B16F10小鼠黑色素瘤高转移细胞
构建稳定表达PDL1的B16F10细胞株
·论著·构建稳定表达PDL1的B16F10细胞株宁晓敏李冬琨钱莉【摘要】目的通过转染及流式细胞仪（flow cytometry，FCM）筛选出稳定表达小鼠细胞程式死亡配体1（Programmed cell death ligand1，PDL1）的B16F10细胞株。
方法将携带PDL1的真核表达质粒通过脂质体法转染到B16F10细胞株中，经FCM进行多次分选，筛选出稳定表达PDL1的B16F10细胞株，将其与抗CD3/抗CD28抗体活化的CD4+T细胞共培养48h后，FCM检测CD4+T细胞表面CD69以及CD25的表达。
结果建立了稳定表达PDL1的B16F10细胞株，该细胞株表面的PDL1可诱导CD4+T细胞高表达CD25。
结论成功地得到了稳定表达PDL1的B16F10细胞株，为后续研究奠定了物质基础。
【关键词】PDL1；稳定表达；B16F10细胞株［中图分类号］Q23［文献标识码］A DOI：10．3969/j．issn．1002－1256．2020．05．005Construction of a B16F10cell line that stably express PDL1NING Xiao－min．Medical college of YangzhouUniversity，Yangzhou，Jiangsu，225001，China．【Abstract】Objective To establish and screen a stable B16F10cell line expressing mouse programmedcell death ligand1（PDL1）via transfection and flow cytometry（FCM）．Methods The plasmid containing PDL1cDNA was transfected into B16F10cell lines using jetPEI TM DNA transfection reagent．B16F10cell lines thatstable express PDL1were obtained by multiple sorting by FCM．The anti－CD3/anti－CD28activated CD4+T cellswere co－cultured with B16F10cells for48hours and then the CD69and CD25expression on CD4+T cells weredetected by flow cytometry．Ｒesults Stable transfected B16F10cell line expressing PDL1was established and thePDL1on the surface of B16F10cell lines activated CD4+T cells to express high levels of CD25．Conclusions TheB16F10cell line that stable expression of PDL1was successfully obtained and it provided solid experimentalfoundation for further studies．【Key words】PDL1；Stable expression；B16F10cell lines细胞程序性死亡配体1（Programmed cell death ligand1，PD－L1）属于B7超家族成员，主要表达在B 细胞、巨噬细胞等抗原提呈细胞表面［1］。
槲皮素-环糊精复合物对B16F10黑色素瘤细胞荷瘤BDF1小鼠肿瘤生长和肿瘤血管生成的抑制作用
１ 在 体 内吸 收 试 验 中 ， 性 Ｆｓｈ ｒ大 鼠禁 食 ） 雄 ｉｃ ｅ １ ２ｈ后 灌 胃和 静 脉 给 以［ Ｃ］ Ａ ０ １ ， “ Ｅ ． ９ｍｇ 给药 后
０ ５ｈ或 １ ． ２ｈ处死 动物 ， 即采血 制备血 浆 ， 立 并剥 离 食 管、 肠、 肠、 、 、 ， 小 大 肺 肝 肾 观察 试 药 的 分 布 。２ ）
产 物 （ ＯＥ） Ｄ Ｃ 的 Ｐ 分别 为 ３ ． 、 ９ ５ ４ ． ； ２ ０ ４ ． 、 ７ ４ 上述 ４
