银染方法总结
银染方法总汇及注意事项
ptotocol是这样的，请看哪里不妥：蛋白银染步骤步骤溶液时间固定甲醇100ml冰醋酸25ml加双蒸水至250ml 30min冲洗双蒸水3次敏化甲醇75ml戊二醛（25%w/）1.25ml硫代硫酸钠(5%w/) 10ml醋酸钠（17g）加双蒸水至250ml 30min冲洗双蒸水3次银反应硝酸银溶液(2.5%w/) 25ml甲醛(37%w/) 0.1ml加双蒸水至250ml 20min冲洗双蒸水2次显色碳酸钠(6.25g)甲醛(37%w/) 0.05ml加双蒸水至250ml2-5min终止EDTA-Na22H2O(3.65g)加双蒸水至250ml 10min冲洗双蒸水3次建议使用silia的方法！！简单，快！本人的银染方法：1. 固定：100ml MeOH, 24ml H Ac, 56ml 0.04%HCHO, 20ml ddH2O,洗三次，每次>=20分钟；2. 50％EtOH洗PAGE胶三次，每次20分钟；3. 预处理：0.02％Na2S2O3 处理一分钟；4. 水洗：ddH2O漂洗三次，每次20秒；5. 染色：0.8ml 20％AgNO3+72ml 0.04%HCHO处理PAGE胶20分钟；6. 水洗：同上；7. 显色：25ml 12％Na2CO3, 24ml 0.04%HCHO, 1ml 0.02％Na2S2O3, 漂洗10－15分钟；8. 水洗：同上；9. 终止：50％MeOH, 12％H Ac,10分钟。
以上步骤从中科院生化所学来，过程和silia 的基本一致，不知道是否有出入，请大家指正。
谢谢！！！5.2.2.3 银染色1 银染液1（1000ml）：甲醇50％乙酸12％甲醇500ml 冰醋酸120ml2 银染液2（1000ml）：甲醇30％，乙酸钠0.4M，戊二醛0.5%，硫代硫酸钠0.1%，（含乙酸1－2ml）甲醇300ml 乙酸钠54.4g 戊二醛10ml 硫代硫酸钠1g 乙酸1－2ml3 显色液(1000ml) 无水碳酸钠2.5% 甲醛0.02%无水碳酸钠25g，甲醛1.5ml4 硝酸银（100ml）：20%硝酸银（过滤后待用）染色步骤：1 银染液1 洗2次，每次5分钟2 银染液2 洗1次，每次30分钟3 超纯水洗2次，每次1分钟4 0.5%硝酸银洗30分钟5 超纯水洗5次，每次1分钟（关键步骤，共计5分钟）显色液显色6 看到各条带，则倾去显色液, 1％乙酸中止我感觉浸银后、显色前的水洗非常关键，时间不能太长，次数不能太多，否则可能会染不上颜色。
银染法原理
银染法原理
银染法（Silver Dyeing）是一种针织衫表面装饰印花工艺，其原理是通过水洗酚与羟基合铝（DHDH）交联到纤维表面，形成一层“磁铁膜”。
此外，经过“活性染料”稳定处理之后，通过“中性染银”工艺，将银染剂附着在纤维表面，形成银染浸出物，从而达到印花的目的。
经过“活性染料”和中性染银的处理，纤维表面结合强条件的DHDH，使纤维表面形成稠密平整的银染“磁铁膜”，并且可以在低温条件下对DHDH进行化学反应，而不会损伤纤维结构，维持纤维表面质地、厚度及形状的稳定性。
因此，银染法可以显著改善纤维表面的抗湿性、抗脏能力，确保长期的产品性能。
此外，由于银染可以实现多种渐变色印花，因而在市场上十分受欢迎。
银染法的一大优点是对纤维表面的抗湿性和耐磨性都有很大的改善，而且易于清洁，易于使用。
此外，它相对传统的织物印花可以提供更持久的色彩，而且可以提供更多的色彩选择。
此外，还有各种多种渐变色印花可以实现，增强了产品的装饰性和独特性。
双向电泳凝胶银染操作流程.
