饥饿和复投喂对大黄鱼(Larimichthys crocea)IGF-Ⅰ、mTOR、MyoD和MHC基因表达的影响
饥饿胁迫和恢复投喂对金鱼主要生长指标影响的研究
文 章 编 号 ：０６— １８ ２ １ ）２— ０ ７— ７ １０ ３ ８ （０ １ ０ ０ １ ０
２１ ０ １年第 ２期
饥饿胁迫和恢复投喂对金鱼主要生长指标影响的研究
王睛睛 ， 吉方， 李 温海深 ， 龙 ， 忠 亮 ， 姜 廖 齐明君
（ 中国海洋 大学水 产 学 院 ， 山东青 岛 ２６０ ） ６０ ３
摘 要 ： 在（ １０．１０ ℃水温范围下 ， ２． － ．） Ｉ － 对金鱼 采取 了不 同饥饿时 间处理及再投 喂实验 ， 定其 主要 生长指标 ， 测 探讨
其补偿生长情况和机制 。实 验结果表 明， 金鱼 的补偿 生 长的类 型 属于完 全补 偿生 长。从摄 食率 和食物 转化 率 的测 定来
Байду номын сангаас
作者 简介 ： 王睛睛（ ９５一） 女 ， １８ ， 硕士研 究生。Ｅ—ｍ ｉ ｑｎ ｅ ５ ０ ５ ６ ．ｏ ａ ：ｉｇｒ １０ ＠１３ ｃｒ ｌ ８ ｎ 通讯 作者 ： 李吉方， ｍａ ：ｊ ｔ ．ｄ ．ｎ Ｅ— ｉ ｌｆ ｌ ｅｕ ｃ ｌ ｉ＠ＯＣ
・
１ ・ ７
总第 １６ ２ 期
王晴晴， 李吉方 ， 温海深等 ， 饥饿胁迫和恢复投喂对金鱼主要生长指标影响的研究
道 ［ ］但 饥 饿 胁 迫 对 金 鱼 的补 偿 生 长 的 系 统 研 ６ ， 究 尚未见 报道 。
收稿 日期 ：０ １ ０ ２ １ — ５—１ ２
食” 时间为一定值。每组设 ３ 个平行 ， 每个平行放
资助 项 目 ： 中国 海 洋 大 学 本 科 生 研 究训 练计 划 （ Ｕ Ｏ Ｃ—Ｓ Ｔ ） ０ ２ ０ ００ ） Ｒ Ｐ （ ８ １ １６ ３
看， 饥饿恢复投 喂后金 鱼既增加 了摄食量又提 高了食 物转化率 。短 时间 （ ｄ 的饥 饿后恢 复投 喂 ， 鱼主要 以增加摄 食量 ５） 金 为主； 长时间 （０～１ｄ 的饥饿后恢 复投喂 ， １ ５） 金鱼 主要 以提高食物转化率为 主。
低温下饥饿胁迫对大黄鱼血清生化指标的影响
低温下饥饿胁迫对大黄鱼血清生化指标的影响徐浩;张东玲;陈庆凯;叶坤;王志勇【期刊名称】《生物技术通报》【年(卷),期】2015(000)006【摘要】The study was conducted to investigate the effects of starvation on serum biochemical indexes in 9-month-old large yellowcroaker(Larimichthyscrocea)at low temperature(13℃). Four hundred fishes were randomly divided into 2 groups, one group as control group was fed with formula feed, and the other as experimental group was starved. Eleven serum biochemical indexes were examined 30 d after experiment started. The results revealed that the UA, UREA, TC, and ALT of experimental group were extremely significantly higher than control group(P< 0. 01);while the ALB and AST of experimental group were extremely significantly lower than control group(P< 0. 01). Compared to control group, the TG and Ca2+ of experimental group were significantly higher(P< 0. 05). There was no significant difference in both TP and Mg2+ between experimental and control group.%研究了在低温（13℃）下饥饿胁迫对9月龄大黄鱼血清生化指标的影响。
