细胞增殖实验word版
(完整word版)CCK8检测细胞增殖毒性的原理、方法及注意事项
CCK8检测细胞增殖/毒性的原理、方法及注意事项一、CCK8检测细胞增殖/毒性的原理Cell Counting Kit—8（简称CCK—8）试剂可用于简便而准确的细胞增殖和毒性分析。
其基本原理为：该试剂中含有WST-8【化学名：2—(2—甲氧基—4-硝基苯基）-3—（4—硝基苯基)-5-(2,4—二磺酸苯）—2H—四唑单钠盐】，它在电子载体1—甲氧基—5—甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯(1—Methoxy PMS）的作用下被细胞中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的黄色甲瓒产物(Formazan dye）.生成的甲瓒物的数量与活细胞的数量成正比。
因此可利用这一特性直接进行细胞增殖和毒性分析.用途:药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏试验CCK8的优点：•使用方便，省去了洗涤细胞,不需要放射性同位素和有机溶剂；•CCK—8法能快速检测；•CCK—8法的检测灵敏度很高，甚至可以测定较低细胞密度；•CCK—8法的重复性优于MTT 法;•CCK—8法对细胞毒性小；•CCK—8细胞活性检测试剂中为1瓶溶液，毋需预制，即开即用。
CCK8的缺点：•与MTT法相比，CCK8和XTT的价格比较贵。
•CCK8试剂的颜色为淡红色，与含酚红的培养基颜色接近，不注意的话容易产生漏加或多加。
与以往的增殖/毒性测定试剂相比较：检测方法MTT法XTT法WST—1法CCK8法甲臢产物的水溶性差（需加有机溶剂溶解)好好好产品性状粉末2瓶溶液溶液1瓶溶液使用方法配成溶液后使用现配现用即开即用即开即用检测灵敏度高很高很高高检测时间较长较短较短最短检测波长560-600nm420—480nm420-480nm430-490nm细胞毒性高,细胞形态完全消失很低，细胞形态不变很低,细胞形态不变很低，细胞形态不变试剂稳定性一般较差一般很好批量样品检测可以非常适合非常适合非常适合便捷程度一般便捷便捷非常便捷二、CCK8检测细胞增殖/毒性的方法实验一：细胞增殖分析1、制备细胞悬液:细胞计数2、接种到96孔板中：根据合适的铺板细胞数,每孔约100ul细胞悬液，同样的样本可做3个重复。
细胞增殖实验
增殖
1、1000个细胞/孔（96孔），一般5个左右重复，大约能做一周
2、孔板周围需用PBS封闭以防蒸发
3、MTS或CCK-8 均是100UL+10UL,可以混好后每孔加100ul,2-4小时后测OD值
4、从第三天开始换液，以后隔天换一次
克隆形成
1、96孔每孔10个细胞（6-10个重复），24孔每孔50个细胞（容易有边缘效应，3-4个重复）
2、孔板周围用PBS封闭
3、约10天左右染色
4、3-4天需换一次液
1. 接种一定数目的细胞于24孔培养板（如50细胞/孔）或6孔培养板（如100细胞/孔）中，每种细胞3个重复孔。
2. 37度孵箱培养，3-4天更换一次培养基。
3. 根据不同的细胞生长状况，10-14天时对克隆形成染色。
4. 弃去培养基，PBS洗1次。
5. 甲醇室温固定10分钟。
6. 弃去甲醇，水洗，超净台中吹干。
7. 加入吉姆萨染色10-30分钟。
8. 弃去吉姆萨，水洗，风干。
9. 根据不同细胞生长情况，一般以50个细胞以上的群体为一个克隆，统计克隆数，与接种的细胞数比较计算出克隆形成比例。
成球
1、96孔10个每孔，6-10个重复，需10天以上
2、孔板周围用PBS封闭
3、3-4天换一次液
4、EGF 20ng/ml ,HGF10ng/ml ,BFGF 20ng/ml ,B27 50x ,LG 100x ,双抗，F12培养基，非贴的96孔板。
