核酸提取原理及方法
核酸提取的原理及方法
核酸提取的常见方法及原理核酸提取作为分子实验中最基础的实验之一，几乎是所有实验的基本，无论后续的克隆、PCR、qPCR、建库测序等等都需要核酸才能顺利进行。
今天我们就来简单了解核酸提取的基本原理和方法。
1、什么是核酸核酸是由许多核苷酸聚合成的生物大分子化合物，为生命的最基本物质之一，分为脱氧核糖核酸（DNA）和核糖核酸（RNA），其中RNA又可以根据功能的不同分为核糖体RNA(r RNA)，信使RNA（m RNA）和转移RNA（t RNA）。
核酸广泛存在于所有动植物细胞、微生物内、生物体内的核酸常与蛋白质结合形成核蛋白。
不同的核酸，其化学组成、核苷酸排列顺序等不同。
DNA主要集中在细胞核内，线粒体和叶绿体中，而RNA主要分布在细胞质当中。
2、核酸提取类型1、总RNA提取总RNA中，75-85%为rRNA(主要是28S-26S/23S和18S/16S rRNA)，其余的由分子量大小和核苷酸序列各不相同的mRNA和小分子RNA如tRNA、5S rRNA、5.8S rRNA、miRNA、siRNA、小核RNA（small nuclear RNA，snRNA）及核仁小分子RNA（small nuceolar RNA，snoRNA）等组成。
2、miRNA提取MicroRNAs (miRNAs)是小型的、高度保守的RNA分子，如小干扰RNAs (siRNAs)，通过与他们的碱基配对调节其同源mRNA的分子表达，以预防通过各种机制的表达。
他们已成为进行发育、细胞增殖、分化和细胞周期的重点监管机构。
3、基因组DNA提取进行基因结构和功能研究以及基因诊断，通常要求得到的片段长度不小于100～200kb。
在DNA提取过程中应尽量避免使DNA断裂和降解的各种因素，以保证DNA的完整性，为后续的实验打下基础。
4、质粒抽提质粒抽提方法即去除RNA，将质粒与细菌基因组DNA分开，去除蛋白质及其它杂质，以得到相对纯净的质粒。
核酸提取原理及方法
核酸提取原理及方法核酸提取是分子生物学实验中的重要步骤，它是从细胞或组织中分离出核酸并净化的过程。
核酸提取的成功与否直接影响到后续的实验结果，因此掌握核酸提取的原理和方法对于科研工作者来说至关重要。
一、核酸提取原理。
核酸提取的原理主要包括细胞破碎、核酸溶解和净化三个步骤。
首先，细胞膜和细胞壁需要被破坏，以释放细胞内的核酸。
其次，核酸需要被有效地溶解，使其能够被提取出来。
最后，通过净化步骤去除蛋白质、多糖和其他杂质，从而得到纯净的核酸样品。
二、核酸提取方法。
1. 酚氯仿法。
酚氯仿法是最常用的核酸提取方法之一。
其原理是利用酚和氯仿两种有机溶剂与水相不相溶的特性，将细胞裂解液中的蛋白质等杂质分离出去，从而得到纯净的核酸。
这种方法操作简单，适用于提取大量样品。
2. 硅胶柱法。
硅胶柱法利用硅胶膜对核酸的亲和力进行提取和分离。
通过将样品加入硅胶柱后，核酸能够与硅胶膜结合，而其他杂质则被洗脱掉。
这种方法提取的核酸纯度高，适用于对纯度要求较高的实验。
3. 磁珠法。
磁珠法是近年来发展起来的一种核酸提取新方法。
通过在磁珠表面修饰亲核酸的功能基团，使得核酸能够与磁珠结合。
利用磁场的作用，可以将核酸与磁珠分离出来，从而实现核酸的提取和纯化。
这种方法操作简便，且适用于高通量提取。
三、注意事项。
