核酸提取技术(CDC培训)
2024版新冠核酸检测标本采集培训
目录
• 培训背景与目的 • 标本采集基本原则与规范 • 咽拭子标本采集方法 • 鼻咽拭子标本采集方法
目录
• 血液标本采集方法 • 标本保存、运输和接收流程 • 总结回顾与考核评估
01
培训背景与目的
新冠疫情现状
全球范围内持续传播，疫情防控形势严峻 无症状感染者比例较高，隐匿性传播风险大 病毒变异株不断出现，防控难度增加
止血带使用时间
止血带使用时间不宜过长，一般建议在1 分钟以内。长时间使用可能导致局部组 织缺氧、淤血等不良反应。
避免反复使用
止血带应一次性使用，避免反复使用导 致交叉感染或皮肤损伤等风险。
特殊人群注意事项
对于老年人、儿童、孕妇等特殊人群， 应特别注意止血带的使用方法和时间， 以免造成不必要的伤害。
06
个人防护与消毒情况
对医护人员在采集过程中的个人防护和消毒措施进行评估， 确保安全操作。
培训效果反馈收集渠道
1 2 3
问卷调查 向参加培训的医护人员发放问卷，收集他们对培 训内容、方式、效果等方面的反馈意见。
实操考核 通过组织实操考核，观察医护人员在实际操作中 的表现，了解他们是否真正掌握了标本采集的技 能。
05
血液标本采集方法
血液标本类型选择
静脉血
通常选择肘部静脉进行采集，适用于大多数人群，采集量适中， 可满足核酸检测需求。
动脉血
主要用于重症患者或需要特殊监测的情况，采集难度相对较大， 需专业人员操作。
毛细血管血
适用于新生儿或婴幼儿等难以采集静脉血的情况，采集量较少， 需注意防止组织液混入。
采集时间点和频率建议
THANKS
露咽喉部。
采集时间
采集核酸技术培训计划方案
一、背景随着新冠病毒的全球传播，核酸检测成为防控疫情的重要手段。
为了提高核酸检测的准确性和效率，保障人民群众的生命安全和身体健康，本方案旨在制定一套全面、系统、规范的核酸采集技术培训计划，确保参与核酸检测的工作人员能够熟练掌握相关技能。
二、培训目标1. 提高参训人员对新冠病毒核酸检测重要性的认识。
2. 确保参训人员掌握核酸采集的基本原理和操作流程。
3. 提高参训人员的个人防护意识和防护能力。
4. 培养参训人员的应急处理能力，确保核酸检测工作顺利进行。
三、培训对象1. 医疗机构从事核酸检测的工作人员。
2. 社区卫生服务中心、疾控中心等相关机构工作人员。
3. 其他需要参与核酸检测工作的相关人员。
四、培训内容1. 基础知识培训- 新冠病毒的基本特征及传播途径。
- 核酸检测在疫情防控中的重要作用。
- 核酸检测的基本原理和流程。
2. 技能操作培训- 核酸采集技术（咽拭子采集、鼻拭子采集等）。
- 标本采集过程中的注意事项和消毒处理。
- 个人防护用品的正确使用和穿戴。
3. 应急处理培训- 应急情况下的核酸采集操作流程。
- 核酸采集过程中的常见问题及处理方法。
- 采样过程中的生物安全防护措施。
4. 实践操作培训- 穿脱防护服的操作演示与实操。
- 核酸采集的现场操作模拟与考核。
- 核酸采集登记系统的使用培训。
五、培训方式1. 理论授课：邀请专家进行系统讲解，结合案例教学，提高参训人员理论水平。
2. 实操演练：现场演示操作流程，参训人员跟学并实操，确保技能掌握。
3. 案例分析：针对实际工作中的问题，进行分析讨论，提高解决问题的能力。
4. 考核评估：理论考核与实践操作考核相结合，确保培训效果。
六、培训时间与地点1. 培训时间：根据实际情况，分为短期集中培训和长期持续培训。
2. 培训地点：医疗机构、社区服务中心、疾控中心等。
