反相高效液相蒸发光散射检测法测定三金软胶囊中羟基积雪草苷含量
高效液相色谱-蒸发光散射检测器法同时测定化瘀祛斑胶囊中4种柴胡皂苷含量
５６ＣｈｉｎａＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ２０２０年６月５日第２９卷第１１期Ｖｏｌ．２９牞Ｎｏ．１１牞Ｊｕｎｅ５牞２０２０第一作者：王丽方，女，大学本科，初级药师，研究方向为药物分析和静脉用药调配，（电子信箱）ｓｙｔｃ７０１０＠１６３．ｃｏｍ。
△通信作者：刘炜，男，大学本科，主任药师，研究方向为新药研发和药物分析，（电子信箱）Ｌｉｕｗｅｉ８０９０＠１２６．ｃｏｍ。
ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００６－４９３１．２０２０．１１．０１５高效液相色谱－蒸发光散射检测器法同时测定化瘀祛斑胶囊中４种柴胡皂苷含量王丽方１，２，３，刘炜１，２，３△（１．首都医科大学附属北京世纪坛医院药剂科，北京１０００３８；２．临床合理用药生物特征谱学评价北京市重点实验室，北京１０００３８；３．临床合理用药生物特征谱学评价国际合作联合实验室，北京１０００３８）摘要：目的建立同时测定化瘀祛斑胶囊中柴胡皂苷ａ，ｂ１，ｂ２，ｄ的高效液相色谱－蒸发光散射检测器（ＨＰＬＣ－ＥＬＳＤ）法。
方法色谱柱采用ＡｇｉｌｅｎｔＺｏｒｂａｘＢｏｎｕｓ－ＲＰＣ１８柱（２５０ｍｍ×４．６ｍｍ，５μｍ），流动相为乙腈（Ａ）－水（Ｂ），梯度洗脱，流速为１．０ｍＬ／ｍｉｎ，柱温为３０℃，漂移管温度为４２℃，载气为氮气牗流速为２．５ｍＬ／ｍｉｎ牘。
结果样品中柴胡皂苷ａ、柴胡皂苷ｂ２、柴胡皂苷ｂ１和柴胡皂苷ｄ进样量分别在０．０８２１～３．２０８０μｇ（ｒ＝０．９９８５），０．２６７３～１０．４４００μｇ（ｒ＝０．９９９８），０．０８３５～３．２６００μｇ（ｒ＝０．９９９３），０．０９０９～３．５５２０μｇ（ｒ＝０．９９９７）范围内与峰面积平均值的对数值呈良好线性关系；平均回收率分别为１０１．６１％，９９．６４％，９５．３６％，９５．２６％，ＲＳＤ均小于２％（ｎ＝６）。
结论该方法操作简单，准确度高，专属性强，可用于化瘀祛斑胶囊中４种柴胡皂苷的含量测定。
积雪草中三萜类化合物含量测定中HPLC的运用
积雪草中三萜类化合物含量测定中HPLC 的运用作者：许开玉来源：《科学与财富》2016年第03期摘要：目的：探究积雪草中三萜类化合物含量测定中HPLC的运用。
方法：将流动相设定乙腈-水，应用C18柱，采用阶梯式进行脱洗，实施波长205nm检测。
结果：所选取的四组三萜类化合物，在回收率上，积雪草苷平均回收率为97.62%，羟基积雪草苷平均回收率为98.96%。
结论：将HPLC应用到积雪草中三萜类化合物含量的测定中，方法简单容易操作，得出的测定结果也较为精确，因此，该方法得到了普遍的认可，在积雪草药材以及制剂的质量控制上有着重要的应用价值。
关键词：积雪草；三萜类化合物；含量；测定；HPLC；运用所谓的积雪草就是一种伞状类的植物，其属于全草类型。
一般来说，积雪草中包含各种各样的三萜类化合物，其中主要有积雪草苷和羟基积雪草苷。
这种积雪草在实际的应用中，具有消毒解热以及消肿的作用。
这种积雪草在我国有着悠久的药用历史。
在临床中，积雪草中发挥药用价值的就是积雪草总苷。
本文就主要针对积雪草中三萜类化合物含量测定中HPLC的运用进行了简要的研究分析，现将具体报道如下。
1 材料与仪器仪器型号：安捷伦1200高效液相色谱仪；G1311A四元梯度泵；G1314B紫外检测器。