在进行核酸提取时，需要注意以下几点：1. 样品的质量和保存对提取结果有重要影响，因此在提取前需要确保样品的完整性和纯度；2. 根据不同的实验目的和样品特点选择合适的提取方法，以确保提取效果；3. 在操作过程中要注意无菌操作，避免外源性核酸的污染；4. 核酸提取后，应根据实验需求储存或立即进行下一步实验。
总结，核酸提取是分子生物学实验中的重要步骤，掌握核酸提取的原理和方法对于科研工作者来说至关重要。
不同的提取方法有着各自的特点和适用范围，选择合适的提取方法能够提高实验效率和结果的准确性。
在实验操作中要严格按照操作规程进行，确保提取的核酸样品质量和纯度。
核酸提取的原理
核酸提取的原理
核酸提取是一种用来从生物样本中分离和纯化核酸（DNA或RNA）的技术。
其原理基于核酸在细胞中的特定性质和化学
特性。
下面是核酸提取的原理步骤：
1. 细胞破碎：首先，将生物样本（如细胞、组织或血液）收集到离心管中，并使用生理盐水或缓冲液洗涤样本以去除杂质。
然后，采用机械、化学或热能等方法，破碎细胞膜和细胞核，使细胞内的核酸释放到溶液中。
2. 蛋白质去除：为了去除细胞破碎后溶液中的蛋白质和其他杂质，可以使用蛋白酶、蛋白质沉淀剂或有机溶剂等方法进行蛋白质的沉淀或显色反应。
这一步骤可以有效地除去干扰物，使核酸纯化更加纯粹。
3. DNA和RNA分离：如果需要纯化DNA和RNA，则可以使用亲水性柱、酸性沉淀剂或硅胶膜等吸附剂。
这些吸附剂可以特异性地结合DNA或RNA，并将其与其他杂质分离开来。
根据吸附剂的不同，可以选择适当的提取方法。
4. 封闭或洗脱：提取后的核酸通常需要保存或进一步分析。
可以将其封闭在储存液中，以避免降解。
此外，还可以使用适当的缓冲液来洗脱核酸，以备后续实验使用。
总的来说，核酸提取的原理是通过破碎细胞、去除蛋白质、分离DNA或RNA，并最终纯化核酸。
这一过程涉及到细胞破碎、蛋白质去除、核酸分离和后续处理等多个步骤，可以根据具体
实验需求进行调整和优化。
这些步骤中的关键是选择合适的试剂和技术，以获得高质量和高纯度的核酸提取产物。
核酸提取的基本步骤及原理
核酸提取的基本步骤及原理
核酸提取的基本步骤包括以下几个步骤：
1. 细胞或组织的损毁与裂解：将样品中的细胞或组织破坏并裂解，使内部的核酸暴露在溶液中。
常用方法包括机械破碎、化学裂解或酶裂解等。
2. 蛋白质去除：通过加入蛋白酶等蛋白质分解酶，将样品中的蛋白质降解，以便之后纯化核酸。
3. 核酸纯化：通过溶液的调节和加入适当的试剂，使核酸与其他杂质分离。
常用的方法有酚-氯仿萃取、硅胶柱层析、磁珠吸附等。
4. 洗涤：通过洗涤溶液的加入和溶液对样品的冲洗，去除残留的杂质，提高核酸的纯度。
5. 脱盐：通过洗涤和纯化步骤，使核酸处于含有适量盐浓度的溶液中。
6. 浓缩：通过溶液的挥发、沉淀和离心等方法，将核酸溶液浓缩到适当的体积。
7. 质量检测：使用紫外吸收光谱、凝胶电泳等方法进行核酸的质量和纯度检测。
8. 储存：将提取得到的核酸转移到适当的储存条件下，保存以备进一步应用。
核酸提取的原理是利用细胞或组织中核酸与其他成分的生化性质的差异，通过物理或化学方法分离和纯化核酸。
核酸提取的关键步骤是细胞裂解和蛋白酶处理。
在细胞裂解过程中，细胞壁和膜被破坏，同时蛋白质酶降解细胞中的蛋白质。
随后通过柱层析或吸附等方法，分离纯化核酸。
最后，通过洗涤、脱盐和浓缩等步骤去除杂质，获得纯净的核酸溶液。
核酸提取技术的原理和应用
