花粉生活力测定(终)
花粉活力测定
TTC法[2,4]又称氯化三苯基四氮唑染色法(2 3, 5一triphenyl tetrazoliun chloride)。
氯化三苯基四氮唑即红四氮唑,作为非萌发分析花粉生话力的方法,速度快也比较精确地反映花粉的活力红四氮唑是标准的氧化还原色素,水溶液无色,遇到活细胞里的脱氢酶接受氯离子,还原后变红生成不溶于水的三苯甲赝,呈红色。
I-IK染色测定法：此法常用于鉴定不含淀粉的不育花粉,凡染成蓝紫色的为发育好、活力强的花粉,呈黄褐色的为发育不良的花粉。
过氧化物酶测定法具有生活力的花粉含有活跃的过氧化物酶,此酶能利用过氧化氢使各种多酚及芳香族胺发生氧化而产生颜色,依据颜色可知花粉的活性强弱。
过氧化物酶测定法
具有生活力的花粉含有活跃的过氧化物酶,此酶能利用过氧化氢使各种多酚及芳香族胺发生氧化而产生颜色,依据颜色可知花粉的活性强弱［13］。
醋酸洋红法测定花粉活力[14]
取少量花粉置于载玻片上,然后滴加1滴1%的醋酸洋红溶液。
室温下静置5 min观察。
统计染成红色的花粉粒所占比率。
[13]赵鸿杰，乔龙巴图，殷爱华等．3种山茶属植物花粉活力测定方法的比较（Ｎ）．中南林业科技大学学报．2010，30（3）．
[14] 盖伟玲，盖树鹏，郑国生．牡丹新鲜花粉活力的快速测定(J)．育苗科技Seedling Cultivation．2011(5)。
实验四花粉生活力的测定
实验四、花粉生活力的测定一、实验目的：通过实验掌握花粉生活力测定的具体技术和方法;二、实验原理：花粉生活力是指在正常条件下花粉在雌蕊上萌发的能力;花粉生活力测定在杂交工作中很重要,尤其亲本花期不相同需要从外地采集花粉作父本时,花粉要经过一段较长时间的贮藏运输过程,因此在杂交前应检验花粉的生活力,以免应用无生活力的花粉而造成杂交工作的失败;三、实验材料：苹果花粉四、实验用具与试剂：指形管、显微镜、载玻片、盖玻片、凹式载玻片、滴瓶、培养皿、天平、烧杯、玻璃棒、微波炉、滤纸、水浴锅、计数器、镊子；碘化钾KI、碘、蓝墨水、蒸馏水、蔗糖、琼脂、硼酸等;五、实验步骤常用的测定花粉生活力的方法：形态观察法、碘-碘化钾染色法、蓝墨水染色法和培养基发芽法;1. 形态观察法直接在显微镜下观察花粉的形态,根据花粉的典型性如具有正常的大小、形状、色泽等判断花粉的生活力,即形态正常的花粉有生活力,而一些小的、皱缩的、畸形的花粉不具有生活力;具体方法：将花粉置于载玻片上,在显微镜下观察3个不同视野,要求被检查的花粉粒总数达到100粒以上,计算正常花粉粒占总数的比率;此法简便易行但准确性差,一般只用于测定新鲜花粉的生活力;2. 染色法1 碘-碘化钾染色法①原理：正常的花粉积累淀粉较多,而不正常的花粉则少;据此,可用化学物质染色,根据呈色反应来间接测定花粉的正常与否和花粉生活力的差别;通常正常花粉用I-KI染色后呈蓝色,而发育不良畸形花粉则不积累淀粉,当I-KI染色时呈黄褐色;②I-KI溶液：取g KI溶于5～10mL蒸馏水中,然后加入g I2待全部溶解后,再加蒸馏水至200mL,贮于棕色瓶中备用;③具体方法：取少量花粉撒于载玻片上,加一滴蒸馏水,用镊子使花粉散开,再加一滴I-KI溶液,盖上盖玻片置于显微镜下观察;凡被染色呈蓝色表示具有生活力,呈黄褐色者为发育不良生活力弱的花粉;为了保证实验的准确性,要求观察不同的3个视野,求其平均值,统计花粉生活力;2 蓝墨水染色法①蓝墨水溶液：正常购买的蓝墨水稀释10倍;②具体方法：取少量花粉撒于载玻片上,加一滴蒸馏水,用镊子使花粉散开,再加一滴蓝墨水溶液,盖上盖玻片置于显微镜下观察;凡被染色呈无色时表示具有生活力,呈蓝黑色者为发育不良生活力弱的花粉;为了保证实验的准确性,要求观察不同的3个视野,求其平均值,统计花粉的生活力;3. 