细胞增殖MTT检测经验总结
MTT实验心得2
MTT实验心得MTT实验是检测细胞活力的实验方法，由于细胞活力与细胞数呈正相关，因此也常常用来检测细胞的增殖情况。
MTT的原理：活细胞有琥珀酸脱氢酶，将MTT还原成棕褐色沉淀。
由于一般介绍园子里已经很多，笔者将自己的心得按照实验流程与大家交流交流。
1、培养好细胞点板。
养细胞没啥好说的，如果不知道细胞如何养，那就看看相关的文献方法。
如果知道了细胞的名字，就可以上检索细胞的培养信息，这个网站上的培养方法是标准培养方法。
当然可以根据自己实验要求进行修改。
由于细胞计数很繁琐，点板时的细胞浓度是最难掌握的，这一点笔者的心得如下：自己先将细胞养一段时间，大概了解细胞的增殖情况，在MTT检测时实际上要求细胞大概能长满96-孔板的80-90%，如果打算养48小时就检测，根据细胞的生长情况反推点板时的细胞浓度状况。
这时可以将细胞不进行计数，将消化好的细胞混匀后（可能是10 ml）直接在一个废弃（最好进行过无菌处理）的96孔板中依次加入180、100、50微升细胞，将细胞放置几分钟就会沉到板底了，这时在显微镜下观察，推测哪个孔的细胞48 h能基本长满板底，假设50 微升的孔比较合适，而点板时没孔需点200 微升，那么就将细胞浓度再稀释4倍就可以正式点板了，这时顺便将细胞进行计数（因为实验记录要求写啊）。
这样就OK了！如果细胞还太多，将细胞稀释4倍后再重复以上操作。
注意：不要过分信赖细胞计数，因为细胞计数的取样量为20 微升左右，由于颗粒的分布不均匀，代表性是很差的。
建议：细胞计数一定要会，但不要完全依赖它。
点板时一定要将细胞消化成单个细胞，而且一定要混匀，最好用排枪，否则，MTT的SD会狂大。
2、点板布局。
其实这一点很多人不懈一顾。
如果你的细胞要养48 h或更长，建议不要吝啬96-孔板的四周边孔，这32个边孔不能使用，建议加入灭菌PBS以饱和中间64个孔的水分。
因为细胞培养过程中，边孔的水分蒸发很快，培养液及里面的药物会出现浓缩现象，细胞的状况就复杂了，有些人称之为“边缘效应”这些孔的SD也会狂大，既然如此，不如不用。
细胞增殖抑制率检测--MTT
细胞增殖抑制率检测--MTT
细胞增殖抑制率检测-- MTT
要点：1、细胞的接种密度为2～5×104/ml，细胞的消化要好，不要形成细胞团；
2、细胞接种时要一边吹打，一边接种；
3、培养板的四边孔只加培养基或只接种细胞，而不作为指标检测孔；
4、于检测指标前4小时，加MTT（5mg/ml）；检测前观察结晶形态和大体数量，弃上清（亦有不主张弃上清者，以免损失结晶，个人认为为了尽快溶解结晶，应去上清，可用翻板法，我用枪头吸，未见明显影响，还可离心1000r/min,10分钟后再吸），加无水乙醇（还可用DMSO、酸化异丙醇等），震荡10分钟（个人认为可用枪头吹打，加快溶解，效果亦可；有资料报道可放入孵箱15分钟溶解结晶），完全溶解后用酶标仪检测。
5、要低血清或无血清培养，减少血清的影响，因为血清高容易和MTT反应，也有报道血清和处理因素反应等等；
6、对于连续测数天的情况，可以考虑每天换液，但要注意条件齐平；另外就要注意的就是接种时宁可稀一点不要细胞接种过密！。
体外检测肿瘤细胞增殖实验综述报告
体外检测肿瘤细胞增殖实验综述报告细胞增殖实验是研究肿瘤细胞增殖和药物筛选的重要手段。
目前常见的肿瘤细胞增殖实验包括MTT法、SRB法、CCK-8法和细胞计数法。