“饥饿-投喂-……”重复处理对星斑川鲽摄食、生长、生化组成以及能值指标的影响
“饥饿-投喂-……”重复处理对星斑川鲽摄食、生长、生化组成以及能值指标的影响张升利;尤宏争;杨璞;孙向军;梁拥军;姜志强【期刊名称】《饲料工业》【年(卷),期】2010(31)22【摘要】采用"饥饿(1、2 d)-饱食(6、5 d)-……"重复处理的方法,在温度(19±1)℃、盐度32±1的条件下,对相同规格的星斑川鲽[(26.02±0.30)g]的摄食、生长、生化组成以及能值等相关指标的影响进行了研究。
研究结果表明,重复饥饿再投喂处理对星斑川鲽的体重、全长的影响不显著,对比肝重的影响显著;对星斑川鲽体内脂肪、蛋白质、水分、灰分含量无显著影响;对星斑川鲽鱼体以及粪便中能值的影响也不显著;对星斑川鲽总摄食量、摄食率、食物转化率的影响显著,对排粪率、吸收率以及特定生长率也有一定程度的影响。
结果表明,两个饥饿再投喂重复处理的实验组的星斑川鲽均出现了完全补偿生长。
【总页数】6页(P28-33)【关键词】星斑川鲽;补偿生长;饥饿;生化组成【作者】张升利;尤宏争;杨璞;孙向军;梁拥军;姜志强【作者单位】北京市水产科学研究所,北京100068;天津市水产技术推广站;大连海洋大学农业部海洋水产增养殖学重点开放实验室【正文语种】中文【中图分类】S821.4【相关文献】1.饲料中添加小肽对星斑川鲽幼鱼生长性能、体组成及血清生化指标的影响 [J], 姜柯君;王际英;张利民;柳旭东;张德瑞;孙永智2.饥饿后再投喂对星斑川鲽生化组成以及能值的影响 [J], 孙向军;梁拥军;张升利;苏建通;尤宏争;姜志强3.饥饿后再投喂对星斑川鲽生长、摄食的影响 [J], 梁拥军;孙向军;张升利;付成东;姜志强4.紫花苜蓿浓缩叶蛋白替代鱼粉对星斑川鲽幼鱼生长、体组成及血液生化指标的影响 [J], 马晶晶;张利民;王际英5.饲料蛋白水平对星斑川鲽幼鱼生长、体组成及血浆生化指标的影响 [J], 丁立云;张利民;王际英;孙丽慧;帅继祥;崔立娇;孙永智因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
饥饿和摄食状态下大黄鱼幼鱼的能量收支
从表中可以得到大黄鱼幼鱼的能量收支方程为: 100C = 64. 5R + 20. 7G + 10. 6F + 4. 2U. 若以同化能 ( A = C - F - U )表示, 则大黄鱼幼鱼 的能 量收 支 方 程为: 100A = 75. 7R + 24. 3G. Cui 等 ( 1990) 根据已发表的 14种鱼在最大摄食水平的能量
1. 4 方法和结果计算
1) 耗氧率及代谢能 采用静水密闭式呼吸实验
方法, 每组鱼设两个代谢瓶作为平行样. 各取二份水样
于 BOD瓶作为空白样, 使其与有实验鱼的代谢瓶中的
海水同步培养. 代谢瓶密闭 2 h后, 各取二份代谢瓶水
样, 然后对空白样和代谢瓶水样进行溶解氧含量测定. 溶解氧 含 量采 用 德 国 W TW 公 司产 的 inoL ab M ulti L evel 3多功能测定仪进行测定. 耗氧率 [ ( mgo2 / g# h) = ( D 0 - D ) V /m t, D 0 为空白水样的溶解氧含量 ( m g / dm3 ); D 为有实验鱼代谢瓶水样的溶解氧 ( m g / dm3 ); V 为代谢瓶容积 ( dm3 ) ; m 为鱼体干质量 ( g) ; t为实验
摄食能Βιβλιοθήκη 代谢能生长能排粪能
排泄能
C /( J/ g# d) R / ( J /g# d) G / ( J /g# d) F /( J/ g# d) U /( J/g# d)
1 861. 1 2 071. 2 2 186. 8 1 679. 4 2 047. 5 1 734. 9 1 930. 1
收稿日期: 2004-09-17 基金项目: 厦门大学自选课题 ( Y 07009) , 福建省农科教结合项目省
基于转录组研究饥饿对大黄鱼(Larimichthys crocea)生长和代谢的影响