材料：积雪草生药采自贵州、湖北、广西三省；积雪草苷、羟基积雪草苷对照品源自中检所。
液相的有机流动相为乙腈（LiChrosolv），水为桂林娃哈哈纯净水，其余试剂均为分析纯。
2 方法与结果2.1 色谱条件选择C18作为色谱柱，而乙腈水则作为流动性，采用的梯度最好控制在0-40min的范围内，乙腈由原本的5%增长到100%，波长设定为205nm进行检测，将流动相的流速控制在为每分钟0.6ml，其中柱温要求控制为30℃，而需要将灵敏度控制为0.05Aufs。
2.2 选择吸收的波长选取一定分量的积雪草苷，将其作为对照品，然后加入乙腈进行充分融合，再利用光波长度在200-300nm之间的紫外线进行配置溶液扫描，所得的曲线图可以详见图1。
积雪草总苷缓释片含量测定及制剂稳定性考察
【 ｌｔ ｃ】 Ｏ ｊ ｔｅ ｔ ｙ ｎ ｏｔ ｔｓ ｙ ｎ ｅａ ｔｎ ｔ ｉｔｏＣｎ ｌ ｉｉ ｙｏ Ａ￣ｔ ｔ ｂ ｃｖ Ｓ ｄ ｎ ｎａ ａ ａｄ ｒ ｒ ｉ ａ ｌ ｔｌａ ａｃ ｇ ｃ— ａ ｅｉ ｕ ｏ ｃ ｅ ｓ ｐ ｐ ａｏ ｓ ｂｉ ｆ ｅ ｅａ ｓ ｔａ ｌ ｙ
积雪草 总苷缓 释片的含 量测定及 制剂稳 定性考察 。方法
利用反 相高效
液相 色谱 法测定羟基积雪草苷 和积雪 草苷的含量 ；通过影响因素实验 、加 速实验和长期实验进
行初 步稳 定性 考察 。 结果
稳定 。
采用含量测定 方法准确可靠 ， 能较好控制积雪草 总苷缓 释片的质量； 积雪草总苷缓释片含量测定 方法合适及该制剂较
积雪草苷母 液 。分别 精密量取对 照 品母液 ８ 、 品溶 液 ，在 ３ ℃下放置 ２ ，在一定 时间取样 ， 、７ ７ ４ｈ ６ 、４ ｌ 、５ 、２ ，置 ｌ ｌ ｍ ０ｍ 量瓶 中 ，加 ５ ％ 甲醇稀 ０ 释至刻度 ，按 ２ ． ４色谱 条件测定 。以峰 面积 Ａ对
浓度 Ｃ做线性 回归 ，得标 准 曲线方程 ：羟基积 雪
【 ｅ ｒｓ Ｃｎ ｌ ｉｉ ｙｏｉ ｓｘ ａｔ ｌｓ ｏｔ ｔｓ ｙ ｔ ｉ ｙ Ｋ ｙ ａ 】 ｅｔｌａ ａｃ ｇ ｃｓ ｅｅｔ ｃｔ ｅ ；Ｃ ｎ ｎ ａ ａ ｗ ｄ ｅａ ｓ ｔａ ｌ ｄ ｒ ｔ ｂ ａ ｅ ｓ ；Ｓ ｂ ｉ ａｌ ｔ
积 雪草为伞形科 植物积雪 草［ｅ ｔｌ ｓ ｔ ａ 加 １ 硬脂 酸镁 混合 ，压制 成异形 片 ，片重 约 ０ Ｃ ｎｅｌ ａｉ ｉ ａ ａｃ ％ ． （ Ｕ ｂ ｎ的干燥 全草或带 根全草 ，从积雪 草 中 Ｌ） ｒａ ］ １ ，每片主药含量 １ ｇ 进 一步进行含量测定 ５ｇ ８ｍ ） 提取 的积雪草 总苷含有 积雪草苷 、羟基积 雪草苷 及 制 剂 稳 定性 考 察 ，采用 含 量 测 定方 法 准 确 可 和积雪草 酸等有效 成分 ，具 有促进 伤 口愈合 、治 靠 ，能较好控 制积雪 草总苷缓 释片 的质 量 ；稳定 疗皮 肤损 伤 及抗 溃疡 等药 理 作用 【３ １ － 。由我校 药 性 考察 确定 该 制剂 质量 比较稳 定 。 Ｊ 学 教研 组 研 制将 积 雪 草 总 苷制 备 成 服 药 间 隔为 １ ２ｈ的积雪 草总苷 缓释 片 。本文将 积雪草 总苷
高效液相色谱蒸发光散射检测法测定金银花中绿原酸和木犀草苷的含量
高效液相色谱-蒸发光散射检测法测定金银花中绿原酸和木犀草苷的含量【摘要】目的建立高效液相色谱-蒸发光散射检测（HPLC-ELSD）法测定金银花中绿原酸及木犀草苷的方法。
方法采用Chromasil C18色谱柱(4.6 mm×250 mm，5.0μm)为色谱柱，用乙腈(A)-0.5%冰醋酸(B) 为流动相梯度洗脱，以蒸发光散射检测器检测绿原酸和木犀草苷。
