实验四、花粉生活力的测定
实验四 花粉生活力的测定
• 一、目的 学会用染色法进行花粉生活力的 测定方法。 二、材料 金丝桃即将开放的花蕾。 三、药品 碘-碘化钾溶液 蒸馏水 四、用具 显微镜、载玻片、盖玻片、滴管、 培养皿、镊子等。
• 五、原理：
• 多数植物正常的成熟花粉粒呈球形，积累 较多的淀粉，I2-KI溶液可将其染成蓝色。发 育不良的花粉常呈畸形，往往不含淀粉或 积累淀粉较少，I2-KI溶液染色呈黄褐色。因 此，可用I2-KI溶液染色来测定花粉活力。
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• 花的解剖结构观察 • 1、依据花被的有无（双被花，单被花，无被花），对 称类型（辐射对称，左右对称，不对称），雄雌蕊有无 （两性花，单性花，无性花，杂性花）分析； • 2、雄蕊的类型（分离雄蕊，单体雄蕊，二体雄蕊，多 体雄蕊，聚药雄蕊）； • 3、雌蕊的类型（单雌蕊，离生雌蕊，合生雌蕊）； • 4、子房的位置 • 子房上位（花下位，花周围）；子房半下位（周位花）； 子房下位（上位花）； • 5、胎座的类型：边缘胎座、侧膜胎座、中轴胎座、特 立中央胎座、基生胎座、顶生胎座
• 【注意事项】 • 此法不能准确表示花粉的活力。因为核期 退化的花粉已有淀粉积累，遇碘呈蓝色反 应。另外，含有淀粉而被杀死的花粉粒遇I2KI也呈蓝色。
• 七、作业 在低倍镜下观察5个视野，计算染色与 未染色的花粉粒数，将计算结果填入表中， 并计算其有生活力的花粉百分数。
测定 花粉 总数 染色数 染色数 有生活力花粉百分 （蓝色） （黄褐色）数（%）
• 六、方法和步骤 • 1、溶液的配制： • I2-KI溶液：取2g KI溶于5～10ml蒸馏水中，加入1g I2，待 完全溶解后，再加蒸镏水300ml。贮于棕色瓶中备用。 • 2、采集花粉 • 采集即将开放的金丝桃的花蕾。 • 3、压片与镜检 • 将花蕾剥开，取一花药于载玻片上，加一滴蒸馏水，用镊 子将花药捣碎，使花粉粒释放，再加1～2滴I2-KI溶液，盖 上盖玻片，在显微镜下观察。凡是被染成蓝色的为含有淀 粉的活力较强的花粉粒，呈黄褐色的为发育不良的花粉粒。 观察2～3张片子，每片取5个视野，统计花粉的染色率， 以染色率表示花粉的育性。 •
花粉生活力测定方法
花粉生活力测定方法花粉是植物生殖过程中非常重要的一环，其生活力的测定对于植物繁殖和生长具有重要意义。
花粉生活力测定方法是通过一系列的实验和观察，来评估花粉的生长和发育能力，从而为植物的繁殖提供科学依据。
本文将介绍几种常见的花粉生活力测定方法，希望能够对相关领域的研究者和爱好者有所帮助。
首先，传统的花粉生活力测定方法是通过染色观察花粉管的生长情况。
首先，将采集到的花粉悬浮在含有营养液的培养基中，然后观察花粉管在一定时间内的生长情况，通过显微镜观察花粉管的长度和形态，从而评估花粉的生活力。
这种方法简单直观，但需要显微镜等设备，且操作较为繁琐。
其次，现代的花粉生活力测定方法中，常用的是荧光显微镜观察法。
通过将花粉与特定的荧光染料结合，使花粉在荧光显微镜下呈现出特定的荧光信号，从而可以清晰地观察花粉管的生长情况。
这种方法操作简便，观察效果明显，对于大规模的花粉生活力测定具有很大的优势。
另外，还有一种常见的花粉生活力测定方法是通过花粉萌发率来评估花粉的生活力。
这种方法是将采集到的花粉悬浮在含有营养液的培养基中，然后观察一定时间内花粉的萌发情况，通过统计萌发的花粉数量来评估花粉的生活力。
这种方法简单易行，可以在较短的时间内获取较为准确的结果。