七、培训效果评估1. 通过考核评估参训人员的理论知识和实践操作能力。
2. 定期对参训人员进行技能考核，确保技能水平持续提升。
核酸检测采样技术培训计划
核酸检测采样技术培训计划一、培训背景新型冠状病毒疫情的爆发给全世界带来了巨大的冲击，而核酸检测成为了疫情防控中至关重要的一环。
准确、快速的核酸检测能够帮助及时发现病毒感染的个体，有助于隔离治疗，有效地遏制病毒传播。
因此，对核酸检测采样技术的培训变得至关重要。
二、培训目标1. 了解核酸检测的基本原理和流程；2. 掌握核酸检测样本采集的标准操作技能；3. 掌握核酸检测样本运输和保存的标准操作技能；4. 掌握核酸检测仪器的操作和维护技术；5. 能够对核酸检测结果进行初步分析。
三、培训内容1. 核酸检测基本原理和流程- 核酸检测的概念和原理- 病毒核酸提取、扩增和检测流程- 核酸检测仪器和设备介绍2. 核酸检测样本采集的标准操作技能- 不同种类样本的采集技术及操作规范（咽拭子、鼻拭子、血液、唾液等）- 采样工具的选择和消毒- 采样操作的注意事项和常见问题处理3. 核酸检测样本运输和保存的标准操作技能- 样本采集后如何进行运输和保存- 样本保存的温度和湿度要求- 样本运输中的特殊情况应对4. 核酸检测仪器的操作和维护技术- 核酸检测仪器的结构和原理- 仪器操作的步骤和注意事项- 仪器常见故障处理及维护保养5. 核酸检测结果的初步分析- 检测结果的解读和报告- 常见异常结果的分析和处理- 检测数据的管理和存档四、培训方法1. 理论授课- 通过幻灯片、讲解等方式，传授核酸检测基本原理和流程，样本采集、运输和保存的标准操作技能，仪器的操作和维护技术，结果分析等内容；- 培训师以案例分析、讲解多媒体等方式进行教学；- 学员积极参与，多问多答，加深对核酸检测相关知识的理解。
2. 实际操作- 安排实验室实际操作环节，由培训师现场演示，学员跟随学习；- 学院分组进行样本采集训练，培训师进行现场指导和点评；- 仪器操作和维护等实际操作进行现场模拟演练。
3. 互动讨论- 针对学员提出的疑问进行互动解答；- 学员可围绕理论和实际操作经验，进行交流和讨论；- 鼓励学员提出建议和意见，不断改进培训方案。
新冠核酸检测标本采集培训课件pptx
将拭子插入肛门约3-4cm，轻 轻旋转并停留数秒。
采集技巧
确保拭子头部充分接触直肠黏 膜，避免触及肛门周围皮肤。
注意事项
操作过程中应注意患者隐私和 舒适度，避免过度刺激直肠。
血液标本采集方法
采集前准备
让患者保持空腹状态，避免剧烈运动和情绪 波动。
采集技巧
确保针头斜面完全刺入静脉内，避免反复穿 刺造成血肿。
新冠核酸检测标本采集培训 课件pptx
目录
• 标本采集前准备 • 标本采集方法与技巧 • 标本保存与运输要求 • 实验室接收与处理流程 • 质量控制与结果解读 • 安全防护与废弃物处理
01 标本采集前准备
了解新冠核酸检测原理
01
02
03
核酸检测原理
通过特异性引物对新冠病 毒核酸进行扩增，检测其 存在与否。
采集部位
选择肘部静脉作为穿刺点，消毒皮肤后穿刺 采血。
注意事项
操作过程中应注意无菌操作原则，避免污染 血液标本。
03 标本保存与运输 要求
标本保存条件及时间限制
标本保存条件
新冠核酸检测标本需在2-8℃条件下 保存，确保病毒RNA的稳定性。
时间限制
标本采集后应尽快进行检测，若无法 及时检测，可在2-8℃条件下保存不超 过72小时。长时间保存可能导致病毒 RNA降解，影响检测结果。
标本运输包装要求
标本包装
使用专用的生物安全运输箱或符 合规定的标本运输容器进行包装 ，确保密封性良好，防止泄漏。