核酸提取技术的原理和应用介绍核酸提取技术是生物学研究和临床实验中常用的一种实验方法。
它被广泛应用于基因组学、遗传学、病理学等领域，为研究人类疾病的发生机制以及改进治疗方法提供了重要的方法支持。
本文将介绍核酸提取技术的原理以及在不同领域的应用。
核酸提取技术的原理核酸提取技术旨在从生物样本中提取纯净的核酸（包括DNA和RNA），以便进行后续的实验操作。
其基本原理如下：1.细胞破裂：首先需要将生物样本中的细胞破裂，以释放细胞内的核酸。
这可以通过物理、化学或者生物学方法实现。
常用的方法包括冻融法、酶切法、声波破碎法等。
2.蛋白质去除：提取到的核酸常常伴随有大量的蛋白质、碳水化合物、脂质等杂质。
因此，为了得到纯净的核酸，需要使用蛋白酶或化学试剂去除这些杂质。
常用的方法有酚-氯仿法、硅胶柱法等。
3.核酸沉淀：通过适当的条件，如加入盐、有机溶剂或乙醇，可以使核酸从溶液中沉淀出来。
核酸沉淀的条件可根据所用的核酸类型（DNA还是RNA）进行调整。
4.质量检测：在提取核酸后，为了确认提取到的核酸质量和纯度，通常需要进行质量检测。
这可以通过比色法、吸光度测定、凝胶电泳等方法实现。
核酸提取技术的应用核酸提取技术在不同领域都有广泛的应用，以下是一些常见的应用领域：基因组学研究•DNA测序：核酸提取是进行DNA测序的前提，测序结果可以帮助研究人员深入了解生物的基因组结构和功能。
•基因表达研究：通过提取RNA并转录为cDNA，可以分析基因的表达水平，进而了解不同细胞状态或组织中基因的表达差异。
遗传学研究•遗传疾病研究：核酸提取技术可以帮助研究人员分析与遗传疾病有关的基因变异，揭示疾病的发生机制。
•个体鉴定：通过核酸提取和DNA指纹技术的结合，可以进行个体鉴定，如刑事侦查中的DNA比对。
病理学研究•癌症诊断：通过提取癌细胞中的核酸，可以进行基因突变的检测，从而帮助癌症的早期诊断和治疗方法选择。
•感染病原体检测：核酸提取技术可以用于检测病原体的核酸，如病毒、细菌等，有助于早期发现和诊断传染病。
核酸提取原理及方法课件
新技术与新方法的探索
纳米材料在核酸提取中的应用
利用纳米材料的特性和功能，开发新型核酸提取方法 。
微流控技术在核酸提取中的应用
通过微流控芯片技术，实现核酸的快速、高效提取。
THANKS
感谢观看
核酸完整性的检测
琼脂糖凝胶电泳
通过观察DNA在电场中的迁移行为，判断DNA的完整性。
脉冲场凝胶电泳
利用不同的脉冲电场来分离不同大小和结构的DNA片段，以 评估核酸的完整性和大小分布。
核酸纯度的检测
紫外光谱分析
通过测量核酸在260nm和280nm紫外光下的吸光度，判断核酸中蛋白质、酚 和其他杂质的含量。
基因组测序
通过对基因组进行测序，可以深入了 解基因的结构和功能，为疾病诊断、 药物研发和生物进化研究提供重要信 息。
基因表达分析
通过比较不同组织或条件下的基因表 达谱，可以研究基因在生命活动中的 作用，以及基因与疾病的关系。
分子生物学研究
分子克隆
利用核酸提取技术，可以获得目的基因的克隆，为进一步研究基因的功能和表达调控机制提供基础。
吸附法
原理
利用吸附剂（如硅藻土、氧化铝 等）对DNA的吸附作用，将
DNA从细胞或组织中分离出来。
步骤
细胞裂解→加入吸附剂→搅拌→ 洗涤→解吸附→DNA。
注意事项
操作过程中要控制好吸附剂的用 量和洗涤次数，同时要保证解吸
附时的温度和pH值。
其他提取方法
酶法
