核酸分离提取技术
磁珠法提取核酸的原理
磁珠法提取核酸的原理
磁珠法是一种用于提取核酸的常用技术，它可以有效地将特定的核酸从样品中分离出来。
该技术是通过将特定的小磁珠表面上覆盖有特定的核酸杂合物，来实现核酸的相互结合，从而有效地提取核酸的方法。
磁珠法的提取核酸的过程如下：首先，将样品中的核酸与特定的小磁珠上覆盖的核酸杂合物发生结合，使样品中的核酸与磁珠上的核酸杂合物紧密结合；其次，将样品中的核酸结合的小磁珠放入磁场中，使磁珠结合的核酸聚集在磁珠的表面；最后，用含有离子的溶液去除未结合的核酸，使磁珠上的核酸脱除，从而实现对特定的核酸的提取。
磁珠法提取核酸的优势在于提取的核酸的活性良好，结果准确，耗费的时间短，而且容易操作，实现了高效率的提取过程。
它还可以通过改变温度、PH值等参数来调节提取过程，从而提高提取效率。
磁珠法提取核酸的缺点是，提取过程中易产生杂质，影响提取率，而且提取结果受样品中各种非特异性高分子的干扰，如蛋白质、碳水化合物等，因此，在提取核酸前，必须采取相应的处理措施，以确保提取的结果的准确性。
总之，磁珠法是一种有效的提取核酸的技术，它具有准确、快捷、
高效率的优势，可以有效地提取特定的核酸，但也存在一定的缺点，因此，在提取核酸前，必须采取有效的处理措施，以确保提取的结果准确可靠。
植物和动物的核酸dna和rna提取方法
提取植物和动物的核酸DNA和RNA是生物学研究中的重要步骤，它们可以帮助科学家们更深入地了解生物的遗传信息和基因表达。
本文将介绍植物和动物核酸DNA和RNA的提取方法，让读者对这一过程有一个清晰的认识。
一、植物核酸DNA提取方法1. 细胞破碎：需要将植物组织破碎，以释放细胞内的DNA。
这可以通过磨粉或切碎的方法来实现。
2. 细胞裂解：接下来，使用裂解缓冲液来裂解细胞膜和细胞壁，释放DNA分子。
裂解缓冲液的配方可以根据不同植物的特性进行调整。
3. 蛋白质沉淀：通过向裂解液中加入溴化苯酚等物质，可以沉淀掉大部分蛋白质，使得DNA分子得以分离。
4. 乙醇沉淀：将裂解液中的DNA用乙醇沉淀，这样可以将DNA分子从溶液中提取出来。
5. 溶解和纯化：将沉淀的DNA分子溶解在适当的缓冲液中，并进行进一步的纯化和浓缩处理，得到纯净的DNA溶液。
二、植物核酸RNA提取方法1. 细胞破碎：与DNA提取类似，首先需要将植物组织破碎，以释放细胞内的RNA。
2. 细胞裂解：使用特制的裂解缓冲液来裂解细胞膜和细胞壁，释放RNA分子。
不同植物组织的RNA特性可能有所不同，需要根据具体情况进行优化。
3. 蛋白酶处理：加入蛋白酶来降解蛋白质，使RNA得以更好地纯化。
4. 酚-氯仿提取：利用酚-氯仿混合液可以有效地将RNA从裂解液中提取出来，与DNA提取类似。
5. 洗涤和纯化：对得到的RNA进行洗涤和纯化处理，得到纯净的RNA溶液。
三、动物核酸DNA提取方法1. 组织裂解：将动物组织进行细胞破碎，释放细胞内的DNA。
2. 细胞裂解：使用特制的裂解缓冲液来裂解细胞膜，释放DNA分子。
对于硬质组织，可能需要较强的裂解条件。
3. 蛋白酶处理：加入蛋白酶来降解蛋白质，使DNA得以更好地纯化。
4. 酚-氯仿提取：利用酚-氯仿混合液可以有效地将DNA从裂解液中提取出来，与植物DNA提取类似。
5. 溶解和纯化：对得到的DNA进行溶解和纯化处理，得到纯净的DNA溶液。
核酸提取经典方法
核酸提取经典方法核酸提取是分子生物学实验中的一项重要步骤，用于从生物样本中提取DNA或RNA。
以下是一些经典的核酸提取方法：1. 酚-氯仿法：这是最常用的核酸提取方法之一。
它通过酚的溶解和蛋白质的沉淀来分离DNA或RNA。
该方法适用于从细菌、真菌、植物和动物等不同来源的样本中提取核酸。
2. 硅胶柱法：这是一种基于硅胶柱的核酸提取方法。
样本先经过细胞裂解，然后通过硅胶柱进行吸附和洗脱，最终得到纯净的DNA 或RNA。
