柱层析实验报告
柱层析实验报告.doc
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柱层析实验是一种分离和纯化混合物的技术，利用不同物质在柱层析填料上的吸附性能差异，通过逐步洗脱来获得纯品。
本实验以小麦胚芽中的皂苷为主要研究对象，通过柱层析方法提取和纯化皂苷。
实验步骤：
1. 制备填料溶液：将0.5克硅胶和正己烷按1：10的比例配制成1%的硅胶溶液。
2. 准备样品：将10毫克小麦胚芽粉末加入10毫升甲醇中，超声提取30分钟，离心10分钟，取上清液作为实验样品。
3. 柱层析操作：使用玻璃柱装填1.5毫升硅胶填料，以极性小的正己烷为移液相，以甲醇为静相，样品用滴定管加入玻璃柱，分别收集不同分离峰的组分。
4. 进行TLC鉴别：将分离峰组分涂于TLC板上，以正己烷和甲醇为展开剂，在紫外灯下观察其色谱带。
实验结果：
实验得到了3个分离峰组分，分别对应TLC上的3个色谱带。
经过比较和鉴别，第1个分离峰为脂肪酸甲酯，第2个分离峰为皂苷，第3个分离峰为芦丁。
实验中使用的柱层析操作可在短时间内对小麦胚芽中的皂苷进行有效分离和纯化。
柱层析方法可以用于许多化学研究和工业生产中，例如生物化学、制药和化妆品等领域。
实验中需要注意的是，柱层析操作时不应以过量样品洗脱柱层析填料，否则可能引起柱塞，而且应适当控制移液相和静相的选择和比例，以达到较好的分离和纯化效果。
总之，本实验通过柱层析的方法成功分离和纯化了小麦胚芽中的皂苷，为后续研究和应用提供了基础支持。
柱层析实验报告
柱层析实验报告
柱层析实验是一种常用的分离和纯化化合物的方法，通过不同物质在固定相和
流动相中的分配系数不同，实现化合物的分离和纯化。
本次实验旨在通过柱层析技术，从混合物中分离出两种化合物，并对分离后的化合物进行鉴定和分析。
首先，我们准备了柱层析实验所需的仪器和试剂，包括柱层析柱、流动相、固
定相、待分离混合物等。
然后，我们按照实验步骤依次进行操作，首先是将固定相填充至柱层析柱中，然后将待分离混合物溶解于适当的溶剂中，使其能够在柱层析柱中均匀分布。
接下来，我们将混合物溶液缓慢地加入柱层析柱中，让混合物中的化合物在固定相和流动相中发生分配，从而实现分离。
最后，我们采集柱层析柱流出的不同组分的溶液，并进行进一步的分析和鉴定。
在实验过程中，我们需要注意控制流动相的流速和流量，以保证化合物在柱层
析柱中充分分配。
另外，我们还需要注意观察柱层析柱流出的溶液，及时采集不同组分的溶液，并记录下采集时的时间和体积，以便后续的分析和鉴定。
通过本次柱层析实验，我们成功地从混合物中分离出了两种化合物，并获得了
纯度较高的目标化合物。
在进一步的鉴定和分析中，我们利用了色谱质谱联用技术，对分离得到的化合物进行了鉴定，并获得了化合物的质谱图谱和色谱图谱。
通过对比标准物质的质谱和色谱数据，我们成功地确定了分离得到的化合物的结构和纯度。
总的来说，本次柱层析实验取得了良好的实验结果，成功地实现了混合物中化
合物的分离和纯化，并对分离得到的化合物进行了鉴定和分析。
柱层析技术作为一种常用的分离和纯化方法，在化学和生物化学领域有着广泛的应用，本次实验也为我们进一步学习和掌握柱层析技术打下了良好的基础。
柱层析实验报告
柱层析实验报告柱层析实验是化学分析中常用的实验方法之一，通过利用不同物质在吸附剂上的分配行为来分离和测定样品中的组成成分。