细胞增殖实验报告
细胞增殖实验报告细胞增殖实验报告细胞增殖是生物学中一个重要的研究领域，对于了解生命的起源、发展和疾病的发生机制具有重要意义。
本文将介绍一项关于细胞增殖的实验，旨在探究细胞增殖的规律和影响因素。
实验设计：本次实验选择了人类肺癌细胞株作为研究对象，通过培养细胞，观察细胞在不同条件下的增殖情况，并分析影响细胞增殖的因素。
实验步骤：1. 细胞培养：将人类肺癌细胞株接种于含有适宜培养基和培养液的培养皿中，放置于恒温培养箱中，温度为37℃，湿度为95%，二氧化碳浓度为5%。
2. 细胞计数：每隔一定时间，取出一小部分细胞悬液，使用显微镜和细胞计数板对细胞进行计数。
记录细胞数量并计算平均值。
3. 细胞增殖曲线绘制：根据细胞计数结果，绘制细胞增殖曲线，以时间为横轴，细胞数量为纵轴，观察细胞增殖的动态变化。
实验结果：经过一段时间的培养，我们观察到细胞数量逐渐增加，呈现出指数增长的趋势。
细胞增殖曲线显示，细胞数量在初始阶段增长较缓慢，随着时间的推移，增长速度逐渐加快，直至达到饱和状态。
讨论：1. 生长曲线特征：细胞增殖曲线呈现出一定的特征，即初始阶段增长缓慢，然后迅速加速，最后趋于平缓。
这是由于细胞在培养基中适应环境，增殖能力逐渐增强，细胞数量也随之增加。
当细胞数量达到一定程度时，培养基中的营养物质和空间有限，细胞增殖速度减缓，最终停止增殖。
2. 影响因素：细胞增殖受到多种因素的影响，如培养基中的营养物质浓度、pH 值、温度、湿度等。
其中，营养物质的供应是细胞增殖的基础，适宜的pH值和温度可以提供良好的生存环境，湿度对于细胞的生长也有一定的影响。
3. 应用前景：细胞增殖实验可以为药物筛选、疾病治疗和组织工程等领域提供重要参考。
通过观察细胞在不同条件下的增殖情况，可以评估药物对细胞增殖的影响，为新药的开发提供依据。
此外，细胞增殖实验还可以为疾病的治疗方案提供参考，例如癌症治疗中的细胞毒性药物筛选和剂量确定。
结论：通过本次实验，我们成功观察到了人类肺癌细胞在培养基中的增殖情况，并绘制了细胞增殖曲线。
细胞增殖学案MicrosoftWord文档
高要二中2010-2011学年高一生物学案——细胞增殖编写：邵艮好审核：尚杰编写时间：2010年11月18日使用时间：课时：2 学习目标1．简述细胞生长和增殖的周期性。
2．模拟探究细胞大小与物质运输的关系。
3．探讨细胞不能无限长大的原因。
4．理解有丝分裂细胞周期的概念，概述细胞的有丝分裂过程。
5．动植物细胞有丝分裂过程的异同点。
6．理解有丝分裂的特征及意义。
7．描述细胞的无丝分裂。
8．观察根尖分生组织细胞的有丝分裂。
自主学习一、细胞不能无限长大的原因1．______表面积______的关系限制了细胞的长大。
细胞体积越大，其相对表面积______，细胞的物质运输效率就______。
2．______与它控制的细胞质的比也限制了细胞体积不能无限增大。
一般来说，细胞核中的DNA不会随细胞体积的增大而增加，细胞既不能无限长大，又不能无限小，只能维持在一定的大小。
提示：1．琼脂块的表面积与体积之比：随琼脂块的增大而减少。
2．NaOH 的扩散速度(深度)：随琼脂块的体积增大，保持不变。
3．NaOH 扩散的体积与整个琼脂块体积之比：随琼脂块体积的增大而减少。
二、细胞增殖1．细胞增殖是重要的细胞_____ ___，它是生物体______________ __的基础。
2．细胞以________方式进行增殖。
真核细胞的分裂方式有三种：________、________、________。
3．的细胞，从时开始，到时为止，为一个细胞周期。
包括____ ____和___ ___。
细胞分裂间期为分裂期进行活跃的物质准备，完成________________和________________，同时有细胞的适度生长。
