10基因治疗
基因治疗PPT课件
• 针对致病基因
(二) 间接策略：
• 导入与致病基因无直接联系的治疗基因
(一)直接策略
1. 基因矫正（gene correction） 2. 基因置换（gene replacement） 3. 基因增补（gene augmentation）
又称为补偿性基因治疗 4. 基因失活（gene inactivation）
1990年9月14日，世界首例基因治疗：SCID
感染性疾病的基因治疗
• 引入治疗基因来抑制病原繁殖
• 方法: 1. Anti-sense 2. Ribozyme RNA
肿瘤基因治疗临床试验方案
黑色素瘤 83 前列腺癌 44
基因治疗
Gene therapy
传统治疗方法
1. 药物治疗 2. 手术治疗 3. 放射治疗 4. 理疗
• 新的生物治疗： • 基因治疗(gene therapy)
基因治疗
一、概念 二、策略 三、基本流程 四、应用与展望
一、基因治疗的概念
• Gene therapy is a medical intervention based on modification of genetic materials in living cells.
(3) 药物增敏基因治疗
• 将外源基因插入肿瘤细胞后，改变肿瘤细胞对 药物的敏感性。
• 如将钙调素基因转入癌细胞，利用其对癌细胞 MDR的逆转作用，使癌细胞对化疗药物的敏感 性明显提高。
3. 其它策略
(1) 特异性细胞杀伤 (2) 多基因转染
特异性细胞杀伤
• 指利用重组DNA技术将生物来源的细胞毒素基 因与一些特异受体的配体基因融合，构建融合 基因，导入高度表达该受体的肿瘤细胞，以特 异性杀伤该肿瘤细胞。
基因治疗
基因治疗基因治疗是指向受体细胞中引入具有正常功能的基因，以纠正或补偿基因的缺陷，也可以利用引入基因以杀死体内的病原体或恶性细胞。
基因工程的兴起，使得基因治疗成为可能。
一些目前尚无有效治疗手段的疾病，如遗传病、肿瘤、心脑血管疾病、老年痴呆及爱滋病等，可望通过基因治疗来达到防治的目的。
下面是基因治疗的几个例子。
1. 复合免疫缺陷综合征的基因治疗：1991年美国批准了人类第一个对遗传病进行体细胞基因治疗的方案，即将腺苷脱氨酶（ADA）导入一个4岁患有严重复合免疫缺陷综合征（SCID）的女孩。
采用的是反转录病毒介导的间接法，即用含有正常人腺苷脱氨酶基因的反转录病毒载体培养患儿的白细胞，并用白细胞介素2（IL－2）刺激其增殖，经10天左右再经静泳输入患儿。
大约1－2月治疗一次，8个月后，患儿体内ADA水平达到正常值的25％，未见明显副作用。
此后又进行第2例治疗获得类似的效果。
2. 黑色素瘤的基因治疗：对肿瘤进行基因治疗是人们早已期望的事，在进行了多方面探索的基础上，发现了肿瘤浸润淋巴细胞（TIL，即能在肿瘤部位持续存在而无副作用的一种淋巴细胞）在肿瘤治疗中的作用。
于1992年实施了TNF／肿瘤细胞和IL－2／肿瘤细胞方案，即分别将IL－2基因肿瘤坏死因子（TNF）基因导入取自患者自身并经培养的肿瘤细胞，再将这些培养后的肿瘤细胞注射至病人臀部，3周后切除注射部位与其引流的淋巴结，在适合条件下培养T细胞，将扩增的T细胞与IL－2合并用于病人，结果5名黑色素瘤病人中1名肿瘤完全消退，2名90％的肿瘤消退，另2人在治疗后9个月死亡。
由于携有TNF的TIL 可积于肿瘤处，因而TIL的应用提高了对肿瘤的杀伤作用。
3. 其它遗传病的基因治疗：其它遗传病诸如白种人中常见的囊性纤维化的进展很快。
对于DMD的基因治疗，由于有小鼠动物模型，也取得一定进展。
例如1993年法国将Ad-RSVmDys（腺病毒－罗斯病毒小肌营养不良蛋白基因重组体）注入小鼠肌内成功。
基因治疗(生物化学)
基因载体的构建 使目的基因在受体细胞内高效、可控、 稳定地表达 受体细胞选择 易分离获取，体外增殖存活，大量扩增。
如成纤维细胞、淋巴细胞、骨髓造血干细胞
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基因转移(gene transfer)方法
1.病毒介导的基因转移 2.非病毒介导的基因转移
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1.病毒介导的基因转移系统 病毒载体介导基因转移效率较高 据统计，有72%的临床实验计划和71%的病 例使用了病毒载体，其中用得最多的是反转
