最新：综合医院结核分枝杆菌感染实验室检查共识最全版
肺癌与肺结核共病的临床诊疗进展完整版
肺癌与肺结核共病的临床诊疗进展完整版肺癌（lung cancer，LC）是恶性肿瘤发病和死亡的主要原因，2022年全球新发肺癌病例约250万，死亡人数约180万。
国家癌症中心最新数据显示，我国2022年肺癌发病人数和死亡人数分别为106.06万和73.33万，居癌症之首。
结核病（tuberculosis，TB）是仅次于新冠病毒感染的单一传染源相关死亡的第二大病因。
我国在全球TB高负担国家中位列第三，2022年新发病例74.8万，严重威胁公共卫生安全。
有研究证据表明，TB会增加肺癌的发病风险；肺癌患者治疗期间的结核感染也并不罕见，并且可能阻碍抗肿瘤治疗方案的实施，对患者预后造成不良影响。
本文简要阐述肺癌共病结核病（LC-TB）的诊疗难点与进展，旨在为LC-TB患者的临床决策支持和未来研究提供新思路。
一、LC-TB的流行病学特点国内基于716 872名受试者的队列研究结果显示，TB患者的肺癌年发病率约为非TB患者的10.9倍。
校正因素后分析结果显示，TB队列的肺癌发病风险比（hazard ratio，HR）为3.32。
韩国一项队列研究纳入2010至2017年间的75 467例TB患者（年龄≥20岁；完成活动性TB治疗；TB诊断后存活≥1年且诊断后12个月内未确诊肺癌），对照组按年龄和性别进行1∶1匹配，在中位随访时间为4.8年的观察期间，TB幸存者发生肺癌的风险是对照组的1.72倍；同时还发现年龄≥60岁、吸烟、慢性阻塞性肺疾病（简称慢阻肺）和支气管哮喘（简称哮喘）是TB患者发生肺癌的危险因素。
在肺癌发病时间上，一项荟萃分析结果显示肺结核诊断后的前2年内肺癌的发生率增加最为显著，两年后逐渐降低，但多数原始研究是回顾性的，可能存在偏倚风险。
此外，TB对不同组织学类型的肺癌发病风险影响存在差异。
腺癌、小细胞癌、鳞状细胞癌患者有肺结核感染史的HR的相对危险度（relative risk，RR）分别为2.605、2.118和3.570。
2023高通量测序技术在分枝杆菌病诊断中的应用专家共识完整版
2023高通量测序技术在分枝杆菌病诊断中的应用专家共识(完整版)摘要高通量测序技术在分枝杆菌病领域中的应用日益普及，而在实际应用过程中，临床医师对技术本身及如何合理应用检测结果仍存在很多疑问。
本共识针对高通量测序技术临床应用中存在的突出问题，依据公开发表的研究数据和参与专家的应用经验，经众多专家讨论形成，为在分枝杆菌病诊断过程中合理使用高通量测序技术提供参考。
高通量测序(high-throughputsequencing)技术在感染性疾病病原学诊断及常见病原微生物的耐药诊断中优势明显，在分枝杆菌病领域也得到越来越广泛的应用，为疑难分枝杆菌病的诊断、鉴别诊断和耐药诊断提供了循证医学证据。
然而在实际应用过程中，临床医师存在诸多困惑。
鉴于此，高通量测序共识专家组针对高通量测序技术临床使用过程中存在的突出问题，撰写了本共识，以期提高该技术的临床应用水平，去伪存真，使这项先进的检验技术得到科学合理的应用。
一、高通量测序技术概况高通量测序技术泛指二代测序技术和第三代测序技术，目前已有多种用于临床感染性疾病的病原微生物鉴定，尤其是当缺乏诊断线索时，鉴定病原微生物具有显著优势。
依据检测策略的不同，其主要分为靶向测序、宏基因组学测序（mNGS）和全基因组测序（WGS\分枝杆菌靶向测序技术是先通过靶向捕获分枝杆菌特异基因后再进行高通量测序，主要适用于临床怀疑分枝杆菌感染的患者，既有助于诊断结核病/非结核分枝杆菌（NTM）病，又可以检测耐药基因突变,从而精准指导临床医师用药。
2018年，WHO发布的《应用高通量测序技术检测耐药结核病相关基因突变的技术指导原则》重点关注了靶向测序技术用于结核病耐药诊断的功能。