利用酶（如蛋白酶、核酸酶等）将细 胞或组织中的DNA或RNA释放出来 ，再进行提取。
高效液相色谱
利用色谱柱将核酸中的杂质与核酸分离，并通过检测器检测纯度。
核酸提取方法三种
核酸提取方法三种核酸（DNA或RNA）的提取是生物学和分子生物学研究中的一项重要技术。
这些提取方法可分为化学法、机械法和磁珠法三种。
1. 化学法：化学法是最常用的核酸提取方法之一，其基本原理是通过化学试剂破坏细胞膜和核膜，使得核酸被释放出来。
常用的化学试剂包括胰蛋白酶、SDS、EDTA、蛋白酶K等。
首先，组织样品需经过细胞破碎，方法可以是机械破碎或液氮冲击。
接下来，将样品中的蛋白质通过蛋白酶处理，以去除干扰。
然后，加入一定的试剂将DNA 或RNA稳定起来，并用氯仿醇萃取法或硅胶柱纯化法来分离核酸。
最后，用适当的缓冲液溶解核酸，使其适合后续实验使用。
2. 机械法：机械法适用于提取植物细胞原生质体中的DNA或RNA。
它的基本原理是通过物理力量破碎细胞壁和细胞膜，释放细胞质中的核酸。
机械法提取核酸的方法有刀切法、研磨法和玻璃珠破碎法等。
在刀切法中，样品被切成细小片段，然后用块状试剂研磨，最后用缓冲液洗净，使核酸溶解。
研磨法和玻璃珠破碎法则通过高速旋转或震荡的方法，利用玻璃珠等硬质物体对样品进行破碎。
3. 磁珠法：磁珠法是一种快速高效的核酸提取方法。
它利用表面修饰的磁性珠，通过磁场的作用来实现核酸的捕获、纯化和洗脱。
这种方法常用于自动化的核酸提取设备中，并通过磁力分离技术简化了传统柱层析法的操作步骤。
在磁珠法中，首先制备表面修饰的磁性珠，以使其能够选择性结合DNA或RNA。
然后，将样品与磁珠混合，使核酸与磁珠结合。
通过磁场的引导和离心沉降，磁珠与被结合的核酸被分离出来。
最后，通过洗脱步骤，将核酸从磁珠上解离，使其溶解在适当的缓冲液中。
总结：核酸提取是分子生物学研究中至关重要的一步，能够从组织样品中提取出纯度较高的DNA或RNA。
化学法、机械法和磁珠法是常用的核酸提取方法。
化学法利用试剂破坏细胞和核膜，使核酸被释放出来；机械法通过物理力量破碎细胞壁和细胞膜，释放细胞质中的核酸；磁珠法则利用表面修饰的磁性珠来捕获、纯化和洗脱核酸。
核酸提取原理及的方法
核酸提取原理及的方法核酸提取是生物学研究中常用的一项操作技术，用于从生物样本中提取出纯度较高的核酸物质，以供进一步的分析和实验使用。
核酸提取的原理是将细胞膜破裂，使得核酸释放到溶液中，然后通过几种方法去除蛋白质、其他杂质和溶液中的酶，最后将纯的核酸物质从溶液中沉淀出来。
核酸提取的方法有很多种，下面将介绍常用的几种方法。
1. 酚/氯仿法（Phenol/Chloroform Extraction）：这是最常用的核酸提取方法之一、首先将细胞样本加入到含有酚和氯仿的溶液中，酚能溶解脂质，破坏细胞膜；然后离心使其分为两相，上层为水相，下层为有机相。
水相中含有核酸和水溶性杂质，有机相中含有脂质和非水溶性杂质。
将上层水相取出，通过分子筛或盐的作用去除水相中的酚、蛋白质等杂质，最后通过异丙醇沉淀法将核酸沉淀下来。
2. 硅胶柱层析法（Silica Column Chromatography）：这是一种常用的纯化核酸的方法。
首先将细胞样本经过裂解步骤释放核酸，然后将裂解液加入硅胶柱中，硅胶能够吸附核酸。
通过洗涤和洗脱的步骤去除杂质，最后将纯度较高的核酸溶液从硅胶柱中洗脱出来。
