微生物实验报告微生物形态观察分布灭菌消毒
菌落形态观察实验报告
一、实验目的1. 了解菌落形态的基本概念和分类。
2. 掌握观察菌落形态的方法和技巧。
3. 通过观察不同菌种的菌落特征，学会鉴别菌种。
二、实验原理菌落是指单个微生物细胞在适宜的培养基上繁殖后形成的肉眼可见的子细胞群体。
菌落形态是指菌落的大小、形状、颜色、质地、边缘、表面等特征。
菌落形态是菌种鉴定的重要依据之一。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：细菌、放线菌、酵母菌、霉菌等纯培养菌种。
2. 仪器：显微镜、接种环、接种针、培养皿、培养基、酒精灯、无菌操作台等。
四、实验步骤1. 菌落培养将纯培养菌种接种于适宜的培养基上，置于恒温培养箱中培养。
2. 菌落观察（1）无菌操作：将接种环、接种针等工具在火焰上灼烧灭菌，待冷却后进行操作。
（2）挑取菌落：用接种环或接种针挑取少量菌落，置于显微镜载玻片上。
（3）制片：在载玻片上滴加适量的生理盐水，用接种环将菌落涂抹均匀。
（4）观察：将制片置于显微镜下，调整镜头，观察菌落形态。
3. 菌落特征描述根据观察到的菌落形态，描述其大小、形状、颜色、质地、边缘、表面等特征。
五、实验结果与分析1. 细菌菌落特征（1）形态：细菌菌落多为圆形、不规则形或椭圆形。
（2）大小：细菌菌落直径一般为0.5-5mm。
（3）颜色：细菌菌落颜色多样，如白色、黄色、绿色、红色等。
（4）质地：细菌菌落质地有粘稠、粘稠带皱褶、粘稠带颗粒、粘稠带膜状等。
（5）边缘：细菌菌落边缘有整齐、不规则、波状等。
2. 放线菌菌落特征（1）形态：放线菌菌落呈放射状、扇形、菊花形等。
（2）大小：放线菌菌落直径一般为0.5-5mm。
（3）颜色：放线菌菌落颜色多样，如白色、黄色、红色、黑色等。
（4）质地：放线菌菌落质地有粘稠、粘稠带皱褶、粘稠带颗粒等。
（5）边缘：放线菌菌落边缘有整齐、不规则、波状等。
3. 酵母菌菌落特征（1）形态：酵母菌菌落呈圆形、不整齐、菌丝状等。
（2）大小：酵母菌菌落直径一般为0.5-5mm。
（3）颜色：酵母菌菌落颜色多样，如白色、黄色、红色、黑色等。
微生物细菌实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 了解细菌的基本形态结构。
2. 掌握细菌的分离、纯化和鉴定方法。
3. 学习细菌生理生化反应的检测原理和应用。
二、实验原理细菌是单细胞微生物，具有典型的原核细胞结构。
通过观察细菌的形态、染色和生理生化反应，可以鉴定细菌的种类。
三、实验材料与仪器1. 材料：大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、肺炎克雷伯菌等纯菌株。
2. 仪器：显微镜、接种环、培养皿、酒精灯、无菌水、生理盐水、革兰氏染色液、生理生化试剂等。
四、实验方法1. 细菌形态观察- 将细菌涂布在载玻片上，进行革兰氏染色。
- 使用显微镜观察细菌的形态、大小、染色性等特征。
2. 细菌分离与纯化- 将纯菌株接种于琼脂平板，进行划线分离。
- 观察菌落特征，挑选单菌落进行纯化。