mNGS技术则是直接对标本中所有的核酸进行无偏倚检测和序列分析，相比分枝杆菌靶向测序，mNGS可检测出种类繁多的微生物，但无法实现对结核分枝杆菌耐药基因的全面检测。
二、高通量测序技术的特点二代测序技术近年来发展迅猛，具有通量高、速度快的优点，但存在读长较短，不利于后续生物信息学分析的缺点，且PCR扩增过程中DNA序列碱基的G-C偏好性会影响检测的准确性。
结核分枝杆菌实验报告
一、实验目的1. 了解结核分枝杆菌的生物学特性及致病机理；2. 掌握结核分枝杆菌的培养、分离、鉴定及检测方法；3. 增强实验室操作技能，提高对结核病的防控能力。
二、实验原理结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis）是一种革兰氏阳性细菌，是引起结核病的病原体。
本实验通过培养、分离、鉴定及检测结核分枝杆菌，了解其生物学特性及致病机理。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：（1）结核分枝杆菌菌种；（2）牛肉浸液；（3）鸡蛋；（4）石炭酸复红染液；（5）无菌生理盐水；（6）无菌试管；（7）酒精灯；（8）高压蒸汽灭菌器；（9）显微镜；（10）生物安全柜。
2. 实验仪器：（1）恒温培养箱；（2）电热恒温水浴锅；（3）无菌操作台；（4）超净工作台；（5）显微镜。
四、实验方法与步骤1. 菌种复苏（1）将冷冻保存的结核分枝杆菌菌种复苏于牛肉浸液中，37℃恒温培养24小时；（2）观察菌落生长情况，记录结果。
2. 分离纯化（1）将复苏后的菌液涂布于牛肉浸液琼脂平板上，37℃恒温培养24小时；（2）挑取单菌落进行纯化，重复涂布、培养，直至获得纯化菌落。
3. 鉴定（1）挑取纯化菌落，用无菌生理盐水洗涤，制成菌悬液；（2）将菌悬液滴加于石炭酸复红染液中，37℃恒温染色30分钟；（3）用无菌生理盐水冲洗，观察菌体形态及染色特性；（4）挑取染色阳性菌落，进行生化试验，如氧化酶试验、触酶试验等，以鉴定结核分枝杆菌。
4. 检测（1）挑取纯化菌落，制成菌悬液；（2）将菌悬液滴加于含有药物的琼脂平板上，37℃恒温培养24小时；（3）观察药物对菌落的抑制作用，判断药物对结核分枝杆菌的敏感性。
五、实验结果与分析1. 菌种复苏：复苏后的菌落呈白色，表面光滑，呈干燥状，有明显的溶血现象。
2. 分离纯化：纯化后的菌落呈白色，表面光滑，呈干燥状，有明显的溶血现象。
3. 鉴定：挑取染色阳性菌落，进行生化试验，结果显示氧化酶试验、触酶试验均为阳性，符合结核分枝杆菌的生物学特性。
(完整版)结核病知识试题及答案综合版
1结核病的病原体是哪种微生物？A、分枝杆菌B、病毒C、寄生虫D、细菌A2肺结核在我国民间又称为什么病？A、肺痨B、阴虚病C、佝偻病D、慢阻肺A3肺结核患者的哪种标本传染性最强？A、痰液B、血液C、汗液D、尿液A4结核病的主要传染源是哪类病人？A、痰菌阳性的肺结核病人B、痰菌阴性的肺结核病人C、结核性胸膜炎病人D、各类结核病人A5控制结核传播最主要的措施是什么？A、注意环境卫生B、及早发现病人、治愈传染源C、预防用药D、接种卡介苗B6人体哪些器官可以患结核病？A、除了牙齿和头发外都可以B、只有肺结核C、只有骨结核D、只有淋巴结核A7出现以下哪些症状应怀疑肺结核病？A、咳嗽咳痰超过两周B、低热、乏力、消瘦C、痰中带血D、呼吸困难A8肺结核病能治好吗？A、能B、不能C、大部分能D、不知道C9肺结核病人的传染性什么时候基本消失？A、服用抗生素后2周B、经过2周的正规抗结核治疗后C、肺结核治愈后D、传染性不会消失B10肺结核患者初次就诊一般检查需要留取哪几份痰？A、夜间痰、清晨痰和即时痰B、夜间痰、清晨痰和午间痰C、夜间痰、午间痰和即时痰D、即时痰、清晨痰和即时痰A11初、复治涂阳肺结核病人在疗程满2个月时痰菌仍为阳性者，应在治疗满几个月时增加查痰一次。