本综述将介绍常用的MTT法和SRB法。
一、MTT法MTT法是一种常用的检测细胞增殖和细胞存活率的方法。
其原理是MTT剂通过被细胞还原，形成紫色沉淀，而细胞活性越强，则代谢产物越多，MTT的还原能力也越强，所以其颜色越深。
MTT法的步骤如下：1. 细胞接种：将待检测的细胞分离并接种到96孔板中，对照组和实验组各重复3次，每孔加入100 μl的细胞悬液。
2. 细胞培养：将孔板置于37℃、5% CO2培养箱中，培养24h，待细胞贴附后进入下一步。
3. 加入MTT：将MTT溶液加入孔板中，加入的量为100 μl/孔，最终浓度为0.5mg/ml。
4. 离心：孔板离心5min，去除上清，加入150 μl的DMSO，进行溶解。
5. 检测：将各孔450 nm波长下吸光度值读取，数据处理和结果分析。
MTT法适用于多种肿瘤细胞，操作简便，可用于初筛药物的活性。
然而，MTT法也存在局限性，如MTT还原能力受到某些实验条件影响，如细胞密度、孵育时间、细胞凋亡等，需要注意标准化操作。
二、SRB法SRB法是酸性快速比色法的缩写，它通过酸性溶液中蛋白质的沉淀和染色，反映了细胞的增殖情况。
该方法操作简单，速度快，结果信度较高。
步骤如下：3. 加入SRB：将SRB溶液加入各孔中，保持10 min。
4. 洗涤：将各孔反复洗涤至清晰。
6. 检测：将各孔570 nm波长下吸光度值读取，数据处理和结果分析。
SRB法比较适用于肿瘤细胞形态大而扁平的情况。
此外，SRB法还能够评价细胞的耐药性，并可用于筛选化合物对细胞增殖的抑制率，是一种较为全面的细胞增殖试验方法。
三、结论以上两种实验方法在检测肿瘤细胞增殖及药物筛选中具有重要的应用价值。
在操作上，需要严格地控制实验条件，确保数据的准确性和可靠性。
mtt法检测细胞增殖
MTT法检测细胞增殖前言细胞增殖是生物体生长和发育的基本过程之一，也是许多疾病的病理基础。
因此，准确测定细胞增殖的能力对于生物医学研究具有重要意义。
MTT(Methylthiazolyl tetrazolium)法是目前常用的细胞增殖分析方法之一，能够可靠地简单测定细胞增殖的活性。
本文将介绍MTT法的原理和操作步骤，并对其优缺点进行分析。
MTT法原理MTT法是一种基于细胞代谢活动的间接检测方法。
其基本原理是利用细胞对MTT的还原作用，通过测定产生的紫色产物的吸光度来间接反映细胞增殖的活性。
MTT是一种黄色的可溶性化合物，能够通过细胞内氧化还原酶系统还原为紫色的结晶体—formazan。
被还原的formazan会在细胞内积累，并且随着细胞数量的增加而增加。
在MTT法中，细胞被处理后，MTT溶液被加入到培养基中，经过一段时间的孵育后，细胞会将MTT还原为formazan，形成紫色的晶体。
随后，使用溶解剂溶解晶体，使其可溶于溶液中，最后通过光谱仪测定溶液的吸光度。
在MTT法中，吸光度的值与细胞数量成正比，因此可以通过比较不同处理组细胞的吸光度值来评估细胞增殖能力的差异。
操作步骤以下是使用MTT法检测细胞增殖的基本操作步骤：1.准备细胞培养物：将需要进行细胞增殖检测的细胞培养在含有适当培养基的培养皿中。
确保培养皿的表面充分涂覆了细胞，并且培养皿中的细胞密度适中。
2.处理组织/药物/生物活性物质：根据实验设计的需求，将细胞培养在含有需要测试的药物或生物活性物质的培养基中。
如果是对不同处理组进行比较，需要设置对照组。
