无菌操作和纯培养技术
名词解释
1、Pure culture：微生物学中把从一个细胞或一群相同的细胞经过培养繁殖而得到的后代，称纯培养。
所得培养物成为纯培养物。
1.无菌技术：在分离、转接及培养纯培养物时防止其被其他微生物污染，自身也不污染操作环境的技术称为无菌技术。
2.菌落：固体培养基中，单个或少数细菌细胞生长繁殖后，会形成以母细胞为中心的一堆肉眼可见、有一定形态构造的子细胞集团是菌落。
3.平板：是被用于获得微生物纯培养的最常用的固体培养基形式，是冷却凝固后固体培养基在无菌培养皿中形成的培养基固体平面称作平板。
4.发酵：发酵是指在无氧条件下，底物脱氢后产生的还原力[H]不经过呼吸链传递而直接交给某一内源氧化性中间代谢产物的一类低效产能反应。
5.培养基：人工配制的、适合微生物生长、繁殖和产生代谢产物用的混合营养基质。
1．微生物：是一类个体微小、结构简单的低等生物。
包括原核微生物、真核微生物以及属于非细胞类的病毒和亚病毒。
2．病毒：病毒粒子指成熟的、结构完整和有感染性的单个病毒,基本成分为核酸和蛋白质。
3．营养：指生物体从外部环境中摄取对其生命活动必需的能量和物质，以满足正常生长和繁殖需要的一种最基本的生理功能。
４．无氧呼吸: 底物按常规方式脱氢后，经部分呼吸链递氢，最终由无机化合物或有机化合物接受氢的过程称无氧呼吸。
5．同步生长：这种通过同步培养而使细胞群体处于分裂步调一致的状态，就称同步生长。
1.微生物学：研究微生物形态构造以及生命活动规律的学科叫做微生物学。
2.噬菌斑:由于噬菌体粒子对敏感菌宿主细胞的侵染和裂解，而在菌苔上形成具有一定大小、形状、边缘的透明圈，称为噬菌斑。
3.溶源性: 温和噬菌体侵入宿主细胞后，由于基因组整合到宿主细胞的基因组上，与宿主细胞 DNA 同步复制，因此，一般情况下不引起宿主细胞裂解，这称为溶源性。
4.转化：受体菌接受供体菌的DNA片段而获得部分新的遗传性状的现象，就称转化。
5.消毒：消毒是一种采用较温和的理化因素，仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的病原菌。
纯培养的名词解释
纯培养的名词解释在生物学领域中，纯培养（Pure Culture）是指由单一个体繁殖或分离出的细胞或微生物群体，通过无菌技术在无外界干扰的条件下，在含有足够营养的培养基上，生长和繁殖的过程。
纯培养是深入研究微生物特性、功能和代谢途径的重要手段，它为微生物学和许多其他相关领域的研究提供了基础。
一、纯培养的重要性纯培养的主要目的是得到单一物种的细胞群体，以便对其进行准确的观察、实验和研究。
在混合培养中，不同菌种之间的相互作用和竞争会干扰对其中某一菌种的研究，因此，通过纯培养可以排除这种干扰，使得研究者能够更好地解读和理解目标物种的特性。
通过纯培养，研究者能够获得物种的纯净代谢产物和代谢产物的准确浓度，这对于开发新药、合成有机化合物和工业生产过程的优化具有重要意义。
同时，纯培养还有助于深入研究微生物在环境中的作用、微生物生态学和生命科学中的基础研究等领域。
二、纯培养的实施方法纯培养的实施需要严格的无菌技术，以防止外界杂菌的污染。
常见的纯培养方法包括传代分离、单菌细胞操作和单菌落筛选等。
传代分离是通过连续传代并筛选细胞群体中的单个细胞，以获得单一细胞的纯培养。
这需要在含有足够营养的培养基上进行适当稀释，使得单个菌落得到足够的空间进行生长。
然后，通过形态学观察和显微镜检查，选择单个菌落来扩大培养。
这个过程需要多次分离和培养，并经过一系列确认实验，确保得到的细胞群体是纯种的。
单菌细胞操作是一种特殊的纯化技术，它限制了无菌条件下进行分离和操作。
该方法适用于处理数量较少的细菌，以及对细菌进行特殊处理或分析的情况。
单菌细胞操作可以采用显微技术、毛细管技术或微型细胞微操作等方法来实现。
