细胞增殖-毒性检测(CCK8试剂盒法)操作步骤_MedChemExpress
WST-8 是 MTT 的一种升级替代产品，和 MTT 或其它 MTT 类似产品，如 XTT 、MTS 等相比有明显的优点。
第一，MTT 被线粒体内的一些脱氢酶还原生成的 formazan 不是水溶性的，需要有特定的溶剂来溶解；而 WST-8 和 XTT 、MTS 产生的 formazan 都是水溶性的，可以省去后续的溶解步骤。
第二，WST-8 产生的 formazan 比 XTT 和 MTS 产生的 formazan 更易溶解。
第三，WST-8 比 XTT 和 MTS 更加稳定，使实验结果更可靠。
第四，WST-8 和 MTT 、XTT 等相比线性范围更宽，灵敏度更高，并且更加稳定。
WST-8 对细胞无明显毒性。
加入 CCK-8 溶液显色后，可以在不同时间反复用酶标仪读板，检测时间更加灵活，便于确定最佳测定时间。
产品编号HY-K0301-100T HY-K0301-500T HY-K0301-3000T HY-K0301-12000T
包装1 mL 5 mL 5 mL × 6(5 mL × 6) × 4
产品名称
Cell Counting Kit-8Cell Counting Kit-8Cell Counting Kit-8Cell Counting Kit-8
Cell Counting Kit-8
1包装清单
产品概述
Cell Counting Kit-8，简称 CCK-8 试剂盒，是一种基于 WST-8 而广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速、高灵敏度、无放射性的比色检测试剂盒。
CCK-8 溶液可以直接加入到细胞样品中，不需要预配各种成分。
WST-8 在电子耦合试剂存在的情况下，可以被线粒体内的一些脱氢酶还原生成橙黄色的formazan (参考图1) 。
细胞增殖越多越快，则颜色越深；细胞毒性越大，则颜色越浅。
对于同样的细胞，颜色的深浅 (生成的 formazan 量) 和细胞数目呈线性关系 (图2) 。
Inhibitors, Agonists, Screening Libraries
MedChem Express
MCE 中国
Hotline: 400-820-3792
操作说明
本试剂盒可以用于细胞因子等诱导的细胞增殖检测，也可以用于抗癌药物等对细胞有毒试剂诱导的细胞毒性检测，或一些药物诱导的细胞生长抑制检测。
1. 制作标准曲线
a. 先用细胞计数板计数所制备的细胞悬液中的细胞数量，然后接种细胞；
b. 按比例依次用培养基等比稀释成一个细胞浓度梯度，一般要做 5-7 个细
胞浓度梯度，每组 4-6 个复孔；
c. 接种后培养 2-4 小时使细胞贴壁，然后每 100 μL 培养基加 10 μL CCK-8 试剂培养一定时间后测定 OD 值，制作出一条以细胞数量为横坐标，OD 值为纵坐标的标准曲线。
根据此标准曲线可以测定出未知样品的细胞数量。
使用此标准曲线的前提条件是试验条件完全一致。
2. 细胞活性检测
a. 在 96 孔板中接种细胞悬液 (100 μL /孔) ，将培养板放在培养箱中预培养 24 小时；
b. 向每孔加入 10 μL 的 CCK-8 溶液 (注意不要产生气泡) ；
c. 将培养板置于培养箱内孵育 1-4 小时；
d. 用酶标仪测定在 450 nm 处的吸光度。
3. 细胞增殖-毒性检测
a. 在 96 孔板中接种细胞悬液 (100 μL /孔) ，将培养板放在培养箱中预培养 24 小时；
b. 向培养板加入不同浓度的待测药物；
c. 将培养板在培养箱孵育一段适当的时间；
d. 向每孔加入 10 μL 的 CCK-8 溶液 (注意不要产生气泡)；
e. 将培养板置于培养箱内孵育 1-4 小时；
f. 用酶标仪测定在 450 nm 处的吸光度。
3
Na +
N N
N +N
NO 2
NO 2
O
S O O
-O S O O