本次实验旨在通过柱层析实验，对样品中的目标成分进行分离和定性定量分析。
实验材料和仪器包括：柱层析柱、样品溶液、吸附剂、洗脱剂、收集容器、进样器等。
实验的步骤主要包括：预处理样品、制备样品溶液、装填柱层析柱、进样、洗脱收集等。
首先，对待测样品进行预处理。
预处理的目的是去除样品中的杂质，以保证层析分离的准确性。
预处理的方法根据不同的样品性质而定，如酸碱中和、稀释、沉淀等。
预处理结束后，制备样品溶液，使样品能够溶解于溶剂中，并保持溶液的稳定性。
接下来，我们需要准备柱层析柱。
柱层析柱是实验中最重要的设备之一，它的选择主要依据样品的性质和所需分离的目标成分。
柱层析柱可以分为正相层析柱和反相层析柱两种类型，正相层析柱适用于极性物质的分离，而反相层析柱适用于非极性物质的分离。
选好柱层析柱后，我们需要将吸附剂填充到柱中，填充的方法通常是通过压缩和振实来保证吸附剂的均匀分布。
柱层析柱准备完毕后，我们可以进行进样了。
进样器是将样品引入柱层析柱的工具，通过准确定量进样，使样品以均匀速率通过柱层析柱。
进样的方式可以是气压驱动、重力流动或者手动控制。
不同的进样方式会对柱层析分离的结果产生不同的影响。
当样品成功进入柱层析柱中后，我们开始进行洗脱收集。
洗脱剂是将目标组分从吸附剂表面解吸的溶剂，选取合适的洗脱剂对分离效果至关重要。
常用的洗脱剂包括纯溶剂、溶剂混合物、缓冲溶液等。
洗脱过程中，可以通过控制洗脱剂的流速和浓度，使目标组分在柱层析柱中逐渐被洗脱出来，并收集到容器中。
完成洗脱和收集后，我们可以对收集到的样品进行进一步的分析。
常见的分析方法包括光谱分析、色谱分析、质谱分析等，可以对样品的成分和结构进行鉴定和定量。
综上所述，柱层析实验是一种常用的分离和分析方法，在科学研究和工业生产中有着广泛的应用。
通过柱层析实验，我们可以对样品中的目标成分进行分离、定性和定量分析，为后续分析工作提供准确的数据支持。
柱层析实验报告
柱层析实验报告1. 实验目的本实验的主要目的是通过柱层析实验，掌握柱层析的基本原理和操作方法，并实现对混合物中各组分的分离和定量分析。
具体实验目的包括： - 了解柱层析技术的原理和应用 - 学会柱层析实验的操作方法和步骤 - 利用柱层析分析仪测定样品中主要成分的含量 - 掌握数据处理的方法和结果分析的基本技能2. 实验原理柱层析是一种静相分离技术，基于不同物质在固定相和流动相中的亲和力差异，将物质分离的过程。
该技术主要包括一系列步骤：1.装置柱层析柱：选择合适的柱层析柱，固定相填充于柱内，并保持良好的流动性和分离效果。
2.选择柱层析流动相：根据被分离物质的亲和力特性，选择合适的流动相，并调节流动相的流速和压力。
3.样品进样：将待分离的混合物样品经过前处理后，通过进样装置导入柱层析柱中。
4.分离与定量：样品通过柱层析柱时，不同组分会与固定相发生相互作用来实现分离。
通过检测不同组分的保留时间和峰面积来定量分析各组分含量。
5.数据处理：根据分离得到的峰面积和所选的标准样品进行定量计算并分析结果。
3. 实验步骤1.准备工作：检查柱层析系统的硬件设备是否正常，检查柱子的流动性，并检查流动相是否满足实验要求。
2.样品前处理：根据实验要求，对样品进行预处理，如提取、浓缩和纯化等步骤。
3.准备样品溶液：将预处理后的样品溶解于适当的溶剂中，制备成所需要的浓度。