单菌落筛选是通过选择含有单个细胞群体的菌落，将其分离、培养和纯化的过程。
这种方法在准备菌落时要求高度的技术操作和专业知识，通过对菌落的生长形态、生理特性或遗传特性的观察，进行单菌落的筛选和纯化。
三、纯培养的应用纯培养在微生物学和其他相关领域中应用广泛。
环境工程微生物学-微生物的纯培养技术
微生物的纯培养技术微生物的纯培养技术纯培养（pure culture）是指在同一培养物或一管菌种中，所有的细胞或孢子都是生物分类中的同一个种。
严格说，是在培养基上由一个细胞分裂、繁殖所产生的后代。
自然界的微生物均混杂存在，为获得某种微生物，需采取一系列措施将其从混杂菌群中分离为纯培养；由于周围环境、空气、用具、操作者体表均有大量微生物存在，为获得和保持纯培养，在分离、培养过程中，必需严格操作，以防止杂菌污染。
纯培养技术包括灭菌、消毒技术和分离接种过程的无菌操作技术。
灭菌、消毒培养基、器皿、接种工具的彻底灭菌，环境及某些材料的消毒，是防止杂菌污染，保证纯培养的关键步骤。
常用方法如下。
干热灭菌通过加热使蛋白质变性或凝固，或直接烧死菌体。
又分为：1.烧灼灭菌：直接用火焰烧灼用具上的杂菌，如接种时在火焰上灼烧接种工具、试管口、瓶口等，或焚烧废弃的带菌物品。
2.烘箱灭菌：玻璃器皿、接种用具、手术器械经包装后，放电热干燥箱中，升温至160～170℃，1～2小时，可彻底杀灭杂菌。
灭菌后的物品保持干燥，带包装存放备用，不易污染。
但应注意温度及时间均不可超过上述规定，否则包装纸被烤焦，不宜使用。
湿热灭菌直接煮沸或用饱和水蒸汽的高温进行灭菌或消毒。
常用的方法有高压蒸汽灭菌、间歇灭菌、巴斯德灭菌、煮沸消毒等。
1.高压蒸汽灭菌（autoclaving）：亦称饱和蒸汽灭菌。
是医疗保健、发酵工业及微生物实验、科研中常用的灭菌方法。
利用水的沸点随水蒸汽的压力增加而上升所产生的高温，达到灭菌的目的。
常用的灭菌装置为高压灭菌锅，是用铝、铁等金属制成的可密闭容器，可承受一定压力（一般耐压为5公斤/厘米2），分为手提式、立式及卧式等。
加热后锅底的水不断产生蒸汽，待冷空气排除后，使完全密闭，温度即可随蒸汽压力而上升。
常用于培养基、水等灭菌，1.05公斤/厘米2（15磅/英寸2），即温度121℃，15～20分钟即可。
使用高压锅在升压前必须充分排除冷空气，才能保证压力上升与温度上升相一致；到达所需压力（温度）必须保持恒温，到达恒温时间后，切断电源，待压力缓缓下降至零点，方可排汽、开盖。
微生物的基本培养技术讲义高二下学期生物人教版选择性必修3
一微生物的基本培养技术【知识链接】一、培养基的配制1.培养基的概念:人们按照微生物对营养物质的不同需求,配制出供其生长繁殖的营养基质——培养基,用以培养、分离、鉴定、保存微生物或积累其代谢物。
2.培养基的种类:3.营养组成:各种培养基一般都含有水、碳源、氮源和无机盐,此外还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及O2的需求。
4.培养基特殊需求:(1)培养乳酸杆菌时,在培养基中添加维生素。
(2)培养霉菌时,将培养基调至酸性。
(3)培养细菌时,将培养基调至中性或弱碱性。
(4)培养厌氧微生物时,需要提供无氧的条件。
二、无菌技术1.目的:防止实验室的培养物被杂菌污染(获得纯净培养物);有效避免操作者自身被微生物感染。
2.关键:防止杂菌污染。
3.常见方法:(1)概念:①消毒:使用较为温和的物理、化学或生物等方法杀死物体表面或内部的一部分微生物(不包括芽孢和孢子)。
②灭菌:使用强烈的理化方法杀死物体内外所有的微生物(包括芽孢和孢子)。
(2)类型与方法:连一连:将无菌技术类型、常用方法和适用对象用线连起来。
