ；２ 安 阳 工 学 院 生 物 与 食 品学 院 ，河 南 安 阳 ４ ５ ０ ） １中 北 ０１３ ． ５０ ０
中 图分 类 号 ：８ ２ ６ ４ ￥ ５．１
文献 标 识 码 ： Ｂ
布鲁氏菌病血清学诊断方法及评价
论与我们 的Ｐ Ｒ Ｔ 是有高度的一致性的。并且该方法的使用不仅对 于 早期 的抗体 产 生 高敏 感 ，对 于后 期 的 治疗 中也表 现 不俗 。特别 是 在 猪 布 病 的 试 验 检疫 时 ，Ｒ Ｂ Ｐ Ｔ 得 出 的结 论 是 与 Ｓ Ａ Ｔ 有着 高 达 ９ ９ ． ４ ４ ％的概 率 的 ，这说 明对于 Ｒ Ｂ Ｐ Ｔ 的使 用是 ￣ Ｌ Ｓ Ａ Ｔ 更 优 秀的 检测
要 可分 为 三种 不 同 的试 验方 法 ，环 状 、絮状 以及 琼 脂扩 散试 验 ，
１ 试 管凝 集试验
在１ ８ ９ ６ 年 我 们 的Ｄ ｕ ｒ ｈ ａ ｍ开 始对 于 细 菌凝 集 反 应 进 行 深 入 研 究 ，试 管 凝 集 试 验 随 着 多 年 的 积 累 被 多 次 的 研 究 和 检 测 布 鲁 氏 菌 病 的参 数 。试 管 凝集 试 验 的又 被 称 为 为Ｓ Ａ Ｔ，是 被 大量 采 用 的 项 检 测 手 段 。 这 种 研 究 方 法 主要 是对 诊 断 布 病 的 一 种 试 验 方 式 。经 过 多年 的实 验 积 累 ，Ｓ Ａ Ｔ 被 不断 的采 纳 ，因为 其 试验 的稳 定 性 ，也 是 一 种高 敏 感 的一 项 选 择 。它 通 过相 关 的 实验 可 以检 测 出我 们 血 清 中 的 存 在 的抗 布 鲁 氏菌 ，一 般 主 要 表 现 为 三 个 免 疫 球 蛋 白抗 体 ，这 三 种 包 括 Ｉ ｇ Ｇ，Ｉ ｇ Ｍ以及 Ｉ ｇ Ａ。通 过 检 测这 三 项 矿 体 ，我 们 的Ｓ Ａ Ｔ 对Ｉ ｇ Ｍ 表 现 出较 强 的 敏感 性 ，在 布鲁 氏菌 病 的早 期 诊 断 中 ，我们 一 般 在 用Ｓ Ａ Ｔ 检 测 是会 进 行 多 次 的实 验 ，由 于检 测 次 数 的增 多 ，我们 可 以 发 现它 的凝 集 价 也会 急 剧 的上 升 ，这 对 于 我 们 精确 的诊 断有 着 很 大 的帮 助 ，这种 凝集 价 可 以保 持 在一 年 的 时 间 ，在 这之 后 它 会 有所 减 少 。在 Ｓ Ａ Ｔ 检 测 中 ，对 于 家 畜和 人 的 检 测 是相 一 致 的 ， 由于操 作 上 并 不 复杂 ，而 且 判 断结 果 也 比较 方 便 ，因 此 ，采 用 Ｓ Ａ Ｔ 是有 较 高 的诊 断价 值 的体 现 的 ，当然 ，我 们
布鲁氏菌病诊断标准
布鲁氏菌病诊断标准
布鲁氏菌病诊断标准如下：
(一) 流行病学：发病前病人与家畜或畜产品，布氏菌培养物有密切接触史，或生活在疫区的居民，或与菌苗生产、使用和研究密切联系者。
(二) 临床表现：出现数日乃至数周发热，多汗，肌肉和关节酸痛，乏力兼或肝、脾、淋巴结和睾丸肿大等可疑症状及体征。
(三) 实验室检查：布病玻片或虎红平板凝集反应阳性或可疑，或皮肤过敏试验后24、48小时分别观察一次，皮肤红肿浸润范围有一次在2.0cm×2.0cm及以上(或4.0cm²以上)
(四) 分离细菌：从病人血液、骨髓、其他体液及排泄物中分离到布氏菌。
(五) 血清学检查：标准试管凝集试验(SAT)滴度为1：100及以上，对半年内有布氏菌苗接触史者，SAT滴度虽达1：100及以上，过2——4周后应再检查，滴度升高4倍及以上，或用补体结合试验(CFT)检查，CFT滴度1：10及以上;抗人免疫球蛋白试验(Coomb'S)滴度1：400及以上。