3.孵育细胞：将培养皿放入恒温培养箱或细胞培养箱中，以维持适当的温度、湿度和气体环境，使细胞进行增殖。
孵育时间根据实验需要而定，通常为24-72小时。
4.添加MTT溶液：取出培养皿，将预先配好的MTT 溶液均匀地加入到培养基中，确保与细胞充分接触。
MTT 溶液的浓度和加入量可以根据实验要求进行调整。
体外检测肿瘤细胞增殖实验综述报告5篇
体外检测肿瘤细胞增殖实验综述报告5篇篇1一、引言肿瘤细胞增殖实验是研究肿瘤发生、发展及其相关机制的重要手段。
随着科技的进步，体外检测肿瘤细胞增殖的方法逐渐成为研究热点。
本文将对体外检测肿瘤细胞增殖的实验方法、应用及优缺点进行综述，为相关研究者提供参考。
二、实验方法1. 细胞培养细胞培养是体外检测肿瘤细胞增殖的基础。
研究者需根据实验需求选择合适的细胞系，并掌握细胞培养的基本技术，如细胞的复苏、传代、冻存等。
2. 实验试剂与仪器在进行肿瘤细胞增殖实验时，需要使用一系列的试剂和仪器，如细胞计数试剂、酶标仪、显微镜等。
这些试剂和仪器的选择对实验结果的准确性至关重要。
三、实验技术1. MTT法MTT法是一种常用的检测细胞增殖的方法，其原理是利用活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶还原MTT，生成蓝色结晶物并沉积在细胞中，从而反映细胞的增殖情况。
该方法具有操作简便、快速、准确等优点，在肿瘤细胞增殖实验中得到了广泛应用。
2. BrdU法BrdU法是通过检测细胞内BrdU的掺入量来反映细胞的增殖活性。
该方法需要预先在培养基中加入BrdU，然后通过特异性抗体检测BrdU的掺入量。
BrdU法具有较高的灵敏度和特异性，能够更准确地反映细胞的增殖情况。
3. 流式细胞术流式细胞术是一种能够同时检测单个细胞多个参数的技术，可以用于分析细胞的周期、凋亡、增殖等情况。
在肿瘤细胞增殖实验中，流式细胞术可以用于检测细胞的DNA含量、BrdU掺入量等指标，从而更全面地了解细胞的增殖情况。
四、应用及优缺点1. 药物筛选与评价体外检测肿瘤细胞增殖实验可以用于药物的筛选与评价。
通过检测药物对肿瘤细胞增殖的抑制作用，可以评估药物的抗肿瘤活性，为药物的进一步研究和开发提供依据。
2. 肿瘤病理学研究体外检测肿瘤细胞增殖实验还可以用于肿瘤病理学研究。
通过分析肿瘤细胞的增殖特性，可以了解肿瘤的发生、发展及其相关机制，为肿瘤的诊断和治疗提供理论依据。
3. 个体化治疗与预后判断体外检测肿瘤细胞增殖实验在个体化治疗和预后判断中也具有重要价值。
MTT实验心得
MTT（四唑盐）法检测细胞力【实验目的】：检测细胞活力【实验材料】：96孔板，1ML 100ul枪头；MTT配制5MG/ML单细胞悬液；处理条件如各种浓度的化疗药物（根据实验目的自行选择）【实验步骤】1．消化贴壁细胞，制成1x105个/ml 的单细胞悬液（可根据不同细胞的生长情况调整浓度）2．接种：每个浓度梯度至少设3个孔（当然复孔越多越好），每空加细胞悬液80-100μl3．24h细胞贴壁后再加已配置好的各个浓度的ADM20μl，至试验所需的终浓度4．37.00c 5%CO2 100%湿度培育48小时5．加5MG/ML MTT 10μl，培育4小时注意MTT溶液配置好后要避光，不能长期使用。
6．去上清，加DMSO原液100μl，震荡5分钟，室温10分钟，7．A492nm波长测吸光度8．设置空白对照：与实验孔平行设不加细胞只加培养液的空白对照，余步骤同前。