除了上述几种方法外，还有一些新兴的花粉生活力测定方法，如分子生物学技术的应用、电子显微镜的观察等，这些方法在花粉生活力测定领域也取得了一些重要的进展。
综上所述，花粉生活力测定是植物繁殖和生长研究中的重要内容，而花粉生活力的准确测定则需要科学、准确的方法。
不同的方法各有优劣，研究者可以根据具体的实验目的和条件选择适合的方法进行花粉生活力的测定，从而为植物繁殖和生长研究提供可靠的数据支持。
希望本文介绍的几种常见的花粉生活力测定方法对相关领域的研究者和爱好者有所帮助，也希望在未来的研究中能够有更多更准确的花粉生活力测定方法被发展和应用。
花粉生活力测定方法
花粉生活力测定方法花粉生活力测定方法是一种评估人们对花粉过敏的程度和生活质量的指标。
它通过采用定量和定性的方法来测定人体对花粉的反应和影响，以便为患者提供相应的治疗和干预措施。
下面我将详细介绍花粉生活力测定方法的原理和步骤。
首先，花粉生活力测定方法需要进行花粉源的采集和制备。
花粉源可以是空气中的自然环境采集或人工培养的花粉。
采集后，需要将花粉样本进行处理和制备，包括去除杂质和保持花粉的活力。
其次，花粉生活力测定方法中常用的技术是皮试和血清学检测。
皮试是一种常用的检测方法，主要通过在患者皮肤表面划一道小口，然后将一定浓度的花粉溶液滴在皮肤上，观察皮肤是否出现过敏反应，如红肿、瘙痒等。
这种方法简单快捷，可以初步筛查患者的过敏反应。
血清学检测是通过采集患者的血液样本，检测血清中花粉特异性IgE抗体水平来评估过敏反应的程度。
常用的检测方法有酶联免疫吸附试验（ELISA）和免疫荧光试验（IFA），这些方法可以检测到血液中特定花粉过敏原的抗体水平，并根据抗体浓度的高低来评估患者的过敏程度。
除了皮试和血清学检测，还可以进行生活质量评估。
这是一种主观的方法，通常通过问卷调查的方式，询问患者对花粉过敏的影响程度和日常生活质量的变化。
问卷通常包括患者的症状、疾病活动、工作和学习能力、社交活动和睡眠质量等方面的评估，以便评估花粉过敏对患者生活的影响。
最后，花粉生活力测定方法可以通过统计分析和数据处理来得出评估结果。
根据皮试和血清学检测的结果、生活质量评估和患者的症状表现等，可以综合评估花粉过敏的程度和生活质量的变化。
这些评估结果可以帮助医生为患者制定个性化的治疗方案，包括药物治疗、免疫疗法和生活调整等。
综上所述，花粉生活力测定方法是评估人们对花粉过敏的程度和生活质量的一种指标。
通过采用皮试和血清学检测、生活质量评估等方法，可以全面分析患者的过敏反应和生活质量的变化，为患者提供针对性的治疗和干预措施。
这种方法对于花粉过敏的预防和管理具有重要的临床意义。
花粉生活力
（一）直接检验法
（二）染色鉴定法（TTC法） （三）发芽测定法（培养基培养法） （四）形态鉴定法
二、实验原理：
所以，可根据花粉染不染成红色来
2、3、5-氯化三苯基四氮唑(TTC)
判断花粉有无生命力，从而测定花 的氧化状态是无色的，被氢还原时
粉生活力。
成红色的TTF。
三苯基四唑有毒，操作时要注意安全。
3．用具：显微镜、载玻片、盖玻片等。
四、操作步骤： （1）取少量花粉放在载玻片上，并在花粉上 滴上1～2滴配制液，用解剖针混合后盖上 盖玻片。 （2）置 35 ℃恒温箱中,20～25min 后镜检。 （3）在显微镜（10×10）下观察：凡具有 生活力的花粉呈红色，部分丧失生活力的 呈淡红色，无色的是死的和不育的花粉粒。
TTC+H＋＝TTF
三、试材及用具
1．Байду номын сангаас料：2种不同处理油菜花粉；
2．试剂：配制好的0.2％TTC染液；
1）磷酸缓冲液（100ml）， PH值为7.17
0.832克 磷酸氢二钠
0.273克
磷酸二氢钾，