3. 盐沉淀法（Salt Precipitation）：这是一种简单快速的核酸提取方法。
首先将细胞样本经过裂解步骤释放核酸，然后加入盐溶液（如氯化钠），通过高盐浓度的作用沉淀核酸。
通过离心将核酸沉淀下来，去除杂质。
最后通过加入适当的溶剂将核酸溶解出来。
4. 柱层析法（Column Chromatography）：这是一种基于分子大小差异的核酸提取方法。
首先将细胞样本经过裂解步骤释放核酸，然后将裂解液加入到一个具有分子层次的柱中。
根据核酸的大小和形状差异，通过洗涤和洗脱的步骤将目标核酸从其他杂质中分离出来。
除了以上介绍的几种方法，还有磁珠萃取法、酵素消化法等核酸提取方法。
这些方法各有优缺点，可以根据实验的需要选择适合的方法。
需要注意的是，在进行核酸提取过程中，应当避免核酸样本的污染，一些常见的措施包括使用丙酮等剂去除有机物和酶，使用无菌工具和试剂，以及进行负控实验等。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
离心柱型质粒DNA提取试剂盒工作原理
离心柱型质粒DNA提取试剂盒采用改进的SDS-碱裂 解法裂解细胞，离心吸附柱内的硅基质膜在高盐、低pH 值状态下选择性地结合溶液中的质粒DNA，再通过漂洗 液将杂质和其它细菌成分去除，最后用低盐、高pH值的 洗脱缓冲液将纯净质粒DNA从硅基质膜上洗脱。
质粒DNA提取及检测——实验准备
洗脱液 EB
10 μg/ml RNase A 10 mM Tris-HCl （pH 8.0）
1 mM EDTA （pH 8.0 ）
质粒DNA提取——实验流程
对数期菌体
上清液
溶液I充分重悬 溶液II裂解
离心
过柱 离心洗涤
质粒DNA溶液
溶液III中和
干燥溶解
详细实验步骤请参考说明书！
质粒DNA提取——电泳检测
RNase非常稳定，它 在一些极端的条件可 以暂时失活，但限制 因素去除后有迅速复 性。用常规的高温高 压蒸气灭菌方法和蛋 白抑制剂都不能使 RNase完全失活。
总RNA提取——去除RNase污染
玻璃器皿处理： 量筒、试剂瓶等玻璃器皿须200℃烘烤2小时以上。
塑料器皿处理： 0.1%DEPC水溶液浸泡过夜，再高温高压灭菌。
DNA中残留有金属离子 ——重新70%乙醇漂洗
基因组DNA提取常见问题分析
DNA降解
材料不新鲜或反复冻融 未很好抑制内源核酸酶的活性 提取过程操作过于剧烈，DNA
被机械打断 外源核酸酶污染
基因组DNA提取常见问题分析
DNA提取量少
实验材料不佳或量少 —— 选取新鲜（幼嫩）材料
质粒类型
• 严谨型：这些质粒的复制是在寄主细胞严格控制之下进 行的，与寄主细胞的复制偶联同步。所以，往往在一个 细胞中只有一份或几份拷贝；
• 松驰型：这些质粒的复制是在寄主细胞的松弛控制之下 进行的，每个细胞中含有10-200份拷贝，如果用一定的 药物处理抑制寄主蛋白质的合成才会使质粒拷贝数增至 几千份。如较早的质粒pBR322即属于松弛型质粒，要 经过氯霉素处理才能达到更高拷贝数。
基因组DNA提取常见问题
DNA样品不纯，抑制后续酶解和PCR反应 DNA降解 DNA量少
基因组DNA提取常见问题分析
DNA样品不纯，抑制后续酶解和PCR反应
DNA中含有蛋白、多糖、多酚类物质 ——抽提纯化、高盐洗涤
DNA在溶解前，有酒精残留，酒精抑制后续酶解反应 ——重新沉淀
一．核酸简介 二．基因组DNA提取 三．质粒DNA提取 四．真核细胞总RNA提取