三、微生物的纯培养1.微生物纯培养的概念:由单一个体繁殖所获得的微生物群体称为纯培养物,获得纯培养物的过程就是纯培养。
2.酵母菌的纯培养:3.基于对酵母菌接种过程的理解,下列接种过程正确的顺序是baefcgd。
知识点一培养基的配制1.培养基的种类、特点及作用的分析:【特别提醒】常见选择培养基举例①缺少氮源的培养基可以筛选利用大气中N2的微生物。
②含青霉素的培养基可淘汰细菌,筛选出真菌。
③无有机碳源的培养基可筛选出自养生物。
2.培养基的成分、功能及来源分析:【特别提醒】有关培养基营养物质的三点提醒(1)培养不同的微生物所需要的营养物质可能不同。
①自养型微生物的培养基主要以无机营养为主。
②异养型微生物的培养基主要以有机营养为主。
(2)微生物需要补充生长因子,是由于缺乏合成这些物质所需要的酶或合成能力有限。
(3)微生物需要量最大的是碳源,能合成含碳有机物的是自养型,反之则为异养型。
纯培养名词解释
纯培养名词解释纯培养（Pure Culture）是指在无菌条件下，从单一菌落中分离并培养纯单种微生物的过程。
纯培养是微生物学研究的基础，它可以得到纯净的微生物种群，方便对其进行病原性、生理生化、遗传学等方面的研究。
纯培养的方法通常包括进行无菌采集、分离与转接、纯化和鉴定等步骤。
首先，采集样品时需要保持无菌状态，通常采用无菌的器皿、工具及培养基等。
样品一般来源于土壤、水体、食品、医学样本等。
采集时需要避免与外界环境接触，以免引入其他细菌或真菌。
其次，分离与转接纯培养基本上是利用分离技术将微生物从样品中分离出来，并将其转移到无菌培养基上进行培养。
常用的分离技术有稀释平板法、涂布法和过滤法等。
通过分离技术可以得到单一菌落的微生物。
然后，纯化是通过进行连续传代的方法去除混合菌种中的杂交菌，使培养物中只含有目标菌种。
纯化的过程通常包括在无菌培养基上进行单菌落划线传代、穿透刺细胞法、摇涡洗菌法等步骤。
最后，鉴定纯培养的微生物是通过形态学、生理生化特性、生殖方式、抗生素敏感性、基因测序和酶学等方面来确定其分类和鉴别。
鉴定的目的是为了确定纯培养物的物种，以便在后续的研究中使用。
纯培养的优点是可以得到单一菌种，便于进行微生物学研究。
它可以用于研究微生物的生长特性、生态学特征、代谢途径和遗传机制等。
此外，纯培养还有利于微生物的应用研究，如产酶菌株的筛选、发酵工程的构建和微生物治疗的开发等。
但是，纯培养也存在一些问题。
因为培养条件的限制，一些微生物可能无法在实验室中成功培养纯种。
此外，纯培养中的微生物往往是不自然的生境，因此一些微生物的生长特性和生态学特征可能会有所改变。
此外，纯培养的方法以及鉴定纯培养物的技术也需要不断改进和提高。
总之，纯培养是微生物学研究的基础，通过纯培养可以得到纯净的微生物种群，为后续的研究提供基础。
纯培养的方法和技术也在不断发展和改进，以适应微生物学研究的需要。
医学组培知识点总结
医学组培知识点总结一、医学组织培养的基本原理医学组织培养的基本原理是将微生物放置在一定条件下的培养基上，利用培养基中的营养物质和适宜的生长条件，使微生物进行生长和繁殖。
培养基中的成分通常包括碳源、氮源、微量元素、生长因子、缓冲剂、水和不含有抑制细菌生长的物质。
根据不同的微生物，在不同的温度、湿度和氧气条件下进行培养。
二、医学组织培养的基本流程1. 选择合适的培养基：根据微生物的特性和需要培养的目的，选择适合的培养基，例如常用的富养分培养基、选择性培养基、富集培养基等。
2. 准备培养基：将所需的培养基称量、溶解、灭菌等操作，确保培养基的质量和无菌性。
3. 分装培养基：将培养基分装到培养皿或试管中，根据需要进行灭菌和冷却。
4. 样本采集：从需要检测的样本中采集微生物，根据需要进行前处理，如悬浮、离心、稀释等。
5. 接种样本：将处理过的样本接种到培养基上，然后进行彻底均匀地涂布，使细菌均匀地分布于培养基中。
