真菌分类学(标本的采集与制作)
菌物学基础
实验实习指导实验一菌物标本采集和制作一、目的：通过菌物标本采集，了解菌物的生态和多样，进一步认识菌物对寄主的危害性，以及它们与自然界和人类关系。
二、采集用具：扩大镜（10—20X）、标本夹、绳、采集袋（箱）、小刀、剪、镊子、指形管（带塞）、标本纸、塑料袋、标笺、记录本、铅笔、固定液（FAA）、照相机等。
三、采集方法：采集的主要对象是植物的根、茎、叶、花器和果实等发病的部位，其上有明显子实体、或植株残体上和林间地上腐生的大型真菌。
1、采集叶部菌物时，用扩大镜注意观察发病叶片正反两面病斑上有无子实体（霉层、霜霉层、小黑点、锈粉、白粉、泡斑等）；采集时叶片不能太少（一般应采集数片至数十片），预防在制作和鉴定时破损，有的还需要固定作切片用，多余的可作交流；对采集到寄主不熟悉时，最好要采到它的花和果实或种子，以便有助于寄主鉴定；采到锈菌类黑粉菌类、要分别用纸将标本包好，记上标记，以免孢子混杂；如果病斑上未见到子实体的标本，可带回室内进行保湿培养，可能产生分生孢子。
2、采集茎秆部的真菌的，用剪子剪下发病茎秆上具明有明显子实体部分。
如为树干，用小刀将有子实体的树皮削下；如植株是萎茑型的茎秆上有时无霉层，可将茎秆剖开观察内部维管束是否变褐色，将标本带回室内进行分离培养。
3、采集花器或穗部的真菌时，注意发病花器易于腐烂，应先将发病花器的症状照下来，然后用纸包好，记上标记，如病穗上为黑粉状物，也先用纸包好，以免孢子混杂污染。
4、采集果实上真菌时，注意发病果实易于腐烂，应先拍照病果的症状，再用纸包好，记上标记，放入采集袋内。
5、采集根部的真菌时，先观察植株地上部有无不正常现象，然后拔起植株或刨开茎基部土壤，观察根上或茎基部有无菌层或菌丝束或小菌核等物。
6、采集幼苗的真菌时，可将发病幼苗拔起除去根上泥土，用纸包好，记上标记带回室内进行保湿培养或分离培养。
7、采集大型真菌（伞菌、多孔菌、地星、马勃等）时，最好在大雨后2—3天，林木中最多，一般发生在树丛或树桩基部，或树干上，地上或枯枝落叶上，这类真菌大多是肉质或胶质，易于败坏，也应先拍照他们的形态特征，然后用纸包好，记上标记，带回室内用浸渍法或烤干保存。
微生物检验常用技术与方法—临床真菌检验技术与方法(微生物检验课件)
掌握真菌的检验方法。 熟悉真菌标本采集及注意事项； 熟悉真菌的鉴定程序；真菌药物 敏感试验方法。
第一节 真菌形态检验技术
一、标本的采集和处理
1. 标本的采集—— 根据真菌感染部位采集不同的标本。 浅部真菌感染 取毛发、皮屑、指（趾）甲等标本
深部真菌感染
取痰液、脓汁、血液、脑脊液等标本
培养基用途 真菌的常规培养 真菌的常规培养 观察白假丝酵母菌的厚膜孢子 观察真菌菌落色素，用于鉴别 生化反应鉴别培养（红色癣菌和石膏样癣菌） 深部真菌培养 真菌的培养与鉴定
第二节 真菌培养技术
显色鉴定培养基
代谢基质 产色基团
原
真菌的酶
理
分解代谢基质
真菌特异性酶的 底物（无色）
产色基团游离 （显色）
4. 病理组织检查 用于深部真菌感染的诊断。
5. 核酸检测
用于真菌的分型鉴定。
有ELISA、生物学方法、薄层层析法、高效液相
6. 真菌毒素的检测 色谱法等多种方法。
7. G试验
用于念珠菌、曲霉菌等深部真菌感染的早期诊断。
返回章内容
第四节 真菌检验G试验、GM试验
应用背景
• 侵袭性真菌病临床表现不典型，确 诊通常需要侵入性的组织标本，因 此有较高的漏诊率。目前国内大多 数医院都在开展非侵袭性实验室技 术如G试验和GM试验，成为真菌 感染的诊断标准之一，以提高真菌 感染的阳性率。
同化氮源试验
• 检测真菌对氮源利用能力的试验，主 要用于鉴定酵母菌。
明胶液化试验
• 某些真菌具有明胶酶，可分解明胶蛋 白，使其失去凝胶性质而不能凝固。
尿素分解试验
• 某些真菌具有尿素酶，可分解尿素。
第三节 真菌的鉴定方法
常见浅部真菌的标本采集及初步鉴定 -无视频
常见浅部真菌的鉴定
• 二、小孢子菌属-犬小孢子菌（Microsporum canis） • 镜下形态: • 可见很多纺锤形的大分生孢子，壁厚有刺，顶端可有“帽样”
肥大，分隔为6-12隔
常见浅部真菌的鉴定
• 二、小孢子菌属-犬小孢子菌（Microsporum canis） • 鉴定要点：