硅胶柱法具有高效、快速和高纯度的特点。
3. 盐析法：盐析法利用核酸和盐的相互作用来分离DNA或RNA。
通过调节盐浓度，可以使核酸从溶液中沉淀下来。
该方法适用于大规模提取核酸的情况，例如从细菌培养物中提取大量的DNA。
4. 磁珠法：磁珠法是一种基于磁性珠子的核酸提取方法。
样本中的核酸先与磁珠结合，然后通过磁力将磁珠和核酸一起分离出来。
该方法具有高效、快速和易自动化的特点，适用于高通量的核酸提取。
5. 高盐法：高盐法利用高盐浓度来沉淀DNA或RNA。
通过加入高盐缓冲液，可以使核酸结合起来形成沉淀物。
该方法适用于从血液等样本中提取核酸。
6. 隔离法：隔离法是一种通过细胞壁溶解和蛋白质去除来提取核酸的方法。
该方法适用于从真菌和植物等样本中提取核酸。
7. 酚氯仿异硫氰酸胍法：该方法是酚-氯仿法的改进版，通过加入异硫氰酸胍来进一步去除蛋白质。
该方法适用于从细胞培养物或组织样本中提取核酸。
8. 碱裂解法：碱裂解法利用高碱性溶液来裂解细胞，并中和后沉淀核酸。
该方法适用于从血液、组织或细菌培养物中提取核酸。
9. 酶裂解法：酶裂解法利用酶来降解蛋白质和核酸之间的连接，从而分离核酸。
该方法适用于从酶可溶化的样本中提取核酸。
10. 玻璃纤维柱法：玻璃纤维柱法利用玻璃纤维柱进行核酸吸附和洗脱。
样本先经过细胞裂解，然后通过玻璃纤维柱进行纯化。
该方法适用于从血液或组织样本中提取核酸。
以上是一些常用的核酸提取方法，每种方法都有其适用的样本类型和优缺点。
核酸分离与纯化的技术路线与原则
核酸分离与纯化的技术路线与原则核酸包括DNA 、RNA两类分子，在细胞内均与蛋白质结合成核蛋白。
真核生物基因组中，95%DNA 为双链线性分子，存在于细胞核中，5%为双链环状分子，存在于细胞器中；原核生物DNA 及质粒DNA 为双链或单链环状分子；RNA 为单链线性分子，主要存在于细胞质中。
DNA 与RNA 性质的不同导致对其分离与纯化的条件也不相同。
一、核酸分离与纯化的原则(1)保证核酸一级结构的完整性。
生物的遗传信息全部贮存在核酸一级结构中，而且核酸的一级结构还决定其高级结构的形式及和其他大分子结合的方式。
所以，所提取的核酸一级结构的完整性直接影响着后续实验中对其结构与功能研究的质量。
因此，在制备核酸的过程中，要做到：尽量简化操作程序，缩短提取过程；避免过酸、过碱等化学因素对核酸链中磷酸二酯键的破坏，在pH 值4～10条件下进行操作；操作时动作要轻缓，提取的样品小包装保存，以免诸多的物理因素对核酸的降解；避免细胞内及环境中核酶对核酸的生物性降解。
(2)排除其他生物大分子的污染，如蛋白质、多糖和脂类分子的污染应尽可能降低到最低程度，特别是提取DNA 分子时应除去RNA 分子，反之亦然。
(3)排除核酸样品中有机溶剂和过高浓度的金属离子。
二、分离与纯化的技术路线(一)核酸的释放通常情况下DNA 及RNA 均位于细胞内，因此核酸分离与纯化的第一步就是制备单个细胞，再破碎细胞，从而释放核酸。
破碎细胞的方法包括机械法与非机械法两大类。
机械法又可分为液体剪切法与固体剪切法；非机械法可分为干燥法与溶胞法。
由于溶胞法采用适宜的化学试剂与酶，能有效地裂解细胞，方法温和，能保证较高的核酸获得率，并能较好地保持核酸的完整性，从而得到广泛的应用。
(二)核酸的分离与纯化利用核酸与其他物质性质上的差异，可以分离与纯化核酸。
这种差异包括细胞定位与组织分布上的差异，物理、化学性质上的不同，以及各自独特的生物学特性。
操作过程中，既可以从复杂样品中抽提出核酸分子，也可以将样品中的非核酸成分(非核酸的生物大分子、非需要的核酸分子及在操作过程中加入的溶液与试剂)逐步清除。
核酸提取方法
核酸提取方法核酸提取是分子生物学研究中的重要步骤，它是从细胞或组织中分离出核酸的过程。
核酸提取的质量直接影响到后续实验的结果，因此选择合适的核酸提取方法至关重要。