标识清晰
在运输容器上贴有醒目的生物危 害标识和新冠核酸检测标本标识 ，以便识别和区分。
运输过程中温度控制
温度监测
在运输过程中，使用温度监测设备对标本进行实时温度监测，确保温度在28℃范围内。
核酸检测培训计划及方案
核酸检测培训计划及方案一、培训背景由于新型冠状病毒疫情的蔓延，核酸检测成为疫情控制和防治的一个重要环节。
为了保障人民健康，控制疫情，培训大量的核酸检测人员势在必行。
二、培训目标1.了解核酸检测的原理和方法；2.掌握核酸检测的操作技能；3.熟悉核酸检测设备的使用和维护；4.掌握核酸检测的质量控制和质量保证方面的知识。
三、培训内容1.核酸检测的原理和方法（1）核酸检测的基本原理（2）核酸提取及纯化（3）核酸扩增技术（4）核酸检测的数据分析2.核酸检测的操作技能（1）核酸提取设备的操作（2）核酸扩增设备的操作（3）核酸检测数据的分析和解读3.核酸检测设备的使用和维护（1）核酸提取设备的使用和维护（2）核酸扩增设备的使用和维护（3）核酸检测设备的日常维护和保养4.核酸检测的质量控制和质量保证（1）核酸检测的质量控制（2）核酸检测的质量管理（3）核酸检测过程中的质量保证四、培训计划1.确定培训时间、地点和对象（1）培训时间：根据需要确定培训周期，一般为2-4周。
（2）培训地点：选择符合培训要求和具备实验室条件的场所进行培训。
（3）培训对象：医学院校的相关专业学生和从业人员等。
2.确定培训方式和教学内容（1）培训方式：包括理论教学和实践操作两种方式，注重操作技能的培养。
（2）教学内容：根据培训目标确定教学内容，分阶段教学，注重实践操作。
3.确定培训师资和教材（1）培训师资：选择具有相关专业背景和丰富教学经验的专家教授进行培训。
（2）教材：选择相关的教材和实验指导书，以及案例分析和操作指南等资料进行教学辅助。
4.确定培训评估和考核方式（1）培训评估：设置定期考核和教学评估，以检测培训效果并及时调整教学进度和教学方式。
（2）考核方式：主要以理论考试和实际操作考核的方式进行，确保培训质量。
五、培训方案1.培训方式：（1）理论教学：传授核酸检测的基本理论知识、操作技能和质量控制要点，培养学员的理论素养。
（2）实践操作：安排学员进行实验室操作，包括核酸提取、扩增和检测等实际操作技能的培养。
核酸实验室培训计划
核酸实验室培训计划一、培训目的随着生物技术的不断发展，核酸实验室在医学、科研和工业领域的应用越来越广泛。
为了提高实验室技术人员的操作能力和实验室管理水平，确保实验室安全和准确性，我们制定了此培训计划。
二、培训内容1. 实验室安全知识2. 核酸提取技术3. PCR技术4. 基因克隆技术5. 实验室管理与质控三、培训对象实验室技术人员、研究人员、医学生及相关专业科研人员四、培训形式1. 理论培训2. 实践操作3. 现场指导4. 案例分析五、培训计划第一阶段：实验室安全知识（1天）1. 实验室安全操作规程2. 实验室常见危险物品及防护措施3. 废弃物处理和环保意识第二阶段：核酸提取技术（2天）1. 核酸提取原理及方法2. 相关实验操作演示和练习3. 常见问题及解决技巧第三阶段：PCR技术（2天）1. PCR反应体系及原理2. PCR操作示范及练习3. PCR实验数据分析第四阶段：基因克隆技术（3天）1. 基因克隆技术原理2. 细菌转形和融合体筛选3. DNA测序和分析第五阶段：实验室管理与质控（2天）1. 实验室管理与ISO标准2. 质控体系建立和实施3. 实验室事故应急处理六、培训师资本次培训由实验室的资深技术人员和专家团队组成，将围绕培训内容进行讲解和现场指导。