O -N N NH N NO 2
NO 2
S O O
-
O S O
O
O -O
还原酶
NAD
+
NADH
EC-H
EC
图1 WST-8 和 WST-8 formazan 的结构式
图2 CCK-8 的原理图
WST-8colorless
WST-8 formazan orange color
Cell
dehydrogenases NAD
electeon mediator reduced form
electeon mediator (1-methoxy PMS)
NADH
保存条件
4°C
一年
-20°C 两年长期保存，建议避光
4MCE 中国 400-820-3792
电话: 021-********传真: 021-********
Email: tech@
4. 计算公式
细胞存活率=[(As-Ab) / (Ac-Ab)] × 100%抑制率=[(Ac-As) / (Ac-Ab)] × 100%
As: 实验孔吸光度 (含细胞、培养基、CCK-8 溶液和药物溶液) ；Ac: 对照孔吸光度 (含细胞、培养基、CCK-8 溶液，不含药物) ；Ab: 空白孔吸光度 (含培养基、CCK-8 溶液，不含细胞、药物) 。
Cell line : HEK293
Medium : DMEM, 10% FBS Incubation : 37°C, 5% CO 2, 2 hours
注：如果待测药物有氧化性或还原性，可在加入 CCK -8 之前更换新鲜培养基，去掉待测药物的影响。
当待测药物影响比较小的情况下可以不更换培养基，直接扣除培养基中加入待测药物后的空白吸收即可。
Cell line : U87, SK-HEP1 Medium : DMEM, 10% FBS Chemicals : 200 μM Cisplatin (DDP)Incubation : 37°C, 5% CO 2, 2 hours
图3 CCK-8 试剂盒检测细胞活性
450
O D U87SK-HEP1
图4 CCK-8 试剂盒检测 DDP 细胞毒性
Cell number
450
O D 注意事项
1. CCK-8 的培养时间一般为 1-4 小时，但在培养 30 分钟左右即可取出肉眼观察显色程度，根据细胞种类而定，需要摸索条件，CCK-8 的最佳反应时间以具体显色的最佳时间为准。
2. 使用 96 孔板进行检测时，如果细胞培养时间较长，一定要注意蒸发问题。
一方面，由于 96 孔板周围一圈最容易蒸发，可以采取弃用周围一圈的办法，改加相同量的 PBS 、水或培养液；另一方面，可以把 96 孔板置
于靠近培养箱内水源的地方，以缓解蒸发。
3. 本试剂盒的检测依赖于脱氢酶催化的反应，所以还原剂 (例如一些抗氧化剂) 会干扰检测，如果待检测体系中存在较多的还原剂，需设法去除。
用酶标仪检测前需确保每个孔内没有气泡，否则会干扰测定。
4. 加入药物中如含有金属，对 CCK-8 显色有影响。
终浓度为 1 mM 的氯化亚铅、氯化铁、硫酸铜会抑制 5% 、15% 、90% 的显色反应，使灵敏度降低。
如果终浓度是 10 mM 的话，将会 100% 抑制。
5. 培养基中的酚红不会影响实验结果，酚红的吸光度可以在计算时，通过
扣除空白孔中本底的吸光度而消去，因此不会对检测造成影响。
6. 本产品可以检测 ，但不能检测酵母细胞。
向 100 μL 培养液中加入 10 μL CCK-8 溶液，并培养 1-4 小时或过夜。
7. CCK -8 试剂对细胞的毒性非常低。
它和活细胞内的脱氢酶持续反应使溶液颜色不断加深，OD 值不断增加 (注: 活细胞内的脱氢酶是持续产生的) 。
8. 要测定细胞的具体数量，建议同时做标准曲线。
9. 建议采用多通道移液器，以减小平行孔间的差异。
10. 以下方法可以终止 CCK-8 反应 (96 孔板) ：
(a ). 在显色反应后，将培养板放置 4°C 冰箱内。
(b ). 每孔加 10 μL 0.1 M HCl 溶液。