Ｅ＇ ］ Ａ在细胞 中 的积 累 。Ｃ ｃ 一 和 ＨＥ １ 细胞 ￣ Ｅ Ｃ ａｏ ２ Ｔ一Ａ 的 ［ Ｃ］ Ａ， Ｂ Ｐ外 ， 接 下来 的 ３ ｎ冲洗 和 ¨ Ｅ 除 Ｓ 在 ０ｍｉ 摄取介 质 中加入 传输抑 制剂 。 反应停 止后 ， 细胞 经 冲 洗、 消化 后测定 ［ ］ Ａ 的量 。采 用 Ｒ Ｐ Ｒ进 行 Ｃ Ｅ Ｔ— Ｃ 总 ＲＮ 分 析 。结果显示 ， Ｅ 灌 胃给 以大 鼠 Ａ 当Ｅ Ｃ］ Ａ ａ ＇
０ ５ｈ后 ， Ａ 在 食 管 和 小 肠 上 皮 组 织 中 的水 平 最 ． Ｅ
用温 缓 冲液 在 ３ ｎ内冲洗 ２次后添 加 １ ￣ ｌＬ ０ｍｉ ０ ｍｏ／ 瘤 ， 片 ， 切 染色 ， 低倍 光镜 观察 、 定肿 瘤毛 细血 管密 测
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Ｐｈ ｒ Ｐ ａ ｍ ａ ｏ ． ２ ０ ， ０ ６ ５ （ ） 一 ２ １ ２ ９
管 生成 和肿瘤细 胞生 长的作用 。 在体 外实 验 中 ， 将经 过 培养 的人 红一 白细胞癌 和 宫 颈癌 细胞株 接种 于 ９ ６孔板 （ ×１ 孔 ） １ ０／ 培育 ２ ４ｈ
肿瘤移植(TT)小鼠模型具体方法及步骤
肿瘤移植(TT)小鼠模型具体方法及步骤原型物种人来源黑色素瘤B16细胞导致的肿瘤肝转移及肺转移模式动物品系SPF级C57BL/6小鼠，健康，雄性，4~6W，体重为18g~20g。
实验分组实验分六组：正常对照组、模型组、阳性药组、受试药组三个剂量组。
实验周期4-6 weeks建模方法恶性黑色素瘤(malignant melanoma MM)的发病率较低, 但恶性度高, 转移早而广泛，且对常规放疗有较强抗性，临床治疗颇为棘手，目前尚无有效的治疗方法，其常规治疗主要有免疫治疗、化疗、生物治疗、近距放射疗法和外束放射疗法等。
近年恶性黑素瘤发病率和死亡率明显上升，肿瘤侵袭及转移是其治疗失败的主要原因，很大一部分肿瘤病人在初治时已有微小的或潜在的转移病灶。
为了能彻底治愈癌症，控制肿瘤侵袭和转移是治疗的关键。
黑色素瘤B16细胞株是生长在C57BL/6小鼠耳根部的自发性肿瘤，C57BL/6小鼠的B16移植瘤和转移瘤模型是肿瘤研究的常用模型之一。
小鼠成瘤实验：取对数生长的细胞，胰酶消化后培养基重悬收集细胞，用无菌磷酸盐缓冲液(PBS)调整细胞密度备用。
选用C57BL/6J 小鼠建立B16 细胞肿瘤转移模型，每组10 只。
试验组小鼠尾静脉注射浓度为5×10 6 /L 的B16 细胞悬液0.1ml，每组于接种细胞次日起腹腔注射药物，10 日后改为隔日注射一次。
于第21天，处死动物，取肝脏及肺组织，解剖镜下计数转移的结节数量，数码相机拍照，并对各组小鼠肺转移结节的数目进行统计学分析。
应用肿瘤转移疾病模型模型评价各组小鼠尾静脉注射接种肿瘤细胞后，生长良好，体重无明显变化，组间无明显差异。
第21 天时处死小鼠，取肝脏及肺组织，解剖镜下观察，可发现肝脏及肺组织有明显转移的结节。
解剖镜下计数转移的结节数量，可见给药组小鼠肝脏及肺结节数目明显低于阴性对照组。
取材：1.实验结束后每组取肝组织、肺组织和肿瘤组织，每个组织从瘤体中央分为2份，一份置于甲醛固定；另一份液氮冷冻置于-80度保存，用于分子生物学和WB检测等等。
b16f10细胞的生长要求
b16f10细胞的生长要求一、引言：细胞生长是生物体发育、生长、繁殖和代谢的基础。
在科学研究和医学领域，对细胞生长的研究具有重大意义。
本文以b16f10细胞为例，详细介绍其生长要求，为相关领域的研究者提供参考。
二、b16f10细胞的基本特点：b16f10细胞是一种来源于小鼠的恶性黑色素瘤细胞系。
它们具有以下特点：1.恶性程度高，生长速度快；2.具有侵袭性和转移能力；3.对多种化疗药物和放疗敏感；4.表达黑色素瘤相关抗原。
三、b16f10细胞的生长条件：1.合适的培养基：选择专一性培养基，如DMEM、RPMI-1640等；2.适宜的温度：一般为37℃；3.恒定的气氛：95%空气+5% CO2；4.适当的湿度：约90%。
四、影响b16f10细胞生长的因素：1.营养因子：如葡萄糖、氨基酸、脂肪酸等；2.生长因子：表皮生长因子、胰岛素等；3.细胞因子：如IL-2、IL-4等；4.细胞外基质：纤维素、弹性蛋白等。
五、维持b16f10细胞生长的方法：1.定期换液：每2-3天更换一次培养液，以提供新鲜营养；2.观察细胞密度：当细胞密度达到约80%时，进行传代培养；3.细胞贴壁生长：保持适宜的细胞贴壁密度，避免过密生长；4.避免细菌污染：严格无菌操作，定期检测培养液菌落。