实验结果分析：细胞存活数（%）=实验组光吸收率/对照组光吸收率x100% 【注意事项】1．每次加样时枪不要太打到底，这样会多吸，或者枪头松动，或有气泡，液体会溢出，会影响实验结果。
2．许多化疗药物粉末用PBS往往很难完全溶解，可以经注射器注入生理盐水，充分混匀后。
3. 切记要设置对照【典型举例】以ADM（阿霉素）和CIS（顺铂）对MCF-7，MCF-ADR细胞活力的影响为例：ADM的配置：（1）10mg粉末中加入灭菌注射用水10ml 1mg/ml 的原液10ML（2）取1mg/ml 的原液0.5ml, 加入9.5ml灭菌注射用水配成50μg/ml 液体10ml(3) 取50μg/ml 液体0.5ml加入4.5ml灭菌注射用水配成5μg/ml 液体5ml(4) 取5μg/ml 液体0.5ml加入4.5ml 灭菌注射用水配成0. 5μg/ml 液体5ml(5) 取0. 5μg/ml 液体0. 5ml加入4.5ml灭菌注射用水配成0.0 5μg/ml 液体5ml(6) oμg/ml消化贴壁细胞，制成1x105个/ml 的细胞悬液接种：每个浓度梯度设3个孔，每空加细胞悬液80μl，24h细胞贴壁后再加各个浓度的ADM20μl，至终浓度0, 0.01, 0.1, 1.0, 10 μg/ml .37.00c 5%CO2 100%湿度培育48小时加5MG/ML MTT 10μl，培育4小时去上清，加DMSO原液100μl，震荡5分钟，室温10分钟，A490nm波长测吸光度。
体外检测肿瘤细胞增殖实验综述报告
体外检测肿瘤细胞增殖实验综述报告肿瘤是一类以异常细胞增殖为主要特征的疾病。
准确评估肿瘤细胞增殖对于肿瘤治疗的效果以及疾病的预后具有重要意义。
体外检测肿瘤细胞增殖是一种常用的方法，本文主要对体外检测肿瘤细胞增殖的实验方法和研究进展进行综述。
一、MTT法MTT法是一种常用的体外检测肿瘤细胞增殖的方法。
该方法是根据细胞线粒体活性的改变来评估细胞增殖的程度。
实验流程主要包括：将细胞悬浮液均匀涂布在培养皿中，待细胞贴附后加入MTT试剂，培养一段时间后将形成的晶体溶解并用酶标仪读取吸光度值。
吸光度值越高，细胞增殖越旺盛。
该方法简单、灵敏度较高，被广泛应用于肿瘤细胞增殖实验中。
二、Clonogenic assayClonogenic assay是一种评估肿瘤细胞增殖潜能的经典方法。
该方法通过培养肿瘤细胞单个细胞或一小群细胞，观察并统计形成的克隆数目来评估细胞增殖的能力。
实验流程主要包括：将肿瘤细胞以适当密度接种在培养皿中，培养一段时间后用甲醛固定，染色后用显微镜观察并计数克隆数量。
克隆数量越多，细胞增殖能力越强。
该方法简便、直观，是评估肿瘤细胞增殖的重要手段之一。
三、Cell proliferation assayCell proliferation assay是一类常用的体外检测肿瘤细胞增殖的方法。
这些方法主要通过检测细胞增殖相关指标来评估细胞增殖的程度，包括细胞数量、细胞代谢活性、DNA合成等。
常用的方法有细胞计数法、脱氧核糖核酸(DNA)含量测定法、流式细胞术等。
这些方法具有高通量、高灵敏度等特点，被广泛应用于肿瘤细胞增殖实验中。
四、组织培养方法组织培养方法是一种用于体外检测肿瘤细胞增殖的重要手段。
该方法直接使用体外培养的肿瘤组织，观察并统计肿瘤细胞的增殖情况。
常见的组织培养方法包括原代细胞培养、血管瘤体外培养等。
