SDS-PAGE全部试剂配方
SDS-PAGE所有详细试剂配方
S D S-P A G E 30%聚丙烯酰胺溶液-----30%（w/v）Acrylamide【组分浓度】各种组分名称配制不同体积所需各成分的体积(mL)或质量(g)30%Acr-Bis(29:1) 1000ml 100ml29%Acrylamide(丙烯酰胺) 290g 29g1%BIS(N,N’-亚甲丙烯酰胺) 10g 1g【配制方法】将29克丙烯酰胺和1克N,N’-亚甲丙烯酰胺溶于总体积为60ml温热（37℃左右）的去离子水中，充分搅拌溶解，补加水至终体积为100ml。
0.45μm微孔滤膜过滤除菌和杂质，储于棕色瓶，4℃避光（用铝箔纸包扎起来）保存。
严格核实PH不得超过7.0，因可以发生脱氨基反应是光催化或碱催化的。
使用期不得超过两个月，隔几个月须重新配制。
如有沉淀，可以过滤。
【保存条件】4℃避光（用铝箔纸包扎起来）保存【注意事项】丙烯酰胺具有很强的神经毒性并可通过皮肤吸收，其作用具有累积性。
称量丙烯酰胺和N,N’-亚甲丙烯酰胺时应戴手套和面具。
可认为聚丙烯酰胺无毒，但也应谨慎操作，因为它还可能含有少量未聚合材料。
1MTris-HCL（pH6.8）(浓缩胶buffer)【组分浓度】1MTris-HCL名称用量备注Tris 12.1g去离子水80ml浓盐酸9ml (36%的浓盐酸)预实验已确定去离子水加入去离子水定容至100ml后，室温保存【配制方法】称量121.1gTris碱溶于800mL的去离子水，充分搅拌溶解，加>0.7mL的浓HCL调节所需要的pH 值（7.4-大约0.7mL，7.6-大约0.6mL，8.0-大约0.42mL），将溶液定容至1L，高温高压灭菌后，室温保存。
应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。
【保存条件】室温保存。
【注意事项】对人体有刺激性，请注意适当防护。
1.5MTris-HCL（pH8.8）(分离胶buffer)【组分浓度】1.5MTris-HCL名称用量备注Tris 18.17g去离子水80ml浓盐酸3ml (36%的浓盐酸)预实验已确定去离子水加入去离子水定容至100ml后，室温保存【配制方法】1L称量181.7gTris碱溶于800mL的去离子水，充分搅拌溶解，加浓HCL调节所需要的pH值=8.8，将溶液定容至1L，高温高压灭菌后，室温保存。
SDS-PAGE 配方
Minigels•migration buffer 500ml12.14 mM Tris 100 ml 5 x stock134.2 mM Glycin0.1% SDS 5 ml 10% SDS1 mM EDTA 1 ml 0.5 M EDTA pH 8394 ml Millipore water• 5 X stock migration buffer 1l60.7 mM Tris 15g Tris671 mM Glycin 72g GlycinMillipore water to 1 Liter•2xSDS buffer 4 ml125 mM Tris-HCl pH 6.8 1ml 0.5 M Tris-HCl pH 6.820% Glycerol 0.8 ml 100% Glycerol4% SDS 1.6 ml 10% SDS10% •-Mercaptoethanol 0.4 ml •-Mercaptoethanol0.005% Bromphenolblau 0.2 ml 0.1% Bromphenolblau•5xSDS buffer 4 ml225 mM Tris-HCl pH 6.8 0.45 ml 2 M Tris-HCl pH 6.8 50% Glycerol 1.55 ml 100% Glycerol5% SDS 1 ml 20% SDS10% •-Mercaptoethanol 1 ml •-MercaptoethanolSpatule tip bromphenol blueSolutions (calculated for 4 minigels)•separating gel (10%) 20ml9.6ml Millipore