2、取材选取皮损边缘处，阳性率高； 3、指趾间皮损以第4、第5指趾间阳性率最高； 4、取部分皮屑置载玻片上，滴一滴5~10%KOH，盖 上盖玻片后直接镜检，另取部分皮屑接种于含氯霉素的 沙氏斜面培养基，置28℃培养两周，隔天观察。
标本采集
• 二、采集的注意事项 • 甲屑：
1、取材前局部用75%酒精消毒，先刮去病甲上层；
• 生长速度：25~28℃生长一周的菌落大小 • 生长非常快：直径≥9cm • 生长快： 直径3-9cm • 生长速度中等：直径1-3cm • 生长慢： 直径0.5-1cm • 生长非常慢：直径≤0.5cm • 质地：可见绒毛状、羊毛状、粉末状、颗粒状、蜡样等，表面可 •
高起或平坦，有或无皱折 颜色：红、白、黄、紫等，色素可渗透到培养基中
齐，背面呈葡萄酒色或红色
• III 粉末状：生长快，表面粉末中央凸起，菌落约占斜面的2/3，正面粉红色，
背面暗红色，边缘清楚
• IV 沟纹状：生长快，表面有少许菌丝及放射状沟纹，边缘清楚，背面暗红色
• V 颗粒状：又称胭脂型，似紫色毛癣菌，表面胭脂色，呈颗粒状，日久有少许
白色绒毛状菌落，背面暗红色，菌落质地松脆
• 1、发外镶嵌状孢子
• 2、菌落形态和颜色
• 3、大分生孢子形态特别是末端的帽样肥大
• 4、在米饭培养基上生长良好，可产生大量大分生孢子
大型真菌标本的采集
厚环粘盖牛肝菌Suillus grevillei
厚环粘盖牛肝菌Suillus grevillei
灰环粘盖牛肝菌 Suillus laricinus
松乳菇 Lactarius deliciosus
绒边乳菇 Lactarius pubescens
毛头乳菇 Lactarius torminosus
黑紫红菇 Russula atropurpurea
• 菌托：外菌幕的残留部分在菌柄基部形成的托状结构。
– 菌托的形状（图13）：1.苞状菌托；2.环带状菌托；3.杯状菌托；4.颗粒状 菌托。
• 菌环：在菌柄的一定部位由内菌幕的残留部分形成的环状结构。
– 菌环的形状（图14）：1.向下性的单层环；2.双层环；3.盖缘上的菌幕；4. 丝膜。
图13
（邵力平等，1997）
粪鬼伞 Coprinus sterquilinus
大孢花褶伞 Panaeolus popilionaceus
粪锈伞 Bolbitius vitellinus
毛柄库恩菇 Kuehneromyces mutabilis
金毛鳞伞 Pholiota aurivella
皮革黄丝膜菌 Cortinarius malachius
大型真菌的主要类群
层 菌 纲 Hymenomycetes
伞 菌 目 Agaricales 非 褶 菌 目 Aphyllophorales 银 耳 目 Tremellales
担子菌门 Basidiomycota
异担子菌纲 Heterobasidiomycetes
花 耳 目 Dacrymycetales 木 耳 目 Auriculariales
蜜黄红菇Russula ochroleuca
野外大型真菌识别、标本采集和室内分离实验报告
野外大型真菌识别、标本采集和室内分离一、目的与要求1、掌握野外标本采集的方法和注意事项2、认识常见的大型真菌。
二、实验原理大型真菌以夏秋多雨时的七、八月份出现最多（春季发生的菌类比较少，仅盘菌目中的羊肚菌、马鞍菌和丛耳菌等多发生于春末），所以此时采集标本最为适宜。
担子菌门是一群多种多样的真菌，约1.6万种。
其特征：①菌丝具横隔，有单核菌丝和双核菌丝（又称初生菌丝和次生菌丝），担孢子萌发时形成单核菌丝，单核菌丝接合，核不结合而形成双核菌丝。
双核菌丝时期相当长。
②形成担子、担孢子，在此过程中有锁状连合。
担子菌分为四纲：①层菌Hymenomycetes，如银耳、木耳、灵芝、蘑菇等。
②腹菌纲Gasteromycetes，如马勃、鬼笔等。
③锈菌纲。
④黑粉菌纲。