基于转录组研究饥饿对大黄鱼(Larimichthys crocea)生长和代谢的影响黄玲;尹恒;邱浩宇;王涵颖;陶晨智;冉志强;许嘉航;王萍【期刊名称】《海洋与湖沼》【年(卷),期】2024(55)3【摘要】大黄鱼(Larimichthys crocea)作为我国产量最高、养殖规模最大的海水养殖鱼类,长时间不合理的饥饿易导致养殖效率低下,因此,需要合理控制越冬禁食时间。
为了探究饥饿对大黄鱼的影响,在水温9.0~14.3℃条件下进行了饥饿0、8、16周的越冬养殖实验,研究了低温与饥饿双重胁迫下的大黄鱼生长、体成分、抗氧化酶活力以及相关基因的表达。
结果显示,随着饥饿时间的延长,大黄鱼的肝体比(HSI)、脏体比(VSI)、肌肉和全鱼的粗脂肪和粗蛋白以及肝糖原含量显著降低(P<0.05),肌糖原含量无显著变化(P>0.05)。
肝脏抗氧化酶丙二醛(MDA)活性先升高后降低;谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和过氧化氢酶(CAT)活性显著降低(P<0.05),甘油三酯(TG)含量显著上升(P<0.05)。
转录组分析结果显示,相比对照组,饥饿后差异基因显著下调,GO分析发现,饥饿后差异基因主要富集在脂质代谢过程、脂肪酸生物合成和补体激活等方面。
聚类分析表明,饥饿16周后,脂肪代谢通路中肉碱棕榈酰转移酶1 (CPT1)、线粒体三功能酶β亚基(HADHB)、肉碱棕榈酰转移酶2 (CPT2)基因的相对表达水平升高,而脂肪酸延长酶(HACD)、脂肪酸合成酶(FASN)、5-氨基乙酰丙酸合成酶(ALAS)基因的相对表达水平下降;免疫代谢通路中丝氨酸蛋白酶抑制剂(SERP)、纤维蛋白原-1 (FGG-1)、纤维蛋白原-3 (FGG-3)、纤维蛋白原β (FGB)基因的相对表达水平也降低,qRT-PCR也证实了以上结果。
综上所述,越冬期间,长时间的饥饿将抑制大黄鱼的生长和免疫相关基因的表达,促进其肝脏抗氧化能力和脂质代谢相关基因的表达。
丁香油、MS-222和异丙酚对大黄鱼的麻醉效果分析
第48卷第2期渔业现代化Vol.48No.2 2021年4月FISHERY MODERNIZATION Apr.2021 DOI：10.3969/j.issn.1007-9580.2021.02.014丁香油、MS-222和异丙酚对大黄鱼的麻醉效果分析杨乐，张晓林,刘贤德（集美大学水产学院,农业农村部东海海水健康养殖重点实验室，福建厦门361021）摘要:研究了丁香油、间氨基苯甲酸乙酯甲磺酸盐（MS-222）和异丙酚对养殖大黄鱼（Larimichthys crocea）的麻醉效果，以期为下一步活体运输麻醉剂的选择提供参考。
首先在（20±0.5）t水温下，对3种麻醉剂的适宜质量浓度进行了探索，初步得出适宜的质量浓度分别为：丁香油10mg/L、MS-22240mg/L、异丙酚0.2mg/ L。
在此质量浓度下，进一步优化了大黄鱼的适宜麻醉水温。
结果显示：丁香油在20t.MS-222在15t、异丙酚在25t水温下的麻醉效果较好。
根据优化的质量浓度和水温，分别对3种麻醉剂麻醉后的大黄鱼进行模拟运输，发现随着模拟运输时间的延长,3种麻醉剂麻醉后的大黄鱼复苏率均逐渐降低，模拟运输24h后丁香油和MS-222麻醉的复苏率可达90%，而异丙酚麻醉的复苏率为70%，说明丁香油和MS-222的麻醉效果较好。
对丁香油和MS-222经济成本分析表明，丁香油的成本相对较低，更适合作为大黄鱼活体运输的麻醉剂。
关键词：大黄鱼；活鱼运输；麻醉剂；丁香油；MS-222；异丙酚中图分类号:S983文献标志码:A文章编号：1007-9580（2021）02-0091-06人'黄鱼（Larimichthys crocea）属于鲈形目、石首鱼科、黄鱼属，因肉质细嫩、味道鲜美，且蛋白质含量较高、脂肪含量较低,受到广大消费者的青睐，是中国重要的经济鱼类之一［1-2］。
大黄鱼对于人工操作、噪音、运输等会表现出极其明显的应激反应,长途活体运输常导致较高的死亡率，现已成为大黄鱼活体物流的技术瓶颈［3］o麻醉剂在国内外已被广泛地用于催产、标志及运输等渔业生产和研究之中。
饲料蛋白质水平对大黄鱼体内蛋白质的沉积和代谢反应的影响
