间充质干细胞研究进展及其临床应用前景

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主圄塞旦医蕴！Ｑ塑堡！！旦笙！鲞筮翌翅￡Ｍ塑￡婴丛丛：盟竺！Ｑ塑：∑尘： ＭＳＣｓ的命名
由于ＭＳＣｓ来源及分化潜能的多样性，曾被命名为骨髓 基质细胞（Ｍａｒｒｏｗ ｓｔｒｏｍａｌ ｃｅｌｌｓ）、集落形成单位成纤维细胞 （ｃｏｌｏｎｙ－ｆｏｒｍｉｎｇ ｕｎｉｔ ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ，ＣＦＵ－Ｆｓ）、骨髓基质干细胞 （ｂｏｎｅ ｍａｒｒｏｗ ｓｔｒｏｍａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ，ＢＭＳＳＣｓ）、基质前体细胞 （ｓｔｒｏｍａｌ ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ ｃｅｌｌｓ，ＳＰＣｓ）、骨骼于细胞（ｓｋｅｌｅｔａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ，ＳＳＣｓ）、多潜能成体祖细胞（ｍｕｌｔｉ—ｐｏｔｅｎｔ ａｄｕｌｔ ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ ｃｅＨｓ，ＭＡＰＣｓ）等Ｈ Ｊ。虽然这些术语均不能准确概括其发育 起源和分化潜能，但间充质干细胞（ＭＳＣｓ）这一名称现已被大 家普遍接受和使用。
瘀积胞中，积聚成瘾。小金丸功能散结消肿，化瘀止痛，原用 于痰气凝滞所致的瘰疬、瘿瘤、乳岩、乳癖，用于此药治疗盆腔 炎包块属异病同治，有异曲同工之妙。现代药理研究表明小 金丸具有抗炎、消肿、抗肿瘤和镇痛作用。血宝胶囊具有益肾 健脾、补阴培阳之效。血宝既可助小金丸化痰散结、活血消ｊ｝毂 之力，又可防止小金丸攻邪太过损伤正气。廊竭粉是伤科活 血疗伤之圣药，取其破散瘾积宿血之功。内服外用双管齐下， 共奏化痰散结、化瘀消瘕之功，使邪去而不伤正。本研究表 明，用中成药扶正消瘾法治疗慢性盆腔炎包块具有无创性、服 用简便、疗效好，复发率低的优点。 ７治疗结节性筋膜炎ｏ¨
５例结节性筋膜炎患者，内服小金丸０．６ ｇ，２次／ｄ。局部 服用黄金膏（金黄散＋凡士林）＋四虎散（由生草乌、生半夏、 生南星、狼毒组成）外敷，方法：根据肿块大小，先用金黄膏涂 布于纱布上，再掺加四虎散，外面用单层纱布包裹，最后在药 物表面撒少量蒸馏水，敷贴患处，每２ ｄ换１次。结果５例均 治愈。最短治愈时间２６ ｄ，最长治愈时间３５ ｄ，平均治愈时间 ３０．８ ｄ。结节性筋膜炎又称为假肉瘤性筋膜炎，是一种发生 于浅筋膜的良性增生性病变。小金丸具有消痰化坚、活血止 痛、消结散毒的作用；金黄散清热、解毒、消肿、定痛；四虎散化 痰散结止痛。内外治结合，共奏解毒化肿、化痰散结、活血止 痛之效，故用于治疗本病能取得较满意的疗效。
ＭＳＣｓ广为接受的来源是动物或人的胫骨、股骨处的骨 髓。此外，还可从脂肪组织、骨外膜、滑膜、骨骼肌、表皮、血 液、骨小梁、人脐带、肺、牙髓、牙周膜等处分离到ＭＳＣｓ，提示 ＭＳＣｓ在体内的分布极其广泛。最近Ｋｅｒｎ等从三种不同组织 中分离ＭＳＣｓ并在同样条件下培养，结果三种来源的ＭＳＣｓ在 形态学及免疫表型方面均无差异，但细胞的分离纯度、增殖力 及分化潜能有一定差异。其分离方法主要有密度梯度离心 法、贴壁法、流式细胞术和免疫磁珠分离法等４种方法。流式 细胞术和免疫磁珠分离法设备昂贵，操作复杂。国内目前常 用Ｐｅｒｃｏｌｌ密度梯度离心法和贴壁法。与贴壁法相比，Ｐｅｒｃｏｌｌ 法所获ＭＳＣｓ纯度高，杂质细胞少，增殖力强，常表现为梭形 星形的上皮样细胞形态。因此用密度梯度离心法分离ＭＳＣｓ 效果较好。