A、3B、4C、5D、6E、7A12肺结核病的主要传播途径是什么？A、吸入含结核菌的飞沫核B、与肺结核病人共餐C、与肺结核病人握手D、以上全是A13以下哪个不是一线抗结核药物？A、利福平B、异烟肼C、乙胺丁醇D、氧氟沙星D14结核病开始治疗后，症状消失了就能停药么？ A. 可以B. 不可以C. 因病人情况而异D.以上都不对B15在结核病治疗期间，尿液出现红色可怕吗？ A. 怕B. 不怕B16抗结核治疗必须遵循的原则是什么？A、早期、联合B、早期、联合、适量、规律C、早期、联合、规律、全程D、早期、联合、适量、规律、全程D17临床诊断耐多药结核病的标准是什么？ A.单利福平耐药；B.单异烟肼耐药；C.利福平和异烟肼同时耐药；D.利福平和链霉素耐药。
涂片抗酸染色T-SPOT
涂片抗酸染色T-SPOT.TB与GeneXpert MTB/RIF联合检测在结核病诊断中的应用价值分析【摘要】目的分析涂片抗酸染色（涂片法）、结核感染T细胞斑点试验（T-SPOT.TB）、结核分枝杆菌/利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测技术（GeneXpert MTB/RIF）三种方法联合检测在结核病诊断中的应用价值。
方法回顾性分析2021年12月至2022年9月在广西壮族自治区人民医院同时进行涂片法、T-SPOT.TB、GeneXpert MTB/RIF检测的临床疑诊结核分枝杆菌感染患者的检测结果，以临床确诊结果为“金标准”计算上述三种方法及其中两者联合检测的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值、准确率。
分析三种检测方法单独和联合检测对结核病的诊断价值。
结果298例疑似结核患者中，排除31例，最终临床确诊为结核74例，非结核193例。
涂片法、T-SPOT.TB、GeneXpert MTB/RIF 检测的灵敏度分别为43.2%、94.6%、63.5%，比较差异有统计学意义（χ2=44.861，P=0.000）；T-SPOT.TB检测特异度低于涂片法和GeneXpert MTB/RIF，差异有统计学意义（χ2=74.861，P=0.000；χ2=78.162，P=0.000）；三种方法检测准确率比较差异有统计学意义（χ2=23.468，P=0.000）。
涂片法联合T-SPOT.TB检测的灵敏度与涂片法相比，差异有统计学意义(χ2=45.548，P=0.000)。
涂片法联合GeneXpert MTB/RIF检测的灵敏度与涂片法相比，差异有统计学意义(χ2=6.965，P=0.008)。
结论在结核病诊断中，GeneXpert MTB/RIF和涂片法的准确率比T-SPOT.TB高，T-SPOT.TB或GeneXpert MTB/RIF的检测灵敏度显著高于涂片法。
采用T-SPOT.TB或GeneXpert MTB/RIF联合涂片法均可显著提高结核病诊断的灵敏度，推荐采用联合检测方法以提高临床诊断效能。
结核分枝杆菌的检验及鉴别
结核分枝杆菌的检验及鉴别【摘要】分枝杆菌属是一类细长略弯曲的细菌，有分枝生长趋势，可呈丝状或菌丝样生长。
无鞭毛，无芽孢。
本属细菌的主要特点是细胞壁脂质含量高，其主要成分是分枝菌酸。
本菌需氧，营养要求特殊，大多数生长缓慢，个别菌种目前尚不能人工培养。
结核分枝杆菌复合群是人类结核病的主要病原体，包括结核分枝杆菌、牛分枝杆菌、非洲分枝杆菌和田鼠分枝杆菌。