诊断疑似病例：具备(一)、(二)、(三)者。
诊断确诊病例：疑似病例加(四)或(五)中任何一项者。
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布鲁菌病的血清学试验
参考范围：
血清凝集试验(A T) <1：100
酶联免疫吸附试验(ELISA) 阴性
补体结合试验(CF) <1：16
2-巯基乙醇(2-ME)试验<1：50
抗人球蛋白试验<1：320
临床评价：
1．布鲁菌病也称波状热，是一种由布鲁菌引起的急性或慢性传染病。
患者感染布鲁菌，在发病1周后血液中可出现特异性抗体。
用血清学试验检测患者血清抗体，是诊断布鲁菌病最常用的方法，对早期和复发诊断都具有重要意义。
2．常用的血清学方法及其意义如下：
(1)血清凝集试验是直接检测针对布鲁茵脂多糖抗原的抗体，效价>1：l00为阳性，间隔1～4周的两次血标本抗体效价有4倍或以上增高时，提示近期有布鲁菌感染，有诊断价值。
多数病人于感染后1～2周出现抗体效价增高，第3～6周达到高峰，高效价保持1年左右，以后逐渐降低，复发时又上升。
急性期患者80％呈阳性反应，慢性期约1／3病例呈阳性。
(2)ELISA的阳性率高于凝集试验，且可检测IgM型及IgG型抗体。
IgM型抗体于疾病早期(第一周)即增高，约于第3周达到高峰，然后逐渐下降。
IgG型抗体于发病后2～3周出现，第8周达到高峰，并于整个感染活动期持续存在。
疾病治愈后，IgG抗体迅速下降，常于1年内消失。
疾病复发时，IgM和IgG均增高。
(3)补体结合抗体属IgG型，出现较晚，但阳性率较凝集试验高，特异性强，且保持时间长，对诊断慢性布鲁菌病意义较大。
(4)2-ME试验是检测IgG型抗体的。
2-ME可氧化巨球蛋白中的-S-S-，使19SIgM抗体失去凝集活性，而不影响7S IgG的活性。
在2-ME试验中，单份血清效价>1：50表示活动性感染的存在。
此法除了明确疾病是否活动，还可鉴别人工免疫和自然感染，自然感染达1个月后，体内抗体即以IgG型为主(初为IgM型)，该IgG对2-ME有耐受性，而菌苗免疫3个月内的抗体均以IgM型为主，可为2-ME所破坏。
(5)抗人球蛋白试验是检查不完全抗体的。
某些布鲁菌病患者血清中存在一种不完全抗体．这类抗体可与布鲁菌抗原特异结合，但肉眼不可见。
当加入抗人球蛋白免疫血清后即出现直接可见的反应。
不完全抗体出现早而消失晚，故可用于急、慢性期病人的诊断。
本法特异性强，敏感性高，但操作较复杂，只适用于凝集试验阴性的可疑病人，效价>1：320为阳性。
3．病原菌的分离培养是诊断布鲁菌病的重要依据。
临床标本中最易获得阳性培养的是发热期的血液，其他如骨髓、尿液、脑脊液、关节液、乳汁等也能分离到布鲁菌。
慢性期骨髓培养的阳性率高于血液。
其他实验室检查可作为诊断布鲁菌病的参考。
在外周血象中，白细胞计数正常或偏低，淋巴细胞相对或绝对增多。
血沉在急性期增速，慢性期亦偏高。
出现并发症脑膜炎时可作脑脊液检查，脑脊液细胞增多，以淋巴细胞为主，蛋白质增高，其余均正常。
4．影响本试验结果的因素
(1)布鲁菌与霍乱弧菌、小肠结肠炎耶尔森菌、土拉热弗朗西菌有交叉抗原，在血清学试验中可出现交叉抗体反应．应注意鉴别。
(2)布鲁菌皮试和接种霍乱疫苗后，血清中可出现布鲁菌抗体效价的升高。
(3)血清学试验阴性不能排除本病，因有6％～l 0％的患者尽管已从血中分离出布鲁菌，但抗体测定仍为阴性．可能因血中存在封闭抗体之故。
(4)在少数情况下，一些曾患过布鲁菌病并已治愈者，因得发热性疾病也可出现暂时性抗体滴度升高，一般于一周至十天内同复到正常水平。