2.银染液成分：
(18cm 胶)每块用 500 ml 银染液
成分
(7cm 胶)
(18cm 胶)
(克，毫升,微升) 100 mlⅹ1 500mlⅹ1 500mlⅹ2 500mlⅹ3 500mlⅹ4
AgNO3
0.25 g
1.25 g
2.5g
3.75g
5.0g
1
北京基因组研究所-阳光
纯水
定容
定容
定容
定容
北京基因组研究所-阳光
双向电泳凝胶银染操作流程
目的：检测聚丙烯酰胺凝胶中的蛋白质。
原理：在碱性条件下，用甲醛将蛋白带上的硝酸银（银离子）还原成金属银，使
银颗粒沉淀在蛋白带上。
一、固定：过夜+10minⅹ3
1.方法：1）.固定 30min 后纯水洗 10minⅹ3。2）.固定过夜后纯水洗 10minⅹ3（推荐）。
1.24g
6.20 g
12.4g
18.6g
24.8g
纯水
定容
定容
定容
定容
定容
总体积
100 ml
500ml
1000 ml
1500 ml
2000 ml
K3Fe(CN)6：铁氰化钾，深红色菱形结晶，比重 1.845，在碱性介质中为强氧化剂； Na2S2O3·5H2O：易溶于水，水溶液呈弱碱性，不溶于乙醇。
Glycine
0.4 g
2g
4g
6g
8g
纯水
定容
定容
定容
定容
定容
总体积
100 ml
500ml
1000 ml
1500 ml
2000 ml
甘氨酸：Glycine，75.07（可以用 EDTA 代替，3.65g 的 EDTA.2H2O 相当于 1g 甘氨酸） 六、（补充）：脱色
银染法汇总
银染法EMBL Silver staining固定液: 50% MeOH, 5% HAc vol. 200 ml.100 ml MeOH Merck 1.0600910 ml HAc (100%) Merck 1.0006390 ml H2O MilliQ漂洗液: 50% MeOH vol. 200 ml.敏化液: 0.02% Na2S2O3 vol. 200 ml.0.04 g. Na2S2O3 Fluka 72049200 ml H2O硝酸银: 0.1% AgNO3 V ol. 200 ml. (Cold)0.2 g AgNO3 Sigma S-8157200 ml. H2O显色液: 0.04% Formalin, 2% Na2CO3 Vol. 250 ml.100 µl Formalin (35% Formaldehyde) Merck 1.040015 g Na2CO3 Merck 1.06392250 ml. H2O终止液：5% HAc: 5% HAc V ol. 200 ml.10 ml HAc (100%)190 ml H2O染色步骤1. Fix gel: 50% MeOH, 5% HAc for 20 mins.2. Wash gel: 50% MeOH for 10 mins.3. Wash gel: H2O for 2 hrs. Reduce background staining by over night washing.4. Sensitize gel: 0.02% Na2S2O3 for 1 min.5. Wash gel: H2O for 1 min.6. Wash gel: H2O for 1 min.7. Incubate gel: Cold 0.1% AgNO3 for 20 mins. at 4oC8. Wash gel: H2O for 1 min.9. Change gel chamber10. Wash the gel: H2O for 1 min.11. Develop gel: 0.04% Formalin, 2% Na2CO3 Observe the color and change solution when the developer turns yellow. Terminate when the staining is sufficient.12. Termination: 5% Hac Change the solution a couple of times13. Leave the gel at 4℃in: 1% HacBlum Silver staining (modified for MS)固定液: 40% EtOH, 10% HAc, 50% H2O vol. 200 ml.80 ml EtOH (99.8%)20 ml HAc (100%)100 ml H2O (milli-Q)漂洗液: 30% EtOH, 70% H2O vol. 200 ml.60 ml EtOH140 ml H2O敏化液: 0.02% Na2S2O3 vol. 200 ml.0.04 g Na2S2O3200 ml H2O硝酸银: 0.2% AgNO3, 0.02% formalin (cold) vol. 200 ml.0.4 g AgNO340 µl formalin (35% Formaldehyde)200 ml H2O显色液: 3% Na2CO3, 0.05% formalin vol. 250 ml.7.5 g Na2CO3125 µl formalin (35% Formaldehyde)250 ml H2O终止液：5% HAc: 5% Hac vol. 200 ml.10 ml HAc190 ml H2O染色步骤1. Fix gel: 40% EtOH, 10% HAc for 1 hr.2. Wash gel: 30% EtOH, 2 x 20 mins.3. Wash gel: H2O for 20 mins.4. Sensitize gel: 0.02% Na2S2O3 for 1 min.5. Wash gel: H2O, 3 x 20 secs.6. Incubate gel: Cold 0.1% AgNO3, 20 mins. at 4oC7. Wash