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基因增补（gene augmentation）
定义: 通过导入外源基因使靶细胞表达其本身 不表达的基因。
类型: 有缺陷基因细胞中导入正常基因，而细胞内 的缺陷基因并未除去，通过导入正常基因的 表达产物，补偿缺陷基因的功能； 向靶细胞中导入靶细胞本来不表达的基因， 利用其表达产物达到治疗疾病的目的。
整合
反 转 录 病 毒 载体
腺病毒载体
致病性
可能致病
感染细胞
分裂细胞
克隆容量
<7kb
随机整合，效率 高
不整合，可能丢 失
不致病
分裂细胞、非 分裂细胞
<7.5kb <5kb
腺相关病毒载 体
定点整合(19号染
色体特定区域)
不致病
分裂细胞、非 分裂细胞
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2.非病毒载体介导的基因转移系统
（1）脂质体介导的基因转移技术 使用方便、成本低廉。 基本原理: 利用阳离子脂质体单体与DNA混合后，可形成包埋 外源DNA的脂质体，然后与细胞一起孵育，即可通过细 胞内吞作用将外源DNA（即目的基因）转移至细胞内， 并进行表达。
素；
– 肌内注射凝血因子Ⅸ基因，可产生血友病所需的凝血因子Ⅸ 。
基因治疗
与安全性相联系的就是生殖细胞基因治疗。虽然在人类尚未实施，但在动物实验已获成功，这就是转基因的 动物出现。这一事实既给人类生殖细胞基因治疗带来了希望，同时也使人们耽心这种遗传特征的变化世代相传， 将给人类带来的是福还是祸。
概念
狭义概念
广义概念
狭义概念
指用具有正常功能的基因置换或增补患者体内有缺陷的基因，因而达到治疗疾病的目的。
广义概念
基因治疗指把某些遗传物质转移到患者体内，使其在体内表达，最终达到治疗某种疾病的方法。
主要分类
按靶细胞
按基因操作
给药途径
按基因操作
基因治疗一类为基因修正（gene correction）和基因置换（gene replacement），即将缺陷基因的异常序 列进行矫正，对缺陷基因精确地原位修复，不涉及基因组的其他任何改变。通过同源重组（homologous recombination）即基因打靶（gene targetting）技术将外源正常的基因在特定的部位进行重组，从而使缺陷基 因在原位特异性修复。另一类为基因增强（gene augmentation）和基因失活（gene inactivation），是不去除 异常基因，而通过导入外源基因使其表达正常产物，从而补偿缺陷基因等的功能；或特异封闭某些基因的翻译或 转录，以达到抑制某些异常基因表达。
①ex vivo途径：这是指将含外源基因的载体在体外导入人体自身或异体细胞（或异种细胞），经体外细胞 扩增后，输回人体。ex vivo基因转移途径比较经典、安全，而且效果较易控制，但是步骤多、技术复杂、难度大， 不容易推广；
②in vivo途径：这是将外源基因装配于特定的真核细胞表达载体，直接导入体内。这种载体可以是病毒型或 非病毒性，甚至是裸DNA。in vivo基因转移途径操作简便，容易推广，但尚未成熟，存在疗效持续时间短，免疫 排斥及安全性等一系列问题。
基因治疗的例子
基因治疗的例子基因治疗是一种利用基因工程技术来治疗疾病的方法。
它通过将正常的基因导入患者的体内，修复或替代缺陷基因，从而达到治疗疾病的目的。
以下是基因治疗的十个例子：1. 囊性纤维化治疗：囊性纤维化是一种常见的遗传性疾病，基因治疗可以通过将正常的CFTR基因导入患者体内来修复缺陷基因，从而恢复肺部和胰腺的正常功能。
2. 血友病治疗：血友病是一种由于凝血因子缺乏导致的出血性疾病，基因治疗可以通过导入正常的凝血因子基因来恢复凝血功能，从而治疗血友病。
3. 巨细胞病毒感染治疗：巨细胞病毒感染是一种常见的病毒感染，基因治疗可以通过导入抗病毒基因来增强机体对巨细胞病毒的抵抗能力，从而治疗感染。
4. 癌症治疗：基因治疗在癌症治疗中有广泛的应用。
例如，通过导入抑制癌细胞生长的基因，可以抑制癌细胞的增殖，达到治疗癌症的效果。
5. 心血管疾病治疗：基因治疗可以通过导入修复心脏血管的基因来治疗心血管疾病。
例如，通过导入血管生成因子基因，可以促进新血管的生成，改善心脏供血情况。