【关键词】分枝杆菌；检验1生物学特性1.1形态染色结核分枝杆菌为细长略带弯曲的杆菌，有分枝生长趋势，单个、成堆或呈束状排列，大小（0．3～0．6）μm×（1～4）μm，形态如球状、串珠状或丝状，革兰染色不易着色，抗酸染色阳性，一般分枝杆莴采用齐-尼（Ziehl-Neelsen，E-N）抗酸染色后，结核分枝杆菌呈红色，非抗酸菌染色呈蓝色。
1.2培养特性本菌为专性需氧菌。
最适生长温度为37℃，低于30℃不能生长。
pH 6．5～6．8。
营养要求较高，但生长缓慢。
必须在含血清、卵黄、马铃薯、甘油以及某些无机盐类的特殊培养基上才能良好生长。
本菌在培养基上缓慢生长，一般2～4周才能生长出菌落。
菌落表面干燥、粗糙、隆起、呈颗粒状、结节状或菜花状、乳A色或淡黄色，不透明。
结核分枝杆菌在5％～l0％的C02条件下对其生长有促进作用。
其对营养要求高，对一些营养成分有特殊的要求。
例如，结核分枝杆菌专嗜甘油为碳源，而牛分枝杆菌则以丙硐酸盐为碳源。
天冬酰胺是结核分枝杆菌生长最好的氮源，钾、镁、铁、磷等无机离子对其生长有促进作用。
1.3生化反应结核分枝杆菌的生化反应不活泼。
不发酵糖类。
多数菌株触酶试验阳性，但68℃加热后酶活性消失即热触酶阴性，借此可与非结核分枝杆菌区别，后者热触酶试验大多阳性。
结核分枝杆菌硝酸盐还原试验、烟酸试验和烟酰胺酶试验阳性，而牛分枝杆菌则为阴性，可有助于两菌的鉴别。
2细菌学检验结核病的症状和体征往往都不典型，虽可借助x线摄片诊断，但确诊仍依赖于细菌学检验。
《结核分枝杆菌和人类免疫缺陷病毒感染双向筛查技术应用专家共识》(2024)要点
《结核分枝杆菌和人类免疫缺陷病毒感染双向筛查技术应用专家共识》（2024）要点1 TB/HIV双向筛查技术手段1.1 在HIV感染者/AIDS患者中开展活动性TB/结核感染筛查目前WHO推荐用于HIV感染者/AIDS患者活动性TB筛查的方法有TB症状筛查、CXR、C-反应蛋白（CRP）检查、尿脂阿拉伯甘露聚糖抗原侧流（LF-LAM）免疫检测以及MTB 分子快速诊断方法。
我国工作实施方案中还要求对于HIV感染者/AIDS患者定期进行TB 病原学检查。
1.1.1 TB症状筛查我国对于感染HIV病毒的人群（PLHIV）的TB症状筛查主要基于门诊随访时的问卷调查，筛查症状包括：咳嗽、咳痰持续2周以上；痰中带血、反复发热持续2周以上；反复夜间出汗、无法解释的体重明显下降、经常容易疲劳或呼吸短促、淋巴结肿大。
1.1.2 胸部影像学检查胸部影像学检查是筛查、诊断或排除活动性肺结核的重要手段之一。
胸部影像学检查包括CXR、胸部CT断层扫描等，是普及性较广的一种检测手段。
1.1.3 TB细菌学检查TB细菌学检查是诊断活动性肺结核的重要检测方法，主要包括痰涂片和痰培养，临床上广泛用于一般人群肺结核的诊断和鉴别诊断。
目前尚无其他检测手段能代替痰培养作为TB实验室确诊的“金标准”。
1.1.4 快速分子生物学检查随着核酸检测技术的迅速发展，快速分子生物学检测已广泛应用于TB诊断，国外研究显示其在HIV感染者/AIDS患者中开展结核筛查也具有较高的灵敏度和特异度。
1.1.5 CRP检查CRP是一种非特异性的炎性标志物，与机体的感染或应激状态相关。
CRP检测简便、价廉、易操作，是POCT的常用项目，普及性高。
1.1.6 LF-LAM免疫检测我国尚未引进该项技术。
1.1.7 结核感染检查WHO和我国推荐用于HIV感染者/AIDS患者LTBI筛查的方法有结核菌素皮肤试验（TST）、γ-干扰素释放试验（IGRA）和基于结核分枝杆菌抗原的皮肤试验（TBST）。
结核杆菌皮试结果判断标准
结核杆菌皮试结果判断标准
结核杆菌皮试，又称结核菌素试验，是一种用于检测人体是否感染结核分枝杆菌的常用方法。
其结果判断标准如下：
1. 硬结直径：硬结是皮试后出现的局部皮肤肿胀和发硬的区域。
测量硬结的直径是判断结果的主要指标之一。
2. 硬结大小判断：