gel: H2O, 3 x 20 secs.8. Change gel chamber10. Wash the gel: H2O for 1 min.11. Develop gel: 3% Na2CO3, 0.05% formalinObserve the color and change solution when the developer turns yellow. Terminate when the staining is sufficient.12. Wash the gel: H2O for 20 secs.13. Termination: 5% Hac14. Wash the gel: H2O, 3 x 10 mins.15. Leave the gel at 4oC in: 1% HAcVorum Silver staining (modified for MS)固定液: 50% MeOH, 12% HAc, 0.05% formalin (35% Formaldehyde) 200 ml 100 ml MeOH (99.8%)24 ml HAc (100%)100 µl formalin (35% Formaldehyd)76 ml H2O (Milli-Q)漂洗液: 35% EtOH (96%) 200 ml73 ml EtOH127 ml H2O敏化液: 0.02% Na2S2O3 200 ml0.04 g Na2S2O3200 ml H2O硝酸银: 0.2% AgNO3, 0.076% formalin (35% Formaldehyde) 200 ml0.4 g AgNO3152 µl formalin (35% Formaldehyde)200 ml H2O显色液: 6% Na2CO3, 0.05% formalin (35% Formaldehyde), 0.0004% Na2S2O3 400 ml24 g Na2CO3200 µl formalin (35% Formaldehyde)8 ml 0.02% Na2S2O3392 ml H2O终止液: 50% MeOH, 12% HAc 200 ml100 ml MeOH24 ml HAc76 ml H2O染色步骤1. Fix gel: 50% MeOH, 12% Hac, 0.05% formalin, 2 hrs or overnight2. Wash gel: 35% EtOH for 20 mins.3. Wash gel: 35% EtOH for 20 mins.4. Wash gel: 35% EtOH for 20 mins.5. Sensitize gel: 0.02% Na2S2O3 for 2 mins.6. Wash gel: H2O for 5 mins.7. Wash gel: H2O for 5 mins.8. Wash gel: H2O for 5 mins.9. Stain gel: 0.2% AgNO3, 0.076% formalin for 20 mins.10. Wash gel: H2O for 1 min.11. Wash gel: H2O for 1 min.12. Develop gel: 6% Na2CO3, 0.05% formalin, 0.0004% Na2S2O313. Stop staining: 50% MeOH, 12% HAc for 5 mins.14. Leave the gel at 4oC in: 1% HAcSilver stain in-gel digestion (EMBL protocol)一、WashingBefore excising bands wash gels twice in ddH2O for 15 minutes. Excise bands, cut as close to the band as possible to minimize excess gel material and cut into 1 mm cubes, place in Eppendorf tube. Dry samples in speed vac for approximately 15 minutes (must be very dry).二、Alkylation (DO NOT need to do, if only obtaining protein identification)1)Remove samples from speed vac and let cool.2)Add 40 µL of 10 mM DTT/100 mM Ambic and incubate in water bath at 56°C for 45minutes.3)Remove samples from bath and let cool.4)Pull off solution and immediately add 40 µL 55 mM iodoacetamide/100 mM Ambicand incubate at room temperature for 30 minutes in the dark.5)Pull off solution and wash with 40 µL of 100mM Ambic incubate 5 minutes.6)Add 40 µL of ACN to make 1:1 soln and incubate for 15 minutes.7)Pull off solution and dry gel pieces in speed vac for 15 minutes三、Digestion1)Remove samples from speed vac and let cool.2)Add 40 µL (enough