泰山常见药用蕈菌有：茯苓Poria cocos (Schw.) Wolf.、灵芝Ganoderma lucidum (Leys. ex Fr.) Karst．、蜜环菌Armillaria mellea (Vahl. ex Fr.) Kummer．、脱皮马勃Lasiosphaera fenzlii Reich.、猪苓Polyporus umbellatus (Pers.) Fr.、雷丸Polyporus mylittae Cook. et Mass.、猴头菌Hericium erinaceus (Bull. ex Fr.) Pers.、云芝Coriolus versicolor (Fr.) Fr.、银耳Tremella fuciformis Berk、木耳Auricularia auricular (L. ex Hook.) Underw．、紫芝Ganoderma japonicum (Fr.) Lloyd．、大马勃Calvatiagigantean (Batsch ex Pers) Lloyd.、紫色马勃C. lilacina (Mont. et Berk.) Lloyd.等。
植物内生真菌的分类鉴定方法
植物内生真菌的分类鉴定方法植物内生真菌是指在植物体内生活并与植物形成共生状态的真菌。
它们在植物生长和发育中扮演着重要角色，可促进植物的生长和抵抗病原微生物的能力。
对植物内生真菌进行分类鉴定是研究植物与真菌相互作用的重要基础。
本文将介绍植物内生真菌的分类鉴定方法。
一、分类鉴定的样本采集和处理1. 样本采集：根据需要采集植物的根系样本，选择表现出明显病状或异常的植株，或者在不同生长时期采集不同部位的样本。
2. 样本处理：将采集的样本用刀片或消毒的剪刀从植物体上切取。
为了避免外源杂菌的污染，可以在取样前用70%酒精或漂白粉消毒，然后用无菌蒸馏水或含有保鲜剂的缓冲液清洗数次，将清洗后的样本装入无菌离心管中。
二、分类鉴定的培养方法1. 消毒：将采集的样本在无菌工作台上消毒，可以用70%酒精或漂白粉进行表面消毒，然后用无菌蒸馏水洗涤数次。
2. 培养基：选择适当的培养基进行分离培养。
一般常用的培养基有马铃薯蔗糖琼脂培养基（PDA）、玉米粉蔗糖琼脂培养基（CMD）、毛状植物根培养基等。
3. 分离培养：将处理好的样本放置在培养基上，均匀涂抹或切割后排列，然后放置在适当的温度和湿度条件下培养。
4. 培养温度和时间：一般情况下，在适宜的温度（25-28°C）和光照条件（12小时光照/12小时暗）下培养一周左右，观察是否有菌落形成。
5. 菌落转接：当菌落形成后，可以用无菌环取样，将菌落转移到新的培养基上进行纯培养。
6. 保存：可以将纯培养的菌株进行保存，可以冷冻保存或进行液氮冻存。
三、分类鉴定的鉴定方法1. 形态学鉴定：通过观察菌落的形态、色素、菌丝等形态特征，以及产孢体、分生孢子的形态特征等来进行鉴定。
可以借助显微镜观察菌丝的形态、菌落的形态、菌丝状产孢体和产生的孢子形态。
2. 分子生物学鉴定：采用PCR方法对菌株进行鉴定。
通常可以从菌落或孢子中提取菌株的DNA，然后进行PCR扩增，再通过序列分析进行鉴定。
临床医学检验知识速记--(真菌)微生物学
临床医学检验知识速记--（真菌）微生物学真菌(fungus)是一类具有典型细胞核，有核膜和核仁，胞浆内有完整的细胞器，无根、茎、叶，不含叶绿素，无光合色素，细胞壁含几丁质和纤维素的，单细胞或多细胞异养真核细胞型微生物。
细胞壁：不含肽聚糖，含几丁质及纤维素临床分类(按致病部位)：浅部真菌、深部真菌形态学分类：单细胞真菌、多细胞真菌真菌的形态与结构在鉴定上起重要作用（一）形态与结构1、单细胞真菌：圆形或卵圆形，包括酵母型和类酵母型真菌。
酵母型真菌以芽生方式繁殖，芽生孢子成熟后脱落成独立个体，不产生菌丝，其菌落与细菌菌落相似。
类酵母型真菌也以芽生方式繁殖，菌落与酵母型真菌相似，但它产生的芽体不从母细胞上脱落，而是延伸入培养基内形成假菌丝。
对人致病的主要有新生隐球菌和白假丝酵母菌。
2、多细胞真菌：由菌丝和孢子两种基本结构组成（1）菌丝：在环境适宜情况下由孢子萌发长出芽管，逐渐延长呈丝状，称菌丝。
按照功能分为：①营养菌丝：伸入培养基；②气生菌丝：露出培养基向空气中生长；③生殖菌丝按照结构分为：①有隔菌丝：多数致病性真菌；②无隔菌丝。
菌丝的形态大小不一(螺旋状/球拍状/鹿角状)、菌丝间有无分隔、形状特征(绒毛状/絮状/粉末状) → 鉴别真菌（2）孢子：由生殖菌丝产生的一种繁殖体，是真菌的繁殖结构。
有有性孢子和无性孢子两类①有性孢子：同一菌体或不同菌体上的2个细胞融合经减数分裂形成。