3. 细菌生理生化反应检测- 进行糖发酵试验、吲哚试验、甲基红试验、V-P试验等。
- 观察反应结果，判断细菌的生理生化特性。
五、实验结果与分析1. 细菌形态观察- 大肠杆菌：革兰氏阴性，呈杆状，两端钝圆。
- 金黄色葡萄球菌：革兰氏阳性，呈球形，呈葡萄串状排列。
- 肺炎克雷伯菌：革兰氏阴性，呈短杆状，两端钝圆。
2. 细菌分离与纯化- 划线分离后，观察到单菌落形成。
3. 细菌生理生化反应检测- 糖发酵试验：大肠杆菌、金黄色葡萄球菌均能发酵葡萄糖。
- 吲哚试验：大肠杆菌、金黄色葡萄球菌均呈阳性。
- 甲基红试验：大肠杆菌、金黄色葡萄球菌均呈阳性。
- V-P试验：金黄色葡萄球菌呈阳性，大肠杆菌、肺炎克雷伯菌均呈阴性。
六、讨论与分析1. 通过观察细菌的形态、染色和生理生化反应，可以初步鉴定细菌的种类。
2. 细菌的生理生化反应具有特异性，可用于细菌的鉴定和分类。
3. 在实际应用中，细菌的分离、纯化和鉴定是微生物学研究和临床诊断的重要环节。
七、实验结论1. 通过本次实验，我们掌握了细菌的基本形态结构、分离、纯化和鉴定方法。
2. 我们学会了利用生理生化反应进行细菌的鉴定和分类。
3. 本实验有助于提高我们对微生物学基本理论的认识和应用能力。
微生物实验报告微生物形态观察分布灭菌消毒
微生物实验微生物实验细菌形态观察细菌分布消毒灭菌细菌形态观察一、实验目的1.掌握光学显微镜油镜的使用及日常维护2.掌握细菌的三种形态3.掌握临床常见细菌的形态及染色4.掌握细菌的特殊结构5.了解支原体、衣原体、立克次氏体、螺旋体及真菌的结构特点二、实验原理1. 普通光学显微镜油镜的使用1. 在标本欲检部位滴一滴香柏油,然后转换油镜头2. 从侧面观察并慢慢转动粗调节器,使油镜头浸没在油滴内,当油镜头几乎接触玻片时停止转动,以免碰撞玻片,用双眼观察目镜,同时调节细调节器,直至细菌清晰3. 根据需要调节显微镜亮度2. 普通光学显微镜的维护1.移动显微镜时,用右手持镜壁,左手托镜座,平端于胸前2.油镜用毕后, 要立即用擦镜纸擦去香柏油；再用滴有二甲苯的擦镜纸擦油镜头；最后,用干净擦镜纸将镜头上的二甲苯擦去,以免损伤油镜头3.镜头擦净后,降低接物镜并将其转成八字形,罩好镜罩放入柜内4.做好使用记录3．微生物知识1．细菌按形态分类：球菌：球形包括双球菌、四联球菌、八叠球菌、葡萄球菌、链球菌等杆菌：杆状包括单杆菌、双杆菌、链杆菌、分枝杆菌、双歧杆菌等螺旋菌：螺旋状包括螺旋菌、弧菌等2．细菌的基本结构细胞壁、细胞膜、细胞质、核质、核蛋白体3．细菌的特殊结构荚膜：如肺炎双球菌鞭毛：又分单毛菌、双毛菌、丛毛菌、周毛菌;如：变形杆菌为周毛菌菌毛芽胞：如破伤风梭菌、炭疽芽胞杆菌、肉毒梭菌4．微生物是一切肉眼看不见或看不清的微小生物的总称,包括原核类、真核类和非细胞类;原核类：细菌、放线菌、蓝藻、衣原体、支原体、立克次氏体真核类：真菌、原生动物、显微藻类非细胞类：病毒、亚病毒5．真菌单细胞：圆形、芽生孢子;如：酵母菌多细胞：菌丝及孢子、孢子出芽;如：霉菌6．白假私酵母菌白念生物学性状：G+单细胞真菌、芽生孢子、类酵母型菌落厚膜孢子、假菌丝有助于鉴定致病性：皮肤粘膜——鹅口疮、内脏感染、CNS感染微生物学检查：直接涂片、染色后镜检——菌体、芽生孢子、假菌丝7．