(c ). 每孔加 10 μL 1% (w/v ) 的 SDS (十二烷基硫酸钠) 溶液。
注意：反应停止后，应在 24 小时内测定。
11. 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品。
12. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
5
E.coli E.coli。
CCK_8操作说明及检测步骤
CCK_8操作说明及检测步骤CCK-8是一种常用的细胞增殖和细胞毒性检测方法，该方法通过评估细胞内脱氢酶的活性来间接反映细胞的代谢活性。
其操作步骤如下：1.常规细胞培养选择要测试的细胞系，并在合适的培养基中进行培养。
通常使用细胞培养瓶或培养皿，并在37摄氏度的培养箱中保持恒定的温度。
确保培养基中含有足够的养分和补充物，以支持细胞的正常生长和代谢。
2.细胞计数和均匀分布细胞生长到适当的密度后，使用显微镜和细胞计数板计数细胞数目。
根据需求，将细胞以适当比例分装到不同的瓶中，再将细胞以适当比例分装到96孔板中，以保证每个孔中的细胞数量和均匀分布。
3.平台适应性试验在进行正式的实验前，可以进行平台适应性试验。
为此，将不同细胞浓度的细胞悬液加入到96孔板中，并使用CCK-8试剂进行处理。
根据CCK-8处理后的细胞的吸光度读数，选择适当的浓度范围和时间点进行后续实验。
4.细胞处理在进行CCK-8实验之前，确保细胞在适当的生长条件下。
将上一步骤中准备好的细胞悬液加入到96孔板中，使每个孔中的细胞数目均匀分布。
可以提前设计不同实验组的处理方式，如对照组、实验组和阴性对照组等。
K-8处理按照CCK-8试剂说明书的建议将CCK-8试剂加入到96孔板中的每个孔中。
通常建议每个孔中加入10%的CCK-8试剂，并与细胞悬液充分混合。
注意避免气泡的产生。
6.孵育将96孔板放置在37摄氏度的培养箱中，孵育一段时间。
孵育时间可以根据实验要求设定，通常为1-4小时。
7.吸光度测量使用酶标仪或多功能板读取器测量每个孔的吸光度值。
通常使用450纳米的波长进行测量。
根据吸光度值的变化，可以评估细胞的代谢活性，并进行细胞增殖或毒性分析。
通过以上步骤，可以使用CCK-8试剂评估细胞的增殖和毒性。
这种方法快速、简单且灵敏，被广泛应用于细胞实验中。
需要提醒的是，在进行实验前要仔细阅读CCK-8试剂的使用说明，并根据实际情况进行操作。
CCK_8操作说明及检测步骤
CCK_8操作说明及检测步骤CCK-8是一种常用的细胞增殖和细胞毒性检测方法，可以评估药物、毒物和其他试剂对细胞增殖的影响。
本篇文章将介绍CCK-8实验的操作说明及检测步骤。
实验材料：1.细胞培养物：包括细胞培养基和要检测的细胞系。
K-8试剂盒：包括CCK-8试剂和添加剂（如无血清培养基）。
实验步骤：1.细胞预处理：a.将细胞接种在培养皿中，使其达到对数生长期。
b.用PBS洗涤细胞，以去除培养基中的血清和其他杂质。
c.加入细胞培养基（如无血清培养基）孵育一天以适应新的生长条件。
K-8溶液的制备：a.从CCK-8试剂盒中取出所需量的CCK-8试剂。
b.按照试剂盒说明书中的方法，将CCK-8试剂溶解于适当的溶剂中，以获得CCK-8溶液。
3.细胞处理：a.在细胞培养皿中加入适量的处理组（含药物/毒物/试剂）和阴性对照组（不含处理）。
b.孵育细胞以使其与处理组接触，一般孵育24小时。
c.如果需要在不同时间点进行测量，可以设置不同的处理时间。
4.检测步骤：a.将培养皿从孵育器中取出，加入CCK-8溶液。
一般将CCK-8溶液与培养基混合，使浓度为10%。
b.返回孵育器中继续孵育15至60分钟，以使CCK-8溶液充分与细胞相互作用。
c. 使用酶标仪测量细胞的吸光度。
一般使用450nm波长进行检测。
d.记录各处理组的吸光度值。
5.数据分析：a.根据实验要求，选择合适的数据分析方法。