这些方法可以更真实地反映肿瘤细胞的增殖状态，但操作复杂、时间长，限制了其在实验中的应用。
体外检测肿瘤细胞增殖是评估肿瘤治疗效果和预后的重要手段之一。
MTT方法总结详解
MTT方法总结详解第一篇：MTT方法总结详解MTT方法总结1.MTT原理MTT比色法是一种检测细胞存活和增殖的方法，所用的显色剂是一种能接受氢原子的化合物MTT，原理是，活细胞内线粒体琥珀酸脱氢酶能将淡黄色的MTT还原为蓝紫色的结晶formazan(甲瓒）后者的产量与活细胞数成正相关。
formazan可用DMSO、无水乙醇或酸化异丙醇等溶解，在酶标仪上以波长490nm和570nm处进行比色。
所检测的OD值的大小可反应细胞代谢活性的强弱。
2.优点（1）有灵敏度高，重复性好，（2）操作简便、经济、快速、易自动化的优点，（3）而且没有3H—TdR掺入试验放射性污染，（4）还可以减少如细胞计数法、软琼脂克隆形成试验中的人为性因素缺点：影响因素多，重复性较差。
MTT有毒性致突变性，操作时应注意防护3.步骤(1)接种细胞：用0.25％胰蛋白酶消化单层培养细胞，用含10％胎牛血清的RPMI1604培养液配成单个细胞悬液，以每孔5×103~1×104个细胞接种于96孔培养板中，每孔体积200ul。
(2)培养细胞；将培养板移入CO2孵箱中，在37℃、5％CO2及湿度条件下，培养4h以上（至细胞状态稳定）．加药物干预24~48h(培养时间取决于实验目的和要其求)(3)呈色：加MTT时一定要避光，测24h细胞增殖率时，于加药干预20h后，每孔加入MTT 溶液(5mg/mL)20ul，37℃，继续孵育4h；测48h细胞增值率时，于加药干预44h后，每孔加入MTT溶液(5mg/mL)20uL，继续孵育4h。
终止培养后，对悬浮生长的细胞，需离心,(2000rpm．15min)；对贴壁细胞最好也离心（2000rpm,3min).然后用1mL或3mL注射器小心吸弃孔内培养上清液，每孔加入150uL DMSO振荡10min，使结晶物充分溶解。
(4)比色：选择490nm和570nm波长，在酶联免疫检测仪上调定各孔收值，记录结果。
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细胞增殖检测：MTT实验经验总结
MTT分析法以活细胞代谢物还原剂3-（4，5）-dimethylthiahiazo （-z-y1）-3，5-di- phenytetrazoliumromide，MTT噻唑蓝为基础。
MTT为黄色化合物，是一种接受氢离子的染料，可作用于活细胞线粒体中的呼吸链，在琥珀酸脱氢酶和细胞色素C的作用下tetrazolium环开裂，生成蓝色的formazan结晶，formazan结晶的生成量仅与活细胞数目成正比（死细胞中琥珀酸脱氢酶消失，不能将MTT还原）。
还原生成的formazan结晶可在含50%的N，N-二甲基甲酰胺和20%的十二甲基磺酸钠（pH 4.7）的MTT溶解液中溶解，利用酶标仪测定490 nm处的光密度OD值，以反映出活细胞数目。
也可以用DMSO来溶解。
MTT粉末和溶液保存时都需要避光，用铝箔纸包好就可以。
实验的时候我一般关闭超净台上的日光灯来避光，觉得这样比较好。
一、步骤
1、接种细胞
用含10%胎小牛血清得培养液配成单个细胞悬液，以每孔1000－10000个细胞接种到96孔板，每孔体积200ul。