梯度程序为：0 min(A：10%，B：90%)→16 min(A：25%，B：75%)→22 min(A：50%，B：50%)；流速1.0 ml・min-1；检测器漂移管温度110℃ ，载气流速3.0 ml・min-1。
结果绿原酸及木犀草苷的回归方程分别为：lgA=1.34lgm + 4.360，r=0.999 5；lgA =1.653lgm + 5.327，r=0.999 6。
线性范围分别为5.0～45 μg和0.4～3.6 μg；平均回收率分别为99.94%(RSD=1.43%，n=5)和100.85%(RSD=1.78%，n=5)。
结论该方法操作简便、结果准确，专属性强，分离效果和重现性好，可有效缩短总分析时间。
为较全面控制金银花药材的质量控制提供了简便可靠的方法。
【关键词】金银花绿原酸木犀草苷高效液相色谱-蒸发光散射检测器含量测定Abstract:ObjectiveTo develop a method for determination of chlorogenic acid(ChA) and galuteolin(Gal) in Flos LoniceraeJaponicae.MethodsAn HPLC equipped with ELSD method was applied to quantify chlorogenic acid and galuteolin．The analytical column was Chromasil C18(4.6 mm×250 mm，5.0μm)with the temperature of 30℃. The chromatogram for the ChA and Gal was developed on a gradient phase. Two solution were acetonitrile(A) and 0.5 % acetic acid solution and the gradient mode was as follows：0 min(A：10%，B：90%)→16min(A:25%，B:75%)→22 min(A：50%，B：50%). The flow rate was 1.0 ml・min-1．The temperature of drift tube was set at 110℃ and the flow rate of gas maintained at 3.0 ml・min-1．ResultsThe calibration curves of ChA and Gal were linear in the range of 5.0～45 μg and 0.4～3.6 μg，and the average recoveries were 99.94%(RSD was1.43%) and 100.85%(RSD was 1.78%) respectively．ConclusionThe method is accurate，specific，and can shorten the total analytical time of Flos Lonicerae Japonicae．Key words:Flos Lonicerae Japonicae； Chlorogenic acid；Galuteolin； HPLC-ELSD； Determination金银花为忍冬科植物忍冬Lonicera japonica Thunb.，红腺忍冬L. hypoglauca Miq.，山银花L. confusa DC.，或毛花柱忍冬L. dasystyla Rehd.的干燥花蕾或带初开的花［1］。