常用的包括比较各示踪实验组与阴性对照组之间的吸光度差异，或者使用半数抑制浓度（IC50）来评估样品对细胞增殖的影响。
b.绘制呈现实验结果的图表和图形。
c.进行统计分析，如t检验或方差分析，并计算显著性水平。
注意事项：1.操作前应严格按照实验室安全规定进行，佩戴实验室所需的个人防护设备。
2.在各步骤中，应尽量避免细胞暴露在环境中的时间过长，以减少细胞的应激反应。
3.操作时要注意使用无菌环境和无菌操作，以防止细胞污染。
4.实验中的所有操作必须根据实验室方法进行，避免任何操作的偏差。
细胞增殖毒性实验步骤cck8知识讲解
如有侵权请联系网站删除细胞增殖-毒性实验步骤1、细胞传代、细胞计数、细胞增殖-毒性实验步骤：实验准备：用75%酒精擦生物安全柜台面2遍，紫外线消毒30分钟（枪、枪头、15ml及50ml离心管、剪刀、封口膜、记号笔、打火机、酒精灯、培养瓶），复温实验所需试剂［细胞培养液（DMEM、1640）、磷酸缓冲盐溶液（PBS、胰酶（0.25% Trypsin-EDT）胎牛血清（FBS、双抗］，所有的试剂、仪器放入生物安全柜前要用酒精喷洒消毒。
显微镜下看细胞生长状态，有无污染。
1、倒去培养瓶内的培养液；2）加入PBS 2ml洗涤培养瓶内细胞2次；3）加入胰酶500ul/0.5ml 2〜10min （具体时间因细胞而异，可在显微镜下看是否贴壁，必要时轻拍培养瓶促使细胞脱落）；4）加入含10%FBS勺培养液1〜1.5ml［培养液：胰酶=（2〜3）:1］中和胰酶；5）轻轻吹打成单细胞悬液，吹打力度以不起气泡为宜；6）将单细胞悬液吸入10〜15ml离心管中，低速离心800rpm 3分钟，倒去上清液；7）加入含10%FBS ffl胞培养液1〜2ml吹打悬浮细胞至单细胞悬液；8）吸取20ul细胞悬液（10ul细胞悬液+10ul台盼兰液：给坏死细胞染色，判断细胞活力）至细胞计数板，进行细胞计数；CCK-8实验：9）在96孔板中，给每孔加100卩L （约7000个）的细胞悬液，将培养板放在培养箱预培养24-72 小时（37 C，5%CO2,使细胞贴壁；10）向培养板中加入10卩L不同浓度（5、10、20、40、80、160ug/ml）的待测药物；11）将培养板在培养箱孵育一段适当的时间24小时（例如：6、12、24或48小时）（药物起作用）；注意：如果待测物质有氧化性或还原性的话，可在加CCK之前更换新鲜培养基（除去培养基，并用培养基洗涤细胞两次，然后加入新的培养基），去掉药物影响。
当然药物影响比较小的情况下，可以不更换培养基，直接扣除培养基中加入药物后的空白吸收即可。
CCK-8操作说明与检测步骤
DOJIND O操作说明细胞活性检测1.在96孔板中接种细胞悬液(100 ml /孔)。
将培养板放在培养箱预培养(在37℃，5% CO2的条件下)。
2.向每孔加入10 ml的CCK- 8溶液(注意不要在孔中生成气泡，它们会影响O.D值的读数)。
3.将培养板在培养箱内孵育1-4小时。
4.用酶标仪测定在450nm处的吸光度。
5.如果暂时不测定O.D值，打算以后测定的话，可以向每孔中加入10 ml 0.1 M HCl溶液或者1% w/vSDS溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。
在24小时内吸光度不会发生变化。
细胞增殖-毒性检测1. 在96 孔板中配制100 ml的细胞悬液。
将培养板在培养箱预培养 24小时 ( 在37℃， 5% CO2的条件下 )。
2. 向培养板加入10 ml不同浓度的待测物质。
3. 将培养板在培养箱孵育一段适当的时间 (例如: 6,12, 24 或48小时)。
4. 向每孔加入10 ml CCK-8 溶液 (注意不要在孔中生成气泡，它们会影响O.D值的读数)。
5. 将培养板在培养箱内孵育 1-4小时。
6. 用酶标仪测定在450nm处的吸光度。
7. 如果暂时不测定O.D值，打算以后测定的话，可以向每孔中加入 10 ml 0.1 M HCl溶液或者1% w/vSDS 溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。
