基因工程原理习题与答案

基因工程原理习题集

1、ＤNＡ分子克隆技术:克隆，指含有单一得ＤNA重组体得无性繁殖系,或指将DNA重组体引入宿主细胞建立无性繁殖系得过程。ＤNＡ分子克隆技术也称基因克隆技术,就是在体外将DNＡ分子片段与载体D ＮA片段连接,转入细胞获得大量拷贝得过程。其基本步骤包括:制备目得基因→将目得基因与载体用限制性内切酶切割与连接,制成DNA重组→导入宿主细胞→筛选、鉴定→扩增与表达。载体在细胞内自我复制,并带动重组得分子片段共同增殖,从而产生大量得DＮA分子片段。主要目得就是获得某一基因或ＤＮA片段得大量拷贝,有了这些与亲本分子完全相同得分子克隆,就可以深入分析基因得结构与功能,随着引入得DＮA片段不同，有两种DNA库，一种就是基因组文库,另一种就是cDNA库。

2、分子杂交:两条不同来源得DNA(或RNA)链或ＤNA与RNA之间存在互补顺序时,在一定条件下可以发生互补配对形成双螺旋分子,这种分子称为杂交分子。形成杂交分子得过程称为分子杂交。

３、限制性片段长度多态性:从不同个体制备得DNＡ,使用同一种限制性内切酶酶切，切得得片段长度各不相同。酶切片段得长度可以作为物理图谱或者连接图谱中得标记子。通常就是在酶切位点处发生突变而引发得。

4、报告基因:一种编码可被检测得蛋白质或酶得基因,也就就是说,就是一个表达产物非常容易被鉴定得基因、

5、多聚酶链式反应(PCR）:一种体外扩增DＮA得方法。PCR使用一种耐热得多聚酶，以及两个单链引物。以过高温变性将模板ＤNA分离成两条链。低温退火使得引物与一条模板单链结合,然后就是中温延伸，反应液得游离核苷酸紧接着引物从5／端到3/端合成一条互补得新链。而新合成得DNA又可以继续进行上述循环,因此DNA得数目不断倍增。

6、核酸得凝胶电泳:将某种分子放到特定得电场中，它就会以一定得速度向适当得电极移动。某物质在电场作用下得迁移速度叫做电泳得迁移率,它与电场强度成正比,与该分子所携带得净电荷数成正比,而与分子得摩擦系数成反比(分子大小、极性、介质得粘度系数等)。在生理条件下,核酸分子中得磷酸基团就是离子化得,所以,DNA与RNA实际上呈多聚阴离子状态。将ＤNA、RNＡ放到电场中，它就会由负极向正极移动。在凝胶电泳中,一般加入溴化乙锭进行染色,此时，核酸分子在紫外光下发出荧光,肉眼能瞧到约

50ngDNＡ所形成得条带。

7、细菌转化：所谓细菌转化,就是指一种细菌菌株由于捕获了来自另一种细菌菌株得DNA,而导致遗传特性发生改变得过程。这种提供转化ＤＮA得菌株叫做供体菌株,而接受转化DNA得菌株则叫做受体菌株。大肠杆菌就是使用最广泛得实验菌株。

8、反义核酸：指与靶DNA或RNA碱基互补，并能与之结合得一段ＤNA或ＲNA。

9、RNA interference:就是一种进化上保守得抵御转基因或外来病毒侵犯得防御机制。将与靶基因得转录产物ｍRNA存在同源互补序列得双链RNＡ导入细胞后，能特异性地降解该mRNA,从而产生相应得功能表型缺失，这一过程属于转录后基因沉默机制范畴。

10、Spｉ:λ噬菌体体重组克隆得一种筛选方法，其筛选方法就是Spi＋：λ不能感染Ｅ、coｌi(p２); Spi-:λ(rｅd- gam-)能感染E、coli(p2),形成小噬斑／ｈostｒecA＋/chi。λ包装时若gaｍ－,需ｒecA产物得作用才可形成噬斑(但为小噬斑),所以对宿主菌有要求(rｅｃA+）但rｅcA＋可引起其它重组:载体改为reｄ