培养基发芽法：人为的创造适合于花粉发芽的环境条件,以花粉发芽的情况来鉴定花粉生活力的强弱;1 培养基的制作与接种10%蔗糖+%硼酸+1%琼脂,溶于蒸馏水中,加热煮沸即可;将配好的培养基保持在40℃的水浴锅中保温,即不凝固;用玻璃棒蘸一滴培养基滴在载玻片的凹玻片内,然后用头发沾少量花粉条播;将载玻片放在垫有湿润滤纸的培养皿内或倒扣在培养皿上,并贴上标签花粉品种名称、姓名和日期,将培养皿放于25℃暗培养24h后统计发芽率;2 观察记数在显微镜下观察,每品种观察不同的3个视野,每个视野花粉粒数目≥20粒,求平均值,统计花粉的发芽率;花粉发芽的标准,以花粉管伸长超出花粉直径为准;四、作业1．绘出花粉发芽前、后的形态特征图;2．统计碘-碘化钾染色法和蓝墨水染色法测定花粉生活力的结果,并填写表1;3. 统计培养基发芽法测定花粉生活力的结果,并填写表2;4. 比较花粉生活力测定的不同方法,并分析引起花粉生活力差异的具体原因;表1 染色法测定花粉生活力结果统计表表2 培养基发芽法测定花粉生活力结果统计表。
花粉活力测定的3种办法
精心整理实验16?花粉活力的测定在作物杂交育种、作物结实机理和花粉生理的研究中，常涉及花粉活力的鉴定。
掌握花粉活力快速测定的方法，是进行雄性不育株的选育、杂交技术的改良以及揭示内外因素对花粉育性和结实率影响的基础。
一、花粉萌发测定法【原理】水放???????1.用。
2.20℃条???????1.不同种类植物的花粉萌发所需温度、蔗糖和硼酸浓度不同，应依植物种类而改变培养条件。
???2.此法也可用于观察花粉管在培养基上的生长速度以及不同蔗糖浓度，离体时间，环境条件等因素对花粉活力的影响。
3.不是所有植物的花粉都能在此培养基上萌发，本法适用于易于萌发的葫芦科等植物花粉活力的测定。
二、碘-碘化钾染色测定法多数植物正常的成熟花粉粒呈球形，积累较多的淀粉，I2-KI溶液可将其染成蓝色。
发育不良的花粉常呈畸形，往往不含淀粉或积累淀粉较少，I2-KI溶液染色呈黄褐色。
因此，可用I2-KI溶液染色来测定花粉活力。
【器材与用具】???显微镜；载玻片与盖玻片；镊子；棕色试剂瓶；烧杯；量筒；天平。
???【试剂】-KI300ml。
???I2～3张片??基四氮唑）还原成红色的TTF（三苯基甲??）而使其本身着色，无活力的花粉呼吸作用较弱，TTC 的颜色变化不明显，故可根据花粉吸收TTC后的颜色变化判断花粉的生活力。
【器材与用具】显微镜；载玻片与盖玻片；镊子；恒温箱；棕色试剂瓶；烧杯；量筒；天平。
【试剂】0.5%TTC溶液：称取0.5gTTC放入烧杯中，加入少许95%酒精使其溶解，然后用蒸馏水稀释至100ml。
溶液避光保存，若发红时，则不能再用。
采集任何植物的花粉，取少许放在干洁的载玻片上，加1~2滴0.5%TTC溶液，搅匀后盖上盖玻片，置35℃恒温箱中，10~15min后镜检，凡被染为红色的花粉活力强，淡红次之，无色者为没有活力或不育花粉。
观察2~3张片子，每片取5个视野，统计花粉的染色率，以染色率表示花粉的活力百分率。
花粉生活力测定方法