Water |375mM Tris-HCl pH 8.8 5ml 1.5M Tris-HCl pH 8.8 |0.1% SDS200µl 10% SDS |10% Acrylamid 5 ml 40% Acrylamid- degase -1 mg/ml ammonium persulfate 200µl APS (100mg/ml)0.04% TEMED 8µl TEMED•separating gel (11%) 20ml9.1 ml Millipore Water |375mM Tris-HCl pH 8.8 5ml 1.5M Tris-HCl pH 8.8 |0.1% SDS200µl 10% SDS |11% Acrylamid 5.5 ml 40% Acrylamid- degase -1mg/ml ammonium persulfate 200µl APS (100mg/ml)0.04% TEMED 8µl TEMED•separating gel (12%) 20ml8.6 ml Millipore Water |375mM Tris-HCl pH 8.8 5 ml 1.5M Tris-HCl pH 8.8 |0.1% SDS200µl 10% SDS |12% Acrylamid 6 ml 40% Acrylamid- degase -1mg/ml ammonium persulfate 200µl APS (100mg/ml)0.04% TEMED 8µl TEMED•separating gel (12.5 %) 20ml8.35ml Millipore Water |375mM Tris-HCl pH 8.8 5ml 1.5M Tris-HCl pH 8.8 |0.1% SDS200µl 10% SDS |12.5% Acrylamid 6.25 ml 40% Acrylamid- degase -1mg/ml ammonium persulfate 200µl APS (100mg/ml)0.04% TEMED 8µl TEMED•separating gel (15%) 20ml7.1 ml Millipore Water |375mM Tris-HCl pH 8.8 5ml 1.5M Tris-HCl pH 8.8 |0.1% SDS200µl 10% SDS |15% Acrylamid 7.5 ml 40% Acrylamid- degase -1mg/ml ammonium persulfate 200µl APS (100mg/ml)0.04% TEMED 8µl TEMED•stacking gel (4%) 10ml6.3ml Millipore Water |125mM Tris-HCl pH 6.8 2.5ml 0.5M Tris-HCl pH 6.8 |0.1% SDS 100µl 10% SDS |4% Acrylamid 1ml 40% Acrylamid- degase -1mg/ml ammonium persulfate 100µl APS (100µg/ml)0.1% TEMED 10µl TEMED•Tricine separating gel (16%) 10ml1 M Tris-HCl pH 8.45 3.35ml 3M Tris-HCl pH 8.450.1% SDS100µl 10% SDS16% Acrylamid 4 ml 40% Acrylamid10% Glycerol 1 ml glycerol1.5 ml H2O0.5 mg/ml ammonium persulfate 50µl APS (100mg/ml)0.05 % TEMED 5µl TEMED0Western blot buffer2L:400ml EtOH12.12 g Tris28.83 g Glycine1.6 L H2OCoomassie Stain Solution:1L:1.6 g CBB R-250400 ml EtOH80 ml Acetic acidDestain Solution :10L :2 L EtOH0.7 L Acetic acid7.3 L H2O•2xSDS loading buffer 4 ml125 mM Tris-HCl pH 6.8 1ml 0.5 M Tris-HCl pH 6.820% Glycerol 0.8 ml 100% Glycerol (甘油)4% SDS 1.6 ml 10% SDS10% •-Mercaptoethanol 0.4 ml •-Mercaptoethanol（巯基乙醇）0.005% Bromphenolblau 0.2 ml 0.1% Bromphenolblau（溴酚蓝）。
