新生大鼠皮层神经元的培养与鉴定
新生大鼠小脑颗粒神经元原代培养与鉴定

差速 贴壁 , 植 在 预 先 涂 有 左 旋 多 聚 赖 氨 酸 的 培 养 板 内 , 3天 加 入 阿糖 胞 苷 纯 化 神 经 元 ; 用 神 经元 特 异 性 烯 醇 化 酶 免 疫 细 种 第 采 胞 荧 光技 术 鉴 定 神 经 元 。 结果 : 胞 存 活 率 达 (8±10 ) ;4h内基 本 贴 壁 ; 3天 细 胞 突 起 增 多 、 长 ; 细 9 .7 % 2 第 变 培养 6~ 8天 , 胞 细 突起 交 织 成 网 , 成 典 型 的神 经 细 胞 网 络 ; 经 元 特 异 性 烯 醇 化 酶 鉴 定 神 经 元 细 胞 占 9 % 左 右 。 结论 : 验 获 取 神 经 元 纯 度 形 神 0 实 较高 , 是小 脑 颗 粒 神 经 元 体 外 培 养 的一 种 较 理 想 的 方 法 。 [ 关键 词 ]神 经 元 ; 小脑 颗 粒 神 经 元 ; 细胞 , 养 的 ; 鼠 培 大 [ 国 图 书 资 料 分 类 法 分 类 号 ]R3 2 8 中 2 .5 [ 献 标 识 码 ]A 文
g a ue n u o r e a e r m —7 da l r g — wly r tp s,h ee la wa e d o n n e m i e t sn z d, r n l e r nswe e pr p r d fo 5 y o d Sp a ue Da e a up te c rbel s f e fme i g s, nc d,r iie r yp t n t els s e in wa e a e o fn fr r mo e a y gi lc ls dis cae c ls wee s e d tp ae he he c l u p nso s prpltd f r30 n o e v n la el , s o itd e l r e de a lt s whih h d be n i c a e pr — o t d wi l— L sn a a no yc t snewa dd d t h u t em e i e c ae t Poy L— y ie. rbi s ly o i sa e ot e c lur dum n da fe e dig fri hiiin o o n u o a h o y3 a trs e n o n b t fn n— e r n l o c l v so Ne r nswee i e i e u o s c fce l s mn n fu r s e e tc i Re u t Th uri a ae o hec lswa e ldiiin. u o r d nt d byne r n—pe i noa e i m o o e c nc e hnc. s ls: e s v v lr t ft el s i f i l
大鼠皮层神经元原代培养方法的改进

【 关键词 】 细胞 ; 培养的; 神经系统 ; 鼠 大 【 中国图书分类法分类 号 】 3 8 R 3 【 文献标识码 】 A 【 收稿 日期 】0 7 0 — 9 2 0 — 1 0
I r v me tf r c l r f p i r e r n f n wb r a o t a is e mp o e n o ut e o r u ma y n u o s o e o n r t c r c lt u i s
【 e od 】 esC l rd N rosss m; as K yw rsC l ; u ue ; evu yt R t l t e
原代 神 经元具 有 良好 的生 物可 利用 性 。被越 来 越多 地用 做 试验 对 象 , 其体 外 培 养 已成 为神 经 科 学 尤其是 神经 药理 学 的重要 手段 之一 。以往多 用胎 鼠 进 行 神 经 细 胞 培 养 【 但 由于 动 物 胚 胎 因饲 养 原 因 l 】 , 对 母 鼠不 分 别 交 配 , 胎 鼠 的胎 龄 不 易 掌 握 , 故 以及 胎脑 的面积 亦 较小 , 因此 近 年来 用 新生 鼠代 替胎 鼠 进行 神 经元 原代 培 养 的 实验 1渐 增 多 , 由于各 种 3 但 方法 其说 不一 , 的使用 B 7 培养基 添加 剂 [ 有 的 有 2 2 1 。 使 用 阿糖 胞 苷 , 糖 胞苷 浓 度 亦 有很 大差 异 4为 阿 1 , 了 寻求 一种 简 单而 理 想 的原代 神 经 元 培养 方 法 , 我 们 在 以往 培 养 方 法 的基 础 上对 取 材 、 化 、 械 操 消 机 作等 方 面进 行 了改 进 ,得 到 了较 理 想 的培 养 结果 。