花粉生活力测定方法花粉生活力测定方法是一种评估人们对花粉过敏的程度和生活质量的指标。
它通过采用定量和定性的方法来测定人体对花粉的反应和影响，以便为患者提供相应的治疗和干预措施。
下面我将详细介绍花粉生活力测定方法的原理和步骤。
首先，花粉生活力测定方法需要进行花粉源的采集和制备。
花粉源可以是空气中的自然环境采集或人工培养的花粉。
采集后，需要将花粉样本进行处理和制备，包括去除杂质和保持花粉的活力。
其次，花粉生活力测定方法中常用的技术是皮试和血清学检测。
皮试是一种常用的检测方法，主要通过在患者皮肤表面划一道小口，然后将一定浓度的花粉溶液滴在皮肤上，观察皮肤是否出现过敏反应，如红肿、瘙痒等。
这种方法简单快捷，可以初步筛查患者的过敏反应。
血清学检测是通过采集患者的血液样本，检测血清中花粉特异性IgE抗体水平来评估过敏反应的程度。
常用的检测方法有酶联免疫吸附试验（ELISA）和免疫荧光试验（IFA），这些方法可以检测到血液中特定花粉过敏原的抗体水平，并根据抗体浓度的高低来评估患者的过敏程度。
除了皮试和血清学检测，还可以进行生活质量评估。
这是一种主观的方法，通常通过问卷调查的方式，询问患者对花粉过敏的影响程度和日常生活质量的变化。
问卷通常包括患者的症状、疾病活动、工作和学习能力、社交活动和睡眠质量等方面的评估，以便评估花粉过敏对患者生活的影响。
最后，花粉生活力测定方法可以通过统计分析和数据处理来得出评估结果。
根据皮试和血清学检测的结果、生活质量评估和患者的症状表现等，可以综合评估花粉过敏的程度和生活质量的变化。
这些评估结果可以帮助医生为患者制定个性化的治疗方案，包括药物治疗、免疫疗法和生活调整等。
综上所述，花粉生活力测定方法是评估人们对花粉过敏的程度和生活质量的一种指标。
通过采用皮试和血清学检测、生活质量评估等方法，可以全面分析患者的过敏反应和生活质量的变化，为患者提供针对性的治疗和干预措施。
这种方法对于花粉过敏的预防和管理具有重要的临床意义。
花粉生活力测定方法研究进展
花粉生活力测定方法研究进展摘要：总结了花粉活力测定的染色法、离体萌发法以及田间授粉法等的原理和应用并分析了各种方法的优缺点。
关键词：花粉花粉活力测定方法花粉是高等植物的雄性配子体，在有性繁殖过程中起到传递雄性亲本的遗传信息。
花粉不仅是植物遗传、育种、进化、生殖的重要研究对象，也是孢粉分析、蜂群培育、药物制造、医疗及生理实验的重要材料。
花粉活力是花粉具有生长、萌发、或发育的能力。
在农业生产及农业常规杂交育种的中，研究花粉的生活力和育性是不可缺少的基础性工作。
农业生产和育种工作通常会遇到花期不一致带来的困难，为解决这一难题，保存花粉的活力成为重要手段，而在贮藏花粉之前必须先检测花粉的活力。
不同种类植物花粉的自然寿命、适宜的贮藏方式及花粉活力适宜的测定方法不同。
因此，掌握花粉活力的检测方法对提高育种效率有较高的作用和意义。
综合前人的研究结果，花粉生活力的检测方法可以分为四大类：①染色法；②萌发测定法；③田间授粉检测法；④形态测定法、无机酸检测法。
1染色法1.1TTC染色法TTC即2,3,5-氯代三苯基四氮唑，它是一种氧化还原染料，水溶液无色。
基本原理是[1]：当TTC渗入细胞后，遇到活细胞里的脱氢酶接受氢离子，由无色的氧化型变成红色还原型不溶于水的化合物，由此来判断花粉的生活力。
具体操作步骤：①配制PH为7.17的磷酸缓冲液。
称取0.832克磷酸氢二钠和0.273克的磷酸二氢钾溶于100ml的蒸馏水中，调整pH为7.17。