包括：卵孢子、接合孢子、子囊孢子、担子孢子，多为非致病性真菌所产生。
②无性孢子：菌丝上的细胞分化或出芽生成，不经两性细胞的配合。
病原性真菌大多形成无性孢子。
可分为三种a. 分生孢子：又可分为大分生孢子（其大小、细胞数和颜色是鉴定的重要依据）、小分生孢子（真菌都能产生，诊断意义不大）b. 孢子囊孢子c. 叶状孢子：又可分为芽生孢子（一般芽生孢子生长到一定大小仍不与母体脱离，则形成假菌丝）、厚膜孢子（是真菌的一种休眠形态）、关节孢子真菌种类不同，孢子形状大小也不同→ 鉴别真菌3、二相性真菌：少数真菌在营养、温度、理化因素等不同环境条件下，可发生单细胞与多细胞两种形态的可逆转化，称为双向性真菌。
实验五真菌标本采集与制作
实验五、真菌标本采集与制作（腐生菌、寄生菌和共生菌的认识）一、实验目的1、了解和掌握腐生菌、寄生菌和共生菌的生活习性和采集、保存方式2、掌握真菌标本的采集和保存方式二、实验材料1、植物病原真菌干标本2、大型真菌干标本3、大型真菌浸渍标本三、实验内容1．真菌的分布根据真菌生境和生活方式不同可将其分为：（1）水生真菌：在水中腐生于动植物尸体上，有的寄生于动植物上，危害水中动物，如水蕾属（Saprol egnia）。
（2）地生真菌：这类真菌的种类较多，生活环境不同，庭院、公园、草原等地都可生长。
（3）木生真菌：有的寄生于活立木上，危害林中树木，形成森林病害；有的腐生于枯立木、倒木或伐木桩上，有利于清除林中垃圾，成为“林中清道夫”。
（4）病害真菌：这类真菌寄生于人、动物及各种农作物体上，使人、动物及农作物患病。
（5）共生真菌：真菌与藻类共生形成地衣；密环菌和天麻共生；接合菌、伞菌、担子菌与高等植物形成菌根。
2．真菌标本的采集制作（1）采集用具平底背筐，平底手提筐，纸盒若干个（或铝盒、小指管若干个，塑料袋若干个），木箱1～2个，液浸标本筒1～2个，掘根器，刨根器，手锯，短刀，刀片，白纸，纱布，号牌，线或细绳，钢卷尺，湿度计，温度计，pH试纸，测高计等。
（2）采集方法空气、土壤或动植物体上的真菌多属于霉菌，采集这类真菌常用分离或纯培养方法得到。
而伞菌、多孔菌、盘菌、锈菌、黑粉菌、银耳等各种真菌的采集方法如下：①地生真菌采集：采集时用手轻轻捏住菌柄基部，缓慢将菌体旋转一周，然后拔出，尽量带出地下部分，抖掉泥土。
采集时注意保持菌体的完整性，不要损伤各部，以免给鉴定带来困难。
有些菌类的菌柄在土中埋的很深，需用刀或掘根器挖出来。
有些伞菌柄的基部，盘菌和腹菌基部，有菌索伸入土中，注意一起采取。
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粘
不粘
形状：钟形、斗笠形、半球形、漏斗形、平展 边缘有条纹、无条纹
块鳞、角鳞、丛毛鳞片、纤毛、疣、丝光、龟裂
菌肉 色
香
味
变色反应
菌柄 长×粗：
cm
颜色：
形状：
菌托 颜色：
形状：
附属物：
消失 不易消失
孢子印 白色 粉红色 锈色 褐色 青褐色 紫褐色 黑色
附记
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9
3、拍照
❖ 照相必须有远距离和近距离两种镜头，应照 生态相。可在原地把蘑菇正、侧、倒和菌柄基部 以及蘑菇的纵断面排好，要保持菌幕、菌环、菌 托的完整，尽可能保持其生境，须附有编号以免 错乱。彩卷摄影更好。如现场来不及照生态相时， 可在回住地整理标本时再补照。
装入标本盒
装入标本袋
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16
三、标本烘干及临时的整理
1、标本烘干
便携式烘干机
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17
2、临时的整理：
首先把标本分为四类： ① 肉质、含水多、速腐性、脆弱、易变色、
盖面黏和小型标本； ② 是肉厚、致密、坚实、含水少、缓腐性标
本； ③ 一年生多孔菌科革质、半革质、纤维质不
易腐的标本； ④ 是木质、木栓质的多孔菌类标本。
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12
5、标本的包装和标号
标本包装方法一：
蘑菇放在报纸上