下面将介绍几种常用的核酸提取方法。
1. 酚氯仿法。
酚氯仿法是最常用的核酸提取方法之一。
它通过酚和氯仿的密度差异来分离核酸。
首先，将细胞或组织破碎，并加入酚酚液，使细胞溶解并释放出核酸。
然后，加入氯仿，混合离心，核酸会在水相中，而蛋白质和DNA在有机相中。
最后，通过离心分离出核酸。
2. 硅胶柱法。
硅胶柱法是一种高纯度核酸提取方法。
它利用硅胶柱的亲和性分离核酸。
首先，将细胞裂解液加入硅胶柱中，核酸会与硅胶结合。
然后，通过洗涤和离心的步骤，可以去除杂质，最后用去离子水洗脱核酸。
3. 磁珠法。
磁珠法是一种快速、高效的核酸提取方法。
它利用表面修饰的磁珠与核酸的亲和性来分离核酸。
首先，将细胞裂解液加入含有磁珠的试剂中，核酸会与磁珠结合。
然后，通过磁场的作用，可以快速分离出核酸。
4. 硝酸盐法。
硝酸盐法是一种适用于古老样本的核酸提取方法。
它利用硝酸盐的氧化性来分解细胞壁，释放出核酸。
首先，将样本加入含有硝酸盐的溶液中，经过裂解和离心，可以分离出核酸。
5. 现场快速提取法。
现场快速提取法是一种适用于野外样本的核酸提取方法。
它利用快速裂解和离心的步骤来分离核酸。
首先，将样本加入裂解液中，经过快速振荡和离心，可以分离出核酸。
总结。
核酸提取是分子生物学研究中的关键步骤，选择合适的核酸提取方法对实验结果至关重要。
不同的样本和实验需求可能需要不同的核酸提取方法，因此在选择核酸提取方法时，需要根据实际情况进行选择。
希望以上介绍的核酸提取方法对您有所帮助。
核酸提取方法
核酸提取方法核酸提取是分子生物学实验中的重要步骤，它是从生物样本中提取出核酸（DNA或RNA）的过程。
核酸提取的质量和纯度对后续实验结果具有重要影响，因此选择合适的核酸提取方法至关重要。
本文将介绍几种常用的核酸提取方法，帮助您选择适合您实验需求的方法。
1.酚氯仿提取法。
酚氯仿提取法是最常用的核酸提取方法之一。
它适用于从细胞或组织样本中提取核酸。
该方法的原理是利用酚和氯仿的不同密度，将细胞或组织中的蛋白质和脂质沉淀到有机相中，从而分离出核酸。
酚氯仿提取法简单、快速，适用于大批量样本的提取。
2.硅胶柱法。
硅胶柱法是一种基于硅胶膜的离心柱层析技术，适用于从血液、组织、细胞培养物等样本中提取核酸。
该方法通过硅胶膜的亲和作用，使DNA或RNA能够在柱子中特异性地吸附，然后经过洗脱步骤将核酸从硅胶柱中纯化出来。
硅胶柱法提取的核酸纯度高，适用于需要高纯度核酸的实验。
3.磁珠法。
磁珠法是利用磁珠与核酸的亲和作用，将核酸特异性地吸附到磁珠表面，然后利用外加磁场将磁珠与其他杂质分离。
该方法操作简便，无需离心步骤，适用于高通量核酸提取。
磁珠法提取的核酸质量好，适用于高灵敏度的实验。
4.酶解法。
酶解法是利用蛋白酶和蛋白酶K等酶类将蛋白质降解，从而释放出核酸。
该方法操作简单，适用于从血液、组织等样本中提取核酸。
酶解法提取的核酸适用于一些特殊实验，如PCR、RT-PCR等。
5.离心法。
离心法是利用超速离心将细胞或组织破碎，然后通过差速离心将核酸从其他细胞成分中分离出来。
该方法操作简单，适用于从大量样本中提取核酸。
离心法提取的核酸适用于一些基础实验。
总结。
选择合适的核酸提取方法需要根据实验样本的来源、实验需求以及实验室条件等因素综合考虑。
在实际操作中，可以根据不同实验目的选择不同的核酸提取方法，以确保提取的核酸质量和纯度满足实验要求。
希望本文介绍的核酸提取方法能够为您的实验工作提供帮助。
核酸提取和注意事项
核酸提取和注意事项核酸提取是生物实验室中常见而重要的实验步骤，它是从细胞或组织中提取出DNA或RNA，以便进行分子生物学研究和DNA分析。
在进行核酸提取时需要注意许多事项，以保证提取出的核酸质量和纯度。
本文将详细介绍核酸提取的步骤和注意事项。