饲料蛋白质水平对大黄鱼体内蛋白质的沉积和代谢反应的影响林淑琴;成琳;张文兵;徐玮;麦康森;申屠基康【期刊名称】《中国海洋大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2014(044)005【摘要】进行9周的养殖实验,比较分析饲料蛋白质水平对3个不同生长阶段大黄鱼体内蛋白质沉积和代谢反应相关指标的影响.实验用大黄鱼分为3种规格,分别是小规格鱼(SF,初始体重:(12.80±0.08)g)、中规格鱼(MF,初始体重:(137.90+0.81)g)和大规格鱼(LF,初始体重:(194.10±2.37)g).饲料中的7个蛋白质梯度设置为30.4％,34.2％,38.5％,42.2％,46.0％,50.3％和54.3％.结果表明,随着饲料蛋白质水平的上升,SF的蛋白质含量和氮保留率显著升高(P＜0.05),而MF和LF的全鱼蛋白质含量(BP)和氮保留率(NR)未见显著变化(P＞0.05).从不同生长阶段来看,氮保留率MF显著低于SF和LF(P＜0.05).3个生长阶段,大黄鱼肝脏中的谷草转氨酶(AST)和谷丙转氨酶(ALT)活性,以及血清中的血氨、尿素氮和总氨基酸含量均随着饲料蛋白质水平的上升而显著升高(P＜0.05).从不同生长阶段来看,血氨含量MF显著高于SF和LF(P＜0.05).研究表明,大黄鱼体内蛋白质沉积和氨基酸代谢随饲料蛋白质水平的上升而增强,大黄鱼的氮保留能力MF阶段低于SF和LF阶段.【总页数】8页(P32-39)【作者】林淑琴;成琳;张文兵;徐玮;麦康森;申屠基康【作者单位】中国海洋大学水产动物营养与饲料农业部重点实验室,海水养殖教育部重点实验室,山东青岛266003;中国海洋大学水产动物营养与饲料农业部重点实验室,海水养殖教育部重点实验室,山东青岛266003;中国海洋大学水产动物营养与饲料农业部重点实验室,海水养殖教育部重点实验室,山东青岛266003;中国海洋大学水产动物营养与饲料农业部重点实验室,海水养殖教育部重点实验室,山东青岛266003;中国海洋大学水产动物营养与饲料农业部重点实验室,海水养殖教育部重点实验室,山东青岛266003;宁波市海洋与渔业研究院,浙江宁波315010【正文语种】中文【中图分类】S963.71;S965.322【相关文献】1.饲料蛋白质水平与投喂频率对大黄鱼生长、体组成及蛋白质代谢的影响 [J], 孙瑞健;张文兵;徐玮;麦康森2.饲料中添加蛋氨酸寡肽对大黄鱼(Larimichthys crocea)生长、饲料利用和蛋白质代谢反应的影响 [J], 马俊;魏泽宏;邢淑娟;依丽娜;徐玮;周慧慧;张文兵;麦康森3.大鼠摄取不同饲料蛋白质水平对蛋白质和锌,铁,铜代谢的影响 [J], 王桂杰;于守洋4.饲料蛋白质水平对拉萨裸裂尻鱼幼鱼肌肉氨基酸及蛋白质代谢的影响 [J], 曾本和; 刘海平; 王建; 王万良; 周建设; 王金林; 朱成科; 张忭忭5.饲料蛋白质水平对异齿裂腹鱼生长、消化酶活性、非特异性免疫及蛋白质代谢反应的影响 [J], 王纤纤;曾本和;刘乐乐;杨瑞斌;刘海平因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
饥饿和摄食状态下大黄鱼幼鱼的能量收支
饥饿和摄食状态下大黄鱼幼鱼的能量收支胡灯进;朱小明;杨圣云【期刊名称】《厦门大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2005(044)004【摘要】在25±1℃的室温下,测定了在不同摄食水平(1.2%,2.5%m/m)下大黄鱼幼鱼SDA的三个主要参数:SDA总耗能分别为263.4 J/g和467.7 J/g;SDA持续时间分别为8 h和14 h;峰值分别为2.85 mgO2/g·h和3.23 mgO2/g·h.得到了在饱食状态下的能量收支方程:100 C=64.5R+20.7G+10.6F+4.2U.饥饿状态下大黄鱼幼鱼排泄能与温度成线性关系,代谢能与温度之间为二次函数关系.同时对饱食状态和饥饿状态下的能量收支进行了比较.【总页数】4页(P551-554)【作者】胡灯进;朱小明;杨圣云【作者单位】厦门大学海洋学系,亚热带海洋研究所,福建,厦门,361005;厦门大学海洋学系,亚热带海洋研究所,福建,厦门,361005;厦门大学海洋学系,亚热带海洋研究所,福建,厦门,361005【正文语种】中文【中图分类】Q959.4【相关文献】1.摄食水平对卵形鲳鲹幼鱼的生长和能量收支的影响 [J], 黄建盛;陈刚;张健东;施钢;汤保贵;周晖;潘传豪2.饥饿状态下大黄鱼幼鱼能量收支的研究 [J], 朱小明;王兴春;姜晓东;王桂忠;陈启发3.低盐水体下摄食水平对斜带石斑鱼幼鱼生长及能量收支的影响 [J], 黄建盛;王安利;陈刚;张健东;王忠良;汤保贵4.不同摄食水平对牙鲆幼鱼生长及能量收支的影响 [J], 陈晶;吴立新;吴玉波;李锐;于海成5.摄食水平对黄颡鱼幼鱼氮收支和能量收支的影响 [J], 杨严鸥;姚峰因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