6. 培养过程：将接种好的培养皿或试管放置在适宜的温度和湿度条件下，进行培养。
7. 观察生长：在适当的时间间隔内观察培养皿或试管中是否有生长，根据生长的特点确定微生物的类型。
三、医学组织培养的常见技术1. 纯培养技术：将纯种的微生物接种到培养基上，使其进行单一种类的生长，以获取纯种培养物。
2. 混合培养技术：将多种微生物共同接种到同一培养基上，进行共同生长。
3. 表层培养技术：将微生物接种到培养基表层，以观察其在表层的生长特点。
4. 深层培养技术：将微生物接种到培养基深层，以观察其在深层的生长特点。
四、医学组织培养的应用1. 临床诊断：通过培养微生物，可对疑似感染病例进行确诊，指导临床治疗方案的制定。
2. 药敏试验：通过培养微生物，观察其对不同抗生素的敏感性，为临床选择合适的抗生素提供参考。
3. 感染病原体鉴定：通过培养微生物，可以对感染病原体进行鉴定，为感染病原体的研究提供可靠的实验数据。
4. 疫情监测：通过培养微生物，可以对疫情的发生和传播进行监测，及时采取控制措施。
微生物检验的基本操作技术
微生物检验的基本操作技术一、无菌操作技术1、定义是指在执行实验过程中，防止一切微生物侵入机体和保持无菌物品及无菌区域不被污染的操作技术和管理方法；无菌操作技术是微生物实验的基本技术，是保证微生物实验准确和顺利完成的重要环节。
2、内容无菌操作技术主要包括两方面：1）创造无菌的培养环境。
包括提供密闭的培养容器、培养容器的灭菌、培养基的灭菌等；2）在操作和培养过程中防止一切其它微生物的侵入的措施。
包括紫外线杀菌、甲醛熏蒸、超净台的消毒与检测、操作工具、器皿灭菌、操作方法等。
3、无菌操作原则1）在执行无菌操作时，必须明确物品的无菌区和非无菌区，接种时必须穿工作服、戴工作帽，应在进无菌室前用肥皂洗手，然后用75%酒精棉球将手擦干净；2）在操作前20〜30分钟要先启动超净台和紫外灯，进行接种所用的吸管、平皿及培养基等必须经消毒灭菌，打开包装未使用完的器皿，不能放置后再使用，金属用具应高压灭菌或用95%酒精点燃烧灼3次后使用。
严禁用手直接拿无菌物品，如瓶塞等，而必须用消毒的钳、镊子等；3）从包装中取出吸管时，吸管尖部不能触及外露部位，使用吸管接种于试管或平皿时，吸管尖不能触及试管或平皿边；4）接种样品、转种细菌必须在酒精灯前操作，接种细菌或样品时，吸管从包装中取出后及打开试管塞都要通过火焰消毒；5）接种环或接种针在接种细菌前应经火焰烧灼全部金属丝，必须时还要烧到环和针与杆的连接处；6）吸管吸取菌液或样品时，应用相应的橡皮头吸取，不得直接用口吸。
倾倒平板应在超净台内操作，并且在开启和加盖瓶塞时需反复用酒精灯烧。
二、无菌操作的环境要求1、无菌室（1）无菌室的结构：更衣间、缓冲间、操作间；(2)无菌室的消毒和防污染■每日(使用前)紫外线照射(0.5~1小时)；•每月用新洁尔灭擦拭地面和墙壁一次的方式进行消毒；•每季度用甲醛、乳酸、过氧乙酸熏蒸(2小时)，特殊情况下可增加熏蒸频次。
(3)无菌室使用要求①无菌室内应保持清洁，工作后用2%-3%煤酚皂溶液消毒，拭擦工作台面，不得存放与实验无关的物品；②无菌室使用前后应将门关紧，打开紫外线，如采用室内悬吊紫外灯消毒时，需30W紫外灯，距离在1.0m处，照射时间不少于30min，使用紫外灯，应注意不得直接在紫外线下操作，以免引起损伤，灯管每隔两周需用酒精棉球轻轻拭擦，除去上面灰尘和油垢，以减少紫外线穿透的影响；③处理和接种食品标本时，进入无菌室操作，不得随意出入，如需要传递物品，可通过小窗传递。
人教(2019)生物选择性必修三(学案+练习)：微生物的基本培养技术
人教(2019)生物选择性必修三(学案+练习)微生物的基本培养技术1．培养基(1)概念：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。