七、评估与考核1. 学员需要参与理论培训、实践操作及案例分析2. 培训结束后进行考核，通过考核方可获得结业证书八、培训后的支持1. 培训结束后，学员可获取培训资料和相关学习辅助资料2. 学员可获得技术支持和指导3. 培训之后，学员可参与实验室技术技能竞赛，提升技能九、实施计划本培训计划将根据实验室需求和学员报名情况进行分批次实施，保证培训效果。
结语核酸实验室作为生命科学领域的重要环节，需要高素质的技术人员参与。
通过本培训计划，希望能够提高学员的实验操作能力和理论水平，为实验室的科研和技术工作提供强有力的支持。
同时也希望通过培训，促进实验室技术人员的职业发展，并为相关科研工作提供人才支持。
采集核酸技术培训计划方案
采集核酸技术培训计划方案一、培训目的随着生物技术的不断发展和进步，核酸技术在临床诊断、科研领域和工业生产中得到了广泛的应用。
本次培训旨在加强参加人员对核酸技术的理论知识、实验操作技能的掌握，提高其在该领域的应用能力，从而为科研实验室、临床诊断中心和相关企业的实际工作提供专业技术支持。
二、培训对象1. 临床医学、生物学相关专业的本科及以上学历人员；2. 从事临床诊断、科研实验室和相关企业的实验人员；3. 对核酸技术具有一定兴趣和基础知识，希望提高自身技能和水平的人员。
三、培训内容（一）理论知识1. 核酸组成结构与功能；2. DNA、RNA的提取、纯化和测序原理；3. PCR扩增技术原理与应用；4. RNAi技术原理及实验应用；5. 分子标记技术在核酸研究中的应用。
（二）实验操作1. DNA、RNA的提取与纯化实验操作；2. PCR扩增技术实验操作；3. RNAi技术实验操作；4. 质粒构建实验操作；5. 分子标记技术实验操作。
（三）安全知识1. 实验室安全操作规程；2. 废弃物处理及环境保护知识。
（四）实际应用1. 核酸技术在临床诊断中的应用；2. 核酸技术在科研领域中的应用；3. 核酸技术在工业生产中的应用。
四、培训时间安排为了更好地满足不同人群的需求，培训时间可根据实际情况进行灵活调整。
一般培训时间可安排为连续2周的全日制培训，共计10天。
五、培训方式本次培训采用理论讲授、实验操作、案例分析、讨论交流等方式进行。
其中，理论知识部分采用讲座形式，实验操作部分以小组为单位进行操作指导。
培训结束后，还可安排实际应用案例分析和讨论交流环节，以便参训人员更好地将理论知识应用到实际工作中。
六、培训地点培训地点可选用具备实验室条件的学术机构、科研中心或企业实验室。
确保培训环境安全、舒适，实验设备、物品齐全，以满足培训的实验操作需要。
七、培训费用培训费用包括师资费、实验用品费、培训场地费等。
针对不同的培训对象，可根据实际情况进行适当调整。
核酸采集操作培训计划
核酸采集操作培训计划一、背景介绍随着新型冠状病毒（COVID-19）疫情的爆发，核酸检测成为了诊断疾病的重要手段。
而正确的核酸采集操作是确保检测准确性的关键环节。
因此，为提高核酸采集人员的操作技能和规范操作流程，我们制定了本培训计划。
二、培训内容1. 核酸采集操作流程•样本采集准备•样本采集方法•样本采集注意事项•样本采集后的处理2. 采集工具的使用•采集材料准备•采集工具的选择•采集工具的正确使用方法3. 采集现场卫生标准•采集现场的清洁与消毒•采集现场防护措施•采集现场废弃物处理三、培训形式本培训将采取以下形式：•理论讲解：通过PPT、视频等形式向学员介绍核酸采集操作的流程和注意事项。