三、有丝分裂过程1．概念：有丝分裂是________进行细胞分裂的主要方式，有丝分裂具有周期性。
一个细胞周期包括________和________。
2．分裂间期：它为分裂期进行活跃的物质准备，完成________的复制和有关________的合成。
细胞增殖实验(Brdu法)
细胞增殖实验(Brdu法)1.将盖玻片放入到24孔板中，将长满的大盘细胞用胰酶消化后，按1-2万个细胞/孔加入到24孔板中。
2.待细胞长至50%-60%的密度后，更换培养液，导入相应质粒，4-6小时后更换培养液。
3.培养24h后，于每孔板加入10µm的Brdu，继续培养4h。
4. 4％冷的多聚甲醛固定20分钟，PBS洗三遍。
5. 0.2％Triton X－100通透10分钟，PBS洗三遍。
6. 按1:1000稀释Brdu抗体，于每孔中加300µl，4度过夜后，PBS洗三遍。
7.0.5ug/ml DAPI染核，然后直接照荧光片。
8.蒸馏水洗掉PBS，甘油封片，指甲油封片子的四周。
4%20min甲醇+30%丙酮）PBS3×5min穿孔15min()PBS×5min加入5%BSA Brdu，于4℃杂交过夜PBS×5min染色2min1.将盖玻片放入到24孔板中，将长满的大盘细胞用胰酶消化后，按1-2万个细胞/孔加入到24孔板中。
2.待细胞长至50%-60%的密度后，取出细胞爬片，3. 4％冷的多聚甲醛固定20分钟，PBS洗两遍。
4. 2N HCL in PBS(1:5 用PBS稀释盐酸) 室温10分钟5. neutralize by incubating the samples in borate buffer (0.1 M) for 10 min at room temperature.硼酸中和，PBS 3次4. Blocking buffer (5% BSA, PBS, Tween-20 0.2%)。
Goat serum 10%5. Blocking buffer封闭（5%BSA）1 小时6. BrdU(rat)/Cdk5(rabbit) 一抗4度过夜，PBS洗三遍。
7.二抗室温2小时（避光），或者37度1半小时，PBS洗三遍。
（一抗，二抗稀释到blocking buffer）Dip the cover silp into DD-H20, and air-dry in filter-paper.8. Anti-fade with DAPI,put the coversilp up-side down,然后直接照荧光片。
细胞增殖实验报告结论(3篇)
第1篇一、实验目的本次实验旨在研究不同条件下人类肺癌细胞株的增殖情况，并分析影响细胞增殖的因素。
通过观察细胞在不同培养条件下的生长、繁殖和形态变化，为后续研究提供数据支持。
二、实验方法1. 细胞培养：将人类肺癌细胞株接种于含有适量培养基的细胞培养瓶中，置于37℃、5%CO2的恒温培养箱中培养。
2. 实验分组：将细胞分为对照组、实验组A、实验组B、实验组C，分别进行不同处理。
3. 处理方法：（1）对照组：正常培养，不进行任何处理。
（2）实验组A：添加一定浓度的药物A，观察细胞增殖情况。
（3）实验组B：添加一定浓度的药物B，观察细胞增殖情况。
（4）实验组C：添加一定浓度的药物C，观察细胞增殖情况。
4. 观察指标：（1）细胞数量：通过细胞计数板计数，记录不同时间点的细胞数量。
（2）细胞形态：通过显微镜观察细胞形态变化。
（3）细胞生长曲线：绘制细胞数量随时间变化的曲线。
三、实验结果1. 对照组：细胞呈正常生长状态，细胞数量随时间逐渐增加，生长曲线呈上升趋势。
2. 实验组A：药物A处理后的细胞数量较对照组有所减少，生长曲线呈下降趋势。