4.装置柱层析柱：选择合适的柱层析柱，并保证柱层析柱内部没有气泡和杂质。
5.进行柱层析实验：将样品进样到柱层析柱中，调节流动相的流速和压力，使得样品以合适的速率通过柱层析柱。
记录不同组分的保留时间和峰面积，以便后续数据处理。
6.数据处理：根据标准样品建立标准曲线，利用样品的峰面积和标准曲线进行定量计算，得到样品中各组分的含量。
7.结果分析：分析不同样品的柱层析数据，对实验结果进行解释和讨论，总结实验的优缺点，并提出改进的建议。
4. 实验结果与讨论在柱层析实验中，我们成功分离了混合样品中的各组分，并利用峰面积和标准曲线进行了定量分析。
柱层析分离实验报告
柱层析分离实验报告柱层析分离实验报告导言：柱层析分离是一种常用的分离技术，广泛应用于化学、生物、制药等领域。
本实验旨在通过柱层析分离方法，分离混合物中的化合物，并通过实验结果探讨柱层析分离的原理和影响因素。
实验目的：1. 掌握柱层析分离的基本原理和操作技巧；2. 了解柱层析分离中的影响因素及其作用机理；3. 分离混合物中的目标化合物，并对其进行鉴定和分析。
实验原理：柱层析分离是一种基于化合物在固定相和流动相之间的差异分离的方法。
在实验中，我们使用了硅胶柱作为固定相，以正己烷和乙酸乙酯的混合溶剂作为流动相。
混合物中的化合物在流动相的作用下，根据其在固定相上的亲和性和相对溶解度的差异，以不同的速度通过柱子，实现了分离。
实验步骤：1. 准备工作：准备好所需的实验器材和试剂，检查柱子是否干净；2. 样品制备：将待分离的混合物溶解在适当的溶剂中，制备样品溶液；3. 柱装填：将硅胶填充到柱子中，保持柱子竖直，并使用适当的填充剂将硅胶固定在柱子底部；4. 柱平衡：用流动相预先洗涤柱子，使柱子内的固定相均匀分布；5. 样品进样：使用微量注射器将样品溶液缓慢地注入柱子顶部；6. 柱洗脱：根据不同化合物的亲和性和溶解度，通过调整流动相的组成和流速，使化合物在柱子中以不同的速度洗脱；7. 收集分离物：根据洗脱曲线和检测结果，收集分离出的化合物；8. 鉴定和分析：使用适当的分析方法对收集到的化合物进行鉴定和分析。
实验结果：根据实验操作和分析结果，我们成功地分离了混合物中的目标化合物，并得到了纯净的化合物样品。
通过红外光谱分析、质谱分析等方法，我们对化合物进行了鉴定，并得到了化合物的结构和性质信息。
讨论与结论：柱层析分离是一种有效的分离技术，可以根据化合物的特性和需求调整操作条件，实现高效的分离和纯化。
在本实验中，我们通过调整流动相的组成和流速，成功地分离了混合物中的目标化合物，并对其进行了鉴定和分析。
实验结果表明，柱层析分离是一种可靠的分离方法，对于复杂混合物的分离和纯化具有广泛的应用前景。
拄层析分离色素实验报告
柱层析分离色素一、【实验目的】1．了解柱层析的分类,掌握各种柱层析的原理。
2．熟练掌握吸附层析的原理和操作技术。
二、【实验原理】叶绿体色素是植物吸收太阳光能进行光合作用的重要物质，主要有叶绿素a、叶绿素b、胡萝卜素和叶黄素组成。
从植物叶片中提取和分离叶绿体色素是对其认识和了解的前提。
利用叶绿体色素能溶于有机溶剂的特性,可用95%乙醇或无水乙醇提取.分离色素的方法有多种，如纸层析、柱层析等.柱层析法是色谱法中的一种，它是根据混合物中各组分对固定相的吸附能力，以及对洗脱剂（即移动相）的溶解度不同将各组分分离。
常用的柱色谱有吸附色柱谱和分配柱色谱两类。