基因组DNA提取方法
基因组DNA提取的几种常用方法： CTAB法 SDS法 其他方法
基因组DNA提取——CTAB法
CTAB法原理（植物DNA提取经典方法）
CTAB（hexadecyltrimethylammonium bromide，十六 烷基三甲基溴化铵），是一种阳离子去污剂，可溶解 细胞膜，并与核酸形成复合物。
基因组DNA提取——CTAB法
CTAB提取缓冲液的改进配方
组份
Tris-HCl （ pH 8.0）
EDTA （ pH 8.0）
NaCl
CTAB
PVP40 β-巯基乙醇
终浓度 100 mM
20 mM
0.4 M
3% (W/V)
5% (W/V)
2%（V/V）使 用前加入
PVP（聚乙烯吡咯烷酮）是酚的络合物，能与多酚形
总RNA提取及检测——实验准备
1.实验器材
台式高速冷冻离心机、移液器、定时器、 marker笔、酒精喷壶、 电子天平、电泳设备、凝胶成像系统（或紫外透射仪）、紫外分光光度计、
微波炉、量筒、试剂瓶、锥形瓶等。
2.实验耗材
1.5 mL EP管（RNase free）、各规格Tip （RNase free） 、 一次性手套、一次性口罩等。
试剂处理： 氯仿、异丙醇、无水乙醇新开后RNA专用。0.1%DEPC水 配制75%的酒精。
专用的RNA操作室、专用器械。
操作时戴口罩、手套、帽子、穿实验服。
总RNA提取——样本准备
植物/动物组织样本： 新鲜取材或组织离体后液氮速冻，存于液氮或-80℃。 为避免反复冻融，需小份分装（50~100 mg/份）。
293细胞总RNA
带不清晰或比例小于此范围则表示RNA有降解 （因为大的RNA被酶降解的可能更大）。
总RNA提取——产量产率与纯度检测
1.打开紫外分光光度计设定参数，具体操作参照 仪器说明。
2.取少量待测RNA样品，用TE Buffer稀释50倍（ 或100倍）。
3.用TE Buffer做空白，在260 nm、280 nm、310 nm处调节紫外分光光度计的读数至零。
4.实验材料
对数期菌株（pEGFP-N1 in DH5α）
质粒DNA提取——碱裂解法
碱裂解法试剂配方
Ⅰ液 Ⅱ液 Ⅲ液
组分1 25 mM Tris-HCl （pH 8.0）
组分2 10 mM EDTA（pH 8.0 ）
0.2 M NaOH
1% SDS
3 M KAc （pH 4.2）
RNase A
质粒DNA提取常见问题分析
RNA残留
忘记加RNase A？ I液中RNase A失效？ 酶量不够？
质粒DNA提取常见问题分析
质粒断裂
II 液裂解时间过长？ 裂解时动作过于剧烈？
质粒DNA提取常见问题分析
量少
凝胶是否有问题？ 菌体量少 菌体重悬不彻底 裂解不完全 菌株老化 严谨型质粒
成一种不溶的络合物质，有效去除多酚，减少DNA中 酚的污染；同时它也能和多糖结合，有效去除多糖。
基因组DNA提取——CTAB法
CTAB法实验流程
植物材料
抽提
离心洗涤
液氮研磨
上层溶液
干燥溶解
细胞裂解
核酸沉淀
DNA溶液
基因组DNA提取——SDS法
SDS法原理
SDS是一种阴离子去垢剂，在高温（55～65℃）条件下能裂解细胞 ，使染色体离析，蛋白变性，释放出核酸；
DNA主要储存遗传信息。 RNA主要传递遗传信息。
核酸简介
如何分离DNA？ 如何分离RNA？
核酸简介——质粒DNA