to cover pieces) of Trypsin solution and incubate 45 min at 4°C (icebath). Add more solution if pieces absorb all of the liquid.3)Pull off excess solution and discard, add 10 µL of same buffer without trypsin (enoughto cover gel pieces) and incubate overnight at 37°C.4)Pull supernate and save, to gel add 20 µL of 25 mM Ambic and incubate 15 minutes.5)Add same amount of ACN to make 1:1 soln of Ambic/ACN and incubate 15 minutes.6)Pull off supernate and add to solution saved in 3(c), to gel add 20 µL of 5% formic acidand incubate 15 minutes.7)Add same amount of ACN and incubate 15 minutes.8)Pull off supernate and pool with 3(c) soln, to gel add 20 µL of 5% formic acid andincubate for 15 minutes.9)Add same amount of ACN and incubate 15 minutes.10)Pull off supernate and pool with 3(c) solution.11)To pooled solution in 3(c) add 10 mM DTT to give final concentration of 1 mM DTT.12)Vacuum dry solution in 3(c) almost to dryness.13)Resuspend in 15 µL of 5% formic acid for mass spectrometric analysis.注意事项I.Incubations are at room temperature unless otherwise noted.rger bands will require more solution volume.Coomassie in-gel digestion (EMBL protocol)一、Wash1)Before excising bands, wash gels twice in ddH2O for 15 minutes.2)Excise bands, cut as close to the band as possible to minimize excess gel material, cut into 1mm cubes, and place in Eppendorf tube.3)To band add 100 µL of ddH2O and incubate for 15 min.4)Pull off ddH2O and add 40 µL of 50/50 acetonitrile (ACN)/ddH2O and incubate 15 minutes.5)Pull off solution and add 40 µL of acetonitrile, incubate until gel pieces are white and sticky.6)Pull off solution and add 40 µL of 100 mM ammonium bicarbonate (ambic), incubate 5minutes.7)Add 40 µL of ACN to make 1:1 solution, incubate 15 minutes.8)Pull off soln and dry samples in speed vac for approximately 15 minutes (must be very dry).二、Alkylation (DO NOT need to do, if only obtaining protein identification)1)Remove samples from speed vac and let cool.2)Add 40 µL of 10 mM DTT/100 mM Ambic and incubate in water bath at 56°C for 45minutes.3)Remove samples from bath and let cool.4)Pull off solution and immediately add 40 µL of 55 mM iodoacetamide/100 mM Ambic andincubate at room temperature for 30 minutes in the dark.5)Pull off solution and wash with 40 µL of 100 mM Ambic incubate 5 minutes.6)Add 40 µL of ACN to make 1:1 soln and incubate for 15 minutes.7)Pull off solution and dry gel pieces in speed vac for 15 minutes三、Digestion1)Add 40 µL (enough to cover pieces) of Trypsin