吸附柱色谱通常是在玻璃管中填入表面积很大，经过活化的多孔性物质或粉状固体作为吸附剂（如氧化铝或硅胶)，当混合物的溶液流经吸附柱时，就被吸附在柱的上端，然后从柱顶加入溶剂（洗脱剂）洗脱。
由于不同化合物在吸附柱上的吸附能力不同，在同一溶剂中的溶解度也不同，因此各组分随溶剂以不同速度下移,形成色带。
继续用溶剂洗脱,吸附能力最弱的组分就随溶剂首先流出,整个层析过程进行反复的吸附-解析—再吸附-再解吸。
用柱层析法可以分别收集各组分，并逐个鉴定.本实验是把三氧化二铝填入玻璃管中（压成柱状）作为吸附剂，将叶绿体色素的石油醚提取液倾于吸附柱上,色素即被吸附。
由于色素的种类不同,被吸附的强弱不同,就在吸附柱上排列成为不同的色层，再利用吸附剂在不同溶剂中有不同的吸附力，用不同的溶剂进行洗脱,从而达到叶绿体主要的4种色素（叶绿素a、叶绿素b、叶黄素、胡萝卜素)的分离。
三、【实验材料】原料:新鲜的菠菜叶试剂：1．无水乙醇或95%乙醇 5。
三氧化二铝2．石英砂 6．饱和氯化钠溶液3．丙酮7.水硫酸钠4．石油醚（60-90℃） 8洗脱液：丙酮：石油醚＝1：9 器材:层析柱（1×30cm），研钵，蒸馏装置，脱脂棉，天平，烧杯，过滤漏斗,玻璃棒，锥形瓶，分液漏斗，试管，铁架台四、【实验操作】1．色素的提取：20克菠菜，加少许石英砂，再加20毫升无水乙醇研磨成浆,脱脂棉过滤，保存滤液，滤渣再用无水乙醇提取一次，合并滤液，滤渣再加入30毫升石油醚提取一次，过滤，合并滤液，转移至分液漏斗中，再加入40毫升饱和氯化钠溶液震荡，弃去下层溶液，再分别加入20毫升水震荡洗涤几次，直至下层无色，保留上层溶液，转移至三角瓶中,加入无水硫酸钠干燥5分钟，备用.2．样品的浓缩：将提取液放入蒸馏烧瓶中，蒸除多余的石油醚，至剩余液体5—8毫升左右，以备加样使用。
柱层析分离实验报告
柱层析分离实验报告实验目的：1. 了解常规柱层析实验法；2. 掌握柱层析法的操作方法；3. 初步了解分离纯化技术；实验原理：柱层析法是一种物理分离方法，它利用溶质在流动相和固定相之间的相互作用差异，使混合物中各组分得以分离纯化的方法。
实验步骤：1. 将样品溶液注入柱中，通过注射器；2. 在柱壁附近加入定量的溶剂，让样品在柱内产生分离现象；3. 通过收集每份柱顶样液，分析各组分的化学性质。
实验结果：我们操作了柱层析实验法，并将样品分离纯化。
最后得出我们想要的纯化物质。
实验结论：柱层析分离实验法是一种非常有效的物理分离方法，它可以用于分离多种样品，对于分离纯化化合物非常有帮助。
此次操作的结果表明，柱层析法的操作非常简便，成本低，且分离效果较好。
参考文献：1. Kavaka, A., & Hjartarson, K. (2017). A comparative study of the suitability of partial least squares regression (PLSR) and artificial neural networks (ANNs) for proteomics data analysis. Analytical and bioanalytical chemistry, 409(24), 5753-5768.2. Levenberg, K. (1944). A method for the solution of certain