3. 实验组B：药物B处理后的细胞数量较对照组有所减少，生长曲线呈下降趋势。
4. 实验组C：药物C处理后的细胞数量较对照组明显减少，生长曲线呈下降趋势。
四、结果分析1. 细胞增殖与药物浓度关系：实验结果表明，随着药物浓度的增加，细胞增殖受到抑制，细胞数量减少。
2. 细胞增殖与药物种类关系：不同药物对细胞增殖的影响存在差异，其中药物C 对细胞增殖的抑制作用最为明显。
3. 细胞形态变化：药物处理后的细胞出现形态变化，如细胞变圆、核固缩等，表明药物对细胞增殖有抑制作用。
五、结论1. 药物A、B、C均能抑制人类肺癌细胞株的增殖，其中药物C的抑制作用最为明显。
2. 药物浓度与细胞增殖呈负相关，药物浓度越高，细胞增殖抑制作用越强。
3. 药物处理可导致细胞形态变化，如细胞变圆、核固缩等。
4. 本实验为后续研究药物抑制肺癌细胞增殖的机制提供了实验依据。
细胞增殖分析实验报告
一、实验目的本实验旨在通过细胞增殖分析技术，探讨不同处理条件下细胞增殖情况，评估细胞生长状态，并分析影响细胞增殖的关键因素。
二、实验材料1. 人类肺癌细胞株（A549）2. 细胞培养试剂：DMEM培养基、胎牛血清、青霉素-链霉素溶液3. 实验试剂：CCK-8试剂盒、MTT试剂盒、胰蛋白酶、DMSO4. 仪器：细胞培养箱、酶标仪、倒置显微镜、离心机、移液器三、实验方法1. 细胞培养将人类肺癌细胞株A549接种于含有10%胎牛血清的DMEM培养基中，置于37℃、5%CO2的培养箱中培养，待细胞贴壁后进行实验。
2. 实验分组将细胞分为对照组、实验组A、实验组B、实验组C，每组设3个复孔。
3. 实验处理- 对照组：不做任何处理。
- 实验组A：加入一定浓度的药物A处理细胞。
- 实验组B：加入一定浓度的药物B处理细胞。
- 实验组C：加入一定浓度的药物C处理细胞。
4. 细胞增殖分析- CCK-8法：在实验处理后，每孔加入10μl CCK-8试剂，37℃孵育1-4小时，酶标仪测定450nm处的吸光值（OD）。
- MTT法：在实验处理后，每孔加入20μl MTT试剂，37℃孵育4小时，加入DMSO溶解紫色结晶，酶标仪测定570nm处的吸光值（OD）。
5. 数据分析对各组数据进行统计分析，比较各组细胞增殖情况。
四、实验结果1. CCK-8法检测结果- 对照组细胞增殖明显，OD值较高。
- 实验组A、B、C细胞增殖受到抑制，OD值低于对照组。
2. MTT法检测结果- 对照组细胞增殖明显，OD值较高。
- 实验组A、B、C细胞增殖受到抑制，OD值低于对照组。
五、讨论本实验结果表明，药物A、B、C均能抑制人类肺癌细胞株A549的增殖。
CCK-8法和MTT法均能有效地检测细胞增殖情况，其中CCK-8法操作简便、快速，适用于大量细胞的增殖分析。
六、结论本实验通过细胞增殖分析技术，成功评估了不同处理条件下细胞增殖情况，为后续研究细胞增殖调控机制提供了实验依据。
高二生物细胞增殖.doc
《细胞增殖》学案班级姓名学号日期编号：16 【考纲要求】【复习目标】（1）了解细胞的无丝分裂（2）用高倍显微镜观察根尖分生组织细胞的有丝分裂，并能辨认细胞分裂的各个时期（3）区分有丝分裂和减数分裂的图像【自主学习】一、无丝分裂的特征1.特征:2.举例：二、观察植物细胞的有丝分裂(见创新P70)思考:能观察到哪些结构？三、区分有丝分裂和减数分裂（动物细胞，2n=4）（1）画出有丝分裂前期、减Ⅰ前期、减Ⅱ前期示意图（2）画出有丝分裂中期、减Ⅰ中期、减Ⅱ中期示意图（3）画出有丝分裂后期、减Ⅰ后期、减Ⅱ后期示意图(4)区分的主要依据是什么？【应用练习】1、用高倍显微镜观察洋葱根尖细胞的有丝分裂。