- 硬结直径小于5 毫米为阴性，提示未感染结核分枝杆菌或免疫力较低。
- 硬结直径在5 毫米至9 毫米之间为弱阳性，提示可能曾经感染过结核分枝杆菌或有一定的免疫力。
- 硬结直径在10 毫米至19 毫米之间为阳性，提示可能存在结核分枝杆菌感染。
- 硬结直径大于或等于20 毫米或出现局部水疱、坏死等强烈反应为强阳性，提示可能存在活动性结核感染。
3. 结果解读：结核杆菌皮试结果需要结合临床症状、病史和其他检查进行综合判断。
需要注意的是，结核杆菌皮试结果并不是确诊结核感染的唯一依据，还需要结合其他检查如胸部X 光检查、痰液检查等来确诊结核病。
如
果皮试结果为阳性或强阳性，建议及时咨询医生并进行进一步的检查和诊断。
以上内容仅供参考，如果你需要更专业的信息，请咨询专业医生。
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最新：综合医院结核分枝杆菌感染实验室检查共识(最全版)综合医院结核分枝杆菌感染(结核病)的病原学诊断一直是业界焦点。
编写组专家对综合医院结核分枝杆菌感染(结核病)的微生物学检查进行了讨论，撰写了专家共识，并对一些关键问题给出了推荐。
本文包括涂片、培养、药敏试验等技术内容，希望能为临床处置、实验室工作提供合理、实用的帮助。
结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis, MTB )是经典致;, 引起肺结核和肺外感染。
结核病是目前全球感染性疾病死亡的主要原因。
我国是〃结核病大国〃，初诊患者很多在综合医院就诊，但结核病在综合医院的病原学诊断、药敏试验等却不尽如人意。
中国医疗保健国际交流促进会临床微生物与感染分会、中华医学会检验医学分会临床微生物学组、中华医学会微生物学和免疫学分会临床微生物学组组织专家撰写本共识, 供综合医院结核病病原学检查参考。
一、术语(—)结核分枝杆菌复合群(Mycobacterium tuberculosis complex , MTBC) 该菌是细长、直或稍弯曲、两端圆钝的杆菌，长约1-4 μm ,宽约0.3~0.6 μm ,抗酸染色阳性，可致结核病。
结核分枝杆菌复合群包括MTB s牛分枝杆菌、非洲分枝杆菌、卡内蒂分枝杆菌和田鼠分枝杆菌等。
非结核分枝杆菌（non-tuberculous mycobacteria , NTM ）是指分枝杆菌属中除结核分枝杆菌复合群及麻风分枝杆菌以外的菌种。
（二）活动性结核病MTBC感染人体后,处于活动期，患者有结核病相关的临床症状和体征，有MTB 感染的病原学、病理学、影像学等检查证据。
（三）潜伏性结核感染（latent tuberculosis infection , LTBI）机体感染MTBC后出现持久免疫应答但未发生活动性结核病的一种临床状态，临床上既无活动性结核病的症状、体征和明显的实验室检查异常，也无活动性结核病的影像学证据等。
目前尚无公认的LTBI诊断方法。
（四）肺外结核病结核病变发生在肺脏以外的器官和部位，可能伴/不伴非特异性全身症状。
如淋巴结、骨、关节、泌尿生殖系统、消化系统、中枢神经系统等部位。
（五）多重耐药结核病（multidrug resistant tuberculosis , MDR-TB ） MTB 领域指该菌同时对异烟月井和利福平耐药。
该菌所致疾病为MDR-TB o（六）广泛耐药结核病（extensively drug-resistant tuberculosis , XDR-TB ）MTB领域指该菌对利福平和任何氟瞳诺酮类药物以及贝达奎林和利奈嘤胺中的一种具有耐药性。
该菌所致疾病为XDR-TB o（七）准广泛耐药结核病（pre-extensively drug-resistant tuberculosis , pre-XDR-TB ）MTB领域指该菌对利福平和任何氟嗡若酮类耐药。