在 24小时内吸光度不会发生变化。
注意：如果待测物质有氧化性或还原性的话，可在加 CCK-8之前更换新鲜培养基，去掉药物的影响。
当然药物影响比较小的情况可以不更换培养基，直接扣除培养基中加入药物后的空白吸收即可。
制作标准曲线1. 先用细胞计数板计数所制备的细胞悬液中的细胞数量，然后接种细胞。
2. 按比例 ( 例如：1/2比例 ) 依次用培养基等比稀释成一个细胞浓度梯度，一般要做 3-5个细胞浓度梯度，每组3-6个复孔。
CCK-8实验步骤
CCK8检测细胞增殖/毒性的原理
Cell Counting Kit-8
●原理：该试剂中含有WST-8【化学名：2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝
基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑单钠盐】，它在电子载体1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯（1-Methoxy PMS）的作用下被细胞中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的黄色甲瓒产物（Formazan dye）。
生成的甲瓒物的数量与活细胞的数量成正比。
因此可利用这一特性直接进行细胞增殖和毒性分析。
●方法
1、制备细胞悬液：细胞计数
2、接种到96孔板中：根据合适的铺板细胞数（每孔5000细胞），每孔约100ul 细胞悬液，同样的样本可做3个重复。
3、37℃培养箱中培养：24h-48h
4、加入10ul CCK8,孵育2-4h
5、测定450nm吸光度。
CCK-8操作说明与检测步骤
DOJINDO操作说明细胞活性检测1.在96孔板中接种细胞悬液(100 ml /孔)。
将培养板放在培养箱预培养(在37℃，5% CO2的条件下)。
2.向每孔加入10 ml的CCK- 8溶液(注意不要在孔中生成气泡，它们会影响O.D值的读数)。
3.将培养板在培养箱内孵育1-4小时。
4.用酶标仪测定在450 nm处的吸光度。
5.如果暂时不测定O.D值，打算以后测定的话，可以向每孔中加入10 ml 0.1 M HCl溶液或者1% w/vSDS溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。
在24小时内吸光度不会发生变化。
细胞增殖-毒性检测1. 在96 孔板中配制 100 ml的细胞悬液。
将培养板在培养箱预培养 24小时 ( 在37℃， 5% CO2的条件下 )。
2. 向培养板加入10 ml不同浓度的待测物质。
3. 将培养板在培养箱孵育一段适当的时间 (例如: 6,12, 24 或48小时 )。
4. 向每孔加入10 ml CCK-8 溶液 (注意不要在孔中生成气泡，它们会影响 O.D值的读数) 。
5. 将培养板在培养箱内孵育 1-4小时。
6. 用酶标仪测定在450 nm处的吸光度。
7. 如果暂时不测定O.D值，打算以后测定的话，可以向每孔中加入 10 ml 0.1 M HCl溶液或者1% w/vSDS 溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。
在 24小时内吸光度不会发生变化。
注意：如果待测物质有氧化性或还原性的话，可在加 CCK-8之前更换新鲜培养基，去掉药物的影响。
当然药物影响比较小的情况可以不更换培养基，直接扣除培养基中加入药物后的空白吸收即可。
制作标准曲线1. 先用细胞计数板计数所制备的细胞悬液中的细胞数量，然后接种细胞。
2. 按比例 ( 例如：1/2比例 ) 依次用培养基等比稀释成一个细胞浓度梯度，一般要做 3-5个细胞浓度梯度，每组3-6个复孔。