下列描述正确的是A．处于分裂间期和中期的细胞数目大致相等B．视野中不同细胞的染色体数目可能不相等C．观察处于分裂中期的细胞，可清晰看到赤道板和染色体D．细胞是独立分裂的，因此可选一个细胞持续观察它的整个分裂过程2.在制作洋葱根尖压片观察细胞有丝分裂时，不可能用到的试剂是A．龙胆紫染液B．醋酸洋红染液C．稀盐酸溶液D．30%蔗糖溶液3.有同学做根尖有丝分裂实验，在显微镜中观察到的图像如图所示。
造成这种情况的原因可能是①取材位置不合适②取材时间不合适③制片时压片力量不合适④解离时间不合适⑤视野选择不合适A．②③ B．②⑤ C．①②⑤ D．①③④4.下列关于“观察植物根尖分生组织细胞有丝分裂”说法不正确的是A、解离目的是使细胞相互分离开B、漂洗是为了洗去药液，防止解离过度C、染色剂可选用醋酸洋红或龙胆紫D、低倍镜下找不到中期细胞，可换用高倍镜5.有关真核细胞分裂的叙述，正确的是A．无丝分裂过程核膜消失 B．动物细胞仅以有丝分裂方式进行增值C．动物细胞有丝分裂末期不形成细胞板 D．无丝分裂仅出现于高等生物的衰老细胞6.关于无丝分裂的叙述，正确的是A、无丝分裂过程中没有DNA的复制B、无丝分裂过程中有纺缍体的出现和染色体的形态变化C、人的红细胞也可以通过无丝分裂进行细胞增殖D无丝分裂并不是一种不正常的细胞分裂方式7. 某二倍体动物的某细胞内含10条染色体、10个DNA分子，且细胞膜开始缢缩，则该细胞A．处于有丝分裂中期B．正在发生基因自由组合C．将形成配子D．正在发生DNA复制8. 雄蛙的一个体细胞经有丝分裂形成两个子细胞（C1、C2），一个初级精母细胞经减数第一次分裂形成两个次级精母细胞（S1、S2）。
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细胞增殖检测方法细胞增殖检测通常是检测分裂中的细胞数量或者细胞群体发生的变化。
目前细胞增殖检测主要分为五类：DNA合成检测、代谢活性检测、细胞数量检测、细胞增殖相关抗原检测和ATP 浓度检测。
在这些方法中作何选择，主要取决于所研究的细胞类型和研究方案。
1.DNA合成检测这是目前实验室中检测细胞增殖最准确可靠的方式。
该法是将放射性标记的3H-胸腺嘧啶与细胞一同孵育，这样新增殖细胞的DNA中就会掺入放射性标记，经洗脱后可用闪烁计数器检测。
该方法耗时长，而且有个明显的弊端就，即使用和处理放射性物质既麻烦又不安全。
不过，可以使用5-溴-2-脱氧尿苷BrdU来进行类似实验，因为BrdU也同样可以掺入到新合成的DNA中。
但这样就需要进行额外的实验步骤，先孵育特异性BrdU单抗和带标记的二抗，然后再进行比色法、化学发光检测或荧光信号检测等步骤。
该方法的优点就是不再需要放射性物质。
BrdU标记很适合免疫组化IHC、免疫细胞化学IC、细胞内ELISA、流式细胞分析和高通量筛选。
2.代谢活性检测检测细胞群体的代谢活性也可以反映细胞增殖的情况。
在细胞增殖过程中脱氢酶的活性会增加，因此其底物四唑盐或Alamar Blue在代谢活跃的细胞环境中会逐渐减少，形成能够改变培养基颜色的甲臜染料。
可以通过低配置或高配置的分光光度计和酶标仪来读取含染料培养基的吸光度，从而衡量细胞的代谢活性，检测细胞增殖的情况。
四种最常见的四唑盐是：MTT、XTT、MTS和WST1。
MTT在标准的细胞培养基中是不溶的，而且其生成的甲臜晶体需要溶解在DMSO或者异丙醇中。
因此，MTT 主要作为终点检测方法。
其他三种盐与Alamar Blue一样，都是可溶且无毒。
它们可以作为连续监控手段来跟踪细胞增殖的动态改变。
其中XTT的效率较低，需要添加额外的因子；WST1更灵敏有效，与其他盐相比能够更快显色；Alamar Blue 的灵敏度也很高，只要微孔板的孔中有100个细胞就能够检测到。
四唑盐和Alamar Blue氧化还原染料能够用于多种仪器和高通量研究，非常方便。
它们适用的检测仪器包括：标准分光光度计、荧光分光光度计和酶标仪等。
3.活细胞数量最直接的增殖指标是活细胞数量的变化。