solution and incubate 45 min at 4°C (icebath). Add more solution if pieces absorb all of the liquid.2)Pull off excess solution and discard, add 10µL of same buffer without trypsin (enough tocover gel pieces) and incubate overnight at 37°C.3)Pull supernate and save, to gel add 20 µL of 25 mM Ambic and incubate 15 minutes.4)Add same amount of ACN to make 1:1 soln of Ambic/ACN and incubate 15 minutes.5)Pull off supernate and add to solution saved in 3(c), to gel add 20 µL of 5% formic acid andincubate 15 minutes.6)Add same amount of ACN and incubate 15 minutes.7)Pull off supernate and pool with 3(c) soln; to gel add 20 µL of 5% formic acid and incubatefor 15 minutes.8)Add same amount of ACN and incubate 15 minutes.9)Pull off supernate and pool with 3(c) solution.10)To pooled solution in 3(c) add 10 mM DTT to give final concentration of 1 mM DTT.11)Completely dry 3(c) solution in speed vac.12)Resuspend in 15 µL of 5% formic acid for mass spectrometric analysis.注意事项：I.Incubations are at room temperature unless otherwise noted.rger bands will require more solution volume.--------------------------------------------------------------------------------溶液：50% ACN in ddH2O250 µL of ACN + 250 µL of ddH2O100 mM ammonium bicarbonate (Ambic)100 µL of 1M Ambic in 900 µL of ddH2O10 mM DTT in 100 mM Ambic5 µL of 2 M DTT + 895 µL of ddH2O + 100 µL of 1 M Ambic55 mM IAA in 100 mM Ambic10 mg of iodoacetamide + 100 µL of 1 M Ambic + 900 µL of ddH2O50 mM Ambic in 5 mM CaCl2 with 12.5 ng of Trypsin5 µL of 1 M CaCl2 + 50 µL of 1 M Ambic + 945 µL of ddH2OTake100 µL of above solution add 12.5 µL of 0.1 mg/µL Trypsin solution25 mM Ambic25 µL of 1 M Ambic + 975 µL of ddH2O10 mM of DTT in ddH2O5 µL of 2 M DTT + 995 µL of ddH2O5% formic acid57 µL of stock formic acid (88%) + 943 µL of ddH2OResearch ArticleImproved silver staining protocols for high sensitivity protein identification using matrix-assisted laser desorption/ionization-time of flight analysisEjvind Mortz 1 *, Thomas N. Krogh 1, Henrik Vorum 2, Angelika Görg 31MDS Proteomics, Odense, Denmark2Institute of Medical Biochemistry, Aarhus, Denmark3Technical University Munich, Freising-Weihenstephan, Germanyemail: Ejvind Mortz (mortz@)。
银染法的名词解释
银染法的名词解释对于普通人来说，银染法可能是一个陌生的名词，但对于纺织品行业的从业者来说，它却是一个非常重要的工艺。
银染法是一种利用化学方法将银离子引入纺织品中，以达到防菌、抗菌、净化空气等功能的一种技术。
下面，我们将深入探讨银染法的详细内容。
一、银染法的原理银染法利用的是银离子的抗菌性能。
事实上，早在古代，人们就发现银具有抗菌的作用。
在现代，科学家们通过研究发现，银离子能够干扰细菌的细胞膜和核酸的复制，从而抑制细菌的生长和繁殖。
为了将银离子引入纺织品中，银染法应运而生。
二、银染法的流程银染法的流程主要包括：纺织品预处理、银染剂的配制、浸染银染剂、干燥和固定银离子等步骤。