大黄鱼(Larimichthys crocea)新品种“东海1号”体长相关的DArT标记筛选
大黄鱼(Larimichthys crocea)新品种“东海1号”体长相关的DArT标记筛选徐圣钊;林勉;闫松松;史雨红;苗亮;李明云;陈炯【期刊名称】《海洋与湖沼》【年(卷),期】2016(047)005【摘要】大黄鱼(Larimichthys crocea)是我国重要的海产经济鱼类.因多年未加选育的累代养殖,养殖大黄鱼生长缓慢,性早熟、免疫力低下,亟需对养殖大黄鱼进行遗传改良.多样性芯片技术(Diversity arrays technology,DArT)具有高通量和低成本的显著特点,不需要明确物种的基因组DNA序列信息,因而广泛应用于动植物遗传图谱制作和遗传多样性分析.本研究旨在采用DArT技术鉴定与“东海1号”大黄鱼体长相关分子标记.首先随机测得“东海1号”大黄鱼199个个体体长,均值为13.45cm,符合正态分布(P＞0.05),“极端大群体”和“极端小群体”之间差异显著(P＜0.01).然后采用7组限制性内切酶组合(PstⅠ/AluⅠ、PstⅠ/BanⅡ、PstⅠ/Bsp 1286I、PstⅠ/BstNI、PstⅠ/HaeⅢ、PstⅠ/RsaⅠ、PstⅠ/TaqⅠ)分别进行酶切,获得基因组代表性DNA片段并用于文库构建.根据多态性克隆数和多态性率确定PstⅠ/RsaⅠ酶切组合为最优降低基因组复杂度方法.之后从PstⅠ/RsaⅠ基因组代表性DNA片段文库中扩增获得3360个片段,以此为多样性芯片探针进行芯片点制,杂交筛选获得18个大黄鱼体长相关DArT候选标记.经过新群体样本再次验证,仍有8个DArT标记与体长相关.本研究有助于选育生长性状优良的大黄鱼群体.【总页数】8页(P1047-1054)【作者】徐圣钊;林勉;闫松松;史雨红;苗亮;李明云;陈炯【作者单位】宁波大学海洋学院生物化学与分子生物学实验室宁波315211;宁波大学海洋学院生物化学与分子生物学实验室宁波315211;宁波大学海洋学院生物化学与分子生物学实验室宁波315211;宁波大学海洋学院生物化学与分子生物学实验室宁波315211;宁波大学海洋学院生物化学与分子生物学实验室宁波315211;宁波大学海洋学院生物化学与分子生物学实验室宁波315211;宁波大学海洋学院生物化学与分子生物学实验室宁波315211【正文语种】中文【中图分类】Q789【相关文献】1.大黄鱼(Larimichthys crocea)CRFB13基因的克隆与表达分析 [J], 杨思司;母尹楠;丁连帅;陈新华;敖敬群2.大黄鱼（Larimichthys crocea）CRFB13基因的克隆与表达分析 [J], 杨思司;母尹楠;丁连帅;陈新华;敖敬群;3.温度骤降对大黄鱼Larimichthys crocea鱼卵与仔鱼的影响 [J], 周孔霖;杜萍;寿鹿;廖一波;刘永叶;黄伟4.大黄鱼(Larimichthys crocea)白细胞介素10(IL-10)基因克隆及溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)侵染后表达变化分析 [J], 侯红红;苗亮;李明云;郭晓飞;杜静雅;陈炯5.饥饿和复投喂对大黄鱼(Larimichthys crocea)IGF-Ⅰ、mTOR、MyoD和MHC 基因表达的影响 [J], 沈伟良;钱宝英;薛良义因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
玉米蛋白粉对大黄鱼生长、肠道组织结构及肠道菌群的影响