两边对折
两边对折
包装成形标号
两端对折
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两端对折
13
标本包装方法二：
蘑菇放在报纸上
两边对折
两边对折
包装成形标号
两端对折
.
两端对齐插入
14
标本包装方法三：柄长的蘑菇包装法
蘑菇放在报纸上
一角折叠、底部折叠
卷包扎
标号
丁部折叠封口
丁部折叠
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15
标本包装方法四：
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18
标本包装后分类装袋并做好标记
装箱
归类装箱，以便搬运过程中避免损坏标本。
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19
标本与采 集表一同 放入标本 盒中
四、标本鉴定
标本鉴 定使用 书籍
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标本解 剖结构 观察使 用工具
标本进 行鉴定
Байду номын сангаас20
五、标本登记入库
已鉴定的标本
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21
标本打签、登记、入库
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22
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10
Pholiota squarrosoides
Hericium romosum
要体现出菌物的生态象及其保持完整性
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11
4、 采集标本
采集地生菌类时，可用手轻捏基部，缓慢地 将菌体转一周，然后拔出。
注意事项： 尽量带出地下部分，散去其泥土，保持其完整。
② 菌盖上的附着物如落叶、小虫等也不要弹掉。 ③ 注意保护菌物的自身特点，以便日后观察。
大型真菌标本采集与制作
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1
大型真菌标本制作流程
Pleurotus citrinipileatus
标本采集 准备工作
标本采集
标本烘干及 临时整理
标本登记 入库
标本鉴定
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2
一、采集标本的准备工作
❖ 1、采集时间及采集地的选择 ❖ 2、准备采集用品和用具
Kuehneromyces mutabilis
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7
1、采集层次顺序
采集过程按一定层次顺序进行,如树木、 枯枝、落叶层、草丛。
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8
2、记录
蘑菇采集记录表
菇 名 中文名
俗名
学名
产 地 省（区） 县
海拔
m
生 境 冻原、针叶林、阔叶林、混交林、灌丛、 基物：地上、腐木、立木、粪上、
草地、草原
虫体
生态
单生 散生 群生 丛生 簇生 迭生
菌盖
大小：
cm
颜色：
3
1、采集时间及采集地的选择
标本采集应根据其种类特点,确
定采集地点及时期。在普查基础上先
选择真菌发生多的地方进行采集,然
后再进行补点采集。
？？？
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4
贺兰山
采集地的普查
克一河
.
扎兰屯
齐齐哈尔
5
2、准备采集用品和用具
采集用具
便携式烘干机
采集框
采集标本盒
培养基
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6
二、标本的采集
❖ 1、采集层次顺序 ❖ 2、记录 ❖ 3、拍照 ❖ 4、采集标本 ❖ 5、标本的包装和标号