血清白蛋白测定.

【操作】

取试管三支，标明测定、标准和空白管，按表 操作。
加入物 / ml 工作试剂 标准液 样品 生理盐水 0.02 0.02 测定管 4.0 标准管 4.0 0.02 空白管 4.0
充分混匀，置室温10min，用630nm波长比色，以空白管调零， 读取各管吸光度。
【计算】
血清清蛋白（g/L）＝ A测/A标〓清蛋白标准 液浓度g/L 清蛋白标准液浓度g/L=40g/L 同时测定血清清蛋白与总蛋白，以总蛋白浓度 减去清蛋白浓度，即得球蛋白（G）浓度，并 计算清蛋白与球蛋白比值（A/G比值）。
血清总蛋白测定(双缩脲法) 血清白蛋白测定（溴甲酚绿法）
实验一、血清总蛋白测定

实验目的 ⒈掌握双缩脲法测定总蛋白的原理及注意事项。 ⒉熟练测定操作步骤。 ⒊了解TP测定的主要临床意义。
实验原理



蛋白质分子中的肽键在碱性条件下能与铜离子作 用生成紫红色的络合物，产生的颜色强度在一定 范围内与蛋白质的含量成正比，与同样处理的蛋 白标准液比较，经计算或查标准曲线即可求出血 清蛋白质含量。 蛋白质分子中的肽键在碱性条件下能与铜离子作 用生成紫红色的络合物与两分子尿素缩合后生成 的双缩脲在碱性溶液中与铜离子作用形成的紫色 物质的反应相似，故称之为双缩脲反应。 双缩脲结构: H2N—OC—NH—CO—NH2试剂:




【参考范围】 清蛋白：35～55g/L 球蛋白：20～29g/L A/G：1.5～2.5/1 【临床意义】 1.血清清蛋白 （1）增高 常见于严重脱水所致的血浆浓缩。 （2）降低 临床上较常见，与总蛋白降低的原因大致相同。急 性降低常见于大量出血或严重烧伤；慢性降低见于肾病蛋白尿、 肝功受损、肠道肿瘤与结核、慢性出血、营养不良和消耗性疾 病等。清蛋白如低于20g/L，患者可出现水肿。 2.血清球蛋白 （1）增高 严重脱水、炎症、免疫系统疾病和肿瘤。 （2）降低 血液稀释、严重营养不良、胃肠道疾病等。肾上腺 皮质激素和其它免疫抑制剂有抑制免疫功能的作用，会导致球 蛋白合成减少。球蛋白浓度如低于10g/L时，可怀疑为无γ球蛋 白血症。 3.清蛋白与球蛋白比值（A/G） 临床上常用A/G值衡量肝病的 严重程度，当A/G值小于l时，称比值倒臵，为慢性肝炎或肝硬化 的特征之一。
临床意义：

清总蛋白生理性波动：长久卧床者比直立活动者约低3～5g/L；新 生儿比成人低5～8g/L；60岁以上的老人约比青壮年低2g/L。 清总蛋白增高：
◦ ◦
血液浓缩：腹泻、呕吐等。 合成增加：如多发性骨髓瘤等。

清总蛋白降低： ①血液稀释：过多注射低渗溶液，各种原因引起的水钠潴留。 ②摄入量不足和消耗增加：营养不良、慢性肠胃炎、严重结核病等。 ③合成障碍：肝脏疾病。 ④蛋白质丢失：严重烧伤时大量血浆渗出，肾综合症等。
试剂
双缩脲试剂：称取硫酸铜(CuSO4· 5H2O)3.0g,溶 于500mL新鲜制备的蒸馏水或刚煮沸冷却的去 离子水中，加酒石酸钾纳 (NaKC4H4O6· 4H2O)9.0g，碘化钾5.0g，待完全 溶解后，加入6mol/L Na2OH 100ml,最后加蒸 馏水至1000mL。 240mmol/L NaOH溶液 蛋白质标准液：市售。
结果报告： 被检者： TP__________g/L［60～80g/L］ ＿＿＿年＿＿月＿＿日 检查者：＿＿＿＿
注意事项：




1、由于各种血清蛋白质的分子量不同，故其浓度不宜用mol/L表示。 2、双缩脲反应并非蛋白质的颜色反应。凡分子内含有两个或两个 以上氨基甲酰基（－ＣＯＮＨ2），不论是直接相连还是通过一个 氮或碳原子间接连接，均可呈双缩脲反应。如缩二脲，草酰二胺２， 丙二酰胺等 3、双缩脲试剂中酒石酸钾钠的作用是络合铜离子，以维持铜离子 在碱性溶液中的溶解性；碘化钾能防止两价铜离子还原． 4、高脂，黄疸及溶血标本应作清空白对照来校正误差。含脂类极 多的血清，加入双缩脲试剂后会出现混浊，可用乙醚3ml抽提后再 进行比色． 5、血清ＴＰ＞100g/L时，需作稀释处理，结果乘上稀释倍数．
实验二、血清白蛋白测定
【实验要求】 掌握BCG法测定血清Alb的实验原理与方法； 学习微量加样器的使用方法；能熟练使用分光 光度计。 熟悉实验方法学评价 了解血清白蛋白测定的临床意义

【实验原理】 在pH4.2的缓冲液中，清蛋白作为一种阳离子 与阴离子染料溴甲酚绿（bromocresol green， BCG）结合形成蓝绿色复合物，在波长630nm 处有吸收峰，颜色深浅与清蛋白含量成正比， 与同样处理的清蛋白标准液比较，可求得血清 清蛋白含量。

实验操作
加 入 物(mL) 待测血清 蛋白标准液 蒸馏水 双缩脲试剂
U(测) 0.1 -
S(标) 0.1
B(空) 0.1
4.0
4.0
4.0
混匀,置37℃水浴6分钟，以”B”管校”0”, λ=546nm比色,读取A值计算。
实验结果及报告
计算及结果报告： 血清总蛋白(TP)=A测/A标〓C标（ C标=70g/L）




【方法评价】 1.高胆红素血症和溶血标本对本法不产生干扰。严重高脂血症可使结 果偏高，应采用标本空白校正。若标本混浊，可做标本空白（血清 0.02ml，加琥珀酸缓冲液4ml），用测定管吸光度减去标本空白管吸 光度后再计算结果。 2. BCG系一种pH指示剂，它受酸、碱影响较大，所用器材必须清洁， 无酸、碱污染。 3.BCG试剂的pH必须严格控制在pH4.15〒0.05，pH升高可使染料空白 增高，与清蛋白结合率下降。所以，控制反应液的pH是本法测定的关 键。 4.BCG与蛋白质结合的特异性较低。它不仅与清蛋白结合呈色，还与 血清中其它蛋白质呈色，其中以α1球蛋白、运铁蛋白（属β球蛋白）、 触珠蛋白（属α2球蛋白）最为明显， BCG与不同蛋白质的反应速率不 同，与清蛋白可立即发生反应（快反应），与其它蛋白质反应较慢 （慢反应）。实验证明，血清与BCG试剂一经混合，“慢反应”即可 发生，约持续1h才完成。 5. Brij-35是一种非离子去垢剂，它可增强BCG-清蛋白复合物的溶解度， 消除BCG同清蛋白反应时可能产生的沉淀，它的浓度高于或低于所指 定的浓度时，均导致敏感度降低和直线性丧失，对测定结果有较大影