首先，核酸提取的步骤通常包括样品的处理、细胞破碎和核酸分离纯化三个主要步骤。
在样品处理步骤中，应该选择适当的样品类型，如细胞、组织、血液、粪便等，并根据样品类型选择合适的提取方法。
在细胞破碎步骤中，可以使用机械破碎、化学溶解或酶处理等方法使细胞破碎释放核酸。
核酸的分离纯化可以通过离心沉淀、柱层析或化学沉淀等方法进行。
在进行核酸提取过程中，还需要注意一些事项来保证提取的核酸质量和纯度。
首先，实验操作人员应该佩戴手套和口罩，避免外源性的DNA或RNA污染。
同时，实验器材如离心管、移液器、离心机等要提前消毒，以避免实验过程中的污染。
其次，在细胞破碎过程中，应避免过度破碎，以免影响核酸的质量。
其次，应该使用高质量的试剂和试验用具来确保提取到纯净的核酸。
此外，实验过程中的温度、时间、pH值等操作条件也要科学合理地控制，以保证核酸提取的效果。
除了实验操作的注意事项，还有一些其他方面也需要特别注意。
首先是样品的存储和保存。
提取后的核酸应尽快进行下一步实验处理，如果需要长时间保存，则应将核酸溶液储存在适当的条件下，如冷冻或冷藏。
其次，实验操作过程中也要注意避免交叉污染。
交叉污染是指从前一个实验中带入的DNA或RNA污染到后一个实验中，严重影响实验的结果。
为了避免交叉污染，可以使用RNase和DNase来去除外源性的核酸污染，并严密控制实验操作流程。
此外，值得注意的是，在核酸提取过程中，可能会出现一些常见的问题和解决方法。
例如，样品中可能含有酶活性物质，影响核酸的纯度和完整性。
这时可以添加酶抑制剂来抑制酶活性。
此外，有些预处理步骤可能会造成样品损失，导致核酸提取产量不高。
在这种情况下，可以通过调整预处理步骤的条件来提高核酸的产量。
核酸提取及扩增技术简介(含等温扩增技术)-综述
核酸提取及扩增技术原理简介1核酸理化性质RNA和核苷酸的纯品都呈白色粉末或结晶，DNA则为白色类似石棉样的纤维状物。
除肌苷酸、鸟苷酸具有鲜味外，核酸和核苷酸都呈酸味。
DNA、RNA和核苷酸都是极性化合物，一般都溶于水，不溶于乙醇、氯仿等有机溶剂，它们的钠盐比游离酸易溶于水，RNA钠盐在水中溶解度可达40g/L。
DNA可达10g/L，呈黏性胶体溶液，在酸性溶液中，DNA、RNA易水解，在中性或弱碱性溶液中较稳定。
2细胞破碎大多数核酸分离与纯化的方法一般都包括了细胞裂解、核酸与其他生物大分子物质分离、核酸纯化等几个主要步骤。
每一步骤又可由多种不同的方法单独或联合实现。
根据原理不同，细胞破碎主要包含机械破碎法，化学试剂法，酶溶解法。
1）机械方法：包括低渗裂解、超声裂解、微波裂解、冻融裂解和颗粒破碎等物理裂解方法。
这些方法用机械力使细胞破碎，但机械力也可引起核酸链的断裂，因而不适用于高分子量长链核酸的分离。
有报道超声裂解法提取的核酸片段长度从< 500bp~>20kb之间，而颗粒匀浆法提取的核酸一般<10kb。
2）化学试剂法：经一定的pH 环境和变性条件下，细胞破裂，蛋白质变性沉淀，核酸被释放到水相。
上述变性条件可通过加热、加入表面活性剂（SDS、Triton X-100、Tween 20、NP-40、CTAB、sar-cosyl、Chelex-100等）或强离子剂（异硫氰酸胍、盐酸胍、肌酸胍）而获得。
而pH环境则由加入的强碱（NaOH）或缓冲液（TE、STE 等）提供。
在一定的pH环境下，表面活性剂或强离子剂可使细胞裂解、蛋白质和多糖沉淀，缓冲液中的一些金属离子螯合剂（EDTA 等）螯合对核酸酶活性所必须的金属离子Mg2+ 、Ca2+ ，从而抑制核酸酶的活性，保护核酸不被降解。
3）酶解法：主要是通过加入溶菌酶或蛋白酶（蛋白酶K、植物蛋白酶或链酶蛋白酶）以使细胞破裂，核酸释放。
蛋白酶还能降解与核酸结合的蛋白质，促进核酸的分离。
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主要内容