间充质干细胞研究进展及其临床应用前景
李玲玲李晶
【关键词】 骨髓间充质干细胞；多向分化；组织工程
间充质干细胞（ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ，ＭＳＣｓ）通常是指 从骨髓或其他组织中分离到的在体外具有多向分化潜能的一 类细胞。自Ｆｒｉｅｄｅｎｓｔｅｉｎ等首次报道骨髓中有少量细胞在培 养过程中能贴壁分化形成类似骨、软骨的集落后，人们对这 些细胞产生了浓厚兴趣。随后从鼠、兔、犬、人等多种动物的 骨髓中均分离到了这种贴壁细胞。它们具有多向分化潜能，
将６０例患者（疾湿疥阻兼脾肾两虚型）分为２组各３０ 例，治疗组口服小金丸和血宝胶囊配合宫颈湿敷血竭粉治疗。 对照组用西医抗炎治疗。治疗前后Ｂ超测量盆腔包块的大 小、检测雌激素水平、观察临床症状消失的情况。结果：总有 效率治疗组８６．６７％，对照组为６３．３３％，２组比较，差异有显 著性意义（Ｐ＜０．０５）；随访半年复发率，治疗组为２３．０８％，对 照组为６３．１５％，２组比较，差异有非常显著性意义（Ｐ＜ ０．０１）；雌激素水平治疗前后比较及治疗后组问比较，差异均 无显著性意义（Ｐ＞０．０５）。慢性盆腔炎包快属中医学瘢瘕范 畴，多起于经行产后，胞脉胞络空虚，血室正开，痰湿之邪乘虚 而入，蕴结胞宫；失治误治，余邪未净，迁延１３久，病及血分，致
作者单位：１３００２１吉林省前卫医院（李玲玲）；吉林省人民医院中 西医结合科（李晶）
在体外不同诱导条件下可分化为成骨细胞、软骨细胞、脂肪细 胞及神经细胞…。
与软骨细胞、骨髓基质细胞、胚胎干细胞等相比，ＭＳＣｓ具 有强大的增殖力、较强的多向分化潜能，而且具有取材方便、 便于自体移植、便于外源基因转染及表达调控等诸多优点。 最近。还发现ＭＳＣｓ具有免疫调节功能嵋ｏ。因此，ＭＳＣｓ是组 织工程的一种新的理想种子细胞。目前，已知ＭＳＣｓ是源于 中胚层的具有高度自我更新能力和多向分化潜能的成体干细 胞，广泛存在于全身结缔组织和器官间质中¨１。本文就ＭＳＣｓ
不同物种ＭＳＣｓ体外培养时所需的培养条件不尽相同。 有人比较了ａ．ＭＥＭ、ＤＭＥＭ—ＨＧ、ＤＭＥＭ．ＬＧ ３种培养基对兔 ＭＳＣｓ体外贴壁、增殖、分化的影响，认为ｄ．ＭＥＭ最适合于 ＭＳＣｓ的体外培养和增殖。ＭＳＣｓ体外培养最常用的是含 １０％～２０％胎牛血清的ＤＭＥＭ培养基。体外培养时，ＭＳＣｓ 呈成纤维细胞样形态，研究发现ＭＳＣｓ只有经高密度接种且 培养数代后，才能表现出形态和表型的一致，但此时会丧失分 化能力［６］。另外，在培养的早期阶段，尤其是低密度接种时， 人间充质干细胞（ｈＭＳＣｓ）的形态、表型和功能出现不一致 性［７］。ｈＭＳＣｓ具有极大的扩增潜能，表现出活跃的增殖能力 并保持着向多种间充质细胞系分化的潜能。 ３ ＭＳＯｓ的表面特征