•操作演示：由专业人员进行实际操作演示，让学员掌握正确的操作技能。
•实践训练：学员在指导下进行实际操作练习，加强技能学习。
四、培训时间安排本次核酸采集操作培训计划为期两天，具体安排如下：•第一天上午：理论讲解•第一天下午：操作演示•第二天全天：实践训练五、培训考核及评估为了确保学员掌握了核酸采集操作技能，我们将进行以下考核及评估：•考核形式：书面考试和实际操作考核•评估标准：按照培训内容要求，对学员的理论知识和操作技能进行评估•合格标准：学员需达到合格标准才能获得结业证书六、总结与展望通过本次核酸采集操作培训计划，希望能提高核酸采集人员的操作技能和规范操作流程，为疫情防控工作提供有力保障。
同时，我们将持续改进培训内容，不断提高培训质量，确保核酸采集操作的准确性和安全性。
以上就是本次核酸采集操作培训计划的详细内容，希望每一位学员能够在培训中取得实际提高，为疫情防控工作贡献自己的力量。
以上为核酸采集操作培训计划的内容，仅供参考，实际培训内容以现场指导为准。
核酸提取技术的原理和应用
核酸提取技术的原理和应用介绍核酸提取技术是生物学研究和临床实验中常用的一种实验方法。
它被广泛应用于基因组学、遗传学、病理学等领域，为研究人类疾病的发生机制以及改进治疗方法提供了重要的方法支持。
本文将介绍核酸提取技术的原理以及在不同领域的应用。
核酸提取技术的原理核酸提取技术旨在从生物样本中提取纯净的核酸（包括DNA和RNA），以便进行后续的实验操作。
其基本原理如下：1.细胞破裂：首先需要将生物样本中的细胞破裂，以释放细胞内的核酸。
这可以通过物理、化学或者生物学方法实现。
常用的方法包括冻融法、酶切法、声波破碎法等。
2.蛋白质去除：提取到的核酸常常伴随有大量的蛋白质、碳水化合物、脂质等杂质。
因此，为了得到纯净的核酸，需要使用蛋白酶或化学试剂去除这些杂质。
常用的方法有酚-氯仿法、硅胶柱法等。
3.核酸沉淀：通过适当的条件，如加入盐、有机溶剂或乙醇，可以使核酸从溶液中沉淀出来。
核酸沉淀的条件可根据所用的核酸类型（DNA还是RNA）进行调整。
4.质量检测：在提取核酸后，为了确认提取到的核酸质量和纯度，通常需要进行质量检测。
这可以通过比色法、吸光度测定、凝胶电泳等方法实现。
核酸提取技术的应用核酸提取技术在不同领域都有广泛的应用，以下是一些常见的应用领域：基因组学研究•DNA测序：核酸提取是进行DNA测序的前提，测序结果可以帮助研究人员深入了解生物的基因组结构和功能。
•基因表达研究：通过提取RNA并转录为cDNA，可以分析基因的表达水平，进而了解不同细胞状态或组织中基因的表达差异。
遗传学研究•遗传疾病研究：核酸提取技术可以帮助研究人员分析与遗传疾病有关的基因变异，揭示疾病的发生机制。
•个体鉴定：通过核酸提取和DNA指纹技术的结合，可以进行个体鉴定，如刑事侦查中的DNA比对。
病理学研究•癌症诊断：通过提取癌细胞中的核酸，可以进行基因突变的检测，从而帮助癌症的早期诊断和治疗方法选择。
•感染病原体检测：核酸提取技术可以用于检测病原体的核酸，如病毒、细菌等，有助于早期发现和诊断传染病。
核酸提取原理及方法课件
新技术与新方法的探索
纳米材料在核酸提取中的应用
利用纳米材料的特性和功能，开发新型核酸提取方法 。
微流控技术在核酸提取中的应用
通过微流控芯片技术，实现核酸的快速、高效提取。
THANKS
感谢观看
核酸完整性的检测
琼脂糖凝胶电泳
通过观察DNA在电场中的迁移行为，判断DNA的完整性。
脉冲场凝胶电泳
利用不同的脉冲电场来分离不同大小和结构的DNA片段，以 评估核酸的完整性和大小分布。
核酸纯度的检测