质粒(Plasmid)是一种染色体外的稳定遗传因子，大小 从1-200 kb不等，为双链、闭环的DNA分子，并以超螺旋 状态存在于宿主细胞中。
质粒主要发现于细菌、放线菌和真菌等细胞中，它具 有自主复制和转录能力，能在子代细胞中保持恒定的拷贝 数，并表达所携带的遗传信息。
组份 终浓度
Tris-HCl （pH 8.0）
50 mM
EDTA （pH 8.0 ）
20 mM
NaCl 0.4 M
SDS 2%
Tris-HCl（pH8.0）：提供一个缓冲环境，防止核酸被破
坏；
EDTA：螯合Mg2+或Mn2+离子，抑制DNase活性；
NaCl：提供一个高盐环境，使DNP充分溶解，存在于液相中
。基因组DNA提取——S来自S法 SDS法实验流程（以动物组织为例）
动物组织
抽提
离心洗涤
液氮研磨 或匀浆
上层溶液
干燥溶解
细胞裂解
酒精沉淀
DNA溶液
基因组DNA的琼脂糖凝胶电泳检测
琼脂糖凝胶电泳：
以琼脂糖凝胶作为 支持物，利用DNA分子 在泳动时的电荷效应和 分子筛效应，达到分离 混合物的目的。
小鼠gDNA电泳图
该复合物在高盐溶液中（>0.7 mol/L NaCl）是可溶的 ，通过有机溶剂抽提，去除蛋白、多糖、酚类等杂质 后加入乙醇沉淀即可使核酸分离出来。
基因组DNA提取——CTAB法
CTAB提取缓冲液的经典配方
组份 终浓度
Tris-HCl （pH 8.0）
EDTA （pH 8.0 ）
100 mM
琼脂糖凝胶电泳检测
质粒DNA的三种带型：
1.共价闭合环状DNA分子：质粒 双链没有断裂；超螺旋结构；泳 动速度最快； 2.半开环质粒DNA分子：质粒的 一条链断裂；松弛的环状分子； 泳动速度最慢； 3.线性DNA分子：质粒的两条链 均断裂；泳动速度居中。
质粒DNA提取常见问题 RNA残留 质粒断裂 量少
3.实验试剂
TRIzol 总RNA提取试剂（YRBIO) 、氯仿、异丙醇、75%乙醇 （RNase free）、DEPC H2O （RNase free） 等。
4.实验材料
新鲜293细胞
RNase是导致RNA降解的最主要物质！ RNase的来源
样品 试剂 多次使用的器具 裸露的手 说话产生的唾沫 空气
破壁或裂解不充分 ——充分研磨、破壁酶、延长裂解时间
沉淀不完全 ——低温、延长沉淀时间
洗涤使得丢失DNA
一．核酸简介 二．基因组DNA提取 三．质粒DNA提取 四．真核细胞总RNA提取 五．琼脂糖凝胶电泳
质粒DNA提取
质粒DNA提取的方法： 碱裂解法 煮沸法
质粒DNA提取——碱裂解法原理
TRIzol试剂中的主要成分为异硫氰酸胍和苯酚，其中 异硫氰酸胍可裂解细胞，促使核蛋白体的解离，使RNA与 蛋白质分离，并将RNA释放到溶液中。当加入氯仿时，它 可抽提酸性的苯酚，而酸性苯酚可促使RNA进入水相，离 心后可形成水相层和有机层，这样RNA与仍留在有机相中 的蛋白质和DNA便分离开。水相层主要为RNA，有机层主 要为DNA和蛋白质。
20 mM
NaCl CTAB β-巯基乙醇
0.4 M
2% (W/V)
0.1%（V/V） 使用前加入
Tris-HCl （pH 8.0）提供一个缓冲环境，防止核酸被破坏； EDTA螯合Mg2+或Mn2+离子，抑制DNase活性； NaCl 提供一个高盐环境，使DNP充分溶解，存在于液相中； CTAB溶解细胞膜，并结合核酸，使核酸便于分离； β-巯基乙醇是抗氧化剂，有效地防止酚氧化成醌，避免褐变，使酚容易去除。