首先，在纺织品进行预处理。
预处理主要包括漂白、洗涤、软化、充电等步骤，以去除纺织品表面的杂质，使其更加适合染色。
接着，配制银染剂。
银染剂通常由银盐和染料组成。
不同的银盐可以产生不同的效果，例如硝酸银可以产生较强的抗菌效果，氧化银则可以产生净化空气的效果。
然后，将纺织品浸泡在银染剂中。
这个步骤中，纺织品会吸收银离子，并且银离子会与纺织品的纤维结合，从而实现功能的目的。
完成浸染后，需要将纺织品进行干燥。
干燥的目的是除去多余的水分，使银离子更好地固定在纺织品上。
最后，采用适当的固定剂将银离子固定在纺织品上。
固定剂能够与银离子进行反应，形成稳定的化学结构，从而增加银离子在纺织品上的使用寿命。
三、银染法的应用银染法在现代纺织品行业中应用广泛。
首先是医疗纺织品领域。
由于银离子的抗菌性能，银染法在生产医用口罩、手术衣等产品时被广泛采用，可以有效地阻止细菌的传播，保护医护人员和患者的健康。
另外，银染法也被应用于家纺领域。
银染法可以制作出带有抗菌功能的床上用品，例如枕头套、被套等。
这些产品可以减少细菌的滋生，为家庭提供一个干净、健康的生活环境。
此外，银染法还可以应用于户外装备领域。
例如，登山服、户外鞋等产品采用了银染法，不仅可以抑制细菌的生长，还有效防止异味产生，让户外运动更加舒适。
DNA非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳银染配方及步骤汇总
DNA非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳银染配方及步骤最近需要做DNA非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳,需要用银染显示条带,但是找不到具体的配方和步骤,不知和蛋白PAGE电泳银染有什么差别,哪位师兄师姐有配方可否发一份,十分感谢!一、电泳试剂：1、30％聚丙烯酰胺(29:1)丙稀酰胺29克，Bis1克，水100ml。
2、10％过硫酸胺过硫酸胺1克，水10ml。
3、TEMED4、5xTBETris 27克，硼酸13.75克，0.5M EDTA(pH 8.0) 10ml，定容至500ml。
二、银染试剂1、固定液：100ml无水乙醇，5ml冰醋酸，定容至1000ml。
2、0.2% AgNO3：AgNO3 1克，水500ml。
3、1.5% NaOH：NaOH 7.5克，水500ml。
4、37％甲醛。
三、配胶(6%)：30％聚丙烯酰胺(29:1) 8ml，5xTBE 8ml，定容至40ml，加10％过硫酸胺 200ul；TEMED 20ul。
室温凝固时间>1小时。
四、银染：1、固定液固定10m。
2、水洗2m x3次。
3、0.2% AgNO3 100ml ＋37％甲醛50ul，混匀，避光染色30～50m。
4、水洗 20秒x2次。
5、1.5% NaOH 100ml，加37％甲醛 0.5ml，混匀，显色3～10m。
6、水洗若干次，终止显色。
电泳时间：150v x 3h，溴酚兰的位置相当于40bp。
银染后胶面积将膨胀10％。
在终止显色过程中，将依惯性继续显色，所以不等显色到位即可进行终止显色。
显色到位后立即拍摄，水浸泡过夜将使背景加深转贴！！！聚丙烯酰胺凝胶电泳是分子生物学常用的一种技术。
我们实验室应用该项技术进行基因组甲基化的筛选，取得了一定结果。
因为全基因组的筛选需要很高的灵敏度，背景干扰降到最低，因此在对凝胶进行染色时，往往采用同位素法或银染法，而且配制的胶往往很大，我们配制的是大约40×35cm的胶，0.4mm厚。
银染方法
银染方法1.搪瓷盘中倒入2000ml左右70%乙醇，把胶做好标记卸入乙醇中，摇床上固定15min2.回收乙醇(可重复用3-5次)，蒸馏水洗2遍，每遍2-3min，尽可能把水倒净3.190ml蒸馏水中加入3.6%的NaOH4.2ml、20%AgNO33.6ml、氨水2ml混匀配成染色液。
倒入染色液，染色30min。
4.倒掉染色液，蒸馏水洗3遍，每遍2-3min，尽可能把水倒净5.200ml蒸馏水中加入1%柠檬酸钠1ml，甲醛100ul混匀配成显色液。
倒入显色液显色至清晰。
6.倒掉显色液，加蒸馏水停显，并洗2-3遍测序板的硅化处理1:每块玻璃板的面都需硅化处理，以防止凝胶与两块玻璃板紧贴并减少电泳完毕后从胶模中取出凝胶时凝胶发生破裂的可能性。
硅化方法为；将拟硅化的玻璃板置于通风橱中，并戴手套操作，在拟硅化板面上加2-3ml 5％二氯二甲基硅烷(二氯二甲基硅烷5％溶于氯仿中)，用纸巾将硅化液涂布均匀，然后用去离子水洗净玻璃板,再用乙醇冲洗后晾干。
如需要从玻璃板上去除原有的硅，可用KOH-甲醇擦拭之。
KOH-甲醇配制为100ml甲醇中加5g片状KOH即可。
测序板的硅化处理2:1.浓度：4%二氯二甲基硅烷2.成分：二氯二甲基硅烷，三氯甲烷4.用途：制备聚丙稀酰胺凝胶时，可用Repel-silane处理小玻板，使凝胶易于剥离。
5.使用方法：测序用玻璃板必须彻底洗净。
先用温水和洗涤剂洗净，用水洗掉洗涤剂,再用去离子水冲洗干净。
最后用乙醇洗板。
1）长玻璃板的处理每次铺胶前均需用亲和硅烷对长玻璃板进行处理。
1、用镜头纸蘸取亲和硅烷溶液少许（1ml左右），涂在长玻璃板上。
要将整块板都涂满、涂匀。
2、4~5分钟后，用95%乙醇洗长玻璃板三次，以去除多余的亲和硅烷。
2）短玻璃板的处理每次铺胶前均需用剥离硅烷对短玻璃板进行硅化处理。
1、处理短玻璃板前先更换手套，以防与亲和硅烷交叉污染。
2、用镜头纸蘸取剥离硅烷溶液适量（1.5ml左右），涂在短玻璃板上。
银染中每步的原理
银染中每步的原理
银染是一种将金属银沉积在物体表面的染色方法，主要用于改变物体的颜色和增加其抗氧化能力。
其原理主要包括以下几个步骤：