紫外光谱分析
通过测量核酸在260nm和280nm紫外光下的吸光度，判断核酸中蛋白质、酚 和其他杂质的含量。
基因组测序
通过对基因组进行测序，可以深入了 解基因的结构和功能，为疾病诊断、 药物研发和生物进化研究提供重要信 息。
基因表达分析
通过比较不同组织或条件下的基因表 达谱，可以研究基因在生命活动中的 作用，以及基因与疾病的关系。
分子生物学研究
分子克隆
利用核酸提取技术，可以获得目的基因的克隆，为进一步研究基因的功能和表达调控机制提供基础。
吸附法
原理
利用吸附剂（如硅藻土、氧化铝 等）对DNA的吸附作用，将
DNA从细胞或组织中分离出来。
步骤
细胞裂解→加入吸附剂→搅拌→ 洗涤→解吸附→DNA。
注意事项
操作过程中要控制好吸附剂的用 量和洗涤次数，同时要保证解吸
附时的温度和pH值。
其他提取方法
酶法
利用酶（如蛋白酶、核酸酶等）将细 胞或组织中的DNA或RNA释放出来 ，再进行提取。
高效液相色谱
利用色谱柱将核酸中的杂质与核酸分离，并通过检测器检测纯度。
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核酸提取质量的鉴定
DNA
纯度
OD260/OD280 = 1.8（1.6~1.9） ＞1.9，RNA污染 ＜1.6，蛋白、酚污染
浓度
OD260 = 1 时，DNA = 50μg/ml
1cm
完整性 电泳观察条带情况
核酸提取质量的鉴定
RNA
纯度
OD260/OD280 = 2.0（1.7～2.0） ＞2.0，异硫氰酸残留 ＜1.7，蛋白、酚污染
高盐低pH值结合核酸，低盐 高pH值洗脱。 快捷高效。
吸附材料结合法：
• •
硅质材料
低盐高pH值结合核酸，高盐 低pH值洗脱。 适用于纯度 要求高的实验。
阴离子交 换树脂
基因组DNA－其它方法
浓盐法：
利用RNP和DNP在盐溶液中溶解度不同，将二者分离
有机溶剂抽提法：
有机溶剂作为蛋白变性剂，同时抑制核酸酶的降解作用
DNA和RNA都是极性化合物，溶于水，不溶 于乙醇、氯仿等有机溶剂，它们的钠盐比游离 酸易溶于水。在酸性溶液中，DNA、RNA易水 解，在中性或弱碱性溶液中较稳定。 真核生物中，DNA主要存在于细胞核的染色 体中，RNA则主要存在于细胞质中；原核生物 中，DNA主要存在于核质区，RNA则主要存在 于细胞质中；而非细胞形式存在的病毒和噬菌 体，往往只含DAN或只含RNA。
DNA提取的方法
基因组DNA的提取
CTAB法 SDS法 其它
非基因组DNA的提取——质粒 DNA 碱裂解法
煮沸法
基因组DNA－ CTAB法
原理
CTAB（hexadecyltrimethylammonium bromide， 十六烷基三甲基溴化铵），是一种阳离子去污剂， 可溶解细胞膜，并与核酸形成复合物。该复合物 在高盐溶液中（>0.7mol/L NaCl）是可溶的，通 过有机溶剂抽提，去除蛋白、多糖、酚类等杂质 后加入乙醇沉淀即可使核酸分离出来。
浓度Biblioteka OD260 = 1 时，RNA = 40μg/ml
1cm
完整性 电泳观察条带情况
核酸提取的注意事项
为了确保核酸的完整性，实验应注意：
① 温度不宜过高； ② 控制一定的pH值范围（ pH5～9），过酸 或过碱均能破坏核酸链中磷酸二酯键； ③ 保持一定的离子强度，有助于维持核酸的 空间构型； ④ 减少物理因素对核酸的降解机械剪切力， 如强力高速振荡、搅拌、样品反复冻贮等。
密度梯度离心法：
利用不同内容物密度不同的原理分离各种内容物