六、总结：b16f10细胞在生物医学研究中有广泛应用，了解其生长要求对实验结果具有重要意义。
通过掌握细胞生长条件、影响因素和维持方法，可以有效提高b16f10细胞的生长效率，为相关领域的研究提供有力支持。
本文旨在提供一个全面的b16f10细胞生长要求指南，以供参考。
小鼠黑色素瘤B16F10-Red细胞株的建立与生物学特性分析
小鼠黑色素瘤B16F10-Red细胞株的建立与生物学特性分析吴伶俐;孙永强;王建红;何向锋;周玉清;郑丽云;赵文静;陈橼;李国兴【期刊名称】《现代肿瘤医学》【年(卷),期】2016(24)6【摘要】目的:构建表达香菇珊瑚红色荧光蛋白(discosomasp red fluorescent protein,DsRed)的小鼠黑色素瘤B16F10-Red细胞株,并检测其生物学特性.方法:用GenEscortTMⅡ转染试剂将pDsRed质粒导入小鼠黑色素瘤B16F10细胞,G418加压培养联合极限稀释法建立稳定、高水平表达DsRed的单克隆细胞系.FCM检测B16F10和B16F10-Red细胞的细胞周期.比较B16F10-Red和B16F10细胞的克隆球形成能力和小鼠体内致瘤能力.结果:稳定表达DsRed的小鼠黑色素瘤B16F10-Red细胞株基本保持了其亲代细胞的特征,能在C57BL/6小鼠腹部皮下形成肿瘤并继续生长和转移.结论:B16F10-Red细胞株构建成功,其移植瘤模型成瘤率和转移情况同B16F10肿瘤相比无明显差别.【总页数】4页(P861-864)【作者】吴伶俐;孙永强;王建红;何向锋;周玉清;郑丽云;赵文静;陈橼;李国兴【作者单位】东南大学附属中大医院检验科,江苏南京210009;南通大学第二附属医院普外科,江苏南通226001;南通大学附属南通市肿瘤医院内科,江苏南通226361;南通大学附属南通市肿瘤医院内科,江苏南通226361;南通大学附属南通市肿瘤医院内科,江苏南通226361;南通大学附属南通市肿瘤医院内科,江苏南通226361;南通大学附属南通市肿瘤医院内科,江苏南通226361;南通大学附属南通市肿瘤医院内科,江苏南通226361;南通大学附属南通市肿瘤医院内科,江苏南通226361【正文语种】中文【中图分类】R739.5【相关文献】1.重组CCL2小鼠黑色素瘤B-16细胞的建立及生物学活性的鉴定 [J], 胡凯猛;熊俊;冀凯宏;汤淑萍;刘厚奇2.黑色素瘤细胞系HME1的建立及其生物学特性分析 [J], 吴尚辉;黄柏英;顾焕华;彭聪;罗学滨;祝和成3.喉癌顺铂耐药细胞株的建立及干性生物学特性分析 [J], 于锋;龚小蓉;周毅波4.C57BL/6小鼠黑色素瘤B16细胞株在ICR小鼠肿瘤模型的建立 [J], 李桂圆;陈龙邦;臧静;张群5.稳定表达T-钙黏蛋白的黑色素瘤顺铂耐药细胞株的建立及其生物学特性 [J], 陆海涛; 郭健; 何磊; 刘利君; 段昕所因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
B16模型
实验性黑色素瘤肺转移模型的制备
模型建立方法：
将体外原代培养处于对数生长期的B16-F10黑色素瘤细胞，胰酶消化，用RPMI-1640培养液洗2遍，调至1×106/ml悬浮于RPMI-1640培养液中（台盼兰染色检测活性95％以上）。
经眼球后静脉丛每鼠注射0.1ml含0.1ml 1×105个B16-F10黑色素瘤细胞悬液。
模型特点及功用：
可用于研究黑素瘤肺转移的治疗研究。
模型建立和使用注意事项：
1、本课题组选用两种肿瘤细胞株建立了实验性肺转移及自发肺转移模型，发现：眼球后静脉注入2.5×104以上B16黑色素瘤活细胞/鼠是建立实验性肺转移模型的最适剂量；足掌注射2～5×105个Lewis肺癌（LLC）活细胞/鼠是建立自发转移模型的最佳接种方式和剂量范围。
2、近交系C57BL/6小鼠是比较好的选择。
GPNMB与肿瘤靶向治疗
DOI: 10.3969/j.issn.1673-713X.2021.01.010·综述·GPNMB与肿瘤靶向治疗翟小田，苗庆芳非转移性黑色素瘤糖蛋白B（glycoprotein non-metastatic melanoma protein B，GPNMB）是一种高度糖基化的I 型跨膜糖蛋白，定位于细胞膜或贮存于内涵体及溶酶体中。
膜结合型GPNMB 可被金属蛋白酶如ADAM 10 裂解，释放出可溶性形式。
该蛋白最初被发现于非转移性黑色素细胞而得名，后来还被发现在其他多种正常组织和癌组织中均有表达[1-2]。