SDS-PAGE试剂配方
SDS-PAGE试剂配方SDS-PAGE电泳所用溶液:30 %聚丙烯酰胺溶液 (100 mL)丙烯酰胺 (Arc) 29 gN,N’-亚甲双丙烯酰胺 (Bis) 1 g用双蒸水定容至100mL，过滤备用，4?存放丙稀酰胺29.2g，N-N-甲叉双丙稀酰胺0.8g，加入去离子水定容至100mL，pH 值不能超过7.0，过滤于棕色玻璃瓶中4?贮存。
5×Tris-甘氨酸缓冲液 (1 L)Tris碱 15.1 g甘氨酸(电泳级) 94 g10 %SDS 50 mL使用时稀释5倍使用2×SDS凝胶加样缓冲液(10mL)0.5 mol/L Tris-Cl (pH 6.8) 2 mL10,(W/V)SDS 4 mL甘油 2 mLβ-巯基乙醇 1.0 mL(DTT(二硫苏糖醇) 0.31g)溴酚兰 0.02g双蒸水 0.5 mL室温存放备用考马斯亮蓝染色液考马斯亮蓝R-250 (G-250) 1.0 g甲醇 450 mL冰醋酸 100 mLddHO 450 mL 20.2g考马斯亮蓝R250+84mL 95,乙醇+20mL冰醋酸，定容至200mL，过滤备用考马斯亮蓝脱色液(甲醇脱色液效果好，但有毒性)甲醇 100 mL冰醋酸 100 mLddHO 800 mL 2医用酒精:冰醋酸:水=4.5:0.5:5(V:V:V)SDS-PAGE所需溶液:A液——30,丙稀酰胺(W/V):丙稀酰胺29.2g，N-N-甲叉双丙稀酰胺0.8g，加入去离子水定容至100mL，pH值不能超过7.0，过滤于棕色玻璃瓶中4?贮存。
B液——1.5mol/L Tris?HCl，pH8.8:18.17g(9.09g)Tirs碱，溶于80mL(40mL)去离子水中，加入约3mL(1.5mL)以上的浓盐酸调节pH值至8.8，定容至100mL(50mL)。
C液——1.5mol/L Tris?HCl，pH6.8:12.1g(6.05g)Tirs碱，溶于80mL(40mL)去离子水中，加入约7mL(3.5mL)以上的浓盐酸调节pH值至6.8，定容至100mL(50mL)。
sds-page凝胶配方及制胶[新版]
![sds-page凝胶配方及制胶[新版]](https://img.taocdn.com/s3/m/db78724fbf23482fb4daa58da0116c175f0e1ee4.png)
SDS-PAGE 凝胶配方及制胶12%分离胶试剂5ml 8ml 10ml 15ml 25ml30ml 60ml 90ml 120ml 30%Acr-Bis （ml ） 2 3.2 4610122436 48 1.5M Tris-HCl PH8.8（ml ） 1.25 2 2.5 3.75 6.25 7.5 15 22.5 30 ddH2O （ml ） 1.65 2.64 3.3 4.95 8.25 9.9 19.8 29.7 39.6 10%SDS （ul ） 50 80 100 150 250 300 600 900 1200 10%APS （ul ） 50 80100 150 250300 600 900 1200 TEMED （ul ） 3 4.8 6 9 15 18 36 54 725%浓缩胶试剂4ml 6ml 8ml 12ml 16ml 20ml 24ml 36ml 48ml 30%Acr-Bis （ml ） 0.66 0.99 1.32 1.98 2.64 3.3 3.96 5.94 7.92 1M Tris-HCl PH6.8（ml ） 0.5 0.75 1 1.5 22.5 34.56ddH2O （ml ） 2.74 4.14 5.48 8.28 11.02 13.7 16.56 24.84 33.12 10%SDS （ul ） 40 60 80 120 160 200 240 360 480 10%APS （ul ） 40 60 80 120 160 200 240 360 480 TEMED （ul ）4681216202436481、按顺序加溶液，每加完一个溶液摇匀一下。