第一部分 核酸的分离制备 第二部分 PCR技术 第三部分 主要分子标记 第四部分 基因克隆
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参考书目：
（美）Dveksler GS and Dieffenbach CW. 黄培堂 俞炜源 陈添弥等译 现代生物技术译从 PCR技术实验指南 科学出版社
（英） Clark MS 主编 顾红雅 瞿礼佳 主译 植物分子生物学实验手册 高等教育出版社 施普林格出版社
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4. 基本步骤
（6） DNA纯度和浓度检测 0.8%琼脂糖凝胶电泳或紫外分光光度计检测 琼脂糖凝胶电泳法(常用） DNA样品在紫外线照射下发出的红色荧光强度与DNA的含量成正比 使用标准浓度的DNA样品作对照，可以估计出被测DNA的浓度 紫外分光光度计检测 DNA在260nm处有一个明显的吸收峰估计浓度 在A260 1OD相当于双链DNA浓度50 µ g/mL 根据A260/A280比值估计DNA纯度 纯DNA 的A260/A280=1.8±0.1， RNA的比值为2.0左右。 >1.8 <1.8 可能有RNA未除去 可能有酚和蛋白质之类的杂质
现代分子生物学的发展导致DNA 分离技术层出不穷, DNA 已经可以 从诸如化石、标本、木乃伊等极端材料中分离出来, 也可以从痕量材料获 得DNA
无论什么材料, 针对不同来源和特点, 调整设计相应的提取缓冲液及 不同的技术方案是十分重要和必需的
在实际应用中可针对不同情况对具体实验方案的各个部分进行不同 组合。缓冲液的成分应根据分离对象的不同而变化，缓冲液的pH值、保 护剂和表面活性剂都要根据不同样品进行优化
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7. DNA提取过程中各试剂的主要作用
β巯基乙醇和抗坏血酸钠：抗氧化剂，有效地防止酚氧化成醌，避免褐变， 使酚类物质容易从基因组DNA去除
蛋白酶K:是一种切割活性较广的丝氨酸蛋白酶，切割脂族和芳香族氨基酸 的羧基端肽键，用于生物样品中蛋白质的一般降解。将蛋白质降解成小肽 或氨基酸，使DNA分子分离出来
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3. 基本原理
(1) 破坏（消化）细胞壁、释放内容物
在破壁时也会剪切DNA，在完整性和产量间折衷考虑 分离总DNA破壁方法 液氮中快速冷冻、研磨成细粉末
分离核DNA或细胞器DNA破壁方法
更温和的方法、以免过早破坏内膜系统、含渗透剂的缓冲液4oC匀浆 (2) 破坏细胞膜使DNA释放到提取缓冲液中 通常靠SDS或CTAB去污剂来完成，保护DNA受核酸内源酶降解 缓冲液通常含EDTA，可螯合大多数核酸酶所需要的辅助因子-镁离子
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7. DNA提取过程中各试剂的主要作用
苯酚/氯仿： （1）苯酚/氯仿是非极性分子，水是极性分子，当蛋白水溶液与酚或氯仿混合时， 蛋白质分子之间的水分子就被挤去，使蛋白失去水合状态而变性。经过离心， 变性蛋白质的密度比水的密度为大，因而与水相分离，沉淀在水相下面，从而 与溶解在水相中的DNA分开。而酚与氯仿有机溶剂比重更大，保留在最下层
样品长期保存
液氮处理后贮存在- 80℃冰箱或直接储放于液氮中
在与提取缓冲液接触前防止冰冻样品在空气中融化导致酚类易被氧化 实验室发苗、田间取叶片（清洗去除灰尘、泥土以及菌孢子等） 饥饿处理减少淀粉含量、遮光处理产生黄化苗
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4. 基本步骤