(2)种类①按物理状态可分为液体培养基和固体培养基。
②按功能可分为选择培养基和鉴别培养基。
(3)成分：各种培养基一般都含有水、碳源、氮源和无机盐，此外还要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的需求。
2．无菌技术(1)含义：在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法。
(2)常用方法3．微生物的纯培养(1)概念：由单一个体繁殖所获得的微生物群体是纯培养物，获得纯培养物的过程就是纯培养。
(2)过程：包括配制培养基、灭菌、接种、分离和培养等步骤。
(3)常用接种方法：平板划线法和稀释涂布平板法。
(4)实例——酵母菌的纯培养1．培养基只能用以培养、分离、鉴定、保存微生物，不能用以积累其代谢物。
(×) 2．由单一个体繁殖所获得的微生物群体称为纯培养物。
(√) 3．经高压蒸汽灭菌后的培养基，要冷却至50 ℃左右时，才能在酒精灯火焰附近倒平板。
(√) 4．平板划线时要注意将最后一次的划线与第一次的划线相连。
(×)1．常见物品的消毒或灭菌方法(1)消毒方法及适用对象(2)灭菌方法及适用对象2．平板划线操作的注意事项(1)灼烧接种环，待其冷却后才能伸入菌液，以免温度太高杀死菌种。
(2)第二次及其以后的划线操作总是从上一次划线末端开始，能使微生物的数目随着划线次数的增加而逐渐减少，最终得到由单个细菌繁殖而来的菌落。
(3)划线时最后一区不要与第一区相连。
(4)划线时用力大小要适当，防止用力过大将培养基表面划破。
(5)操作第一步即取菌种之前及每次划线之前都需要对接种环进行火焰灼烧灭菌，划线操作结束时，仍需灼烧接种环，每次灼烧的目的如下表：考向1| 培养基的成分与功能的分析1．下列有关培养基的叙述，正确的是( )A ．培养基是为微生物的生长繁殖提供营养的基质B ．培养基中都只含有碳源、氮源、水和无机盐C ．固体培养基中加入少量水即可制成液体培养基D ．微生物在固体培养基表面生长，可形成肉眼可见的单个细菌繁殖而来的菌落A 解析：培养基是为微生物的生长繁殖提供碳源、氮源、水和无机盐等营养的基质，A 正确；微生物培养基的主要营养物质有碳源、氮源、水和无机盐等，有的还需要生长因子等特殊的营养，固体和半固体培养基需要琼脂，液体培养基不需要琼脂，B 错误；液体培养基中加入琼脂可制成固体培养基，C 错误；微生物在固体培养基上生长时，可以形成肉眼可见的菌落，但不一定是单个细菌繁殖而来的，D错误。
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1. 利用选择平板进行直接分离
待分离的微生物生长
其它微生物的生长被抑制
高温下培养：分离嗜热细菌 培养基中不含N：分离固氮菌
培养基加抗生素：分离抗性菌
1. 利用选择平板进行直接分离
待分离的微生物的生 长特征明显不同于其 它微生物
待分离的微生物的生 长特征明显不同于其 它微生物
酪素平板：分离蛋白酶产 生菌
3.相差显微镜
迂回螺菌
(×210)
肉毒梭菌
(×600)
草履虫
(×100)
4.荧光显微镜
大肠杆菌 （×600）
草履虫 （×125）
鞭毛虫 （×1000）
藤黄微球菌 蜡状芽胞杆菌
5.透射电子显微镜
深红螺菌 （相差） ×600
深红螺菌 (TEM) ×100 000
人类流感病毒 (TEM) ×280 000
1) 物镜
0.5 λ
能分辨的最小距离（D）= ———— n sin θ 数值孔径（NA） n：玻片与物镜间介质的折射率 θ:为物镜镜口角的半数，它取决于物镜的直径和 工作距离
低倍镜
高倍镜
油镜（OI）
1) 物镜
用香柏油取代空气的作用：
② 提高显微镜的 分辨率
2) 目镜