最近，Ｌｉｎ Ｓｏｎｇ等Ｈ１提出骨髓干细胞的这种转分化能力 并非真正的转分化，它们所获得的表型改变是通过细胞融合 而不是通过分化而来的。ＭＳＣｓ作为骨髓干细胞中重要的成 员，具有高度的可塑性，可向多种细胞系分化。研究表明， ＭＳＣｓ在不同的体外条件下可诱导分化为骨细胞、软骨细胞、 成肌细胞、脂肪细胞等，还可向神经细胞、上皮细胞、血管内皮 细胞、心肌细胞等分化”Ｊ。在体外一些因素的作用下，ＭＳＣｓ 可能会改变自身的基因表达，从而转分化为其他谱系的细胞。 因此要了解ＭＳＣｓ的定向分化过程，找到其转分化的关键基 因至关重要。另一种观点是ＭＳＣｓ之所以能多向分化是因为 其本身可能存在能生成所有３个胚层细胞的多能成体祖细胞 （ＭＡＰＣｓ）。 ４．１分化为中胚层起源的细胞研究发现ＭＳＣｓ经５－氮胞 苷（５－ａｚａｃｙｔｉｄｉｎｅ）处理后可诱导分化为心肌细胞¨“。目前认 为干细胞进入微环境后对分化信号的反应受周围正在进行分 化的细胞影响，并对新的微环境中的调节信号做出反应，可称 之为“环境诱导分化”。干细胞对环境信号的反应能力随时 问而变化，反应强弱取决于细胞表面信号传递分子或转录因 子的表达，是定向分化的决定因素。实验表明，环境诱导分化 除可能与细胞接触有关外，还存在基因水平调控、细胞因子调 控等。
研究发现ｈＭＳＣｓ表达一组独特的趋化因子：３个ＣＣ受 体（ＣＣＲｌ、ＣＣＲ７、ＣＣＲ９）、３个ＣＸＣ受体（ＣＸＣＲ４、ＣＸＣＲ５、 ＣＸＣＲ６）。ＨＭＳＣｓ还分泌ＣＣＬ２、ＣＣＩＡ、ＣＣＬ５、ＣＣＬ２０、ＣＸＣＬｌ２
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、ＣＸＣＬ８等配体，当配体结合时，ＭＡＰＫ和ＦＡＫ激酶磷酸 化１１０１。迄今为止，对于ＭＳＣｓ的表面标志尚不确定。流式细 胞术检测显示，ＭＳＣｓ的表面抗原具有非专一性，表达问质细 胞、内皮细胞和表皮细胞的表面标志；不表达造血细胞的表面 标志．如ＣＤ３４、ＣＩＭ５、ＣＤｌ４、ＣＤ３、ＣＩＭ、ＣＤ８和Ｉ、Ⅱ、Ⅲ型胶 原及碱性磷酸酶等；也不表达与人类白细胞抗原（ＨＬＡ）识别 有关的共刺激分子１３７－Ｉ、Ｂ７－２及主要组织相容性复合物Ⅱ类 分子如ＨＩＡ－ＤＲ抗原等，因此具有低免疫原性［Ｉ“。细胞周期 研究发现，ＭＳＣｓ中有９０％处于ＧＯ／ＧＩ期，说明ＭＳＣｓ具有高 分化潜能。ＭＳＣｓ能分泌ＩＩ。－６、ＩＬ－７、ＩＬ－８、ＩＬ．１、Ｇ．ＧＳＦ、ＤＳＦ、 ＳＣＦ等多种细胞因子，对支持造血和维持细胞生长分化十分 重要‘１引。 ４ ＭＳＣｓ的分化潜能
参考文献
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ｈＭＳＣｓ表达多种不同细胞的表面蛋白，包括多数整合素、 生长因子受体（ｂＦＧＦＲ，ＰＤＧＦＲ，ＥＧＦＲ，ＴＧＦｐＩＲ／ＩＩＲ）、趋化 因子受体（某些白介素、ＣＣ及ＣＸＣ受体）以及细胞粘附分子 （ＶＣＡＭ．１，ＩＣＡＭ．１／２。ＡＬＣＡＭ一１，Ｌ．ｓｅｌｅｃｔｉｎ，ＣＤｌ０５，ＣＤ４４） 等ｏｔ－３ｊ。ｈＭＳＣｓ还产生大量的基质分子，包括纤连蛋白、Ｉ， ＩＩＩ，ＩＶ型胶原、层粘连蛋白、透明质烷及蛋白聚糖等¨…。
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国际细胞疗法学会（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ ｆｏｒ Ｃｅｌｌｕｌａｒ Ｔｈｅｒ－ ａｐｙ，ＩＳＣＴ）建议学者们在下列情况下采用ＭＳＣｓ这一名称：一 是在体外培养中必须具有贴壁性；二是为ＣＤｌ０５、ＣＤ７３、ＣＤ９０ 抗原阳性，但缺乏造血系统抗原ＣＤ４５、ＣＤ３４及单核细胞、巨 噬细胞和Ｂ细胞抗原；三是在标准的体外分化条件下，它们 至少能分化形成成骨细胞、脂肪细胞、成软骨细胞，且这种分 化能用广为接受的染色程序加以证明ｂ１。因此，这三条原则 是ＭＳＣｓ分离、培养、鉴定的基本原则。 ２ ＭＳＣｓ的分离培养