00000002、TEMED 要在通风橱中加，加入后混匀30秒左右后再注胶；吸打时枪头不出液面，以减少气泡 000000003、分离胶配好后要用水封顶，聚合至少40min （也可聚合一夜）00000004、加入浓缩胶后插梳子（要洗干净），梳子倾斜插入，避免产生气泡。
SDSPAGE所有详细试剂配方精修订
SDSPAGE所有详细试■ 剂配方SANY 标准化小组#QS8QHH-HHGX8Q8-GNHHJ8-HHMHGN# 称S181.7gTrisfi«溶于800mL的去离子水，充分搅拌溶解.加浓HCL调节所需耍的pH值=8・&将洛液定容至ILt 高温高压灭菌后.室温保存。
(1. 5mmol/LTris"HCL(pH8. 8) : 18. 15gTris 和48mllmol/LHCL 混合.加水稀释到100ml 终体积。
过滤后4七保存。
)【保存条件】室温保存【注意事项】应使溶液冷却至室温后再调定pH值，I大I为Tris溶液的pH值随温度的变化差界很大.温度每升商1°C,溶液称取2g高纯度的SDS迓于100、200ml烧杯中，加入约16ml的去离子水.689加热溶解.滴加浓盐酸调节PH 至7・2・定容至20ml后，室温保存【保存条件】室温保存【注意事项】对人体有害•请注总:防护。
io%过硫酸鞍溶液------ io%(w G AP称取O・lg过硫酸钱宜于l・5ml离心管•加ImL去离子水吹打溶解.JC保存【保存条件】49保存【注意事项】10%过疏酸钱溶液在49保存时•可使用2周左右•超过期限会失去催化作用5XTris-酸电泳缓冲液------------ oXTris-Clycinebuffer (SDS-PAGE 电泳缓冲液)【组分浓度】称取15. IgTris, 91. 0g甘氮酸(glycine) , 5. OgSDS,用800ml蒸馅水或去离子水溶解.充分搅拌溶解•定容至1000ml,室温保存。
得0・125mol/LTris7 25mol/L甘氨酸电极缓冲液。
临用前稀释5倍。
【保存条件】室温保存•两年有效。
【注意事项】配制好的电泳液使用时间不宜超过两周。
电泳缓冲液可以回收.回收后可再使用「2次.但为了取得最佳的电泳效果,应使用新电泳液°0. 25MTris-HCL (pH6. 8)：10%(W/V)SDS：0. 5%(W/V)BPB(^酚蓝):50%(V/V)廿油：5%(W/V) 0-筑基乙醇(2-ME)【配制方法】fit取1.25mLlMTris-HCL (pH6・8) , 0・5gSDS, 25mgBPB・2・5mL甘油,宜于lOmL塑料离心管中■加去离子水溶解后•定容至5mL,小份(0・5mL/份)分装，于室温保存。
SDS-PAGE分离胶-浓缩胶配方
SDS-PAGE1、SDS-PAGE :聚丙烯酰胺凝胶电泳2、Acr :丙烯酰胺；配胶时用30%Acr （质量比Acr ：Bis=29:1）3、Bis ：甲叉双丙烯酰胺4、DDW :超轻水5、SDS ：十二烷基硫酸/磺酸钠，阴离子去污剂（配胶时用10%）6、APS ：过硫酸铵NH 4S 2O 4配胶时用10%7、TEMED :四甲基乙二胺，促凝剂8、Tris-Hcl ：3羟基氨基甲烷盐酸缓冲液，配胶时（分离胶ph=8.8,浓缩胶ph=6.8） 9、DTT ：二硫苏糖醇，DTT 也常常被用于蛋白质中二硫键的还原，可用于阻止蛋白质中的半胱氨酸之间所形成的蛋白质分子内或分子间二硫键。
10、IMA ：碘乙酰胺，碘代乙酰胺用于有机合成，在蛋白组学中组氨酸和半胱氨酸的烷基化试剂，用于多肽测序以及酶抑制剂等，蛋白组学级试剂。
CH>2ICONH>2,是和碘乙酸一样，可通过下列反应不可逆地抑制SH 酶类的物质。