1. 表面处理：首先需要对物体表面进行适当的处理，以去除表面的杂质和氧化物，以便银能够更好地沉积在物体表面。
常用的表面处理方法有机械打磨、电化学抛光等。
2. 银溶液制备：制备含有银离子的溶液，通常使用银盐（如硝酸银）和适当的酸性溶液配制而成。
溶液的酸性有助于提供适当的环境，使银离子可以稳定存在，同时可调节酸碱度来控制银沉积的速率和均匀性。
3. 沉积过程：将待染物体放入银溶液中，并加上适当的电压，通过电解作用将银离子还原成金属银，并沉积在物体表面，形成一层均匀的银膜。
电压的选取要根据染色效果和物体材质等因素进行调节。
4. 清洗和后处理：将染色后的物体从银溶液中取出，经过适当的清洗，以去除残留的银离子和其它杂质。
清洗后，还可以进行一些后处理步骤，如漂白、封闭等，以增加染色层的光亮度和耐久性。
总的来说，银染的原理是通过电解作用，将银离子沉积在物体表面，形成一层均匀的银膜。
这一过程的关键是控制电解条件和后处理步骤，以确保银染效果的稳
定和持久。
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银染的方法种类很多，目前有文献报道的就有100 多种。
大致的原理是银离子在碱性pH 环境下被还原成金属银，沉淀在蛋白质的表面上而显色。
由于银染的灵敏度很高，可染出胶上低于1 ng/蛋白质点，故广泛的用在2D 凝胶分析上，及极低蛋白含量测定的垂直凝胶中。
这里介绍的是我们实验室成功运用的银染方法，主要是用于垂直凝胶电泳中低丰度蛋白的检测！如内源性GST-Pulldown、Co-IP等实验中相互作用蛋白的研究
银染操作规程
实验原理：在碱性条件下，用甲醛将蛋白带上的硝酸银（银离子）还原成金属银，以使银颗粒沉积在蛋白带上。
染色的程度与蛋白中的一些特殊的基团有关，不含或者很少含半胱氨酸残基的蛋白质有时候呈负染。
试剂：乙醇、冰醋酸、乙酸钠、硫代硫酸钠、硝酸银、碳酸钠、甘氨酸或EDTA.Na2.2H2O、甲醛
实验操作程序：
固定：30min或者更长时间
100ml 乙醇（40% 乙醇）25ml冰醋酸（10% 冰醋酸）加水到250ml
致敏：30min
75ml 乙醇（30% 乙醇）17g乙酸钠或28.2g三水乙酸钠0.5g硫代硫酸钠加水到终体积250ml 水洗：3 x 10min
银染：20min
0.625g AgNO3、100 ul 37%甲醛（在使用前加入）加水到终体积250ml
水洗：2 x 1 min (注意把握时间，水洗时间长显色速度慢，点的颜色偏黄色)
显色：视情况而定
6.25 g Na2CO3、50 ul 37% 甲醛（在使用前加入）加水到终体积250ml
终止：10min
3.65g EDTA.Na2.2H2O 或者1g 甘氨酸加水到终体积250ml
保存：1% 冰醋酸，4 ℃
注意事项：
1．固定时间较长，则加一步水洗30min，以免胶太脆而破碎。
2．甲醛在使用前加入。
3．最好多配制一份显色液，第一次显色到溶液变混浊时换一份显色液，显色到点清晰。
4．显色过程很快，要注意把握时间，避免染色过度。
5．银染液和显色液需要预冷。
6．所用器皿要很洁净，不用手直接接触，以免杂蛋白污染！
7．清洗用水尽量用高纯度去离子水，蒸馏水更佳，可以减少背景着色。
银染注意事项:
1. 银染主要出现在胶的表面，用薄胶（0.5-0.75mm）可以提高灵敏度。
2. 对于考马斯亮蓝染色的胶，可用甲醇将胶漂洗后，继续进行银染。
乙酸会干扰银染，因此要确保将凝胶中的乙酸彻底洗净。
如果凝胶被过度银染，可用Rapid Fix脱色，并用考马斯亮蓝二次染色。
3. 不同蛋白质对银染的反应是不一样的，尤其是碱性蛋白染色效果差。
因此，不宜用银染测定不同蛋白的比例。
4. 染色过程中，缓慢的振荡是必要的，一般选择40-60 rpm.
5. 凝胶表面的裂纹多是由于压力、手印及表面干燥所致，所以全程操作中都应带手套。
6. 凝胶背景呈均一的黑色多是水中的杂质引起的，所以溶液的配制应使用电导率小于1 μS 的去离子水。
7. 如果染色后有呈灰尘或烟雾状灰色或棕色的沉淀出现在凝胶表面，可能是在几步漂洗过程中洗得不够彻底，或是染色过程时温度太低。
8. 较深的银染背景多是丙烯酰胺中的杂质所致。
9. 在最初甲醇洗脱时就应该先除去甘油、尿素、甘氨酸、Triton X-100和两性电解质这些干扰性物质。
10. 室温操作，温度的波动往往会干扰银染的效果，恒温水浴可以解决这个问题。
11. 当蛋白质中含有核酸或金属时，银染则不会奏效。
改变固定剂和染色之前对胶进行漂洗可以改进染色效果。
12. SDS凝胶中的巯基乙醇会导致在60 KDa或67 KDa处出现两条水平线。
减少巯基乙醇的用量即可避免。
13. 凭借戊二醛预处理可以使各种蛋白质的染色提高40倍。
14. 染色使用的玻璃器皿必须非常干净，用酸浸泡可以满足要求。
15. 银染应尽快照相，随着时间延长，蛋白条带会变浅，而背景会加深。
六我发个简单的配方，我一直用还挺好用，
固定甲醇250ml、冰醋酸25ml、加双蒸水至500ml ,30min,水洗2x2min，后水洗1h。
敏化硫代硫酸钠0.1g加双蒸水至500ml,冲洗双蒸水2x30s
银反应硝酸银0.5g加双蒸水至500ml，避光孵育30min，冲洗双蒸水2次x5min
显色碳酸钠10g加双蒸水至500ml，甲醛500ul，现用现加。
终止观察至想要效果，1%的冰醋酸终止，
七银染应该注意的事项:
1. 银染主要出现在胶的表面，用薄胶（0.5-0.75mm）可以提高灵敏度。
2. 对于考马斯亮蓝染色的胶，可用甲醇将胶漂洗后，继续进行银染。
乙酸会干扰银染，因此要确保将凝胶中的乙酸彻底洗净。
如果凝胶被过度银染，可用Rapid Fix脱色，并用考马斯亮蓝二次染色。
3. 不同蛋白质对银染反应不一样，尤其是碱性蛋白染色效果差。
因此，不宜用银染测定不同蛋白的比例。
4. 染色过程中，缓慢的振荡是必要的，一般选择40-60 rpm.