中国水产科学 2018年3月, 25(2): 361-372 Journal of Fishery Sciences of China研究论文收稿日期: 2017-05-03; 修订日期: 2017-06-12.基金项目: 国家自然科学基金项目(31602205); 国家海洋公益性行业科研专项(201505025); 浙江省自然科学重点基金(Z16E0-90006)；浙江省重中之重学科开放基金(XKZSC1406)；舟山市海洋专项(2015C41001)；浙江海洋大学重中之重学科项目(20161105).作者简介: 何娇娇(1990−), 女, 硕士研究生, 研究方向为海洋生物养殖学. E-mail: 915316064@ 通信作者: 王萍, 副教授, 硕士生导师. E-mail: 178********@DOI: 10.3724/SP.J.1118.2018.17180玉米蛋白粉对大黄鱼生长、肠道组织结构及肠道菌群的影响何娇娇, 王萍, 冯建, 娄宇栋浙江海洋大学 浙江省海洋养殖装备与工程技术重点室, 浙江 舟山 316022摘要: 为了探讨玉米蛋白粉替代鱼粉对大黄鱼(Larimichthys crocea )生长、肠道组织结构及肠道微生物菌群的影响, 进行了为期8周的生长实验。
以初始体重为(10.49±0.03) g 的大黄鱼幼鱼为研究对象, 用玉米蛋白粉分别替代基础饲料(含40%鱼粉)中0%(FM, 对照组)、15%(CGM15)、30%(CGM30)、45%(CGM45)、60%(CGM60)、75%(CGM75)的鱼粉, 配制6种等氮(粗蛋白含量45%)等脂(粗脂肪含量10%)的实验饲料。
56 d 投喂实验结束后, 各处理组幼鱼的存活率与特定生长率以及饲料系数等指标均无显差异(P >0.05)。
从肠道组织学发现, 各处理组与对照组(FM)的幼鱼肠道组织结构肠黏膜、皱襞高度、杯状细胞个数均无显著差异性(P >0.05), 但CGM60组的幼鱼部分肠黏膜上皮细胞被破坏, 上皮细胞排列紊乱, 纹状缘出现缺刻, 肠绒毛部分出现脱落或破损; CGM75组的幼鱼肠道的皱襞高度变短, 皱襞密度降低, 皱襞个数减少。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
第50卷 第4期 海 洋 与 湖 沼Vol.50, No.4 2019年7月OCEANOLOGIA ET LIMNOLOGIA SINICAJul., 2019* 浙江省育种专项, 2016C02055-7号; 浙江省基础公益项目研究计划, LGN18C190007号; 宁波市农业重大专项, 2015C110005号; 国家海水鱼产业技术体系, CARS-47-Z08号。
沈伟良, 博士研究生, E-mail: 12696743@① 通信作者: 薛良义, 教授, 博士生导师, E-mail: xueliangyi@ 收稿日期: 2018-12-07, 收修改稿日期: 2019-03-02饥饿和复投喂对大黄鱼(Larimichthys crocea )IGF-Ⅰ、mTOR 、MyoD 和MHC基因表达的影响*沈伟良1, 2 钱宝英1, 3 薛良义1①(1. 宁波大学海洋学院 宁波 315832; 2. 宁波市海洋与渔业研究院 宁波 315103; 3. 台州学院 浙江省植物进化生态学与保护重点实验室 台州 317000)摘要 为从分子水平研究饥饿对大黄鱼肌肉生长代谢的影响, 本实验采用qPCR 技术研究了在饥饿胁迫以及复投喂过程中胰岛素样生长因子基因IGF- Ⅰ(insulin-like growth fator-)Ⅰ、雷帕霉素靶蛋白基因mTOR (mammalian target of rapamycin)、成肌分化抗原基因MyoD (myogenic differentiation antigen)和肌球蛋白重链基因MHC (myosin heavy chain)等4个大黄鱼肌肉生长调控相关基因在肝脏、脾脏、脑、心脏、肠、鳃、肌肉和肾8个组织中的表达模式。
结果显示: 四个基因在正常大黄鱼不同组织间表达存在显著差异; 饥饿显著降低IGF-Ⅰ在肝组织中的表达量(P <0.05), 在复投喂14d 时显著上升, 此外在肠和鳃组织中表达量变化显著(P <0.05); mTOR 表达量随着饥饿时间的延长, 在脾、心和肾组织中表达量下降, 在脑、鳃和肌肉组织中表达量显著升高(P <0.05); MyoD 在饥饿胁迫和恢复投喂期间, 在肝脏、鳃和肌肉组织中表达量变化极显著(P <0.01); 饥饿和恢复投喂对MHC 在鳃和肌肉中的表达影响显著(P <0.05)。