高效液相色谱—蒸发光散射检测法测定补血胶囊中黄芪甲苷的含量
法。
关键 词 ： 补血胶囊
高效液相色谱一蒸发光散射检 测法
黄芪 甲苷
补血 胶囊 由黄芪 、 当归 等五 味 中药组 成 ， 具有益 气 补血 、 健脾滋 肾的作 用 ， 中黄 芪 为君 药 ， 重 要活 性 方 其 成分 为黄芪 甲苷 ， 文 采用 高 效液 相色 谱一蒸发 光 散 本 射检测法 测定 补血胶 囊 中黄芪 甲苷 的含 量 ， 由于之 前 多采用薄层扫 描法 或紫 外 检测 色谱 法来 测定 ， 现性 重 差， 杂质干扰多 。应 用 薄层 扫描 法 测定 黄芪 甲苷 含 量 的文献 ． 较多 ， ２ 但应 用 ＨＰ Ｃ—Ｅ Ｓ Ｌ Ｌ Ｄ测 定黄芪 甲苷 含量 的文献较少 ， 为了有效地 控制 产品质 量 ， 研究应 本 用 ＨＰ Ｃ—Ｅ Ｓ Ｌ Ｌ Ｄ法测定其含量 ， 该法重现 性好 ， 抗杂质 干扰强 ， 简便 ， 准确 。
维普资讯
２０ ０ ７年 Ｉ ２月
高效液 相色谱一蒸发光散射检测法 测定 补ｌ 胶谩中黄芪 甲苜 的 含量 ｍ Ｉ
Ｊ７ ｌ
高 效 液 相 色 谱 一 蒸 发 光 散 射 检 测 法 测 定 补 血胶 囊 中 黄 芪 甲苷 的 含 量
高效液相色谱法测定参麦散结胶囊中羟基红花黄色素A的含量
高效液相色谱法测定参麦散结胶囊中羟基红花黄色素A的含量袁常珍;梅刚【摘要】OBJECTIVE:To establish the method for the content determination of hydroxysafflor yellow A in Shenmaisanjie capsules by high performance liquid chromatography (HPLC).METHODS:The chromatographic column was ZORBAX SB-C18 (250 mm ×4.6 mm,5 μm), the mobile phases consist of methanol-acetonitrile-0.7% phosphoric acid (V:V:V=23:2:75), with detective wavelength of 403 nm and flow rate of 1.0 ml/min, the column temperature was 35℃.RESULTS:The calibration curve of hydroxys afflor yellow A was linear over the range of 24.25μg/ml-121.25μg/ml(r=0.9995,n=5).The average recovery rate was 97.93%,RSD=1.64%(n=6).CONCLUSIONS: The method is simple, rapid and accurate with good reproducibility and can be used for the quality control of the preparation .%目的:建立高效液相色谱法测定参麦散结胶囊主药红花中羟基红花黄色素A的含量.