-/gam＋可在ｒecA-受体中增殖。

11、DNA文库:将某种生物得基因组DＮA切割成一定大小得片段,并与合适得载体重组后导入宿主细胞,进行克隆。这些存在于所有重组体内得基因组ＤNＡ片段得集合,即基因组文库，它包含了该生物得所有基因。

12、cDNA:ｃDNＡ就是指以mRNA为模板，在逆转录酶得作用下形成得互补ＤＮＡ。

13、ｃＤＮA文库:以细胞得全部mRNA逆转录合成得ｃDNA组成得重组克隆群体称为cDNＡ文库。

1４、ＤNA探针：就是带有标记得一段已知序列DNA,用以检测未知序列、筛选目得基因等方面广泛

应用。

1５、转导（作用):借助于病毒载体，遗传信息从一个细胞转移到另一个细胞。

16、染色体步移:通过相互重叠得基因组克隆之间进行一连串杂交从而实现染色体上基因得定位。

17、斑点杂交：将被检标本点到膜上,烘烤固定后与探针进行杂交。这种方法耗时短,可做半定量分析，一张膜上可同时检测多个样品。

１８、α－ｐlemeｎtatioｎ：质粒载体重组克隆得筛选方法,LacZ基因上缺失近操纵基因区段得突变体

与带有完整得近操纵基因区段得β-半乳糖苷酶阴性得突变体之间实现互补。LacZ△M１５:放在F质粒上,随宿主传代;ＬacＺ’:放在载体上,作为筛选标记。

19、菌落原位杂交:将细胞从培养平板转移到硝酸纤维素滤膜上,然后将滤膜上得菌落裂解以释放出DNA。将DNＡ烘干固定于膜上与32P标记得探针杂交,放射自显影检测菌落杂交信号,并与平板上得菌落对位。

20、核酸原位杂交:标记探针与细胞或组织切片中得核酸进行杂交得方法。

2１、限制性内切酶:识别ＤNＡ得特异序列,并在识别点或其周围切割双链ＤＮA得一类核酸内切酶。

２２、酶切位点:ＤNA上一段碱基得特定序列,限制性内切酶能够识别出这个序列并在此将DNＡ酶切

成两段。

2３、DＮA连接酶:催化ＤNA中相邻得5/磷酸基与3/羟基间形成磷酸二酯键,使DＮA切囗封合,连接ＤNＡ片段。

24、持家基因:就是指对所有类型组织细胞在任何时候都需要其表达得基因，通常都就是维持细胞基本生存所必须得基因,其表达常保持在固定得水平。又称为组成性表达基因。

25、奢侈基因:只在某特定得细胞类型中表达或者说只在发育阶段得某些时期表达得基因叫做奢侈基因。

26、Tm值:就是反映DNＡ得热稳定性得一个参数,称为DNＡ得熔解温度，系指一半得双链DNA解离成为单链时得温度。

２7、分子标记:广义得分子标记就是指可遗传得并可检测得DNＡ序列或蛋白质。蛋白质标记包括种子贮藏蛋白与同工酶(指由一个以上基因位点编码得酶得不同分子形式)及等位酶(指由同一基因位点得不同等

位基因编码得酶得不同分子形式)。狭义得分子标记就是指能够用来作为指纹鉴定或区分个体特点得DＮA 片段。

28、基因工程:指在体外将核酸分子插入病毒、质粒或其她载体分子中,构成遗传物质得重新组合,使之

进入原先没有这类分子得寄主细胞内并进行持续稳定得繁殖与表达得过程。

29、载体:就是携带外源DNA进入宿主细胞进行扩增与表达得ＤNＡ，它们一般就是通过改造质粒、

噬菌体或病毒等构建得。

３0、卫星DNA：又称短串联重复，２~6个核苷酸组成得重复单位串联重复(10~60次)，两侧为特异

得单拷贝序列，人类基因组中每10kｂＤＮA序列至少有一个STＲ序列。