二、目的与适用范围（一）目的鼓励综合医院开展结核病的病原学检查，规范结核病实验室诊断和鉴别诊断，提高综合医院结核病诊、治、防、控能力。
（二）适用范围对咳嗽、咳痰2周或2周以上，或痰中带血或咯血，或依据流行病学史、临床症状、影像学特征等，疑为结核病或需费非除结核病时,应开展结核病病原学检查。
对病原学阳性患者的密切接触者、人类免疫缺陷病毒感染者/艾滋病患者、透析或移植患者、硅肺患者等重点人群的主动筛查。
接受免疫抑制疗法的患者，如肿瘤坏死因子α拮抗剂、系统性皮质类固醇或器官移植后使用免疫抑制剂等，应开展结核病和潜伏性结核感染的筛查与监测随访。
本共识所列MTB实验室检测项目的相关建议适用于综合医院。
结核病医院、收治结核病的感染病医院/传染病医院之外的其他专科医院，如果涉及结核病，可以参考本共识。
三、中国结核病流行病学和综合医院在结核病微生物学诊断中的定位(-)结核病面临的挑战结核病是由MTB感染引起的重要传染病，患病率高，社会负担重。
MTB 进入人体会引发以细胞免疫为主的免疫反应和迟发性变态反应，造成慢性炎症、干酪样坏死和空洞形成的病理改变，进展缓慢。
肺结核的主要临床症状为咳嗽、体重减轻、盗汗、低热等，也可以无明显症状，隐匿起病；肺外结核的临床表现还有相应受累局部的炎症病变。
2021年世界卫生组织(World Health Organization , WHO )全球结核病报告显示,2020 年全球估算新增结核病病例约990万每10万人中约有127例患病1 ]0 30个结核病高负担国家占全球所有估算病例的86% ,前3位国家为印度(26% )、中国(8.5% )和印尼(8.4% ) o 2020年中国估算发病数84 万，发病率59/10万。
2020年中国登记的人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus , HIV )感染者中结核阳性率1.4% , HIV 阳性结核病发病数1.2万，实验室确诊的MDR-TB和利福平耐药结核病(rifampicin-resistant tuberculosis z RR-TB )患者1.6 万z pre-XDR-TB 和XDR-TB患者1.2万。
2020年，新型冠状病毒肺炎疫情影响全球结核病防控。
全球用于结核病预防、诊断和治疗服务的费用下降9%β WHO 预计结核病作为单一传染病死亡原因从2019年第1位降至2020年第2 位。
(二)综合医院是发现结核病的主要场所和前哨结核病患者常常以呼吸道疾病表现为主,估计有超过50%的结核感染者到综合医院首诊就医。
建设综合医院结核病检测能力是提升结核病防治水平的首要任务。
及时发现结核感染者，控制传染源是结核病防治工作的起点[2],而结核病的临床实验室检测是诊断该病的重要支撑。
结核病防治体系中传染病专科医院集中收治结核病患者，而综合医院已成为发现结核病的主要场所和前哨[3 ]。
WHO全球结核病报告显示，2020年全球病原学阳性证据率为58%o而我国登记的结核病数据显示2020年诊断结核病时55%的患者具有病原学阳性证据[4 ],比例低于全球水平，误诊和漏诊并不少见。
另一方面，结核病的实验室诊断技术不断进步，从传统抗酸染色、MTB培养、体外药敏等经典细菌学检查发展成包括结核免疫学、分子生物学检测及结核病辅助检测等多方面的结核病临床检验体系，同时从手工到自动化，从定性到定量的变革，使综合医院可根据自身能力开展和优化结核病检测工作[5 ],为〃健康中国2030〃〃2035终止结核流行〃目标提供保障。
四、结核病实验室检查方法与结果解释结核病实验室检查方法按方法学分类包括以下3种。