non-linear problems in least squares. Quarterly of applied mathematics, 2(2), 164-168.3. Zhang, Y., Zhu, Y., Li, L., Bai, R., Chen, C., & Wang, M. (2018). Analysis of the bacterial community in the water of a deep south china sea gas hydrate site. Frontiers in microbiology, 9, 127.。
柱层析实验报告范文
柱层析实验报告范文一、实验目的1.学习柱层析法的基本原理和方法；2.掌握柱层析法的操作技能；3.了解柱层析法的应用领域和意义。
二、实验原理层析法是一种物质分离和纯化的常用方法，其基本原理是根据待分离物质在固定相和流动相之间的分配系数差异，实现物质的分离。
柱层析法是层析法的一种常见形式，通过将样品溶液首先加到柱中，然后加入流动相，待流动相在柱中流动时，不同成分会发生差异的溶解和吸附行为，继而实现分离。
三、实验步骤1.准备工作：a.根据实验要求，选择适当的柱和固定相材料；b.准备好流动相和样品溶液。
2.柱层析操作：a.按照实验要求，将固定相充填到柱中，注意保持柱底均匀；b.预先在柱床上加入一小层纯流动相，使其保持湿润；c.加入样品溶液至柱中，待完全吸附后，加入流动相；d.注意调整流动相的流速，避免过快或过慢；e.当待分离物质出现不同的峰时，即可停止实验。
3.实验记录：a.记录各组分的流速、保留时间和峰面积等信息；b.绘制柱层析曲线，观察各峰的形态和相对峰面积。
四、实验结果和分析通过柱层析实验，我们成功地分离了样品溶液中的不同成分，并得到了明显的峰。
根据峰面积，我们可以计算出各组分在样品中的含量，进一步分析样品的组成。
实验结果表明，柱层析法在物质分离和纯化方面具有很大的潜力。
通过选择不同的固定相和流动相，我们可以实现对各种物质的高效分离，从而提高样品的纯度和分析结果的准确性。
经过实验，我们也发现了柱层析法的一些局限性，如对样品量、溶剂选择和柱层析条件的敏感性较大。
这就要求我们在实际应用中对柱层析法进行合理的优化和调整，以获得更好的实验结果。
五、实验总结通过本次柱层析实验，我们进一步了解了柱层析法的基本原理和操作方法。
柱层析法作为一种常用的分离和纯化技术，在化学分析、制药工业、生物学等领域的应用非常广泛，具有重要的科学研究和工业生产价值。
同时，我们也认识到柱层析实验的复杂性和技术要求。
在实验过程中，我们需要严格控制操作条件，如柱床的充填均匀性、流速的把握、固定相和流动相的选择等，才能获得准确可靠的实验结果。
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柱层析分离色素一、【实验目的】1．了解柱层析的分类，掌握各种柱层析的原理。
2．熟练掌握吸附层析的原理和操作技术。
二、【实验原理】叶绿体色素是植物吸收太阳光能进行光合作用的重要物质，主要有叶绿素a、叶绿素b、胡萝卜素和叶黄素组成。
从植物叶片中提取和分离叶绿体色素是对其认识和了解的前提。
利用叶绿体色素能溶于有机溶剂的特性，可用95%乙醇或无水乙醇提取。
分离色素的方法有多种，如纸层析、柱层析等。