结果提示饥饿可能通过调节这些肌肉生长相关基因的表达来影响肌肉的生长。
关键词 大黄鱼; 饥饿; 肌肉增殖; IGF-Ⅰ; mTOR ; MyoD ; MHC 中图分类号 Q78; Q955; S965 doi: 10.11693/hyhz20181200287 大黄鱼(Larimichthys crocea )属鲈形目(Perciformes), 石首鱼科(Perciformes), 黄鱼属(Larimichthys ), 为暖湿狭温性洄游鱼类, 喜集群, 主要分布在我国东部近海区域, 如南海、黄海南部和东海约80m 以内的近大陆沿岸中底层水域, 是我国重要的海洋经济鱼类(段清源等, 2000; 刘家富等, 2011)。
在自然水域或者人工养殖过程中, 鱼类会经常因自身原因或环境因素如季节更替、极端天气等而经受缺少食物或者不进食的情况。
大部分鱼类都有一定时间的耐饥饿能力, 其往往是通过改变自身的基础代谢水平和消耗食物丰富时体内所储存的营养物质如糖类、脂肪、蛋白质等, 从生理生化、物质代谢等方面来应对饥饿胁迫对鱼体本身的影响(Menezes et al , 2015; Carmen et al , 2017; 夏媛香等, 2018)。
由于大黄鱼进食与水体温度有关, 当水体温度高于30ºC 和低于14ºC 时摄食明显下降, 且低于10ºC 时大黄鱼基本停止进食(刘端炜等, 2002), 而浙江沿海冬季海水温度低于10ºC, 因此网箱养殖大黄鱼每年都会禁食3个月左右。
在此期间, 大黄鱼主要通过调整自身的各项生理代谢及消耗自身所储存的营养物质来应对饥饿。
在鱼类肌肉生长过程中, 其下丘脑—垂体—肝4期沈伟良等: 饥饿和复投喂对大黄鱼(Larimichthys crocea) IGF-Ⅰ、mTOR、MyoD和MHC基因表达的影响 895脏轴发挥着重要的生长调控作用, 通过胰岛素样生长因子基因IGF-Ⅰ(insulin-like growth fator-)Ⅰ介导雷帕霉素靶蛋白基因mTOR (mammalian target of rapamycin)、成肌分化抗原基因MyoD (myogenic differentiation antigen)和肌球蛋白重链基因MHC (myosin heavy chain)等基因的表达调控, 实现鱼类肌细胞的增殖、分化。
已有研究表明, 肌肉生长过程中胰岛素样生长因子(IGF)—磷酸肌醇三磷酸(PI3K)—丝氨酸/苏氨酸激酶(PKB/Akt)—雷帕霉素靶蛋白(mTOR)代谢通路的激活能有效增加成肌细胞中的蛋白质合成, 其中IGF是一种在肝脏中合成并储存于血液中可促进细胞分裂增殖的多肽, 包括IGF-Ⅰ和IGF-,Ⅱ与胰岛素的结构与功能相似, 主要与生物体的生长发育有关(Blundel et al, 1978; Rinderknecht et al, 1978; Vasilatos-Younken et al, 1991), 其中IGF-Ⅰ可正向调节肌肉的生长, 如促进肌细胞的增殖、分化并促进细胞中肌管的融合。
代谢通路中mTOR为磷脂酰肌醇-3激酶(phosphatidylinositol kinase-related kinases, PIKKS)家族的主要成员之一, 是一种重要的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(Brown et al, 1994)。
在动物如鱼类遭受环境胁迫时, mTOR可将多种胞外信号如盐度压力、营养等整合, 并通过调节蛋白质的合成、能量代谢及控制相关基因的转录和翻译, 进一步调控细胞的生长、分化、增殖以及细胞凋亡, 从而调整生物体器官、组织的各项机能应对环境的变化(Fingar et al, 2004)。
MyoD是肌肉生长调节因子MRFs家族(四种转录调节因子包括MyoD, Myf5, MyoG和MRF4等)的成员之一, 在肌肉细胞的形成和分化起正向调控作用(Naidu et al, 1995; Rescan, 2001; Francetic et al, 2011)。