3. 接种后培养2-4 小时使细胞贴壁，然后加 CCK-8试剂培养一定时间后测定 O.D值，制作出一条以细胞数量为横坐标 (X轴) ，O.D值为纵坐标 (Y轴) 的标准曲线。
CCK8实验原理与步骤
CCK8实验原理与步骤CCK-8是一种常见的细胞活力检测方法，常用于评估细胞增殖和细胞毒性等生物学活性。
实验原理：CCK-8试剂是一种黄色噻唑-二苯基甲烷盐的溶液，它能够在有活细胞存在时被细胞内的酶还原成橙色水溶性的产物。
这种产物可以通过光度计测量，从而得到细胞的活力信息。
细胞活力高时，细胞内有较多的酶可以将CCK-8还原成产物，产生较高的吸光度；细胞活力低时，细胞内酶的活性降低，无法完全还原CCK-8，产生较低的吸光度。
实验步骤：1.细胞培养：将待测细胞株接种到含有适宜培养基的培养皿或孔板中，并在恒温、湿润、含有5%CO2的培养箱中孵育。
2.实验前处理：根据实验设计的需要，可进行细胞预处理，如给药、感染等。
预处理时间根据需要确定。
K-8试剂准备：将CCK-8试剂按照用户手册的要求溶解成适合实验设计的浓度。
注：部分实验可能需要调整试剂的浓度，应根据实验要求进行调整。
K-8试剂加样：对不同组的培养皿或孔板分别加入适量的CCK-8试剂，使其与培养基均匀混合。
一般情况下，加入的CCK-8试剂量为培养基总量的10%。
5.孵育CCK-8与细胞的反应：将含有CCK-8试剂的培养皿或孔板放回恒温、湿润、含有5%CO2的培养箱中继续孵育。
孵育时间根据实验需要确定，一般为1-4小时。
6. 吸光度测定：使用酶标仪或光度计测定吸光度（OD）值，一般在450nm波长下测定。
同时，记录对照组（如细胞温育组）的OD值作为参照。
7.数据处理与分析：根据实验设计，采用合适的统计学方法，比较各组的细胞活力差异，并将数据结果进行图表展示。
注意事项：K-8试剂对皮肤、眼睛、呼吸道等有刺激性，请注意安全操作；2.实验前需进行细胞的适宜密度的培养，以保证其在实验过程中的稳定生长状态；3.在实验中注意培养条件的一致性，如温度、湿度、CO2浓度等；4.参照组的选择要慎重，需要与实验对象具有相同的培养条件；5.准备稀释CCK-8试剂时，避免过长时间暴露于光线和空气中，以免降低其效力。
cck8具体操作流程
cck8具体操作流程
以下是使用CCK8试剂盒进行细胞活力检测的步骤：
1. 准备细胞：取生长状态良好的细胞制备成一定浓度的细胞悬液。
如果是贴壁细胞，需要37℃培养箱进行预培养2-6小时等细胞贴壁后再开展实验，
如果是悬浮细胞，不需要预培养。
2. 制备培养基：在无酚红DMEM高糖培养基中加入双抗、谷氨酰胺和血清。
3. 准备96孔板：根据实验需求，准备适当数量的96孔板。
每孔加入
100ul细胞悬液，通常细胞增殖实验每孔加入2×10³个/100ul 细胞，细胞
毒性实验每孔加入5×10³个细胞/100ul。
如果是贴壁细胞，可以直接在96
孔板中进行实验，如果是悬浮细胞，需要离心后取沉淀进行实验。
4. 加药处理：根据实验需求，在各组细胞中加入不同浓度的药物或对照组不加药。
5. 孵育：将96孔板放入37℃培养箱中孵育一定时间，通常为24小时。
6. 检测：在检测前，将CCK8试剂加入96孔板中，轻轻混匀后继续孵育1-4小时。
然后使用酶标仪测定各孔在450nm处的吸光度，记录数据并计算
细胞活力。
以上步骤仅供参考，具体操作请根据实验需求和实际情况进行调整。
CCK8检测细胞增殖毒性的原理、方法及注意事项
CCK8检测细胞增殖/毒性的原理、方法及注意事项一、CCK8检测细胞增殖/毒性的原理Cell Counting Kit—8（简称CCK-8）试剂可用于简便而准确的细胞增殖和毒性分析。
其基本原理为：该试剂中含有WST—8【化学名：2—（2—甲氧基-4—硝基苯基）—3—（4-硝基苯基）—5-（2，4—二磺酸苯）—2H—四唑单钠盐】,它在电子载体1—甲氧基—5—甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯（1-Methoxy PMS)的作用下被细胞中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的黄色甲瓒产物(Formazan dye)。