目镜不可以提高分辨率
二. 用固体培养基获得纯培养
纯培养( pure culture )
只有一种微生物的培养物。微生物学中通常将由一个 细胞生长、繁殖所形成的群体称为纯培养。 Nhomakorabea 自然状态
纯培养
纯培养技术
把某种特定的（目标）微生物从自然混杂存在的状态中 分离、纯化出来，以便被研究和利用。
二. 用固体培养基获得纯培养
平皿（Petri dish ） 由玻璃或透明塑料制成的圆形皿底和皿 盖组成，皿盖可覆盖于皿底之上，防止 空气中微生物的污染。 培养 平 板（ culture plate ） 常简称为平板，指固体培养基 倒入无菌平皿，冷却凝固后所 形成的培养基平面。
待分离的微生物的生 长特征明显不同于其 它微生物
刚果红平板：分离纤维素 酶产生菌
待分离的微生物的生 长特征明显不同于其 它微生物
淀粉平板：分离淀粉酶产 生菌
2. 富集培养
取样
“投其所好” （液体培养）
特定的环境条件培养
适应于该条件的微生物旺盛生长
待分离微生物在群落中的数量大大增加
选择培养基分离到所需的特定微生物
涂布平板法培养结果
2. 稀释倒平板法
对好氧菌和热敏感菌效 果不好 即可定性，又可定量， 用途广泛
3. 平板划线法
3. 平板划线法
Mixed culture
Pure culture
画完一个区 域后，应将接 种环灼烧后， 再进行划线
画完一个区域后，应将接种环灼烧后，再进行划线 一般A＜B ＜ C ＜ D，且各区夹角一般为120°
1) 物镜
用香柏油取代空气的作用：
空气 当光线从其 n=1.0 ① 增加视野 它介质射入空 照明度，改善 玻璃 n=1.50 气时，折射角 观察效果 大于入射角 香柏油 n=1.52
1) 物镜
用香柏油取代空气的作用：
显微镜分辨 率示意图
1) 物镜
0.5 λ
能分辨的最小距离（D）= ———— n sin θ
革兰氏阳性菌等电点：2~3
革兰氏阴性菌等电点：4~5
2. 富集培养
加入滤纸条的 液体培养基
刚果红平板
图 利用富集培养技术从土壤中分离纤维素降解微生物
2. 富集培养
图 利用富集培养技术从土壤中分离能降解对羟基苯甲酸的微生物
2.2 显微镜和显微技术
一. 显微镜种类及其原理
1.普通光学显 微镜
1) 物镜
低倍镜
高倍镜
油镜（OI）
镜头和玻片间以 香柏油 代替空气
Petri dish
culture plate
二. 用固体培养基获得纯培养
菌 落 （colony）
单个微生物在适宜的固体培养基表面或内部 生长、繁殖到一定程度可以形成肉眼可见的、 有一定形态结构的子细胞生长群体。
菌落
二. 用固体培养基获得纯培养
菌 落 （colony）
单个微生物在适宜的固体培养基表面或内部 生长、繁殖到一定程度可以形成肉眼可见的、 有一定形态结构的子细胞生长群体。
适用厌氧微生物的分离
三. 用液体培养基分离纯培养
顺序稀释，高度稀释，使一支试管中分配不到一 个微生物。
采用稀释法进行液体分离，必须在同一个稀释 度的许多平行试管中，大多数（一般应超过95%） 表现为不生长。
不生长管 生长管
采用稀释法进行液体分离，必须在同一个稀释 度的许多平行试管中，大多数（一般应超过95%） 表现为不生长。
压滴法 悬滴法 1.活体观察
菌丝埋片法
插片法
适于放线菌、霉菌
小培养法
光学显微镜的制样
2.染色观察
简单染色 正染色 鉴别染色 1.死菌 负染色：荚膜染色等 2.活菌：美兰等 革兰氏染色 芽孢染色 抗酸性染色 姬姆萨染色
大肠杆菌
金黄色葡萄球菌
肺炎链球菌
常用染料
碱性染料 美兰、结晶紫、孔雀绿、碱性复 红等（染料离子带正电） 酸性染料 伊红、酸性复红、刚果红等（染 料离子带负电）
微生物的纯培养和显微技术
微生物学基本实验技术
显微技术
染色技术
无菌技术 培养基制备 消毒灭菌 分离纯化 菌种保藏