6. 免疫缺陷病治疗：免疫缺陷病是一类免疫系统功能异常的疾病，基因治疗可以通过导入正常的免疫相关基因来增强免疫功能，从而治疗免疫缺陷病。
7. 遗传性视网膜病治疗：遗传性视网膜病是一类导致视网膜退化的疾病，基因治疗可以通过导入修复视网膜功能的基因来治疗视网膜病，恢复视力。
8. 先天性免疫缺陷病治疗：先天性免疫缺陷病是一类由于先天基因缺陷导致的免疫系统功能异常的疾病，基因治疗可以通过导入正常的免疫相关基因来修复免疫功能，从而治疗先天性免疫缺陷病。
9. 神经退行性疾病治疗：神经退行性疾病是一类由于神经细胞退化导致的疾病，基因治疗可以通过导入促进神经细胞生长和修复的基因来治疗神经退行性疾病，延缓疾病进展。
10. 遗传性代谢病治疗：遗传性代谢病是一类由于代谢酶缺乏或功能异常导致的疾病，基因治疗可以通过导入正常的代谢酶基因来修复代谢功能，从而治疗遗传性代谢病。
基因诊断与基因治疗
（1）DNA模板的变性 DNA模板的变性 模板的
将待扩增DNA加热到95 左右，使双链DNA DNA解开成 将待扩增DNA加热到950C左右，使双链DNA解开成 DNA加热到
使模板DNA或延伸后的双链DNA DNA或延伸后的双链DNA发生热变性 为单链（即：使模板DNA或延伸后的双链DNA发生热变性 ），
PCR技术在模板、dNTP、Mg2+等条件下，用耐热 技术在模板、dNTP、 等条件下， 技术在模板 Taq酶代替DNA聚合酶 用合成的DNA引物代替RNA 酶代替DNA聚合酶， DNA引物代替RNA引 的Taq酶代替DNA聚合酶，用合成的DNA引物代替RNA引 经过DNA变性、引物与模板结合 复性）和延伸3 DNA变性 模板结合（ 物，经过DNA变性、引物与模板结合（复性）和延伸3 个步骤的循环过程（25∼30个循环），目的DNA可 个循环），目的DNA 个步骤的循环过程（25∼30个循环），目的DNA可扩增 100万倍以上 万倍以上。 100万倍以上。
并游离于反应体系中作为模板； 并游离于反应体系中作为模板；
（2）模板与引物的结合（退火或复性） 模板与引物的结合（退火或复性）
将体系温度降至合适温度（ 左右） 将体系温度降至合适温度 （ 550C 左右 ） ， 使加入 的引物与模板DNA两端 碱基序列互补结合。 的引物与模板DNA两端（3ˊ端）碱基序列互补结合。 DNA两端（
固 相 支 持 物
B
本法优点： 本法优点：
16 特异性强，对样本纯度要求不高，定量较准确。 特异性强，对样本纯度要求不高，定量较准确。
situ） （6）原位杂交（nucleic acid hybridization in situ） 将标记探针与细胞或组织切片中的核酸进行杂交， 将标记探针与细胞或组织切片中的核酸进行杂交， 进而检测特异的DNA RNA序列 DNA或 序列。 进而检测特异的DNA或RNA序列。 有 细胞原位杂交 组织切片原位杂交 三类杂交
基因治疗的原理和临床应用
基因治疗的原理和临床应用近年来，随着生物学和医学的不断发展，基因治疗作为一种新颖的治疗手段，受到越来越多的关注。
它通过直接作用于基因，改良基因序列或者控制基因表达，从而达到治疗疾病的目的。
本文将介绍基因治疗的原理和临床应用。
一、基因治疗的原理基因治疗是利用DNA、RNA等核酸对病变基因进行干预和纠正，或者提高其生物活性等治疗手段。
它主要分为三类：基因替换、基因修饰、基因靶向治疗。
1.基因替换基因替换是指将正常基因导入体内，取代患有病变基因的功能，从而矫正导致患病的异常生理和生化现象。
其中典型的例子是囊性纤维化。
该疾病是由一种缺陷的基因(CFTR基因)引起的，导致黏液不能被有效地分泌，最终引发肺部和胰腺的严重疾病。
为了治愈这种疾病，基因治疗的主要策略是将CFTR基因通过特定的载体体系导入到患者的细胞内。
载体是一种可以帮助患者或患者体内的细胞摆脱从外部进入它们的CFTR缺失的大分子碳水化合物黏液的物质。
研究人员将CFTR基因注入这些载体后，将其与人体细胞结合，利用人体细胞的功能将这些复合物递送到囊性纤维化患者的组织和细胞中，从而取代CFTR基因的功能。
这种技术目前仍在临床试验阶段，但已经给予了许多病人新的希望。
2.基因修饰基因修饰是指修改患有病变基因序列中的DNA，以纠正基因缺陷。