生成的甲瓒物的数量与活细胞的数量成正比.因此可利用这一特性直接进行细胞增殖和毒性分析。
用途：药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏试验CCK8的优点：•使用方便，省去了洗涤细胞，不需要放射性同位素和有机溶剂；•CCK—8法能快速检测；•CCK—8法的检测灵敏度很高,甚至可以测定较低细胞密度；•CCK—8法的重复性优于MTT 法；•CCK-8法对细胞毒性小；•CCK—8细胞活性检测试剂中为1瓶溶液,毋需预制，即开即用。
CCK8的缺点：•与MTT法相比，CCK8和XTT的价格比较贵。
•CCK8试剂的颜色为淡红色，与含酚红的培养基颜色接近，不注意的话容易产生漏加或多加。
与以往的增殖/毒性测定试剂相比较:检测方法MTT法XTT法WST-1法CCK8法甲臢产物的水差(需加有机好好好溶性溶剂溶解)产品性状粉末2瓶溶液溶液1瓶溶液使用方法配成溶液后使用现配现用即开即用即开即用检测灵敏度高很高很高高检测时间较长较短较短最短检测波长560-600nm420-480nm420—480nm430—490nm细胞毒性高,细胞形态完全消失很低，细胞形态不变很低,细胞形态不变很低，细胞形态不变试剂稳定性一般较差一般很好批量样品检测可以非常适合非常适合非常适合便捷程度一般便捷便捷非常便捷二、CCK8检测细胞增殖/毒性的方法实验一：细胞增殖分析1、制备细胞悬液：细胞计数2、接种到96孔板中：根据合适的铺板细胞数,每孔约100ul细胞悬液，同样的样本可做3个重复。
CCK-8操作说明和检测步骤
ＤＯＪINDO操作讲明细胞活性检测１、在96孔板中接种细胞悬液(10０ｍl /孔)。
将培养板放在培养箱预培养(在３7℃,５% CO２的条件下)、2、向每孔加入１０ml的ＣCK－8溶液(注意不要在孔中生成气泡,它们会影响O、Ｄ值的读数)。
3、将培养板在培养箱内孵育1-４小时、４、用酶标仪测定在４５0 nm处的吸光度、5、假如暂时不测定O、D值,打算以后测定的话,能够向每孔中加入10 ｍｌ 0、1 ＭHCl 溶液或者1% w/vSＤS溶液,并遮盖培养板避光保存在室温条件下、在２4小时内吸光度可不能发生变化、细胞增殖－毒性检测1、在９６孔板中配制100 mｌ的细胞悬液。
将培养板在培养箱预培养２4小时( 在３7℃,5％ CＯ2的条件下)、2、向培养板加入10 ml不同浓度的待测物质。
３、将培养板在培养箱孵育一段适当的时间(例如: 6,１２, 2４或48小时)。
4、向每孔加入10 ｍｌ CCＫ-８溶液(注意不要在孔中生成气泡,它们会影响O、D 值的读数) 。
5、将培养板在培养箱内孵育1—4小时。
6、用酶标仪测定在450 nm处的吸光度。
7、假如暂时不测定O、D值,打算以后测定的话,能够向每孔中加入10 mｌ0、1 M ＨCl溶液或者1% w／vSDS 溶液,并遮盖培养板避光保存在室温条件下、在２４小时内吸光度可不能发生变化。
注意:假如待测物质有氧化性或还原性的话,可在加CCＫ—８之前更换新鲜培养基,去掉药物的影响。
当然药物影响比较小的情况能够不更换培养基,直截了当扣除培养基中加入药物后的空白吸收即可。
制作标准曲线1、先用细胞计数板计数所制备的细胞悬液中的细胞数量,然后接种细胞、2、按比例( 例如:1/2比例) 依次用培养基等比稀释成一个细胞浓度梯度,一般要做3-５个细胞浓度梯度,每组3—6个复孔、3、接种后培养2—4 小时使细胞贴壁,然后加CCＫ—8试剂培养一定时间后测定O、D 值,制作出一条以细胞数量为横坐标(X轴) ,O、D值为纵坐标(Y轴) 的标准曲线、依照此标准曲线能够测定出未知样品的细胞数量(使用此标准曲线的前提条件是实验的条件要一致,便于确定细胞的接种数量以及加入CCＫ－８后的培养时间)。