柱层析法是色谱法中的一种，它是根据混合物中各组分对固定相的吸附能力，以及对洗脱剂（即移动相）的溶解度不同将各组分分离。
常用的柱色谱有吸附色柱谱和分配柱色谱两类。
吸附柱色谱通常是在玻璃管中填入表面积很大，经过活化的多孔性物质或粉状固体作为吸附剂（如氧化铝或硅胶），当混合物的溶液流经吸附柱时，就被吸附在柱的上端，然后从柱顶加入溶剂（洗脱剂）洗脱。
由于不同化合物在吸附柱上的吸附能力不同，在同一溶剂中的溶解度也不同，因此各组分随溶剂以不同速度下移，形成色带。
继续用溶剂洗脱，吸附能力最弱的组分就随溶剂首先流出，整个层析过程进行反复的吸附-解析-再吸附-再解吸。
用柱层析法可以分别收集各组分，并逐个鉴定。
本实验是把三氧化二铝填入玻璃管中（压成柱状）作为吸附剂，将叶绿体色素的石油醚提取液倾于吸附柱上，色素即被吸附。
由于色素的种类不同，被吸附的强弱不同，就在吸附柱上排列成为不同的色层，再利用吸附剂在不同溶剂中有不同的吸附力，用不同的溶剂进行洗脱，从而达到叶绿体主要的4种色素（叶绿素a、叶绿素b、叶黄素、胡萝卜素）的分离。
三、【实验材料】原料：新鲜的菠菜叶试剂：1．无水乙醇或95%乙醇 5.三氧化二铝2．石英砂 6．饱和氯化钠溶液3．丙酮 7.水硫酸钠4．石油醚（60-90℃） 8洗脱液：丙酮：石油醚＝1：9 器材：层析柱（1×30cm），研钵，蒸馏装置，脱脂棉，天平，烧杯，过滤漏斗，玻璃棒，锥形瓶，分液漏斗，试管，铁架台四、【实验操作】1．色素的提取：20克菠菜，加少许石英砂，再加20毫升无水乙醇研磨成浆，脱脂棉过滤，保存滤液，滤渣再用无水乙醇提取一次，合并滤液，滤渣再加入30毫升石油醚提取一次，过滤，合并滤液，转移至分液漏斗中,再加入40毫升饱和氯化钠溶液震荡，弃去下层溶液，再分别加入20毫升水震荡洗涤几次，直至下层无色，保留上层溶液，转移至三角瓶中，加入无水硫酸钠干燥5分钟，备用.2．样品的浓缩：将提取液放入蒸馏烧瓶中，蒸除多余的石油醚，至剩余液体5-8毫升左右，以备加样使用。
3．层析拄的制备：15克碱性三氧化二铝加入30毫升石油醚搅拌，浸泡10min.。
在层析拄内加入一团棉花在底部，再加入石英砂以上，然后用石油醚半充满柱子，再将浸泡好的三氧化二铝倒入柱内，倒时应该缓慢，重复使用下面的石油醚，直到装完。
用石油醚洗柱内壁，顶部加一小团棉花，然后再填入石英砂厘米高。
3．样品的分离层析：吸附层析分离色素打开层析拄下部开关，向拄内加入2毫升浓缩液，至液体没入砂内，再加入石油醚冲洗拄壁，液体浸入砂内，加洗脱液开始层析，可以看到不同色带如图片1，直至第一条色带洗脱完毕，在拄下面用试管接收第一条色带的洗脱液，如图片2。
五、【实验结果】实验结果如下图：图一：层析柱中出现黄色带图二：提取出的黄色胡萝卜素结果分析：洗脱过程中，首先有一条黄色的色带圈沿着层析柱下移，色带圈的各个方向的移动速度并不是完全相同，原因在于层析柱的制作过程并不完全均一，使层析柱内部不均匀，以至于色带各方向的移动速度不同。
最后收集得到亮黄色的胡萝卜素。
七、【注意事项】1、萃取时不要剧烈振荡，以防止发生乳化现象。
2、为了保持柱子的均一性，使整个吸附剂浸泡在溶剂或溶液中是必要的，否则当柱中溶剂或溶液流干时，就会使柱身干裂，影响渗透和显色的均一性。
因此要保证整个装样过程中溶剂要高于三氧化二铝的表面。