5酣TO mlmt 20ml30祝4Qmd50ml6%Bd叫匸2.6 5.3 7.9 10.6 132 15.9 21.2 26.5 30%Atiylamde10 2.0 3.0 4.0 50 60 ao 10.0 15M Trls-HCl (pHS.Sl 1.3 2.5 33 5,0 6.3 7.5 100 125 lO^iSDSC05 01 015 0.2 025 03 04 0.5 10%过谦酸霰 CQ5 01 015 12 025 03 04 05 TEMED CO3400080G123.0160020C240032 004 8%姑2.3 4S S.93.3 11.5 13.S 18.5 232 30%Acrylamde 13 2.7 40 5.3 S.7 a.o 107 13^ 15M Trls-HCII'pHS S'I 1.3 2.5 38 5.0 63 75 100 1£.5 ItPiSDSC.05 0.1 0.16 X 0.25 0.3 0.4 0.5 彳贰过砺酸鞍COS QJ 0.S5 0.2 Q25 03 04 05 TEMEO C00300060W9D.01200t50G18 0024003 io^GelHiO19 4,0 5.9 7.9 &9 11S 159 19S Acryiamde 17 33 6.0 S.7 a.a too 13J 167 15M Trls-HCIipHsB) 13 25 3.8 5.0 63 7.5 W.O 1?5 I^SDSC.05 0.1 0.15 3.2 0.25 0.3 0.4 0.5 1贰■过硫股牧 C0501 0.15 £1.2 025 03 04 05 TEMED C(X)20034 0006 3.0C® 0.01 0012 0016 002 12%GalH J O16 33 49 5.e &2 $= 132 165 30陽3.0 40 SO B.O 100 12Q 160 20£l 1.5M Tris-HCI(pHS 印 13 25 30 5.0 6-3 75 100 1^5It^iSDSC.05 0.1 0.36 J 总 0.25 0.3 0.4 0.5 过硫鞭较C05 0.1 0.15 tl.2 025 03 Q4 05 TEMED CO320004 ooosO.OCf i0.01 0C12 0016 002 15%*l甌11 23 34 4-a 6 37 6.& 9? 11.5 30%A trylamde 2S SO 7.S 1U.0 125 150 2Q0 25a 15Ml Tris-HCIipHs 印 13 2.5 3.8 5.0 S3 7.5 100 125 10%SDSC.05 0.1 0.15 3.2 0.25 0.3 0.4 0.5 过盘盤钮COS 01 015 0.2 025 0.3 04 05 TEMEDCO^0004OOOSO.OCfl0010C12001E0.021）根据目的蛋白的分子量大小选择合适的凝胶浓度，再按照下面的表格配制SDS-PAGE 的分离胶（即下层胶）：Sap QFS f/cD时爭尸。
sds-page 试剂配制
SDS-PAGE 试剂配制
凝胶脱色染色方法：
溶液1：无水乙醇250mL，冰醋酸50mL，水200mL；
溶液2：无水乙醇50mL，冰醋酸37.5mL，水437.5mL；
溶液3：0.25g考马斯亮蓝R-250 溶于100mL 95%乙醇中，滤纸过滤，待用。
电泳结束，取出胶放在胶盒中，加约50mL溶液1，微波炉加热1min，摇床摇10-20nin；倒掉溶液1，加入溶液2，再加1mL溶液3，混匀，微波炉加热1min，摇床摇，直至条带染色清晰为止。
上样缓冲液（5×）：（5×loading buffer）有
10%（W/V,g/ml）过硫酸铵（APs）的配制：（1ml）
1.称取0.1g过硫酸铵；
2.加入1ml的去离子水，将固体粉末彻底溶解；
3.贮存于4℃。
注意：10%过硫酸铵最好现配现用，配好的溶液在4℃保存可使用2周左右，过期会失去催化效果。
5×Tris-Glycine电泳缓冲液的配制：（1L）
1.称取Tris粉末15.1g、Glycine（甘氨酸）94g、SDS5.0g；
2.加入约800ml的去离子水，搅拌溶解；