2）TTC溶液：称取0.2gTTC溶解在100ml的磷
酸缓冲液中，溶液配好后装入棕色滴瓶内。氯化
油菜花粉生活力测定
蒲至恩
1．外地采集来的花粉或杂交时父本花期早
于母本时都要将花粉进行短暂贮藏；
2．自交或远缘杂交时，为了分析结实率或
不结实原因时；
3．为了鉴定雄性不育系时；
4．了解某些杂交技术时，如测定花粉的刺
激等作用，测定受精选择性等。
一、实验目的：
学习花粉生活力测定的方法，学习如
何判断花粉生活力的有无，进而探索
花粉生活力测定方法
花粉生活力测定方法
花粉是植物生殖的重要组成部分，其生活力的测定对于植物繁殖和种子生产具有重要意义。
本文将介绍几种常用的花粉生活力测定方法，希望能够对相关领域的研究者和生产者有所帮助。
首先，最常见的花粉生活力测定方法是离体培养法。
这种方法首先需要收集新鲜的花药，然后在适当的培养基上进行培养，观察花粉的萌发情况来判断其生活力。
离体培养法的优点是操作简单，结果可靠，因此被广泛应用于植物育种和种子生产中。
其次，荧光显微镜法也是一种常用的花粉生活力测定方法。
这种方法利用荧光显微镜观察花粉颗粒的形态和结构，通过判断其内部结构的完整性来评估花粉的生活力。
荧光显微镜法对花粉的观察更加直观，能够提供更多的信息，但需要专业的设备和操作技能。
另外，还有一种叫做染色法的花粉生活力测定方法。
这种方法通过在花粉颗粒上涂抹特定的染料，然后观察染色情况来判断花粉的生活力。
染色法简单易行，可以快速得到结果，但对染料的选择和浓度有一定要求。
除了上述方法，还有一些新兴的花粉生活力测定方法，比如电子显微镜法、流式细胞仪法等。
这些方法在技术上更加先进，能够提供更为精细的数据，但也需要更高的成本和专业的操作技能。
综上所述，花粉生活力的测定对于植物育种和种子生产具有重要意义，而不同的方法各有优劣。
在选择具体的测定方法时，需要根据实际情况和研究目的进行综合考虑，以便选择最适合的方法。
希望本文介绍的内容能够对相关领域的研究者和生产者有所启发，推动相关领域的科研工作和生产实践取得更好的成果。
实验：园艺植物花粉生活力测定
天竺葵柱头上的花粉粒
瑞士摄影师马丁-奥格里利(Martin Oeggerli) 用扫描电子显微镜拍摄的花粉照片
蒂氏荚蒾花粉（灰色) 其中一个已开始萌发
瑞士摄影师马丁-奥格里利(Martin Oeggerli) 用扫描电子显微镜拍摄的花粉照片
勿忘草的花粉 最小的花粉粒之一，直径只有0.005毫米
瑞士摄影师马丁-奥格里利(Martin Oeggerli) 用扫描电子显微镜拍摄的花粉照片
花锦葵属植物的花粉
瑞士摄影师马丁-奥格里利(Martin Oeggerli) 用扫描电子显微镜拍摄的花粉照片
桦树的花粉
瑞士摄影师马丁-奥格里利(Martin Oeggerli) 用扫描电子显微镜拍摄的花粉照片
柳树花粉粒
瑞士摄影师马丁-奥格里利(Martin Oeggerli) 用扫描电子显微镜拍摄的花粉照片
染色者为发育不良、生活力弱的花粉。观察3~4个视野，
五、方法步骤：
（三）花粉生活力试验
3.取另一载玻片，加少量同种待测花粉，然后在花
粉上滴试剂Ⅰ和试剂Ⅱ各一滴，仔细搅匀，盖上盖
玻片，用镊子轻轻压实。经3～4分钟后，放在显微
镜下检查。
有生活力的花粉呈红色或玫瑰色，无生活力的 花粉为黄色或无色，连续观察3～4个视野，分别记 录有生活力及无生活力的花粉数。
银叶树花粉
瑞士摄影师马丁-奥格里利(Martin Oeggerli) 用扫描电子显微镜拍摄的花粉照片
凤梨科植物的花粉
瑞士摄影师马丁-奥格里利(Martin Oeggerli) 用扫描电子显微镜拍摄的花粉照片
银叶树花粉