(1)病原学诊断方法：如涂片显微镜检查与培养；(2)免疫学诊断试验：如结核菌素皮肤试验(tuberculin skin test, TST )、结核抗体检测与Y-干扰素释放试验(interferon-γ release assay , IGRA ) ; ( 3 )分子生物学方法。
其中，培养与分子生物学方法可用于结核病确诊。
(-)涂片显微镜检查用于涂片显微镜检查的临床标本，包括但不限于呼吸道标本(痰、咽喉拭子、支气管肺泡灌洗液、支气管毛刷等)、胸腔积液、腹腔积液、尿液、脑脊液、胃液、脓液（分泌物、穿刺液等）、穿刺物、病理组织、粪便等。
对于痰标本，采用5%次氯酸钠液化后离心浓缩，沉淀物涂片染色可有效增加阳性率，对于未采用分子生物学或培养等手段的实验室非常重要。
对于体液标本，含有的MTBC的数量很少，涂片本身价值非常有限，一般推荐浓缩后涂片。
但是浓缩过程存在生物安全风险，且MTBC的比重与水相近,有一部分MTBC会存在于上清液中，离心未必有效提高检出率。
因此在实验室有条件时应尽可能采用更灵敏的手段进行MTBC检测。
目前较为实际的方法是，对肉眼所见清亮的体液标本，优选细胞离心甩片机浓缩制片，也可使用普通离心机。
对于脑脊液，标本量充足时建议至少用5 ml 标本。
当标本混浊、血性或脓性，可直接涂片不离心。
浓缩的标本在进行半定量报告时，建议备注为〃浓缩标本〃。
胸腔积液时，优选胸腔活检组织用于MTBC微生物学检查。
1.萋-尼抗酸染色和显微镜检查：该方法采用萋-尼抗酸染色液对临床标本涂片染色后，用普通光学显微镜或发光二极管显微镜进行观察。
2.荧光染色和显微镜检查：该方法利用金胺〃0〃染料对抗酸杆菌进行染色。
该方法阅片时间较短，一般为1~3 min ,可减轻工作强度。
荧光染色后的标本要立即观察，否则应将玻片标本置于2~8 OC黑暗中以减少淬灭对结果的影响。
结果分级报告标准见表I o表1分枝杆菌姜-底⅛色与荧光染色镜检结果分级报告标准项目安尼雌a≡⅛W5!S?图能阻性i®ftQ»3oo^?ap. *⅛3an⅛ffβoft/so®!?θtt (}g≡Γ»¾ffβ≡)l~8⅛∕300财l-9ft∕5O⅞(W1+35/100则=300个视Sf IZ9加50的2+®S®«100个152»1~曲1蝴3*l→SVl 蟋lO-99S∕l¾0ff4+≥1OS∕1⅛ES10θ3WiULt∕i¾W注：a ffiβlJgS2*≡^J5≡R100y r⅞I!W. 3+. 4+时≡TWSΛ5<K∙？SS. SWffieB≡SKK例，报（1D：吸火体、丝状侬巨玲牯等）.0茄/Er兄5哂BMSJB.败：耍尼奥色J3性也体（2+） . *2.至少观RxrNBSf. 3+及以上的阳佳i≡JΛ至少观察204书理？涂片镜检具有操作简单、检测迅速、对硬件设施要求不高等优点，适合基层开展。
但该方法敏感度较低，特别是儿童、艾滋病与肺外结核病患者[6, 7 ]。
Tan 等[8 ]以BD MGrr 液体培养和/或Xpert MTB/RIF 分子生物学方法作为MTBC检测〃金标准〃，评估了自动涂片显微镜检查技术(自动系统)的敏感度和特异度。
结果自动系统检出率为28.2% (150/496 ),明显高于人工涂片镜检21.1% ( 111/496 , P<0.01) o 190份阳性标本中，自动系统检出140份阳性，敏感度为73.7% ,明显高于人工涂片镜检553% ( P<0.01)。
此外，涂片镜检的缺点还包括：不能区分菌体的死活，无法开展后续的药物敏感性试验只能检测标本中是否存在分枝杆菌不能区分MTB和NTM , 检测结果阳性还需进一步明确。
我国"MTB分离株〃中最后鉴定为NTM 的比例约22.9% [9]NTM可呈现一定程度的抗酸性，其他如红球菌属、诺卡菌属、米克戴德o很多军团菌、隐袍子虫属的包囊、等抱子虫、环抱子虫和微抱子菌属抱子，也有某些程度的抗酸性。