但细胞直接计数法操作繁琐费时，所需细胞量较多，不推荐使用。
4.增殖标志检测有些抗原只存在于增殖细胞中，而非增殖细胞缺乏这些抗原，因此可以通过特异性的单抗来对细胞增殖进行检测。
例如，在人体细胞中，Ki-67抗体识别同名蛋白，在细胞周期S期、G2期和M期（增殖期）表达，而在G0期和G1期(非增殖期)不表达。
用针对Ki-67蛋白的单抗就可以检测细胞的增殖情况。
由于需要组织切片，这种方法无法进行高通量分析。
不过这一方法颇受肿瘤研究者们的青睐，因为它能够用来检测体内肿瘤细胞的增殖。
其他普遍使用的细胞增殖或细胞周期调控标志还包括：增殖细胞核抗原PCNA、拓扑异构酶IIB，以及磷酸化组蛋白H3等。
5.ATP检测细胞内的ATP含量受到了严格调控，检测ATP也可以得到细胞增殖的信息。
死亡细胞或即将死亡的细胞几乎不含ATP，在细胞溶解物或提取物中测得的ATP 浓度与细胞数之间存在严格的线性关系。
利用荧光素酶luciferase及其底物荧光素luciferin的ATP检测以生物发光为基础，能够提供非常灵敏的结果。
如果有ATP存在荧光素酶就会发光，而且其发光强度与ATP浓度成正比，用能读取发光信号的光度计和酶标仪都可以方便的进行检测。
这种方法非常适用于高通量细胞增殖检测和筛选。
选择策略怎样选择最适合的检测方法，主要依赖于使用的细胞类型和具体研究方案，还取决于实验者在细胞增殖中期望得到的信息。
假如希望了解细胞增殖中的代谢活性变化，可以使用四唑盐和比色法检测；如果关注重点在于对DNA合成的改变，可以选择用BrdU或EdU标记，再通过比色法、化学发光或荧光检测进行分析；若研究的是单个细胞，也可以用BrdU或EdU标记来检测DNA合成，将其与荧光标记的相应抗体结合，就可以通过流式细胞仪来进行流式分选。
应该注意，测定细胞增殖很多时候单一方法都是有缺陷的，四唑盐—MTT法不够精确；最直接的指标是活细胞数量的变化，结果比较准确，但细胞直接计数法所需细胞量较多，操作繁琐费时；而3H掺入法麻烦且不安全。
所以，建议最好用两种以上的方法进行测定，这样做主要是可以有一个用于辅助修正的数据。
EdU实验流程一、实验原理EdU（5-Ethynyl-2’- deoxyuridine）是一种胸腺嘧啶核苷类似物，能够在细胞增殖时期代替胸腺嘧啶（T）渗入正在复制的DNA分子中，通过基于EdU与Apollo荧光染料的特异性反应快速检测细胞DNA复制活性，适用于细胞增殖、细胞分化、生长与发育、DNA修复、病毒复制、细胞标记示踪等方面的研究，尤其适合进行siRNA、miRNA、小分子化合物及其他药物的筛选实验。
二、材料及准备工作试剂、耗材名称品牌货号广州锐博C10327-1 Cell-Light™ EdU Apollo®567In Vitro Imaging Kit(500T)细胞培养板或培养皿☆试剂盒需4˚C储存，荧光试剂请避光，勿冻存，可稳定储存一年溶液配制1.PBS (pH 7.2~7.6)PBS缓冲液 10xNaCl 80 gKCl 2 gNa2HPO4·12H2O 36.151 g(Or Na2HPO4 14.4 gK2HPO4 2.4 g蒸馏水至 1000 mL 调pH值至7.42.渗透剂(含0.5% Triton X-100的PBS)3.甘氨酸溶液(2 mg/mL)（去离子水配配制，现用现配）4.细胞固定液(即含4%多聚甲醛的PBS)多聚甲醛 4 g1x PBS定容至100ml，磁力搅拌器加热搅拌，温度控制在60℃以下。
如仍不溶，滴加NaOH (1N或0.1N），调PH值至7.4。
5.1% BSA的PBS6.甲醇7.无水乙醇三、操作步骤及注意事项A流式检测1.1 取对数生长期的细胞，105细胞接种于6孔板或培养皿中，培养箱中培养过夜；1.2 可以根据实验需要进行各种药物处理。