方法:色谱柱为ZORBAX SB-C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为甲醇-乙腈-0.7%磷酸溶液(V:V:V=23:2:75),检测波长为403 nm,流速为1.0 ml/min,柱温为35℃.结果:羟基红花黄色素A的质量浓度在24.25~121.25μg/ml范围内具有良好的线性关系(r=0.9995,n=5),平均回收率为97.93%,RSD为1.64%(n=6).结论:本方法简便快速、准确、重复性好,可用于该制剂的质量控制.【期刊名称】《中国医院用药评价与分析》【年(卷),期】2017(017)003【总页数】3页(P377-378,384)【关键词】高效液相色谱法;参麦散结胶囊;羟基红花黄色素A;含量测定【作者】袁常珍;梅刚【作者单位】泸州市食品药品检验所中药室,四川泸州 646000;四川省泸县中医医院药剂科,四川泸州 646000【正文语种】中文【中图分类】R927.2参麦散结胶囊是由党参、麦冬、酸枣仁、红花等9味中药制成的中药复方制剂，由泸州医学院(即西南医科大学附属医院)制剂室生产，具有益气养阴、软坚散结、活血化瘀等功效，适用于颈部包块、心悸自汗、神疲乏力、气短等甲状腺肿大见上述症状者，其疗效显著，在临床应用广泛。
固相萃取-反相高效液相色谱法测定大鼠血浆中羟基积雪草苷的浓度
固相萃取 一反相 高效 液相色谱法测定大鼠血 浆中羟基积雪草 苷 的浓度
谭欣 玮 ， 刘颖 菊 ， 丽 莎， 朱 高丽佳
（ 庆 医 科 大 学药 学 院 药 理 教研 室 ， 重 重庆 ４０ １） ００ ６
【 要】 摘 目的： 建立大 鼠血浆中羟基积雪草苷测定的高效液相色谱法。方法： 同相萃取法对样 品进行纯化处理后 ， 选用 ｗｅ ｈｏ － 。 ｌ ｒｍ Ｃ。 ｃ ｉ ２ ： ６ ａ ｏ ｉ ｈ ｓ ｆ ｗ ｒｔ：１ ／ ｎ ， ｕ ｕｂｔ ｉ Ｂ ａ ｉｔ １ ｔ ｄ ｒ ２ ０ｍ ６ ｍ， ４ ， ａｅ ａ ｅ ｎ ｒｅ（ ４ ７ ） ｓ ｂｌ ｐ ａｅ（ ｎ ｅ ． ｍｌ ） ｃ ｃ ｒ ｉ ｃ ｓ ｎ ｍａ ｓ ｎ ａｄ ｒ ｏ ｔｌ ｍ ｅ ｉ ａ ０ ｍｉ ａｎ ｅ ａ
【 ｂｔ ｃ］ ｊｃｉｅＴ ｓ ｂｉ ｅ ｏ ｏ ｍ ｄ ｃｓｏｉｅｄｔｒ ｉａｏ ｙｓｌ — ｈ ｓ ｅｔ ｃｉ Ｐ Ｈ Ｌ Ｄ Ｉｔ Ｄａｍ Ａ ｓ ａｔＯｂｅｔ ：ｏｅｔ ｌ ｈａｍ ｔ ｄｆｒ ａ ｅａｓｓ ｅ ｍｎｔ ｎｂ ｏｉ ｐ ａｅ ｘ ａｔ ｎＲ — Ｐ Ｃ ｉ Ｓ ａ １ｓ ａ ｒ ｖ ａ ｓ ｈ ｄ ｅ ｉ ｄ ｒ ０ ｎ ＿ｓ
一
８ ４～ ８
重 庆 医科 大 学 学 报 ２ １ 第 ３ ０ ０年 ５卷 第 ６期 （ｏ ａ ｏ ｈ ｎ ｑｎ ｄｃ ｌ ｎｖ ｒｉ ０ ０ Ｖ １５ＮＯ６ ） Ｊ ｕｎ ｌ ｆ ｏ ｇ ｉｇＭｅ ｉ ｉ ｓ ｙ２ １ ． ｏ． ． ｒ Ｃ ａＵ ｅ ｔ ３
技术与方法 文 章编号： ５—６６２１） —８４０ ０ ３３ （ ０ ０８ ４ ２ ２ ００ ６ —
【 关键词 】 羟基积雪草苷 ； 固相萃取 ； 高效液相色谱法 【 中国图书分类法分类号 】 ９ ５ Ｒ ６． ２ 【 文献标 识码 】 Ａ 【 收稿 日期 】０ ９ １－ ８ ２ ０ — １０
超高效液相色谱-蒸发光散射法测定新风胶囊中黄芪甲苷的含量
（ ｕ ｌ ｔ ｒ ａ — ｈｉ ｇｈ ｐｅ ｒ ｆ ｏ ｒ ｍａ ｎ ｃ ｅ ｌ ｉ ｑｕ ｉ ｄ ｃ ｈ ｒ ｏｍ ａ ｔ ｏ ｇ ｒ ａ ｐｈ ｙ — ｅ — ｖ ａ ｐ ｏｒ ａ ｔ ｉ ｖ ｅ ｌ ｉ ｇ ｈｔ ｓ ｃ ａ ｔ ｔ ｅ ｒ ｉ ｎ ｇ ｄｅ ｔ ｅ ｃ ｔ ｏ ｒ， Ｕ ＰＩ Ｃ— ＥＩ ＳＤ ）