新型隐球菌生物学性状：圆形酵母型菌、外周有厚荚膜比菌体大1-3倍致病性：吸入后侵犯皮肤、粘膜等——慢性炎症和脓肿；侵袭CNS——亚急性或慢性脑膜炎微生物学检查：脑脊液离心后取沉淀、痰和脓标本直接检查；墨汁负染见出芽菌体外围有宽厚荚膜为阳性三、实验材料记号笔：1支；大镊子：1支；火柴：1盒；蜡笔：1支；试管架：1个；酒精灯：1个；接种环：1支；Olympus显微镜：1台；显微镜使用记录本：1个四、实验内容1. 观察细菌三种形态1球菌链球菌、葡萄球菌、肺炎双球菌子弹形、脑膜炎双球菌蚕豆形、四联菌2杆菌破伤风杆菌、白喉杆菌异染颗粒、绿脓杆菌、伤寒杆菌、变形杆菌3螺形菌弧菌——霍乱弧菌；螺菌；螺杆菌——幽门螺杆菌；弯曲菌2. 观察细菌的特殊结构芽胞、鞭毛、荚膜、异染颗粒、钩端螺旋体、幽门螺杆菌3. 绘图葡萄球菌staphyloccocus；肺炎双球菌pneumo coccus；脑膜炎球菌meningococcus；破伤风杆菌Clostridium Tantenus；霍乱弧菌vibrio cholera；芽胞spore；鞭毛flagellum；荚膜capsule；钩端螺旋体leptospira五、实验结果绘8幅细菌镜下图,已交;六、思考与讨论1．显微镜高倍镜使用时看不清楚的常见原因1 未滴加镜油2 镜头不干净3 标本放置反了,所以达不到对焦平面4 制片问题：标本太厚、染色误差等细菌分布一、实验目的1. 掌握固体培养基的制备2. 掌握机体常见部位及环境中的细菌采样、培养、及初步鉴定3. 掌握革兰氏染色方法及结果判定二、实验原理1. 培养基：1．细菌生长所需营养物质：水、碳源、氮源、无机物和生长因子2．培养基分类：1根据营养物质：营养培养基、选择培养基、鉴别培养基2根据物理性质：液体培养基、固体培养基和半固体培养基3．细菌在培养基中的生长状况：表面生长、均匀浑浊生长、沉淀生长2. 革兰氏染色：革兰阳性细菌细胞壁的肽聚糖peptidoglycan层较厚,经乙醇处理后使之发生脱水作用而使孔径缩小,通道弯曲,结晶紫与碘的复合物保留在细胞内而不被脱色；而革兰阴性细菌的肽聚糖层很薄,脂肪含量高,经乙醇处理后孔径仍可使结晶紫与碘的复合物通过,因而将染料洗去而被脱色;三、实验材料咽拭子、羊血培养皿：1套/人；大号普通培养皿：1块/2人；载玻片：1片/人；A、B菌：6套/桌；NS：1份/人；滤纸：1张/人；消毒液：4套/桌；三角瓶、电天平、营养琼脂、称药纸、称药勺、量筒：1套/桌四、实验内容1. 培养基制备1按产品要求称取营养琼脂2每实验桌制备200ml3高压蒸汽灭菌后,在洁净工作台内倒平皿4所制备的普通平皿用于空气培养2. 机体不同部位的细菌采样、培养1咽部正常菌群的采样、培养咽拭子擦拭咽部,平行划线法接种于羊血平皿;2手指消毒前后细菌的采样培养未消毒手指平行划线法接种于普通平皿；同一手指碘酒、酒精消毒后平行划线法接种于普通平皿;3. 环境中细菌采样培养1空气培养将培养皿打开暴露于空气中,20分钟后盖好平皿盖儿2流通纸币或硬币的细菌采样培养将硬币正反面分别在培养基上充分接触3采样结束后,将培养皿底部朝上放入铁丝筐,统一置培养箱：37℃18-24小时4. A、B、C菌鉴定革兰氏染色法1. 