2、培养细胞
同一般培养条件，培养3－5天（可根据试验目的和要求决定培养时间）。
3、呈色
培养3－5天后，每孔加MTT溶液（5mg/ml用PBS 配）20ul.继续孵育4小时，终止培养，小心吸弃孔内培养上清液，对于悬浮细胞需要离心后再吸弃孔内培养上清液。
每孔加150ul DMSO，振荡10分钟，使结晶物充分融解。
4、比色
选择490nm波长，在酶联免疫监测仪上测定各孔光吸收值，记录结果，以时间为横坐标，吸光值为纵坐标绘制细胞生长曲线。
二、注意事项
1、选择适当得细胞接种浓度。
2、避免血清干扰：一般选小于10%的胎牛血清的培养液进行试验。
在呈色后尽量吸尽孔内残余培养液。
3、设空白对照：与试验平行不加细胞只加培养液的空白对照。
其他试验步骤保持一致，最后比色以空白调零。
MTT实验吸光度最后要在0-0.7之间，超出这个范围就不是直线关系，
IC50是半抑制率，意思是抑制率50％的时候药物的浓度。
把药品稀释成不同的浓度，然后计算各自的抑制率，以药品的浓度为横坐标，抑制率为纵坐标作图，然后得到50％抑制率时候的药品浓度，就是IC50。
要点：药品2倍稀释，多做梯度，做点线图即可！
三、举例
各组浓度0.1、0.01、0.001、0.0001、0.00001、0.000001，稀释倍数为10，最大浓度为0.1，抑制率为0.95、0.80、0.65、0.43、0.21，0.06。
代入计算公式：
Pm=0.95
Pn=0.06
P=0.95+0.80+0.65+0.43+0.21+0.06=3.1
Xm=lg0.1=-1
lgI=lg0.1/0.01=1
lgIC50=-1-1*（3.1-（3-0.95-0.06）/4）=-3.6025
IC50=0.00025
有一个公式可供参考；
lgIC50=Xm-I（P-（3-Pm-Pn）/4）
Xm：lg 最大剂量
I：lg（最大剂量/相临剂量）
P：阳性反应率之和
Pm：最大阳性反应率
Pn：最小阳性反应率
抑制率=1-加药组OD值/对照组OD值
公式中的最大最小阳性反应率就是最大最小抑制率
例：
用96孔板培养SMMC-7721肝癌做MTT测细胞活力，应该加多少1640培养基，多少MTT和DMSO合适?根据书上说的加200ul1640，20ulMTT，150ulDMSO 加DMSO之前要尽量去掉培养液，便于DMSO溶解甲臜颗粒进行比色测定
一般每孔4000个细胞为宜，既细胞浓度在20000个/ml，MTT加20ul，作用四小时后洗掉上清液，注意不要将甲瓉洗掉，然后每孔加150ul DMSO，在脱色摇床上振荡10分钟，然后测吸光值。
一般要低于IC50，避免非调亡性杀伤的细胞太多，造成流式细胞仪检测碎片太多。
我一般用1/2-1/3的IC50，作用时间为36h。
一般肿瘤细胞系空白处理的调亡率应低于1%，用药后一般为5-10%（Annexin V），细胞周期的亚G0峰比较明显。
MTT法心得
MTT实验是检测细胞活力的实验方法，由于细胞活力与细胞数呈正相关，因此也常常用来检测细胞的增殖情况。
一、MTT的原理
活细胞有琥珀酸脱氢酶，将MTT还原成棕褐色沉淀。
由于一般介绍园子里已经很多，笔者将自己的心得按照实验流程与大家交流交流。
二、MTT法检测细胞增殖实验的注意事项
1、培养好细胞点板
养细胞没啥好说的，如果不知道细胞如何养，那就看看相关的文献方法。
如果知道了细胞的名字，就可以上检索细胞的培养信息，这个网站上的培养方法是标准培养方法。