MyoD正常表达对鱼类骨骼肌细胞的分化有重要作用, 缺失可导致成肌细胞停止增殖和停止分化, 而过量表达则会抑制肌细胞的增殖, 并促使成肌细胞过早分化成成熟的肌纤维细胞(Rudnicki et al, 1993; Te Pas et al, 2000; Alves et al, 2003)。
MHC是马达蛋白-肌球蛋白(Myosin)中的长肽链, 也是肌球蛋白的重要组分, MHC表达变化能引起肌球蛋白含量的改变, 进而引起肌原纤维蛋白含量的改变(Watabe et al, 1997)。
饥饿胁迫对鱼类的生理活动影响涉及多个方面, 而对肌肉生长代谢的影响尤为明显。
目前对饥饿胁迫后大黄鱼肌肉生长相关基因表达变化的研究未见报道。
本文分析了饥饿胁迫42d并恢复投喂14d期间大黄鱼IGF-Ⅰ、mTOR、MyoD和MHC等4个肌肉生长相关基因的时空表达量变化, 研究结果可为饥饿胁迫对大黄鱼生长影响及补偿生长的分子机制研究提供一定的基础数据。
1材料与方法1.1材料与取样选取象山港湾水产苗种有限公司平均体重(60±2.27)g大黄鱼300尾为试验群体, 暂养于3m×3m×4m规格网箱中, 每箱150尾。
经停食适应3d后, 每天早晚各以鱼糜饱食投喂一次, 正常养殖7d后随机分组开始实验。
其中实验组停止投喂, 饥饿42d后恢复投喂鱼糜, 恢复投喂期为14d。
对照组正常投喂, 不进行饥饿处理。
分别在饥饿胁迫处理0、7、14、21、28、35、42d和恢复投喂7、14d, 从对照组和实验组各取6尾大黄鱼, 经麻醉后取肝脏、脾脏、脑、心脏、肠、鳃、肌肉和肾组织, 样品储存于RNA保存液中, 带至实验室立即保存于–20℃冰箱中。
1.2基因表达分析用高纯度总RNA抽提试剂盒(RP1201)(北京百泰克生物技术有限公司)进行总RNA的提取, 按照试剂盒说明书进行提取操作, 后用1%琼脂糖凝胶(上海生工生物工程技术服务有限公司)检测RNA的完整性, 并用NanoDrop2000超微量紫外分光光度计(美国托摩根科技有限公司)测定浓度和纯度, 提取的总RNA 保存于–80℃超低温冰箱备用。
cDNA合成使用PrimeScript TM RT Reagent Kit with gDNA Eraser (Perfect Real Time)试剂盒(TaKaRa, 大连), 并以说明书要求进行反转录操作。
根据本实验室转录组测序获得的大黄鱼MyoD、IGF-Ⅰ、mTOR、MHC基因cDNA序列, 以β列肌动蛋白(β-actin)为内参基因使用Primer premier 5.0设计β-actin、MyoD、IGF-Ⅰ、mTOR、MHC引物, 并送华大公司合成。
引物名称及序列见表1。
实时荧光定量PCR反应体系(20μL)为: 10μL FastStart Universal SYBR Green Master (Roche)、0.4μL 正向引物(10μmol/L)、0.4μL反向引物(10μmol/L)、1μL cDNA模板、8.2μL无菌水。
热循环反应条件包括: 95℃预变性10min; 95℃变性15s, 59℃退火40s, 40个循环, 72℃延伸20s。
将cDNA模板以5为单位进行6个梯度的稀释, 用于制作目的基因和内参基因的标准曲线。
目的基因的mRNA表达采用2–ΔΔCT方法来计算目的基因的表达倍数(Schmittgen et al, 2008), 然后896 海洋与湖沼50卷表1 qPCR引物Tab.1 The primer sequence of qPCR基因正向引物或反向引物引物序列(5′—3′)正向(F) GCTGTCCCTGTATGCCTCTG β-actin反向(R) CTCGGCTGTGGTGGTGAAG正向(F) CGGCTCAGTAAAGTCAACGA MyoD反向(R) TGATGGCGTTGCGAAGGA正向(F) GGGAATGTTTGCTGTGCT MTOR反向(R) ATCAAGTCCCTGCCGTAA正向(F) TTCAAGAGTGCGATGTGC IGF-Ⅰ反向(R) GCCGTAGCCTGTTGGTTT正向(F) TTGTGGATGGTTGTCCGTAT MHC反向(R) AAAGCCAGCAATGTCCAG用SPSS软件(版本21.0)进行单因素方差分析, 且P<0.05表示存在显著差异。