维普资讯
一
3 2一 9
新生大鼠大脑皮层神经元的原代培养

版 社 , 0 : 74 8 2 44 —6 . 0 6
J l2 1 , o 1, o 0 圆衄 u 3V 1 1N . y0 . 2
神经 细胞 培养 的影 响[ . 用医药 杂志 , 0 , () 35. J实 ] 2 21 3: —6 0 9 5
[] 李 玉 , 齐琴 , 4 但 习杨 彦彬 . 小 鼠海马 神 经 细胞 培养 及 其 鉴 定 成年 [] J 昆明 医学 院学 报,01 26: —2 . 2 1, () 93 . 3 2
用于 治疗结膜炎 、沙眼等 眼部感 染 ,是临床常用 药物。为有效控 制药
备 好 的上述 6 菌液 ,再 加入相应 的培养基 lO L,按规 定条 件培 养 株 Om
35 ,逐 日 -d 观察 。 2. .2菌液组 2
品的质量 ,保 证 无菌检 查方 法 的科学性 和检 验结 果 的准确性 。根据 Ⅸ 中国药典 2 1年版 附录无 菌检查 的要 求 ,建立 复方硫酸锌 滴眼 00 液 的无菌检查方法 ,并对其进行方法学 验证 。
3 5 ,逐 日观察 。 ~d 表1 试验 组 与阳性对 照 哈尔 滨 医 科 大学 附属 第 一 医 院 ,批 号 :
2 112 ,2 112 ,2 112规格 :5 L支 )。 00 13 00 14 00 15 m/
2 方 法与 结果
[ _ 州 医学 院学报 , 0 , () 35. J锦 ] 2 3 415 —6 0 2 :
【】 于 丽华 , 3 赵书 平 , 先 成 , . 同种 类 血清 对 新生 大 鼠大 脑 皮层 席 等不
复方硫 酸锌 滴眼液无 菌检查方法 的建立
王 瑛 杨 利 红
( 黑龙江省食 品药 品检验检测所 ,黑龙江 哈尔滨 10 0 ) 5 0 1
大鼠大脑皮层星形胶质细胞体外培养方法的建立及鉴定

RAT’ S CEREBRAI C0RTEX F AN Yu e , S HANGYa - z h e n
( H e b e i K e y L a b o r a t o r y o f S t u d y a n d E x p l o i t a t i o n o f C h i n e s e Me d i c i n e , I n s t i t u t e o f T r a d i t i o n a l C h i n e s e M di e c i n e , C h e n g d e
c e l l s o fr a t s a b o u t l 一 3 d a y s n e wb o n r we r e c u l t i v a t e d i n v i t r o . T h e i f b r o b l a s t c e l l s nd a n e u r o n s we r e r e mo v e d t h r o u g h d i f e r e n t i a l a d h e r e n t me t h o d a n dp a s s a g e . h e T a s t r o c y t e s we r ei d e n t i i f db e yd e t e c t i n ga s t r o c y t e s s p e c i i f c p mt e i n - g l i a l i f b r i l a r y
星形胶质细胞 的形 态且 生长旺盛 , 第3代星形胶质细胞纯度达9 5 %。 结论 : 本研究建立 的星形胶质 细胞体 外培 养方法操作简单 、 可靠 。
缺氧条件下新生大鼠皮质神经元凋亡的机制

Bc . 12
图 3 10p o/ o 1 导 神 经元 凋 亡 时 B x和 Bl 2的表 达 0 + lLC C2诱 m a c一 表 1 10 I o LC C2 不 同时 间 点 对 0 m l o 1 在 x / B x和 B l 2蛋 白 的 影 响 a c一 4s -