（2）组织（细胞）破碎 物理方法 溶涨和自溶; 化学方法 生物酶降解 液氮快速冷冻处理后研磨（推荐）或在提取缓冲液中研磨（不推荐） （3）释放DNA 释放DNA到CTAB或SDS类去污剂中、65oC保温处理 （4）纯化和浓缩：去除残渣、沉淀DNA 释放出的DNA中含有大量的RNA、蛋白质、多糖、丹宁和色素等杂质 需用氯仿、苯酚处理后变性、沉淀除去，RNA可用RNase除去。 通常采用4oC离心的方法，产生分层，去掉植物残渣、留上清液部分 沉淀通常采用异丙醇（1 volume)、酒精（2 volume) 等 （5）洗涤 去掉部分色素和盐等，通常采用70%酒精和100%无水乙醇
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5. 提取缓冲液对植物总DNA提取的影响与作用
表面表面活性剂： 十二烷基磺酸钠(SDS)： 是一种阳离子强表面活性剂, 通常与蛋白酶K和抗氧化剂、 螯合剂一起使用 十六烷基三甲基溴化铵(CTAB) ：是一种在高盐下能与核酸结合形成可溶、稳定的 复合物, 低盐浓度下可沉淀的表面活性剂 酶抑制剂 乙二胺四乙酸 (EDTA)： 可用于抑制金属离子依赖性的酶 (螯合Mg2+ 、Ca2+ ) 的活 性 牛血清白蛋白(BSA) ：可使一些降解酶的表面变性 精胺及其他多胺: 降低核酸酶的影响 氰化物: 降低重金属氧化酶的影响
(9) 调节取样时期可减少粗提产品中多糖含量，生长幼苗暗室暗化处理，黄化 叶提取DNA可有效地防止多糖污染
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6. DNA提取过程中杂质去除
植物色素成分去除
植物色素分布：在植物中广泛存在 种类：脂溶性和水溶性色素两类 脂溶性色素多为四萜类衍生物 不溶于水，难溶于甲醇，易溶于乙醇、乙醚和氯仿等 叶绿素、叶黄素、胡萝卜素、番红花素和辣椒红素等 其中胡萝卜素不溶于乙醇。 水溶性色素：主要为花色甙类，又称花青素，普遍存在于花中 可溶于水与乙醇，不溶于乙醚与氯仿等有机溶剂，色泽随pH改变
可以采用非可溶性PVP（polyvinylpyrrolidone）研磨样品， PVP能络合多酚类物 质，不但能较彻底防止氧化作用，而且能有效的去除多糖和色素 在DNA浓缩之前，再用CTAB处理1-2次；或采用乙醇等有机溶剂洗涤 加入抗氧化剂，防止酚类物质褐化
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7. DNA提取过程中各试剂的主要作用
（2）多糖、单宁等物质与DNA 会结合成粘稠的胶状物,获得的DNA 常出现产 量低、质量差、易降解，影响了DNA 质量和纯度，不能被限制性内切酶 酶切，严重的甚至不能作为模板进行PCR 扩增
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2. 提取DNA应满足的基本原则
不同的研究对DNA的要求不一致，但一般应满足: (1) 排除蛋白、糖类和脂类等物质的污染，DNA纯度应满足下游操作需要 用于RFLP、AFLP应满足酶切要求 用于PCR的不含PCR的干扰甚至抑制物 (2) 所得DNA应当完整 电泳检测得到清晰、完整、可重复、无降解的条带 保证DNA一级结构的完整 (3) 足够量的DNA 有的实验要求量多（标记）
液氮：组织破碎、裂解细胞 EDTA，Tris/HCl: 缓冲体系使溶液pH不会变化太大，DNA在这一体系中呈稳定 态，EDTA螯合Mg 2+或Mn 2+离子，抑制DNase的活性，防止DNA被DNase降解 异丙醇/酒精：沉淀DNA；DNA溶于水，不溶于酒精，在用乙醇沉淀DNA时常加 入单价的阳离子NaCl 或 NaCH3COOH，Na+中和DNA分子上的负电荷，减少 DNA分子之间的同性电荷相斥力，而易于聚集沉淀 RNase: 消化RNA。 PVP （polyvinylpyrrolidone，聚乙烯吡咯烷酮): 抗氧化作用，络合酚类物质和萜 类物质, 防止酚类物质氧化而发生褐变, 也可有效的去除多糖和色素，色素是PCR 反应中的强抑制剂，一定要除掉