因此，GPNMB 又名造血生长因子诱导的神经激肽 1 型（HGFIN）、树突状细胞肝素整合蛋白配体（DC-HIL）以及骨激活素（osteoactivin，OA）[3-7]。
相比于正常组织，GPNMB 在癌组织中的表达量更高。
其正常生理功能包括抗炎、神经保护、参与黑色素体合成等；而在肿瘤组织中，GPNMB 可促进多种癌细胞的生长增殖以及转移侵袭，并且还可以促进癌组织周边血管生成[4, 8-11]。
因此，GPNMB 已成为黑色素瘤、乳腺癌、骨肉瘤等多种癌症治疗的潜在靶点，但目前针对该靶点在研药物品种相对较少。
本文拟对GPNMB 的结构、生理及病理功能和相关药物的研发进展进行综述，为以其为靶点的药物研发提供参考和依据。
1 GPNMB 的结构GPNMB 是一种跨膜糖蛋白，主要由胞外区、跨膜区、胞质尾三部分构成[12-13]（图1）。
GPNMB 的胞外区，主要由整合素识别区（integrin-recognition motif，RGD）、多囊肾病结构域（polycystic kidney disease domain，PKD）、脯氨酸富集重复域（proline-rich repeat domain，PRRD）三种亚结构[14-15]构成。
RGD 区能够与整合素受体结合，介导细胞间的粘连[4, 10, 16]。
b16细胞
b16细胞b16细胞是一种具有重要生物学意义的细胞类型，广泛应用于细胞生物学和癌症研究领域。
b16细胞最早来源于小鼠黑色素瘤，具有一系列特定的细胞特征和功能。
本文将介绍b16细胞的来源、特征、应用以及未来展望。
来源b16细胞最初来源于小鼠黑色素瘤组织，是一种体细胞株。
通过细胞培养和传代培养，b16细胞已经得到了广泛的脱附和扩增，成为研究人员研究癌症生物学和治疗的有用工具。
特征b16细胞具有黑色素瘤细胞的特征，包括高度的增值能力、侵袭性和转移性。
这些特征使得b16细胞成为研究癌症发展、转移机制和治疗策略的理想模型。
另外，b16细胞还具有较高的稳定性和易于维持的特点，使得其在实验室中应用较为广泛。
应用b16细胞在癌症研究领域有着重要的应用价值。
研究人员可以利用b16细胞模拟黑色素瘤的生长和转移过程，探索癌症细胞的生物学特征以及潜在的治疗靶点。
此外，b16细胞还可以用于评估抗癌药物的疗效和毒性，为临床治疗策略的制定提供重要参考。
未来展望随着癌症治疗领域的不断发展，b16细胞作为一个重要的实验模型将继续发挥重要作用。
未来，研究人员可以进一步探索b16细胞在肿瘤免疫治疗、靶向治疗等方面的应用，为癌症治疗带来新的突破。
同时，更深入地研究b16细胞的特性和机制，有助于揭示癌症发展的新机制，为精准医学和个性化治疗提供理论支持。
综上所述，b16细胞作为一种重要的细胞模型，在癌症研究领域发挥着不可替代的作用，将继续为癌症治疗的进步贡献力量。
我们相信，通过对b16细胞的深入研究和应用，将会有更多的科学发现和治疗创新涌现。
感谢您阅读本文，希望对b16细胞及其在癌症研究中的应用有更深入的了解。
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B16F10小鼠黑色素瘤高转移细胞
Cat Number：KG078 For Research Use Only
一、组成:
二、客户自备试剂:
1、PBS (凯基货号：KGB5001)
2、Complete growth medium (凯基货号：KGM 31800-500)
3、0.25% （W/V） Trypsin-0.53mM EDTA (凯基货号：KGY0012)
三、细胞简介:
四、常见问题及解决方案:
1、培养瓶有破裂，培养液有漏液：细胞极大可能会污染，所以我们会及时安排帮老师解决。
2、细胞漂浮：培养瓶不开封，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培养箱。
次日观察，如细胞大部分又贴回瓶底，表明细胞
活力正常，剩余漂浮的细胞可以离心去掉，留10ml培养液培养观察，细胞生长至汇合度80%，进行消化传代；如细胞还是不贴壁，将细胞离心收集转到新培养瓶，原培养瓶加部分培养液继续培养，中间注意观察，我们的技术人员会一直跟踪指导，直到问题解决。
客户收到细胞后请务必仔细阅读细胞注意事项，确保细胞的培养条件一致，如果由于培养条件不一致导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。
由于运输的情况，所以极个别细胞会出现不稳定，客户收到细胞后务必第一时间和我们联系，告知细胞具体情况，以便我们技术人员能及时有效的和老师沟通，不胜感谢！。