基金项 目： 国家科技 支撑计 划 项 目（ ２ ０ １ ２ Ｂ Ａ１ ２ ６ ｔ ￣０ ） ； 现代 中医 内 科应 用基础 与开 发研究 省级 实验室项 目（ １ ０ １ １ １ ４ ０ ６ ０ ２ ９ ） ； 安 徽
进行 优化 。 采用 超 高效液 相 色谱 蒸 发光 散射 检测 器
测 定新 风胶囊 中黄芪 甲苷 的含量 ， 现报 告如 下 。
１ 仪 器 与 试 药 １ ． １ 仪 器 Ｗ ａ ｔ ｅ ｒ ｓ Ａｃ ｑ ｕ ｉ ｔ ｙ Ｈ— Ｃ ｌ ａ ｓ ｓ ＵＰ Ｉ Ｃ： 美 罔
中医学 院第 一 附属医 院 ２ ０ １ １ 年 度“ 三新 ” 项目 作者简介 ： 姜辉（ １ ９ ８ ０ 一 ） ， 男， 硕士 ， 药 师
物 组 方而 成 ， 具 有 益 气健 为方 中君 药 ， 黄 芪 甲 苷 为 其 主 要 活 性 成分 。
为进 一步 控制 产 品 的 内在 质量 ， 本 研 究 对 测 定 条 件
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反相高效液相蒸发光散射检测法测定三金软胶囊中羟基积雪草苷含量
（作者:___________单位: ___________邮编: ___________）
[摘要] 目的：建立测定三金软胶囊中羟基积雪草苷含量的方法。
方法：采用反相高效液相色谱法测定羟基积雪草苷含量。
色谱条件为Diamonsil C18柱(150 mm×4.6 mm，5 μm)，流动相为甲醇-水(50∶50)，检测器为蒸发光散射检测器。
结果：羟基积雪草苷在1.006~10.064 μg的范围内，进样量与峰面积呈良好的线性关系（r=0.999 2），精密度、8 h内稳定性、重复性均符合要求，平均回收率为100.16%（RSD=2.28%）。
结论：该含量测定方法灵敏、准确，重复性好，专属性强，适合羟基积雪草苷的含量测定。
[关键词] 三金软胶囊；高效液相色谱法；蒸发光散射检测器；羟基积雪草苷
[Abstract] Objective：To determine the content of madecassoside in Sanjin Soft Capsulae. Methods：HPLC method was used to determine the content of madecassoside. The column was Diamonsil C18(150 mm×4.6 mm,5 μm),the mobile phase was
methanol-water(50∶50),and the evaporative light-scattering detector(ESLD) was used as detector. Results：The linear range was 1.006-10.064 μg (r=0.999 2), precision, stability and reproducibility were good, the average recovery was 100.16% (RSD=2.28%). Conclusion：The method is sensitive, accurate with good reproducibility and strong specificity, and it can be used for the determination of madecassoside.