②TTC溶液配制。
依据不同植物称取0.02～1.0g的TTC溶于100ml的磷酸缓冲液中，于棕色瓶中黑暗处保存。
③染色。
取少量花粉置于载玻片上，加上一滴TTC溶液，用镊子搅拌均匀，盖上盖玻片，然后放置于35℃的恒温箱中染色15～20min。
④镜检。
于10×10倍镜下观察，凡具有活力的花粉被染成红色，部分丧失活力的呈现粉红色，无色的是的或不育的花粉粒。
凌春英,肖恩等的研究[2]得出常温、黑暗条件下用TTC染色12h可达到较好的观察效果，并认为TTC法是大花蕙兰和墨兰花粉活力测定便捷、有效的方法。
花粉生活力测定的实验反思
花粉生活力测定的实验反思花粉生活力测定是一种常用的实验方法，用于评估花粉颗粒的活力和生长能力。
在这个实验中，我们通过观察花粉萌发的情况、花管的生长情况等指标，可以了解花粉的活力和生长情况。
在实验中，我们使用了不同处理方法，比较不同处理组的结果，以便评估不同处理对花粉活力的影响。
在这次花粉生活力测定的实验中，我们首先收集了待测花粉样本，并进行了一系列前期处理，如消毒、分离等。
接下来，我们将花粉分别置于培养基上，在适当的温度下进行孵育。
孵育结束后，我们对不同处理组的花粉进行观察和记录。
实验中我们设置了多个处理组，包括对照组和不同处理组。
通过对照组和不同处理组的比较，我们可以评估不同处理对花粉活力的影响。
在实验中，我们注意到一些结果和问题，需要进行反思和探讨。
首先，我们应该更加严格控制实验条件，以确保实验的结果可靠和可重复。
例如，在实验过程中，应该精确测量和控制培养基的温度，以确保花粉得到适宜的环境。
此外，我们还应该注意保持培养基的湿度，以防止花粉干燥而影响萌发和生长。
其次，在实验设计方面，我们可以考虑增加更多的处理组和样本量，以提高实验的准确度和可靠性。
通过增加处理组和样本量，我们可以更全面、更准确地评估不同处理对花粉活力的影响，避免个别差异对实验结果的影响。
另外，我们还可以在实验中引入一些新的指标和测定方法，以更全面地评估花粉的活力和生长能力。
例如，我们可以通过测量花粉管长度和分支数量来评估花粉的生长情况，从而更全面地了解花粉的生长能力。
此外，我们还可以通过使用显微镜等设备来观察花粉细胞的构造和内部变化，以进一步了解花粉的活力和生长情况。
最后，在实验中还可以引入一些对照方法，以帮助我们更好地评估花粉活力。
例如，我们可以在实验中设置阳性对照组和阴性对照组，以验证我们实验结果的准确性和可靠性。
通过与阳性对照组和阴性对照组的比较，我们可以确保我们测定的花粉活力是正确的，并排除其他因素对实验结果的影响。
总之，对于花粉生活力测定的实验，我们应该对实验结果进行反思和探讨，以提高实验的准确性和可靠性。
花粉生活力测定方法
花粉生活力测定方法
花粉是植物生殖的重要组成部分，其生活力的测定对于植物繁殖和种子生产具有重要意义。
本文将介绍几种常用的花粉生活力测定方法，希望能够对相关领域的研究者和生产者有所帮助。
首先，最常见的花粉生活力测定方法是离体培养法。
这种方法首先需要收集新鲜的花药，然后在适当的培养基上进行培养，观察花粉的萌发情况来判断其生活力。
离体培养法的优点是操作简单，结果可靠，因此被广泛应用于植物育种和种子生产中。
其次，荧光显微镜法也是一种常用的花粉生活力测定方法。
这种方法利用荧光显微镜观察花粉颗粒的形态和结构，通过判断其内部结构的完整性来评估花粉的生活力。