3、在吸附剂上端加入脱脂棉（或滤纸）是使加样品时不致把吸附剂冲起；在吸附柱下端加脱脂棉（或沙子）可以防止吸附剂细粒流出。
4、层析柱填装紧密与否，对分离效果很有影响，若各部分松紧不匀，会影响渗透速度和显色的均匀。
6、洗脱流速不宜过快，避免因此压紧凝胶，色素分离不开；也不要过慢，使柱装得太松，导致层析过程中，凝胶床高度下降，色素洗脱很慢。
因此应控制洗脱流速，以每分钟60~80滴为宜。
7、样品一定要足够浓缩，加样量不要过大，过大，分离条带过宽，如果层析拄不够长，各组分不易分开，易同时洗脱下来；加样量过少，色带不是很清楚，不易观察，效果不好。
8、层析柱粗细必须均匀，柱管大小可根据试剂需要选择。
一般来说，细长的柱分离效果较好。
若样品量多，最好选用内径较粗的柱，但此时分离效果稍差。
柱管内径太小时，会发生“管壁效应”，即柱管中心部分的组份移动慢，而管壁周围的移动快。
柱越长，分离效果越好，但柱过长，实验时间长，样品稀释度大，分离效果反而不好。
八、【实验小结】在该柱层析分离色素实验中，我了解了柱层析技术的相应方法和原理，学会了层析柱的制作和准备，进一步了解绿叶中色素的组成及各色素的颜色和性质、洗脱液的配比、层析柱的制作及洗脱液的流速是本实验成功与否的三大关键因素。
知识拓展：1、溶剂的选择：（1）吸附剂要求较纯，否则会影响样品的吸附和洗脱。
（2）溶剂和吸附剂不能起化学反应。
（3）溶剂的极性应比样品小，如果大了，样品不宜被吸附剂吸附。
（4）溶剂对样品的溶解度不能太大，否则影响吸附，但也不能太小，溶液的体积增加，易使色谱分散。
（5）可使用混合溶剂，如有的组分含有较多的极性基团，在极性小的溶剂中溶解度太小。
也可选用极性大的溶剂溶解，然后加入一定量的非极性溶剂。
这样既降低了极性，又减少了溶液的体积。
2、洗脱剂的选择：样品吸附在氧化铝柱上后，用合适的溶剂进行洗脱，这种溶剂称为洗脱剂。
如果原来用于溶解样品的溶剂冲洗柱不能达到分离的目的，可以改用其他溶剂，一般极性较强的溶剂影响样品和氧化铝之间的吸附，容易将样品洗脱下来，达不到分离的目的。
因此常用一系列极性渐次增强的溶剂，既先使用极性最弱的溶剂，然后加入不同比例的极性溶剂配成洗脱溶剂。
常用的洗脱溶剂的极性按如下次序递增。
己烷和石油醚＜环己烷＜四氯化碳＜三氯乙烯＜二硫化碳＜甲苯＜二氯甲烷＜氯仿＜乙醚＜乙酸乙酯＜丙酮＜丙醇＜乙醇＜甲醇＜水＜吡啶＜乙酸。
篇二：实验六：薄层层析与柱层析实验六薄层层析与柱层析实验目的1.2.了解偶氮苯的光学异构反应，加深对光化学反应的理解。
3.4.掌握薄层层析的基本操作,薄层层析分离顺、反式偶氮苯。
5.6.了解柱层析分离有机化合物的原理，初步掌握层析柱装填和洗脱的操作方法7.8.采用柱层析分离反式偶氮苯与靛红的混合物实验原理偶氮苯是最简单的芳香偶氮化合物，众多偶氮染料的母体结构。
含有两个苯基分别与偶氮基–n=n–两端相连的结构。
偶氮苯有毒，易燃。
偶氮苯有顺（z）-反（e）-异构体。
反式为橙红色棱形晶体，蒸气为深红色，溶于乙醇、乙醚、醋酸和水。
反式的热力学性质稳定。
当溶于乙醇的偶氮苯用一定强度的紫外光照射时，顺式的比例逐渐增大，直至达到平衡，形成顺反异构体的混合物。
偶氮苯的光致异构是很多偶氮类功能材料光响应的基础。
顺式为橙红色片状晶体，不稳定，在加热或可见光照射下能够变成反式。
色谱方法是通过在固定相和流动相间分配的不同而将物质分离开。