与 0h组 比较 P<00 .5
种细胞 内的变化的方法则需进一步研究 。
参 考 文 献
[ ] C O E .Idcdhptemi frnoa l yoi sh— 1 O P R D J nu e yo r a o ent pxc—i e h ah c
mi e c p ao a h : p t o h so o y, c re t r a me t a d c n e h lp t y ah p y i lg u r n te t n , n
们 在 研 究 中发 现 , 在距 电凝 作 用 处 2~ . m 处 , 管 2 5m 血
管是安全有效的 , 可在 临床手术 中推广应用 。
参 考 文 献
[ ] 朱弋 , 1 李晓东 , 贺建林.高频电刀应用到的三个物理效应分析
[] J .中 国医 学 装 备 , 0 l 8 2) 3 4 . 2 1 , ( : 9— 0
3 . 5
[ ] 姜茜 ,姜玉武 ,王静敏 , 种改进 的大 鼠皮层神经元原代 2 等.
一
培养方法及其性 质鉴定 【 ] 北 京 大 学 学 报 :医 学 版 , 0 9 J 20 ,
4 () 1 1 2 :2 2—2 6 1.
由于 取 材 的 限 制 , 究 人 员 无 法 直 接 观 察 和 测 定 研
新生大鼠大脑皮层少突胶质前体细胞的培养分离及鉴定

新生大鼠大脑皮层少突胶质前体细胞的培养分离及鉴定【摘要】[目的]探讨新生(spraguedaley,SD)大鼠大脑皮层少突胶质前体细胞在体外条件下的生长情况及培养分离,以获得纯化的少突胶质前体细胞,为今后细胞移植治疗研究提供良好的种子细胞。
[方法]出生48hSD大鼠取大脑皮层进行混合胶质细胞的体外培养,原代培养第9~10d时采用水平振荡、差速贴壁的方法分离、纯化少突胶质前体细胞,继续用定向培养基传代培养。
相差显微镜观察少突胶质前体细胞在体外条件下的生长情况,免疫细胞化学技术进行细胞鉴定。
[结果]混合胶质细胞原代培养第9~10d时出现明显的细胞分层,少突胶质前体细胞散布于单层的星形胶质细胞表面,胞体呈椭圆形或圆形,具有典型的双极突起,少数呈三极突起。
经振荡分离后少突胶质前体细胞纯度达95%,少突胶质细胞特异性标记lig2反应阳性,胶质纤维酸性蛋白抗体反应阴性。
[结论]新生SD大鼠大脑皮层原代培养中少突胶质前体细胞能够维持在未成熟阶段,细胞分层后通过振荡法及差速贴壁法可以获得较高纯度的少突胶质前体细胞。
【关键词】少突胶质前体细胞;细胞培养;脱髓鞘化;脊髓损伤Keyrds:ligdendrytepreursrell;ellulture;deyelinatin;spinalrdinjury脊髓损伤是一种常见的中枢神经系统损伤,可以造成患者严重的神经功能损害。
目前,临床上尚无有效办法治疗脊髓损伤。
随着研究深入,人们对于脊髓损伤的病理过程有了更进一步的认识。
脊髓损伤不仅导致神经元丢失,同时还造成大量少突胶质细胞的死亡,从而引起残留神经轴突的脱髓鞘改变,进一步影响了脊髓神经功能的恢复。
近来不少研究显示通过髓鞘形成细胞移植治疗脊髓损伤,有利于脱髓鞘轴突的再髓鞘化,促进损伤脊髓的神经功能恢复[1,2]。
研究表明,少突胶质细胞不仅形成髓鞘包绕轴突,同时它还起着为其他神经细胞提供营养因子、促进轴突生长等作用[3]。
此外,少突胶质前体细胞是处于分化早期阶段的未成熟细胞,既能够定向分化为成熟少突胶质细胞,同时又具有一定的增殖与迁移能力[4],更加适合于细胞移植治疗。
胎鼠、新生大鼠原代海马神经元培养及鉴定

胎鼠、新生大鼠原代海马神经元培养及鉴定熊丽娇;郭阗廷;曾治平;黄志华;曾靖【摘要】目的:建立胎鼠、新生鼠海马神经元体外培养方法.方法:分别取胎鼠、新生鼠海马,消化后种植,用含有2%B27的neurobasal培养液培养,第3天加入5 μmol·L-1的阿糖胞苷,换液后继续培养,以获得纯度较高的海马神经元.培养第3、7天观察细胞生长及突起情况,用neurofilament抗体以免疫荧光方法鉴定神经元细胞.结果:海马神经元种植24 h后贴壁,7天时神经元突起相互连接成网络.经neurofilament染色,培养细胞阳性率高,新生鼠原代培养海马神经元阳性率达(89±3.4)%,胎鼠海马神经元阳性率达(98±1.5)%.结论: 本方法培养出的胎鼠、新生大鼠海马神经元纯度较高,可作为海马神经元模型用于进一步研究.【期刊名称】《赣南医学院学报》【年(卷),期】2017(037)003【总页数】3页(P354-356)【关键词】海马神经元;细胞培养;胎鼠;新生鼠【作者】熊丽娇;郭阗廷;曾治平;黄志华;曾靖【作者单位】赣南医学院第一附属医院全科医学VIP科;赣南卫生健康职业教育学院外科教研室,江西赣州 341000;赣南医学院第一附属医院全科医学VIP科;赣南医学院;赣南医学院【正文语种】中文【中图分类】R285.5海马是大脑边缘系统重要部分,神经元分布高度集中,在认知、记忆、情绪、植物神经系统方面起着不可替代的作用[1-3]。