3.加去离子水定容至1L，室温保存。
注意：加水时应让水延着壁缓缓流下，以避免由于SDS的原因产生很多泡沫。
SDS-PAGE原理、试剂配制和注意事项
SDS是阴离子去污剂，能断裂分子内和分子间的氢键，破坏蛋白分子的二、三级结构。
作用有四：去蛋白质电荷、解离蛋白质之间的氢键、取消蛋白分子内的疏水作用、去多肽折叠。
而强还原剂如巯基乙醇，二硫苏糖醇能使绊胱氨酸残基间的二硫键断裂。
在样品和凝胶中加入还原剂和SDS后，分子被解聚成多肽链，解聚后的氨基酸侧链和SDS结合成蛋白- SDS 胶束，所带的负电荷大大超过了蛋白原有的电荷量，这样就消除了不同分子间的电荷差异和结构差异。
SDS-PAGE一般采用的是不连续缓冲系统，浓缩胶是由AP催化聚合而成的大孔胶，凝胶缓冲液为pH6.7的Tris-HC1。
分离胶是由AP催化聚合而成的小孔胶，凝胶缓冲液为pH8.9 Tris-HC1。
电极缓冲液是pH8.3 Tris-甘氨酸缓冲液。
2种孔径的凝胶、2种缓冲体系、3种pH值使不连续体系形成了凝胶孔径、pH值、缓冲液离子成分的不连续性，这是样品浓缩的主要因素。
当样品液和浓缩胶选TRIS/HCL缓冲液，电极液选TRIS/甘氨酸。
电泳开始后，HCL解离成氯离子，甘氨酸解离出少量的甘氨酸根离子。
蛋白质带负电荷，因此一起向正极移动，其中氯离子最快，甘氨酸根离子最慢，蛋白居中。
电泳开始时氯离子泳动率最大，超过蛋白，因此在后面形成低电导区，而电场强度与低电导区成反比，因而产生较高的电场强度，使蛋白和甘氨酸根离子迅速移动，形成以稳定的界面，使蛋白聚集在移动界面附近，浓缩成一中间层。
过硫酸铵（AP）为催化剂，四甲基乙二胺（TEMED）为加速剂。
在聚合过程中，TEMED 催化过硫酸铵产生自由基，后者引发丙烯酰胺单体聚合，同时甲叉双丙烯酰胺与丙烯酰胺链间产生甲叉键交联，从而形成三维网状结构。
当分子量在15KD到200KD之间时，蛋白质的迁移率和分子量的对数呈线性关系，符合下式：logMW=K-bX，式中：MW为分子量，X为迁移率，k、b均为常数，若将已知分子量的标准蛋白质的迁移率对分子量对数作图，可获得一条标准曲线，未知蛋白质在相同条件下进行电泳，根据它的电泳迁移率即可在标准曲线上求得分子量。
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SDS-PAGE试剂配方
30%凝胶贮液（150ml， 4℃保存）
29.2% Acr：43.8g 0.8% Bis：1.2g
将Acr完全溶解于120ml水中，再加入Bis使其完全溶解，加ddH2O定容至150ml，用滤纸过滤溶液，棕色玻璃瓶中4℃保存。
分离胶Buffer （1.5M Tris-HCl 250ml）
Tris：45.4725g SDS：1g
将Tris溶于200ml水中，在磁力搅拌器上不断搅动溶液使其完全溶解，用HCl调节pH 至8.8，此过程中加入HCl时浓度需逐渐降低，越接近目标pH越要小心防止pH调节过头。
加ddH2O定容至250ml，加入SDS（此时容易产生气泡，可用超声或抽气破碎气泡），抽滤或滤纸过滤，4℃保存。
浓缩胶Buffer （0.5M Tris-HCl 100ml）
Tris：6.07g SDS：0.4g
将Tris溶于80ml水中，后续步骤同分离胶Buffer，调节pH值至6.8（可配置200ml调pH后100ml用于添加SDS作浓缩胶Buffer，剩余100ml为Tris-HCl贮液）
SDS裂解液（10ml）：
0.5M Tris-HCl pH：6.8 2ml
2%甘油2ml
4%SDS 0.4g
65mM DTT 100mg（使用时临时加入）
ddH2O 6ml
样品溶解液：（100ml）
终浓度为50 mmol/L Tris﹒HClpH=6.8（总体积的20%=20ml），2% SDS=2g，0.1% 溴酚蓝=0.1g，10% 甘油=10ml，补ddH2O到100ml
10％过硫酸铵：5g(0.5g)过硫酸铵，溶于50mL(5mL)去离子水中；现配现用或分装至0.5mL 离心％过硫酸铵：管中冷冻备用
TEMED(N-N-N`-N`－四甲基乙二胺)原液，室温保存（有毒，致癌物质）。