质粒DNA－碱裂解法
前 言
核酸是遗传信息的携带者，是基因表达的物质 基础。在生物的生长、发育和繁殖等生命活动 中起着十分重要的作用。
因此无论是进行核酸结构与功能的研究，还是 进行基因工程、蛋白质工程，首先需要对核酸 进行分离和纯化，核酸样品的质量将直接关系 到实验的成败。核酸的提取是分子生物学实验 技术中最重要、最基本的操作 。
主要内容
核酸提取的目的意义
核酸提取的一般程序 微生物核酸提取的方法原理 核酸提取质量的鉴定 核酸提取的注意事项
核酸提取的意义
从生物材料中分离制备核酸，研究其结构与 功能，对于了解生命活动的规律，揭示生命现 象的本质有重大意义。 医学检验需要：是分析标本中包含的分子 信息的前提条件，对于精确诊断疾病具有重 要意义。
蛋白质的去除可以选择酶法、去污剂
法或有机溶剂法或联合运用上述方法。
微生物核酸提取的方法原理
1. 阴离子表面活性剂法
原理：利用SDS等阴离子表面活性剂与蛋 白质带正电荷的侧链结合，从而使核酸与 蛋白质分开。然后加入浓醋酸钾溶液，使 SDS-蛋白质复合物沉淀，并使多余的 SDS转化为溶解度小的钾盐而同时沉淀
基因工程的需要：基因工程疫苗和药物。
核酸提取的一般程序
核酸的提取一般分为两个阶段：
① 裂解细胞：使样品中的核酸游离在裂
解体系中。
② 分离纯化：使核酸与裂解体系中的其
它成分，如蛋白质、盐及其它杂质彻 底分离。
细胞的裂解
分离提取核酸，首先要求核酸从原来的 组织或细胞中以溶解的状态释放出来，并保 持原来的天然状态，不丢生物活性。因此应 选择适当的方法将组织和细胞破碎。但若材 料是体液（如血）或生物体分泌到体外的分 泌物，则不必进行组织细胞的破碎
细菌细胞的破碎比较困难，因为整个细菌细胞壁
细菌有坚硬的细胞壁，裂解细胞有三种方法：
①机械方法：超声波处理法、研磨法、匀浆法； ②化学试剂法：用SDS处理细胞； ③酶解法：加入溶菌酶或蜗牛酶，可使细胞壁破碎。
核酸的分离纯化
细胞裂解后，核酸与大量杂质在一起，必须 进行分离纯化。
蛋白质
多糖
关键：蛋白质的去除
细胞的裂解方法：
一般动物组织和细胞可用电动捣碎机或匀浆器破
碎或用超声波处理破碎。
植物组织和细胞由于具有纤维素、半纤维素和果
胶等物质组成的细胞壁，一般常用与石英砂和适 当的提取液一起研磨的方法破碎或用纤维素酶处 理也能达到目的。
的骨架实际上是一借共价键连接而成的肽聚糖囊 状大分子，非常坚韧。
微生物核酸提取的方法原理
2. 有机溶剂法
原理：利用酚、氯仿的混合液与含核酸和 蛋白质的水溶液一起振摇时形成乳状液， 蛋白质因充分接触酚和氯仿而变性，与核 酸分开。离心后可分为两相，一般上层为 含核酸的水相，下层为有机相，交界处是 变性凝聚的蛋白质层。
微生物核酸提取的方法原理
3. 酶法
原理：利用蛋白酶消化降解蛋白质，达到去除 蛋白质的目的。
基因组DNA－SDS法
SDS法流程图
标 本、 细菌培养物 裂解抽提
上层溶液
离心洗涤
酒精沉淀
干燥溶解
DNA溶液
基因组DNA－其它方法
根据细胞裂解方式的不同有：
物理方式：玻璃珠法、超声波法、研磨法、冻融法 化学方式：异硫氰酸胍法、碱裂解法
生物方式：酶法
基因组DNA－其它方法
根据核酸分离纯化方式的不同有：
基因组DNA－SDS法
原理
SDS在高温（55～65℃）条件下能裂解细胞， 使染色体离析，蛋白变性，释放出核酸； 提高盐 (KAc 或 NH4Ac) 浓度并降低温度（冰 浴），使蛋白质及多糖杂质沉淀，离心后除 去沉淀； 上清液中的 DNA 用酚 / 氯仿抽提，反复抽提 后用乙醇沉淀水相中的DNA。