海马神经元体外培养模型已经成为研究神经元发育分化、神经疾病的发生机制的重要技术手段[4-6]。
海马神经元体外培养文献报道方法多样,动物来源主要有胎鼠和新生鼠,根据实验条件,我们摸索出了原代胎鼠、新生大鼠的海马神经元培养方法,并进行了细胞鉴定,获得了高纯度的胎鼠、新生大鼠海马神经元。
1.1 材料1.1.1 实验动物孕17天SD大鼠及出生24 h内的SD大鼠。
1.1.2 主要试剂 DMEM培养基、neurobasal培养基、胎牛血清(FBS)和B27培养基添加剂(Gibco公司)、青链霉素、胰酶、多聚L赖氨酸(sigma公司)。
新生大鼠背根神经节神经元的分离、培养及鉴定

新生大鼠背根神经节神经元的分离、培养及鉴定发表时间:2015-10-09T15:22:53.543Z 来源:《医药前沿》2015年第21期供稿作者:张雨尧1 梁宸1 胡学昱2(通讯作者)[导读] 1第四军医大学学员旅陕西西安2第四军医大学西京医院骨科陕西西安我们采用新生大鼠DRGn来作为研究对象分析电刺激对神经元突起再生的影响,进行轴突生长发育的研究,是经典而常用的方法之一[4]。
张雨尧1 梁宸1 胡学昱2(通讯作者)(1第四军医大学学员旅陕西西安 710032)(2第四军医大学西京医院骨科陕西西安 710032)【摘要】目的:建立一种简单、稳定、高效的新生大鼠背根神经节神经元原代培养方法。
方法:摘取新生24h SD大鼠背根神经节,采用0.25%胰酶和0.1%Ⅳ型胶原酶消化,制成单细胞悬液,接种于Neurobasal/B27无血清培养液中。
将培养3d的DRGn于倒置相差显微镜下进行形态学观察,扫描电镜行细胞形态学检测,应用β-tubulinⅢ进行免疫细胞化学染色,鉴定细胞纯度。
结果:体外培养的背根神经节神经元生长状态良好,纯度可达到(92±6)%。
结论:本实验方法简单、稳定、高效,可以获得高纯度的背根神经节神经元。
【关键词】背根神经节;动物实验;细胞培养;纯化【中图分类号】R74 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752(2015)21-0034-03The dissection, purification and culture of dorsal root ganglion neurons from new born ratsZhang Yuyao1, Liang Chen1, HU Xueyu(corresponding author)21 Fourth Military Medical University, Xi’an, Shanxi, 710032, China2 Department of orthopaedics, Xijing hospital,Fourth Military Medical University, Xi’an, Shanxi, 710032, China【Abstract】Objective To establish an simple, efficient, reliable method for the purification culture system of dorsal root ganglion neurons derived from new born rats. Methods Dorsal root ganglions harvested from new born SD rats were digested with the mixture of trypsin and collegonease Ⅳ, then turned into single cell suspension and plated in neuralbasal media. The purified