其主要方法包括：1)基因靶向的核酸序列的编辑技术: CRISPR-Cas9CRISPR-Cas9技术是一种新兵的基因修饰技术，可删除、更新、修复和修改基因序列等多种操作，可以清除细胞级别的病变，是目前最常用和最流行的基因修饰技术之一，CRISPR技术通过导入CRISPR-Cas9复合体，使其靶向基因切断，利用细胞内自身的DNA修复系统完成基因缺陷修复。
2)裂解与合成技术(antisense Technology)该技术旨在识别疾病基因所编码的mRNA序列，并将其引入人体内，以靶向裂解 mRNA的方式减少该基因的表达。
3)单核苷酸多态性技术(SNP)SNP是指在同一个基因的同一位点上，常规基因和变异基因仅在一个碱基上不同。
基因治疗
基因矫正、基因置换、基因失活、基因修饰
从临床治疗角度，目前肿瘤基因基因治疗的策略
直接杀伤肿瘤细胞或抑制其生长； 增强机体免疫系统，间接杀伤或抑制肿瘤胞； 改善肿瘤常规治疗方法，提高疗效；
肿瘤基因治疗常用方法
基因干预技术 反义RNA技术：①封闭异常表达的癌基因； ② 作用癌基因的易位和重排部位；⑶抑制肿瘤细胞 的耐药性，提高化疗效果。 RNA干扰技术：用于阻断、抑制癌基因异常表 达的恶性肿瘤治疗。 反义基因技术：设计原癌基因启动子的竞争剂， 从而抑制原癌基因转录。
遗传病的基因治疗研究
人类遗传病4000多种，发病率为40-50%， 必须符合以下要求的遗传病才可考虑开展 基因治疗研究：（30余种） 在DNA水平上明确其发病原因及机制； 单基因遗传病，而且属隐形遗传； 该基因的表达不需要精确调控； 该基因能在一种便于临床操作的组织细胞 中表达并发挥其生理作用； 该遗传病不经治疗将有严重后果。
基因转移的生物学与非生物学方法
生物学方法：以病毒载体作为转移系统
逆转录病毒基因组经过改造后作为载体 ( retrovirus vector) 腺病毒(adenovirus,AV)基因组可作为载体携带治疗基因
腺病毒相关病毒（adenovirus associated virus, AAV)载体适合治疗基因的稳定长效表达。
几种已经或可望在临床进行基因治疗的 人类单基因遗传病
腺苷脱氨酶(ADA)和嘌呤核苷磷酸化酶（PNP) 缺乏症； 血友病：针对凝血因子Ⅸ基因； 中国科学家1991年12月成功进行了血友病B的基因 治疗。 将携带凝血因子Ⅸ基因的巨细胞病毒载体导入患者 自身皮肤的成纤维细胞—— 经体外培养---再植入患者皮下----患者血浆中凝血因子Ⅸ浓度 上升，凝血活性改善。
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• 怎样将重组DNA导入宿主细胞，并且能在宿
主细胞中有效表达目的蛋白，达到基因治疗的
目的。
1、基因治疗的策略：
1)基因修复(gene reparation)
2)基因代替(gene substitution ) 3)基因抑制( gene inhibition )
4)基因开放(gene opening) 5)基因增强(gene enhancement)
入靶细胞代替遗传缺陷的基因，或关闭、抑制 异常表达的基因，以达到预防和治疗疾病目的 的一种临床治疗技术。 一句话：将外源性基因引入细胞，以改变细 胞或个体的表型来达到治疗的目的。
1、原理
1) DNA是遗传的物质基础。
2)基因是能表达产生特异蛋白质 的DNA片段。 3)遗传病的根源在于基因异常， 对异常基因的纠正可以使疾病获得 根治。
性的iPS细胞。
iPS 细胞显示了ES细胞的形态学（圆形、 大核仁和少细胞质）和生长特性，表达了 ES细胞的标志基因。
• 通过皮下注射把iPS细胞移植到裸鼠体 内形成了畸胎瘤（包含了来自三个胚 层的各种组织），说明其具有分化多 潜能性。
• 用显微注射的方法把iPS细胞注射到小 鼠胚泡内，iPS细胞参与了胚胎发育， 形成成熟的嵌合体小鼠。
基因表达序列的改变： 单个或多个核苷酸的突变、缺失、重复
基因调控区域的改变：
基因启动子的突变、缺失等
20世纪50年代,DNA双螺旋结构、遗传密码与中
心法则，奠定了基因结构和功能的分子生物学理
论基础。
70年代重组DNA技术的发展，使携带目的基因
的病毒载体在实验室产生。
80年代现代生物学在理论和技术上的突破，使基 因治疗成为可能。
Evidence for gene transfer and expression of factor IX in haemophilia B patients treated with an AAV vector.