荧光显微镜法对花粉的观察更加直观，能够提供更多的信息，但需要专业的设备和操作技能。
另外，还有一种叫做染色法的花粉生活力测定方法。
这种方法通过在花粉颗粒上涂抹特定的染料，然后观察染色情况来判断花粉的生活力。
染色法简单易行，可以快速得到结果，但对染料的选择和浓度有一定要求。
除了上述方法，还有一些新兴的花粉生活力测定方法，比如电子显微镜法、流式细胞仪法等。
这些方法在技术上更加先进，能够提供更为精细的数据，但也需要更高的成本和专业的操作技能。
综上所述，花粉生活力的测定对于植物育种和种子生产具有重要意义，而不同的方法各有优劣。
在选择具体的测定方法时，需要根据实际情况和研究目的进行综合考虑，以便选择最适合的方法。
希望本文介绍的内容能够对相关领域的研究者和生产者有所启发，推动相关领域的科研工作和生产实践取得更好的成果。
实验：园艺植物花粉生活力测定
天竺葵柱头上的花粉粒
瑞士摄影师马丁-奥格里利(Martin Oeggerli) 用扫描电子显微镜拍摄的花粉照片
蒂氏荚蒾花粉（灰色) 其中一个已开始萌发
瑞士摄影师马丁-奥格里利(Martin Oeggerli) 用扫描电子显微镜拍摄的花粉照片
勿忘草的花粉 最小的花粉粒之一，直径只有0.005毫米
瑞士摄影师马丁-奥格里利(Martin Oeggerli) 用扫描电子显微镜拍摄的花粉照片
花锦葵属植物的花粉
瑞士摄影师马丁-奥格里利(Martin Oeggerli) 用扫描电子显微镜拍摄的花粉照片
桦树的花粉
瑞士摄影师马丁-奥格里利(Martin Oeggerli) 用扫描电子显微镜拍摄的花粉照片
柳树花粉粒
瑞士摄影师马丁-奥格里利(Martin Oeggerli) 用扫描电子显微镜拍摄的花粉照片
染色者为发育不良、生活力弱的花粉。观察3~4个视野，
五、方法步骤：
（三）花粉生活力试验
3.取另一载玻片，加少量同种待测花粉，然后在花
粉上滴试剂Ⅰ和试剂Ⅱ各一滴，仔细搅匀，盖上盖
玻片，用镊子轻轻压实。经3～4分钟后，放在显微
镜下检查。
有生活力的花粉呈红色或玫瑰色，无生活力的 花粉为黄色或无色，连续观察3～4个视野，分别记 录有生活力及无生活力的花粉数。
银叶树花粉
瑞士摄影师马丁-奥格里利(Martin Oeggerli) 用扫描电子显微镜拍摄的花粉照片
凤梨科植物的花粉
瑞士摄影师马丁-奥格里利(Martin Oeggerli) 用扫描电子显微镜拍摄的花粉照片
银叶树花粉
瑞士摄影师马丁-奥格里利(Martin Oeggerli) 用扫描电子显微镜拍摄的花粉照片
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3、碘－碘化钾法
以碘－碘化钾溶液 （ 0.3g 碘＋ 1.3g 碘 化钾溶于 100ml 蒸馏 水）染色后于显微镜 下观察。
有活力
无活力
五、结果与分析
➢ 1、将培养基法和染色法两种方法测得的结果 列表记录，并计算花粉的生活力。
➢ 2、比较测定花粉生活力三种方法的优缺点。 ➢ 3、绘制一花粉粒发芽形态图。
实验五 花粉发芽试验和 生活力的测定
指导教师：姜喜 2014.6.19
一、实验目的
学习和掌握果树发芽 试验和花粉生活力测 定的技术。
花粉
二、实验原理
果树杂交工作中，往往会遇到父母本花期不遇，必须采 集花粉短暂贮藏，经贮藏的花粉及其生活力如何，必须 经过测定，以保证杂交效果。