rate was evaluated according to cell count and β-tubulinⅢ immunocytochemistry stain. Results Cultured dorsal root ganglion cells could survive healthily. The purification rate of neurons was(92±6)%. Conclusion The method, which is used for culture and purification of DRGn, is a simple, efficient and reliable way. Using it could obtain highly purify neurons.【Key words】Dorsal root ganglion; Animal experimentation;Cell Culture;Purification背根神经节(dorsal root ganglion, DRG)主要由感觉神经元组成,参与脊髓反射与感觉功能的调节,DRG因其细胞种类、生物学特性单一,越来越受到人们的重视。
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新生大鼠皮层神经元的培养与鉴定
作者:邓莉, 代荣阳, 廖彦生, 高小青, 杨朝鲜, Deng Li, Dai Rongyang, Liao
Yansheng, Gao Xiaoqing, Yang Chaoxian
作者单位:邓莉,廖彦生,高小青,杨朝鲜,Deng Li,Liao Yansheng,Gao Xiaoqing,Yang Chaoxian(泸州医学院神经生物研究室,四川,646000), 代荣阳,Dai Rongyang(泸州医学院生物化学教研室
,四川,646000)
刊名:
西南军医
英文刊名:JOURNAL OF MILITARY SURGEONIN IN SOUTHWEST CHINA
年,卷(期):2011,13(4)
1.Chernova T;Nicotera P;Smith AG Heme deficiency is associated with senescence and causes suppression of N-methyl-D-aspartate receptor subunits expression in primary cortical neurons[外文期刊] 2006(03)
2.Soundarapandian MM;Zhong Xiaofen;Peng li sheng Role of K(ATP) channels in protection against neuronal excitatory insults[外文期刊] 2007(05)
3.Farkas Q;Povlishock JT Cellular and subcellular change evoked by diffuse traumatic brain injury:a complex wed of change extending far beyond facial damage[外文期刊] 2007(01)
4.Lee SJ Origins and effect of extracellular alpha-synnuclein:Implications Parkinson's disease[外文期刊] 2008(10)
5.Hamabe W;Fujita R;Ueda H Insulin Receptor-Protein Kinase C-Signaling Mediates Inhibition of Hypoxia Induced Necrosis of Cortical Neurons[外文期刊] 2005(3)
6.姜茜;姜王武;王静敏一种改进的大鼠皮层神经元原代培养方法及其性质鉴定[期刊论文]-北京大学学报(医学版) 2009(02)
引用本文格式:邓莉.代荣阳.廖彦生.高小青.杨朝鲜.Deng Li.Dai Rongyang.Liao Yansheng.Gao Xiaoqing.Yang Chaoxian新生大鼠皮层神经元的培养与鉴定[期刊论文]-西南军医 2011(4)。