Kay MA, Manno CS, Ragni MV, Larson PJ, Couto LB, McClelland A, Glader B, Chew AJ, Tai SJ, Herzog RW, Arruda V, Johnson F, Scallan C, Skarsgard E, Flake AW, High KA.
• 病毒载体的安全性
• 基因治疗的审批与临床试验 • 美国是最早开展基因治疗的国家 • 先在地方伦理小组---HGTS----RAC---FDA
• 1989年首例基因标记与基因治疗，恶性黑色
素瘤
• 1990年首例成功案例，ADA-SCID
• 1999年患难事件，杰辛格事件---OTC
二、基因转移系统
(1)裸DNA直接注射
（1）裸DNA直接注射
（2）基因枪（gene gun)
（3）电穿孔法（electroporation）
电 转
（4）显微注射(microinjection)
2、基因转移的化学方法
（1）磷酸钙共沉淀法
（2）DEAE-葡聚糖转染法
（3）脂质体转染法
（4）纳米颗粒转移法
（1）磷酸钙共沉淀法
直接体内法(in vivo)
间接体内法（ex vivo)
基因转移的方法可分为：Fra bibliotekgene-transferring strategies
物理 physical； 化学 chemical； 生物 biochemical。
1、基因转移的物理方法
基因转移的物理方法包括：
裸DNA直接注射、微粒轰击、电穿孔、显微注射等
糖尿病
• 血友病B： • 一种X连锁遗传的出血性疾病，由 FIX的缺乏而出现严重的凝血功能障碍。
在男性中该病的发病率1/30000，临床特
征为关节和软组织的自发性出血。
• 正常人体内，FIX的浓度为5ug/ml，根 据血浆中FIX的水平，可以将血友病B分 为三类： • 重型 低于正常浓度的1% • 中间型 低于正常浓度的5% • 轻型 低于正常浓度的20%
以超过或代替异常基因的表达。
基因增强：
是指将目的基因导入病变细胞或其他细胞，目的基因的表达 产物可以补偿缺陷细胞的功能或使原有的功能得到加强。
2、 基因转移的方法
基因转移是基因治疗的关键和基础，实施 基因转移的途径主要有两类： 1）直接体内法(in vivo) ，即活体直接转移 法，指将外源基因直接注入人体内有关组织器 官，使其进入相应的细胞 2）间接体内法（ex vivo) ，即在体转移，指 在体外将外源基因导入细胞，再将这种细胞回 输到病人体内。
纳米颗粒（nanoparticle)
3、基因转移的生物学方法
主要分为两类： 1）病毒介导的基因转移 • 逆转录病毒（RV）载体 • 腺病毒（Ad）载体 • 腺相关病毒（AAV）载体 • 单纯疱疹病毒（HSV）载体 • 多种形式的嵌合病毒载体
逆转录病毒（RV） 载体(Vector)
腺相关病毒（AAV）载体
后来科研人员用Oct3/4, Sox2, 和 Klf4 三个基因组合以及OCT4, SOX2, NANOG, 和LIN28四个基因组合把人 皮肤成纤维细胞成功诱导为iPS细胞， 同时待诱导的细胞也由成纤维细胞扩大 到胃上皮细胞、肝细胞等细胞。
为了评价iPS细胞的治疗性潜能，美国科学家Jacob Hanna等做了用自体成纤维细胞诱导出的iPS治疗镰 状细胞性贫血症小鼠模型的动物实验。 治疗策略： 1.将突变体小鼠体内成纤维细胞诱导成iPS细胞； 2.通过同源重组修复有遗传缺陷的iPS细胞； 3.体外把修复的iPS细胞诱导分化成HPs（造血祖细
• 国际首次血友病基因治疗临床研究是我 国的复旦大学遗传研究所与上海长海医 院血液科合作开展的。 • 病人皮肤细胞，重组反转录病毒，注射 入病人皮下。
• Kay进行的重组AAV直接肌肉注射法临 床基因治疗研究。
Nat Genet 2000 Mar;24(3):257-61
Comment in: •Nat Genet. 2000 Mar;24(3):201-2.