瑞士摄影师马丁-奥格里利(Martin Oeggerli) 用扫描电子显微镜拍摄的花粉照片
花粉活力测定
花粉活力测定
一、实验原理：
TTC染色法——TTC（2，3，5－三苯基氯化四氮唑）的氧化态是无色的，可被氢还原成不溶性的红色三苯甲潛（TTF）。
用TTC的水溶液浸泡花粉，使之渗入花粉内，如果花粉具有生命力，其中的脱氢酶就可以将TTC作为受氢体使之还原成为红色的TTF；如果花粉死亡便不能染色；花粉生命力衰退或部分丧失生活力则染色较浅或局部被染色。
因此，可以根据花粉染色的深浅程度可鉴定花粉的生命力。
二、实验仪器：载玻片、盖玻片、显微镜、镊子、毛笔、滤纸、培养皿、三角瓶、天平、烧杯、恒温箱、量筒、吸管
三、实验药品：0.5%TTC溶液、琼脂、硼酸、氯化钙、蒸馏水、蔗糖（浓度分别为5%、10%、15%、20%）
四、实验步骤：
TTC法：将采集到的花粉（虞美人、三色堇），取少许放在干洁的载玻片上，加1~2滴0.5%TTC 溶液，搅匀后盖上盖玻片，并用清水做对照，置37℃恒温箱中，30min后镜检，凡被染为红色的花粉活力强，淡红次之，无色者为没有活力或不育花粉。
每片取3个视野，统计花粉的染色率，以染色率表示花粉的活力百分率。
五、实验结果：
TTC法：虞美人花粉活力——26.1%
三色堇花粉活力——23%
六、结果分析：
1、TTC法：三色堇花粉染色在30分钟时观察时基本没有染色，50分钟左右观察，才有明显染色的划分出现，原因可能是花粉对TTC的敏感度不同。
花粉贮藏及花粉生活力的测定
实验四花粉贮藏及花粉生活力的测定花期不遇给杂交工作造成困难，有的园林植物可通过调整花期来解决，有的则不得不进行花粉贮藏，或者从外地寄运花粉。
为了避免杂交工作失误，在使用外地寄来的花粉或经过一段时间贮藏的花粉之前，必须对花粉的生活力进行检测，以便对杂交结果进行分析与研究。
因此我们必须掌握花粉贮藏及花粉生活力测定的原理和技术。
（为什么贮藏花粉？）一、实验目的掌握花粉贮藏及花粉生命力鉴定的方法和原理。
二、实验材料油松、辣椒、一串红、矮牵牛、油茶、油菜等植物的花粉。
三、仪器及药品载玻片、盖玻片、解剖针、镊子、毛笔、干燥器、小指形管、标签、记号笔、显微镜、天平、烧杯、培养皿、滴管、玻璃棒、量筒、电炉、石棉网、冰箱；凡士林、无水氯化钙、蔗糖、琼脂、蒸馏水、硼酸、磷酸二氢钾、磷酸氢二钠、碘、碘化钾、氯化二苯基四氮唑（TTC ）。
四、实验原理花粉在低温（0 ～ 2 ℃）、干燥、黑暗等条件下代谢强度降低，花粉贮藏的原理就是要创造这样低代谢的环境条件，从而延长花粉的寿命。
花粉的形态、花粉中酶的活性以及积累淀粉的多少（淀粉质花粉）通常与其生活力密切相关，因此可以利用花粉的形态观察、过氧化物酶、脱氢酶的活性高低（呼吸）、淀粉的含量以及在人工培养基上花粉管萌发的情况作为鉴定花粉生活力高低的标准。
鉴定花粉生活力的方法很多，概括起来主要有如下几种：1 ．直接测定法将待测花粉直接授粉，然后统计结实情况。
此法最准确，但需时较长，且实验结果易受气候条件的影响。
也可在授粉后隔一定时间切下柱头，在显微镜下压片检查花粉的萌发情况，根据萌发率的高低来鉴定花粉的生活力。
2 ．形态观察法直接在显微镜下观察花粉的形态，根据品种花粉的典型性（如具有正常的大小、形状、色泽等）判断花粉的生活力，即形态正常的花粉有生活力，而一些小的、皱缩的、畸形的花粉不具有生活力。
此法简便易行但准确性差，一般只用于测定新鲜花粉的生活力。
3 ．染色观察法1 ）碘－碘化钾染色法：以碘－碘化钾溶液（0.3g 碘＋1.3g 碘化钾溶于100ml 蒸馏水）染色后于显微镜下观察，花粉被染成蓝色者表示具有生活力，花粉呈黄褐色者不具有生活力（不太准，比如刚死的花粉）。