微生物学基本实验技术
1
2
3
无菌技术
纯培养 技术
显微技术
？
？
？
2.1 微生物的分离和纯培养
一、无菌技术(aseptic technique)
无菌技术
在分离、转接及培养纯培养物时防止其 被其他微生物污染，其自身也不污染操作环 境的技术
四. 单细胞（孢子）分离
究反行用 中比。单 采，难细 用限度胞 。于与分 高细离 度胞器 专或， 业个在 化体显 的的微 科大镜 学小下 研成进
五. 选择培养分离 （固体培养基分离）
根据某种微生物的生长需要，设计一套特定环境
条件使之特别适合这种微生物的生长，以便能够从 自然界混杂的微生物群体中把这种微生物选择培养出来， 这种通过选择培养进行微生物纯培养分离的技术称为选 择培养分离。
二. 用固体培养基获得纯培养
菌 落 （colony）
霉菌
单个微生物在适宜的固体培养基表面或内部 生长、繁殖到一定程度可以形成肉眼可见的、 有一定形态结构的子细胞生长群体。
酵母菌 酵 母 菌
金黄色葡萄球菌 Staphylococcus aureus
枯草芽孢杆菌 Bacillus subtilis
大小、形状、隆
2.1 微生物的分离和纯培养
一、无菌技术(aseptic technique)
无菌技术
灭 菌
分离、培养微 生物的器具不 含任何微生物
无菌操作
转接时防止其 它微生物污染， 也防止污染环 境
无菌技术
高压蒸汽灭菌
灭 菌
分离、培养 微生物的器 具不含任何 微生物
高温干热灭菌 高温灼烧 过滤除菌
紫外线照射等
♪ 静 ♪ 快
关好门窗, 避免空气流动过快 不宜四处走动 操作者不讲话,他人也不要在操作处讲话 操作熟炼 动作快速
♪ 轻
打开或盖上 瓶口的动作要 轻 接种操作动 作要轻
二. 用固体培养基获得纯培养
培养物(culture)
在一定的条件下培养、繁殖得到的微生物群体。
空气中的微 生物
6.扫描电子显微镜
金黄色葡萄球菌 （×32 000）
脊螺旋体 （×6000）
二. 显微观察样品的制备
分辨率 : 放大 : 反差: 能辨别两点之间最小距离的能力 放大倍数 被观察物区别于背景的程度 被观察物区别于背景的程度 样品制备是显微技术的一个重要环节，直接影响 着显微观察效果的好坏
光学显微镜的制样
涂布平板法 平板划线法 稀释摇管法
平板分离
（最常用）
1 mL 1.dilute sample 1 mL 9 mL
Original sample
10-1 10-2
10-3 10-4 10-5 10-6
2. plate out 0.1 mL
1. 涂布平板法
使用较多的常规方法， 但有时涂布不均匀 即可定性，又可定量， 用途广泛
Mixed culture
Swab from sole of shoe 鞋底试样
Oral swab 口腔试样
Each colony was examined microscopically
2.1 微生物的分离和纯培养
一、无菌技术(aseptic technique)
无菌技术
在分离、转接及培养纯培养物时防止其 被其他微生物污染，其自身也不污染操作环 境的技术
This is an example of how NOT to streak for isolation. Scribbling is not streaking, and most likely will not result in isolated colonies.
4. 稀释摇管法
单菌落
光学显微镜一般配置的最大放大倍数： 目镜：10 ~ 15 ╳ 物镜： 100 ╳ 总放大倍数 1000~1500 ╳
思考： 放大倍数为400倍的两组镜头，观察效果
是否相同？（1）目镜10×，物镜40×；（2）目镜 4×，物镜100×
2. 暗视野显微镜
梅毒螺旋体
(×500)
团藻和绿藻
(×175)
无菌技术