• FIX基因： • 定位在X染色体上，全长33.5Kb，由8个 外显子、7个内含子；c DNA全长2.8kb，
编码序列为1383bp，编码461个氨基酸，
成熟FIX蛋白为415氨基酸。在肝脏中特异
表达，蛋白加工后，以分泌途径从肝细胞释
放到血液。
• 血友病B的基因治疗的临床前研究
• 通过病毒载体介导的in vivo和ex vivo基因转移 系统的途径实现。 • 采用的宿主细胞：肝细胞、肌细胞和成纤维细胞。 • 基因转移的载体：病毒载体。
胞）；
4.把这些HPs移植到经辐射照射的供体小鼠体内。
实验比较成功，达到了预期的治疗效果，显示了iPS 细胞用于遗传病基因治疗的巨大潜力。
三 临床应用例子(Examples of clinical application)
血友病B（hemophilia B) 重症联合免疫缺陷症 (Severe Combined Immunodeficiency , SCID） β-地中海贫血
• X连锁的重症联合免疫缺陷（X-SCID） • T、B淋巴细胞功能先天性缺乏综合征，1/80000。
• 发病机制：
• 1、 细胞因子受体γ 链缺陷 • 2、Jak3缺陷 • 3、X-SCID中T细胞和NK细胞发育缺陷 • 4、Jak-STAT途径中其他环节对T细胞和NK细胞的 影响
• X-SCID的基因治疗：
“自杀”基因疗法
• iPS细胞（人工诱导的多潜能干细胞）
最先由日本京都大学Yamanaka科研团队发起这项研究， 他们选择Oct3/4, Sox2, c-Myc, and Klf4四个基因， 通过逆转录病毒将这四个基因导入小鼠胚胎成纤维细胞 和小鼠成体成纤维细胞中，可以引起待诱导细胞的基因
组发生重新编程而转变为具有ES细胞（胚胎干细胞）特
导，虽有点疗效，但有其局限性
• 细胞水平的研究:
• 病毒载体介导的人珠蛋白基因转移，骨 髓干、祖细胞。 • RNA/DNA嵌合体介导的定点修复
• 间接体内(ex vivo)基因转移研究
• RV重组体，受体鼠骨髓中，----有效。
• AAV 用于间接体内珠蛋白基因转移的报道很 少。 • HIV 研究活跃，动物实验中取得了好的结果。
非病毒性生物载体法 配体/受体 非生物性载体法 脂质体，微粒子， GAM
非载体法
质粒DNA注射、吸入， 电穿孔法，显微注射， 体内电穿孔，基因疫 磷酸钙共沉淀法 苗
基因治疗的靶细胞
• • • • • • 造血干细胞 肝细胞 肌细胞 淋巴细胞 皮肤成纤维细胞 iPS细胞（ induced pluripotent stem cell）
• 反转录病毒载体介导的FIX基因转移，采用部分
肝脏切除，转染的效率不高，不能达到治疗的目
的。
• 腺病毒介导的FIX基因转移，效果在鼠体内维持 了较长时间，但在狗体内维持的时间较短。 • 腺相关病毒介导的FIX基因转移，取得了重要的 发展，临床基因治疗也获得了初步的成功。
• 血友病B基因治疗临床研究
基因修复：原位修复有缺陷的基因，使其在质和量上均能得
到正常的表达。
基因代替：指去除整个变异基因，用有功能的正常基因
取代之，使疾病基因得到永久的更正。
基因抑制：利用反义RNA抑制有害基因的表达
基因开放
β - 珠蛋白基因家族（11号染色体）：
ε Aγ Gγ ψβ δ β
drug
基因开放：目的在于促使有类似功能的基因表达，
• 糖尿病的基因治疗
• 胰岛细胞中胰岛素的表达调控、生物合 成与分泌。 • 胰岛素分泌的工程化细胞株的建立。
胰岛β-细胞系的工程化 胰岛干细胞操作 非β-细胞系的工程化