[Key words] Sanjin Soft Capsulae; HPLC; ELSD; Madecassoside
三金软胶囊是由金樱根、积雪草等中药组成的复方制剂，具有清热解毒、利湿通淋、益肾的功效。
可治疗下焦湿热，小便短赤，淋沥涩痛，热淋，肾盂肾炎，膀胱炎，肾虚湿热下诸证者[1，2]。
临床应用广泛，具有较好的疗效。
本研究参考文献[3]使用反相高效液相色谱法，测定积雪草中羟基积雪草苷的含量。
1仪器与试药
Agilent 1100 series高效液相色谱仪，SEDEX 75蒸发光散射检测器，Agilent HPLC色谱工作站；羟积雪草苷对照品（中国药品生物制品检定所）；三金软胶囊(自制)；甲醇为色谱纯；水为重蒸馏水；其余试剂均为分析纯。
2方法与结果
2.1色谱条件
Diamonsil C18柱(150 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相为甲醇-水(50∶50)；检测器为蒸发光散射检测器；漂移管温度：35℃；载气（空气）压力：3.6 bar；柱温30℃；流速1.0 ml/min[2，3]。
色谱图如图1所示。
2.2溶液配制
2.2.1对照品溶液的制备取羟基积雪草苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 ml分别含0.2 mg、0.6 mg的溶液，即得。
2.2.2供试品溶液的制备取本品12粒，精密称定内容物1.0 g，精密加入甲醇40 ml，称定重量，超声处理（功率250 W，频率40 kHz）30 min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过。
精密量取续滤液25 ml，回收溶剂至干，残渣加水20 ml使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取2次，每次15 ml，合并提取液，用氨试液洗涤2次，每次15 ml，取正丁醇液，减压回收溶剂至干，残渣用甲醇溶解，转移至5 ml量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，即得。
另按处方制备缺积雪草的三金软胶囊，同法制得阴性样品溶液，备用。
2.3标准曲线
精密吸取羟基积雪草苷（0.503 mg/ml）对照品溶液2、4、8、12、16、20 μl进样，测定峰面积，以峰面积对进样量分别取对数后，进行线性回归，回归方程为：A＝1.352M+15.698（r=0.999 2），表明羟基积雪草苷在1.006～10.064 μg的范围内，进样量与峰面积
的线性关系良好。
2.4精密度试验
精密吸取羟基积雪草苷对照品溶液10 μl，连续进样6次，记录峰面积，RSD=1.56％，表明仪器精密度良好。
2.5稳定性试验
取供试品溶液，在8 h内每隔2 h精密吸取10 μl，注入液相色谱仪，记录峰面积，其RSD=1.80%，表明供试品溶液在8 h内稳定性良好。
2.6重复性试验
取样品5份，每份1.5 g，精密称定，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，测定并计算其含量，RSD=1.90%，表明分析方法的重复性良好。
2.7回收率试验
精密称取已知羟基积雪草苷含量的样品6份，分别精密加入定量羟基积雪草苷对照品，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，测定含量，计算回收率，结果见表1。
2.8样品测定
分别精密吸取上述两种浓度的对照品溶液各10 μl，供试品溶液10 μl。
注入液相色谱仪，测定峰面积，用外标两点法对数方程计算样品中羟基积雪草苷的含量，3批样品含量分别为 1.85、1.80、1.83 mg。
3讨论
在研究过程中，根据羟基积雪草苷易溶于水、醇等极性溶剂，不溶于氯仿等低极性溶剂的理化性质，并考虑醇提时易溶出大部分的其他成分，特别是有机酸、酚类及多糖类成分，对所测的羟基积雪草苷干扰严重的情况，实验采用甲醇溶液超声提取，回收甲醇，加水溶解，正丁醇萃取，再用氨水洗涤正丁醇，基本避免了有机酸、酚类及多糖类等成分的干扰。
使用紫外检测器的HPLC图谱中，羟基积雪草苷峰干扰较多，专属性不强；使用蒸发光散射器的HPLC图谱中，羟基积雪草苷峰干扰少，方法简便、准确、可靠，可作为质量控制方法。
[参考文献]
[1]中华人民共和国国家药典委员会.《卫生部药品标准》中药成方制剂第１２册[S].1997.11.
[2]中华人民共和国国家药典委员会.中国药典[S].一部.北京:化学工业出版社,2005.326.
[3]曾建国,宋云飞,侯团章,等.HPLC法测定积雪草中三萜类化合物的含量[J].基层中药杂志,2000,14(6):7-8.。