5. 凝胶表面的裂纹多是由于压力、手印及表面干燥所致，所以全程操作中都应带手套。
6. 凝胶背景呈均一的黑色多是水中的杂质引起的，所以溶液的配制应使用电导率小于1 μS 的去离子水。
7. 如果染色后有呈灰尘或烟雾状灰色或棕色的沉淀出现在凝胶表面，可能是在几步漂洗过程中洗得不够彻底，或是染色过程时温度太低。
8. 较深的银染背景多是丙烯酰胺中的杂质所致。
不要用双蒸水
用去离子的，双蒸水的某些离子会和agno3反应
若用去离子水，也要经常给机器换滤头，以免去离子不净
一步骤溶液时间固定甲醇100ml 冰醋酸25ml 加双蒸水至250ml 30min
冲洗双蒸水3次
敏化甲醇75m 戊二醛（25%w/v）1.25ml 硫代硫酸钠(5%w/v) 10ml 醋酸钠（17g）30min 加双蒸水至250ml
冲洗双蒸水3次
银反应硝酸银溶液(2.5%w/v) 25ml 甲醛(37%w/v) 0.1ml 加双蒸水至250ml 20min
冲洗双蒸水2次
显色碳酸钠(6.25g) 甲醛(37%w/v) 0.05ml 加双蒸水至250ml 2-5min
终止EDTA-Na22H2O(3.65g) 加双蒸水至250ml 10min
冲洗双蒸水3次
二1）PAGE胶切下后用50％乙醇（100ml左右）洗三次，每次20分钟
2）2％硫代乙醇酸钠稀释50倍作用1分钟，双蒸水洗3次，每次20秒
3）2％硝酸银稀释10倍作用20分钟，双蒸水洗3次，每次20秒
4）6％碳酸钠溶液显色，直到条带清晰为止，一般几分钟，大量水冲洗
5）加中止液10％乙酸中止即可
三 1. 固定：100ml MeOH, 24ml H Ac, 56ml 0.04%HCHO, 20ml ddH2O,洗三次，每次>=20分钟；
2. 50％EtOH洗PAGE胶三次，每次20分钟；
3. 预处理：0.02％Na2S2O3 处理一分钟；
4. 水洗：ddH2O漂洗三次，每次20秒；
5. 染色：0.8ml 20％AgNO3+72ml 0.04%HCHO处理PAGE胶20分钟；
6. 水洗：同上；
7. 显色：25ml 12％Na2CO3, 24ml 0.04%HCHO, 1ml 0.02％Na2S2O3, 漂洗10－15分钟；
8. 水洗：同上；
9. 终止：50％MeOH, 12％H Ac,10分钟。
四 1 银染液1（1000ml）：甲醇50％乙酸12％（甲醇500ml 冰醋酸120ml）
2 银染液2（1000ml）：甲醇30％，乙酸钠0.4M，戊二醛0.5%，硫代硫酸钠0.1%，（含乙酸1－2ml）
甲醇300ml 乙酸钠54.4g 戊二醛10ml 硫代硫酸钠1g 乙酸1－2ml
3 显色液(1000ml) 无水碳酸钠2.5% 甲醛0.02% （无水碳酸钠25g，甲醛1.5ml）
4 硝酸银（100ml）：20%硝酸银（过滤后待用）
染色步骤：
1 银染液1 洗2次，每次5分钟
2 银染液2 洗1次，每次30分钟
3 超纯水洗2次，每次1分钟
4 0.5%硝酸银洗30分钟
5 超纯水洗5次，每次1分钟（关键步骤，共计5分钟）显色液显色
6 看到各条带，则倾去显色液, 1％乙酸中止
我感觉浸银后、显色前的水洗非常关键，时间不能太长，次数不能太多，否则可能会染不上颜色。
但水洗不充分又可能导致背景较深。
我个人一般是用水洗三遍，每次半分钟左右。
固定液：50%乙醇，10%冰醋酸，40%水
浸泡液：30%乙醇，6.8% NaAc，50%戊二醛0.625ml，0.2% NaS2O3•5H2O
银染液：0.1% AgNO3，0.02% 甲醛
显色液：2.5% Na2CO3，0.01% 甲醛
终止液：1.46% EDTA-2Na•2H2O。