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4. 基本步骤
（1）植物材料的采集及前处理
尽可能使组织材料保持水分而保鲜（用湿纱布包裹,放臵于密闭的冰盒等） 野外远距离采集样本时，尽可能采用冷冻保存(如放臵于液氮中) 不具备冷冻条件时 无水CaSO4 的瓶子分别保存使其迅速干燥，可将材料 保存数月，返回后尽快提取DNA 对具有大量次生代谢物(如丹宁、酚类、醌类等) 的植物材料,尽可能采集幼嫩 组织，冷冻保存、短时间内提取DNA 植物组织化学保存法 乙醇、丙二醇处理法 导致DNA剧烈降解（不推荐）
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4. 基本步骤
（7）DNA保存备用 通常用pH 8.0的TE（Tris-EDTA）缓冲液（推荐）或超纯水 于4℃或-20 ℃（推荐）冰箱保存、避免反复冻融，1-2年一般没问题
也可短时保存于100%无水乙醇中（几天）
较长期保存可放臵于-70 ℃超低温冰箱，可保存5年以上
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5. 提取缓冲液对植物总DNA提取的影响与作用
NaCl: 提供一个高盐环境, 使DNA充分溶解于液相中 异戊醇：（1）在抽提DNA时，为了混合均匀，必须振荡混匀数次，这时在 混合液内易产生气泡，气泡会阻止相互间的充分作用。加入异戊醇能降低 分子表面张力，减少泡沫产生。一般采用氯仿：异戊酵=24：1或酚：氯仿： 异戊醇=25: 24: 1（不必先配制，可在临用前把一份酚加一份24：1的氯仿与 异戊醇即成） （2） 同时异戊醇有助于分相，使离心后的上层水相，中层变性蛋白相以及 下层有机溶剂相维持稳定
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5. 提取缓冲液对植物总DNA提取的影响与作用
保护剂 还原型巯基成分: 如 β-巯基乙醇、谷胱苷肽、半胱氨酸、二硫苏糖醇等一些硫醇类物质，通 常可用于保护DNA 免受醌类物质、二硫化物、多酚氧化酶等物质的损害
抗坏血酸、维生素C :
降低醌类物质的影响 活性炭、硫代硫酸钠、亚硫酸钠、重过亚硫酸钠、硼砂等: 防止多酚类物质氧化 聚乙烯吡咯烷酮(PVP) : 减少酚类、醌类及丹宁类物质的影响
郑成木 主编 植物分子标记原理与方法 湖南科学技术出版社 Brown TA. 魏群等译 国外优秀生命科学教材译从 基因克隆和DNA分析 高等教育出版社
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第一部分：核酸的分离制备
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第一部分：核酸的分离制备
1. DNA在分子生物学研究中的重要性
DNA 提取是一切分子生物学研究最基础的技术，高质量的DNA是用于PCR和酶 切分析等系列后续操作的重要保证 发展了多种DNA 提取方法,可从植物叶片、愈伤组织、组培苗、果实、韧皮部 等多种组织器官中提取DNA；但不同植物、同种植物材料的不同来源、部 位、形态以及不同化学成分、组织结构特点差异,导致DNA 提取时需要选 择不同的方法或作一些特殊处理 从富含多糖、多酚、单宁、色素及其他次生代谢物质的木本植物中提取DNA的 方法难度就相对大于大多数禾谷类及蔬菜类植物 （1）多酚被氧化成棕褐色