当然可以根据自己实验要求进行修改。
由于细胞计数很繁琐，点板时的细胞浓度是最难掌握的，这一点笔者的心得如下：
自己先将细胞养一段时间，大概了解细胞的增殖情况，在MTT检测时实际上要求细胞大概能长满96-孔板的80-90%，如果打算养48小时就检测，根据细胞的生长情况反推点板时的细胞浓度状况。
这时可以将细胞不进行计数，将消化好的细胞混匀后（可能是10ml）直接在一个废弃（最好进行过无菌处理）的96孔板中依次加入180、100、50微升细胞，将细胞放置几分钟就会沉到板底了，这时在显微镜下观察，推测哪个孔的细胞48 h能基本长满板底，假设50微升的孔比较合适，而点板时没孔需点200 微升，那么就将细胞浓度再稀释4倍就可以正式点板了，这时顺便将细胞进行计数（因为实验记录要求写啊）。
这样就OK 了！如果细胞还太多，将细胞稀释4倍后再重复以上操作。
注意：不要过分信赖细胞计数，因为细胞计数的取样量为20 微升左右，由于颗粒的分布不均匀，代表性是很差的。
建议：细胞计数一定要会，但不要完全依赖它。
点板时一定要将细胞消化成单个细胞，而且一定要混匀，最好用排枪，否则，MTT的SD会狂大！
2、点板布局
其实这一点很多人不懈一顾。
如果你的细胞要养48 h或更长，建议不要吝啬96-孔板的四周边孔，这32个边孔不能使用，建议加入灭菌PBS以饱和中间64个孔的水分。
因为细胞培养过程中，边孔的水分蒸发很快，培养液及里面的药物会出现浓缩现象，细胞的状况就复杂了，有些人称之为%26ldquo;边缘效应%26rdquo;这些孔的SD也会狂大，既然如此，不如不用。
3、加MTT
如果确认你考察的药物没有氧化还原性，你可以直接加入MTT溶液（总体积的1/10），如果你没有把握，建议在加MTT前换一次液；如果你肯定考察的药物的氧化还原性很强，比如谷胱甘肽、Vit E、VitC，那建议你用PBS将细胞洗洗，否则这些药物会将MTT还原成棕褐色沉淀，这种效果可能是你不需要的。
4、加入MTT后的反应
时间为3-4h，此时弃去各孔中的液体在加入200微升的DMSO。
为了将沉淀溶解完全，尽可能将水弃除干净，加入DMSO后在摇床上震摇10min。
提醒：如果你的细胞贴壁不好，此时的沉淀在弃去液体时易丢失，因此贴壁不好的细胞在点板时记得将96孔板用多聚赖氨酸处理处理，要么在弃液体时先用甩板机离心，再轻轻弃去液体。
关于DMSO的量，每孔的体积有点儿差异不干扰检测，只要能将沉淀完全溶解就行了。
至于DMSO的体积差异不同为什么不影响检测值已经被数学证明了，在此我不多说，如果有人不明白我再证明给他看。
当然为了养成良好的实验习惯，DMSO的体积还是一致的好。
5、检测MTT
还原的MTT在460-630均有较好的吸收，如果你的酶标仪是滤光片，可以选470 nm左右或630 nm左右的滤光片，如果酶标仪有单波长，你可以在检测前扫描一下吸收谱，选用最大细说波长检测就是了，最大波长，大概在550nm附近，必要时加一个参比波长以扣除非特异性吸收。
6、吸收值分析
在理想的MTT实验中，如果是细胞抑制实验，不加药物处理组的吸收值应该在0.8-1.2左右，太小检测误差占的比例较多，太大吸收值可能已经超出线性范围。
这个原理在朗伯-比尔定律中有解释。
7、建议
如果你觉得MTT中出现的问题不好解决，那么建议你做CCK-8实验，原理与MTT相似，但操作上简化些，当然，费用也稍微高一些。