2.1 用细胞培养液以1:1000的比例稀释EdU溶液(试剂A)，制备适量50 µM EdU 培养基；2.2 每孔加入500 µL 50µM EdU培养基孵育2h。
（☆此步务必在超净台内完成）3.1 用0.25％胰酶进行消化，转至离心管，用1×PBS吸打后，1000rpm×5min，弃上清；3.2 用含1%BSA的PBS吸打后，1000rpm×5min，弃上清；3.3 4%多聚甲醛的PBS固定15min，1000rpm×5min，弃上清；3.4 用含1%BSA的PBS吸打后，1000rpm×5min，弃上清；3.5 300 µL PBS吹散细胞，加入700 µL 无水乙醇(制成70%乙醇PBS液)，边加边震荡混匀，4℃固定24h以上；3.6 1000rpm×5min，弃上清。
4.1 按下列顺序配置适量1× Apollo®反应液（☆现用现配，30分钟用完，以免破坏正常的反应体系）：4.2 加入500 µL的1×Apollo®染色反应液，重悬细胞，避光室温孵育30 min，1000rpm×5 min；4.3 加入500 µL 0.5% TritonX-100的PBS吸打，1000rpm×5min，重复2次；4.4 每孔每次加入100 µL 甲醇冲洗1次，每次5min；PBS 100µL脱色摇床5min。
5.1 用去离子水按100:1稀释试剂F，制备适量1×Hoechst33342反应液，避光保存；5.2 弃上清，加入500 µL 1× Hoechst 33342反应液，避光室温孵育30min，1000rpm×5min；5.3 加入500 µL PBS吸打，1000rpm×5min，重复2次，洗脱Hoechst 33342反应液。
6.1 1000rpm×5min收集细胞，300 µL PBS吹散细胞，自备300目尼龙滤膜过滤（若吹打成单细胞悬液，可不过网）；转至流式管进行流式细胞仪分析，荧光通道依据实验仪器而设定。
B荧光显微镜检测1.1 取对数生长期的细胞，4×103~1×105细胞接种于96孔板中（☆细胞接种密度，没有严格要求，只要不影响显微镜下观察即可），培养箱中培养过夜；1.2 可以根据实验需要进行各种药物处理。
2.1 用细胞培养液以1:1000的比例稀释EdU溶液（试剂A），制备适量50µM EdU 培养基；2.2 每孔加入100 µL 50µM EdU培养基孵育2h。
（☆此步务必在超净台内完成）;2.3弃培养液，100 µL PBS清洗细胞2次，脱色摇床上，每次5min。
3.1 每孔加入100 µL 4% 多聚甲醛的PBS，室温脱色摇床孵育30 min；3.2 2 mg/mL 甘氨酸脱色摇床孵育5 min；（☆可在多聚甲醛固定时配置，现用现配。
目的：中和多聚甲醛）3.3 每孔加入100 µL PBS脱色摇床孵育每次5 min；3.4 每孔加入100 µL 0.5% TritonX-100的PBS，脱色摇床孵育10 min；3.5 每孔加入100 µL PBS脱色摇床孵育1次，10 min。
4.1 按下列顺序配置适量1×Apollo®反应液（☆现用现配，30分钟用完，以免破坏正常的反应体系）：4.2 每孔加入100 µL的1×Apollo®染色反应液，避光，室温脱色摇床孵育30 min；4.3 每孔每次加入100 µL渗透剂（0.5% TritonX-100的PBS）脱色摇床孵育2次，每次10min；4.4 每孔每次加入100 µL 甲醇冲洗1次，每次5min；PBS 100 µL脱色摇床5min。
5.1 用去离子水按100：1稀释试剂F，制备适量1×Hoechst33342反应液，避光保存；5.2 每孔加入100 µL 1×Hoechst 33342反应液，避光，室温脱色摇床孵育30 min；5.3 每孔每次加入100 µL PBS脱色摇床孵育2次，每次5min，洗脱Hoechst 33342反应液。