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实验四、花粉生活力的测定
一、实验目的：通过实验掌握花粉生活力测定的具体技术和方法。
二、实验原理：花粉生活力是指在正常条件下花粉在雌蕊上萌发的能力。
花粉生活力测定在杂交工作中很重要，尤其亲本花期不相同需要从外地采集花粉作父本时，花粉要经过一段较长时间的贮藏运输过程，因此在杂交前应检验花粉的生活力，以免应用无生活力的花粉而造成杂交工作的失败。
三、实验材料：苹果花粉
四、实验用具与试剂：指形管、显微镜、载玻片、盖玻片、凹式载玻片、滴瓶、培养皿、天平、烧杯、玻璃棒、微波炉、滤纸、水浴锅、计数器、镊子；碘化钾（KI）、碘、蓝墨水、蒸馏水、蔗糖、琼脂、硼酸等。
五、实验步骤
常用的测定花粉生活力的方法：形态观察法、碘-碘化钾染色法、蓝墨水染色法和培养基发芽法。
1. 形态观察法
直接在显微镜下观察花粉的形态，根据花粉的典型性（如具有正常的大小、形状、色泽等）判断花粉的生活力，即形态正常的花粉有生活力，而一些小的、皱缩的、畸形的花粉不具有生活力。
具体方法：将花粉置于载玻片上，在显微镜下观察3个不同视野，要求被检查的花粉粒总数达到100粒以上，计算正常花粉粒占总数的比率。
此法简便易行但准确性差，一般只用于测定新鲜花粉的生活力。
2. 染色法
(1) 碘-碘化钾染色法
①原理：正常的花粉积累淀粉较多，而不正常的花粉则少。
据此，可用化学物质染色，根据呈色反应来间接测定花粉的正常与否和花粉生活力的差别。
通常正常花粉用I-KI染色后呈蓝色，而发育不良畸形花粉则不积累淀粉，当I-KI染色时呈黄褐色。
②I-KI溶液：取2.0 g KI溶于5～10mL蒸馏水中，然后加入1.0 g I2待全部溶解后，再加蒸馏水至200mL，贮于棕色瓶中备用。
③具体方法：取少量花粉撒于载玻片上，加一滴蒸馏水，用镊子使花粉散开，再加一滴I-KI溶液，盖上盖玻片置于显微镜下观察。
凡被染色呈蓝色表示具有生活力，呈黄褐色者为发育不良生活力弱的花粉。
为了保证实验的准确性，要求观察不同的3个视野，求其平均值，统计花粉生活力。
(2) 蓝墨水染色法
①蓝墨水溶液：正常购买的蓝墨水稀释10倍。
②具体方法：取少量花粉撒于载玻片上，加一滴蒸馏水，用镊子使花粉散开，再加一滴蓝墨水溶液，盖上盖玻片置于显微镜下观察。
凡被染色呈无色时表示具有生活力，呈蓝黑色者为发育不良生活力弱的花粉。
为了保证实验的准确性，要求观察不同的3个视野，求其平均值，统计花粉的生活力。
3. 培养基发芽法：
人为的创造适合于花粉发芽的环境条件，以花粉发芽的情况来鉴定花粉生活力的强弱。
(1) 培养基的制作与接种
10%蔗糖+0.01%硼酸+1%琼脂，溶于蒸馏水中，加热煮沸即可。
将配好的培养基保持在40℃的水浴锅中保温，即不凝固。
用玻璃棒蘸一滴培养基滴在载玻片的凹玻片内，然后用头发沾少量花粉条播。
将载玻片放在垫有湿润滤纸的培养皿内或倒扣在培养皿上，并贴上标签（花粉品种名称、姓名和日期），将培养皿放于25℃暗培养24h后统计发芽率。
(2) 观察记数
在显微镜下观察，每品种观察不同的3个视野，每个视野花粉粒数目≥20粒，求平均值，统计花粉的发芽率。
花粉发芽的标准，以花粉管伸长超出花粉直径为准。
四、作业
1．绘出花粉发芽前、后的形态特征图。
2．统计碘-碘化钾染色法和蓝墨水染色法测定花粉生活力的结果，并填写表1。
3. 统计培养基发芽法测定花粉生活力的结果，并填写表2。
4. 比较花粉生活力测定的不同方法，并分析引起花粉生活力差异的具体原因。
表1 染色法测定花粉生活力结果统计表
表2 培养基发芽法测定花粉生活力结果统计表。