正常条件下花粉在雌蕊上萌发的能力，就是花粉的生活 力。
花粉发芽试验观察记载表
品种
培养 基配
方
视野1
视野2
视野3
花粉 总数 (个）
发芽 数(个）
萌发 率(%)
花粉 总数 (个）
发芽 数(个）
萌发 率(%)
花粉 总数 (个）
发芽数 (个）
萌发 率(%)
1
2
3
4
5
花粉活力测定观察记载表
视野1
视野2视野3品种染色方法花粉 总数 (个）
染色 数(个）
生活 力(%)
➢花粉发芽率=发芽花粉总数/花粉总数*100
★ 优点：能够统计出百分率，准确度高 ★ 缺点：操作相对复杂，而且花粉发芽条件与实际不完全相 符易受培养基配方的影响导致结果的偏差。
【注意事项】
1.不同种类植物的花粉萌发所需温度、蔗糖和硼 酸浓度不同，应依植物种类而改变培养条件。
2.此法也可用于观察花粉管在培养基上的生长速 度以及不同蔗糖浓度，离体时间，环境条件等因素 对花粉活力的影响。
3.不是所有植物的花粉都能在此培养基上萌发， 本法适用于易于萌发的植物花粉活力的测定。
4h
密
集
24 h
（二）花粉生活力的测定
1 过氧化物酶法：
具有生活力的花粉含有活跃的过氧化物酶。此酶能利用过 氧化氢使各种多酚及芳香族胺发生氧化而产生颜色，依据颜色 可知花粉有无活性。实验中甲液成分为联苯胺，α-萘酚、碳酸 钠，乙液成分为过氧化氢。
H2O2 + 酚 过氧化氢酶 醌 +H2O
（无色） （红色、玫瑰红色）
将适量花粉置于载玻片上
先滴1滴甲液，再滴1滴乙液
充分反应
显微镜下镜检计数，红色的为有活力的花粉
★优点：染色法用时短，见效快 ★优点：颜色判断易受个人因素影响，导致结果有较大差
别。
【注意事项】
滴加甲液和乙液后，会 产生大量的气泡，待 气泡基本消失后方可 观察。
统计生活力的方法同前。
2 TTC法：
TTC即2、3、5-三苯基四唑氯化物。主要原理在于检验花 粉呼吸过程中脱氢酶的活性。2、3、5-氯化三苯基四氮唑 (TTC)的氧化状是无色的，被氢还原时成红色的TTF。
有活力
（1）取少量花粉放在载玻片上，并在花粉上滴上1~2滴配制液， 用玻璃棒混合盖上盖玻片。 （2）将载玻片置于恒温箱中（35~40℃）约15~20分钟。 （3）在显微镜下观察：凡具有生活力的花粉呈红色，部分丧失生 活力的呈淡红色，无色的是死的和不育的花粉粒。 （4）观察和测定结果：每片观察3个视野，并统计具有生活力的 花粉的百分率。
花粉 总数 (个）
染色 数(个）
生活 力(%)
花粉 总数 (个）
染色数 (个）
生活 力(%)
1
2
3
4
5
四、实验方法与步骤
（一）花粉发芽试验
配置培养基 （ 1%琼脂+0.01%硼酸+ 5%-20%蔗糖 ）
煮沸溶化
用玻棒分装与凹玻片中
播撒花粉
置于培养皿中20-25℃恒温培养数小时
保持湿度
镜检计数
➢显微镜 ➢隔一定时间检查一次 ➢随机调查5个视野，若发现花粉已发芽时，就记录花粉粒总 数和发芽数，算出平均值，将观察结果填入表内。 ➢花粉发芽的标准：以花粉管伸长超出花粉直径为准。若花 粉发芽率在5%以下，为极弱，不能采用。
花粉生活力的高低直接影响植物授粉、受精乃至坐果。
三、实验材料与用具
1、材料: 正在开花的植株花粉 2、器具:
盖玻片 载玻片 培养皿 滴管 镊子 解剖针 吸水纸 水浴锅 恒温箱 天平 烧杯 玻棒 电炉 普通显微镜
3、药品:
蒸馏水 硼酸 蔗糖 琼脂 联苯胺 α-奈酚 碳酸钠 过氧化氢 磷酸氢二钠 磷酸二氢钾 氯化三苯基四氮