待分离混合物各组分在固定相上的吸附强度不同，与流动相一起移动的速度也不同，因此被分离开。
薄层色谱属于固-液吸附色谱。
薄层色谱板中的固定相中的微孔结构使得溶剂在毛细管作用下能够沿着色谱板向上移动。
由于混合物中各组分对吸附剂（固定相）的吸附能力不同，当展开剂（流动相）流经吸附剂时发生无数次吸附解附过程，吸附力弱的组分随流动相迅速向前移动，吸附力强的组分滞留在后，由于各组分具有不同的移动速度，最终在固定相薄层析上分离。
tlc除了用于分离外，还可以通过与已知结构的的化合物比对，鉴定少量有机混合物的组成，它也是柱色谱寻求最佳展开剂的手段。
上图中红色化合物的rf等于竖直红线的长度除以竖直蓝线的长度。
柱层析也属于固-液吸附色谱。
在一根玻璃“分离柱”中进行。
管中装上适当的粉末作为国定相。
待分离或纯化物质的溶液（流动相）在重力作用下流经吸附剂时，不同物质对溶剂和吸附剂的亲和力不同，因而被吸附的程度不同，从而以不同速度流动，使化合物得以分离。
靛红与偶氮苯在极性上具有较大差异，从而可以使用极性适中的展开剂，通过柱层析将二者分离。
仪器与试剂分析天平，tlc，锥形瓶，毛细管，层析柱，棉花，量筒，硅胶，蒸发皿，展缸；etoac, ch2cl2, 石油醚，靛红；请自带尺子（用于计算rf值）颜老师在实验开始之前已经准备好的试剂：a. 偶氮苯的溶液（15 mg in 1ml etoh）；b.靛红的溶液（15 mg in 1ml ch2cl2）；c. 靛红与偶氮苯的均匀混合物（靛红 g + 偶氮苯 g）。
实验内容a)b)光照异构化取 g反式偶氮苯溶于5 ml无水乙醇中，将此溶液放于试管中，密封，置于可见光下二星期，以便与光照前的溶液进行对比。
c)d)薄层层析取管口平整的毛细管吸取光照后的偶氮苯溶液，在离薄层板边沿约 cm的起点线上点样。
再用另一毛细管吸取未经光照的反式偶氮苯溶液点样。
待乙醇挥发后，将点好样品的薄层板放入内衬滤纸的展缸中。
展缸内已放置展开剂（乙酸乙酯/石油醚=1/40）。
薄层板的点样端在下方，浸入展开剂，展开剂不要没过起点线，也不要碰到样品点。
待展开剂前沿上升到离板的上端约1 cm处时，取出薄层板，立即用铅笔在展开剂上升的前沿处划一记号，置于空气中晾干。
可观察到薄层板上经光照后的偶氮苯溶液点样处上端有两个黄色斑点（哪一个斑点是顺式的？哪一个斑点是反式的？）。
计算异构体的rf值。
用上述相同的方法，采用ethyl acetate : petroleum ether = 1:1为展开剂，对靛红与偶氮苯的混合物进行tlc，为下面的柱层析选择展开剂。
e)f)柱层析1．将层析柱固定在铁架台上，一定要保持柱子竖直。
2．将层析柱洗净后在柱底部放入一小团脱脂棉花。
3．在锥形瓶中称重7g 硅胶（sio2），并用ethyl acetate : petroleumether(1:40)调匀。
在层析柱的下方放置一个锥形瓶，以收集流下的液体。
加入少量洗脱剂于层析柱中，以润湿棉花，使其贴在柱子下端。
4．打开层析柱活塞，控制溶剂下流，将硅胶悬浊液沿柱子侧壁加入，并用少量的溶剂洗去残余的硅胶，并加入柱中。
用装有橡皮管或塞子由下向上轻轻敲击柱子外壁，将气泡赶出，使硅胶填装均匀。
并加压使硅胶紧密，以获得较好的分离效果。
轻轻敲击，使硅胶最上层成均匀平面，然后用药匙沿柱子侧壁，轻轻地、慢慢地在硅胶表面覆盖一层海砂（注意：不要破坏硅胶的上平面）。