细菌涂片制备程序：1取一干净玻片,火焰上方缓缓通过三次去油2蜡笔画线将玻片分割为A、B、C三区域3接种环取生理盐水分别滴入A、B两区域各一滴4分别取少许A、B 、C菌,与生理盐水充分混匀成菌液,风干后形成菌膜5固定火焰上方缓缓通过三次6革兰氏染色7滤纸吸干水分,油镜观察2. 革兰氏染色：1细菌涂片、火焰固定2结晶紫初染1min3卢戈氏碘液媒染1min495%乙醇脱色30-40s5沙黄复染1min五、实验结果A：G+,球菌,推测为金黄色葡萄球菌；B：G-,短杆菌,推测为大肠杆菌；六、思考与讨论1．影响革兰氏染色的因素：1细菌本身因素：菌龄：如果菌龄太大,可能出现假阴性2操作因素涂片：取菌应适量,涂片要均匀,如果某个部分菌层太厚,可能在脱色时达不到,会导致局部假阳性固定：固定温度太高或时间太长都会导致细菌结构破坏而出现假阴性；但是固定不够,细菌会在水洗时被冲掉初染：初染时间虽然说是1分钟,但是可以适当延长,时间太短会出现假阴性；染色滴加不均匀可能出现半阴半阳媒染：和初染一样脱色：脱色时间不能过长,基本上用酒精滴过之后马上水冲就可以了,否则容易出现假阴性复染：复染时间需足够长,否则可能会染不上消毒灭菌一、实验目的1. 了解实验室常用消毒灭菌方法及其原理2. 掌握实验中所用仪器的使用方法3. 掌握机体常见部位及环境中的细菌培养物的初步鉴定4. 强化革兰氏染色技能二、实验原理1．口咽部及皮肤正常菌群鼻咽部及扁桃体：葡萄球菌、类白喉杆菌、肺链、溶血及非溶血性链球菌、奈瑟菌等口腔：链球菌多见、放线菌、螺旋体、G-杆菌等皮肤：表皮葡萄球菌、丙酸杆菌、类白喉杆菌、铜绿假单胞菌2．溶血类型α溶血：现象：草绿色溶血环常见菌种：机会致病菌甲链、肺链原理：细菌产生过氧化氢将血红蛋白氧化成深绿色的高铁血红蛋白β溶血：现象：透明溶血环常见菌种：致病菌乙链原理：细菌释放溶血素使红细胞破裂,血红蛋白释放三、实验材料咽拭子培养物：1套/人；空气、纸币、手指消毒前后培养物：1套/2；载玻片：1片/人；NS：1支/人；滤纸：1张/人四、实验内容1. 常用消毒灭菌方法：示教讲解1．热力灭菌：1干热灭菌法：焚化、烧灼、干烤160 ℃ ,2小时2湿热灭菌法：煮沸2%Na2CO3,105 ℃；高压蒸汽灭菌,20分钟,121℃,临床运用最广的灭菌方法2. 紫外线Ultraviolet radiation：波长265nm-266nmDNA吸收光谱杀菌能力最强;紫外光穿透力差,一般只用于不耐热物品表面的消毒;3. 过滤filtration用物理阻流的方法除去液体或空气中的细菌,用于不耐热物质的灭菌血清、毒素、抗生素等滤菌器：薄膜滤菌器、玻璃滤菌器、石棉滤菌器、素陶瓷滤菌器4. 低温保存菌种冷冻真空干燥法6．实验室常用化学消毒剂：70-75%乙醇洁净台消毒：来苏水擦拭防腐剂：三氯甲烷、硫柳汞、叠氮钠2．细菌分布结果鉴定1观察菌落2取部分菌落的细菌进行革兰氏染色并观察五、实验结果1. 咽部正常菌群的采样、培养结果：在羊血培养皿上出现四种菌落：（1）数目多,划线沿线都有；针尖大小；无色、光滑、湿润、透明、圆形;周围出现草绿色溶血环,发生了不完全溶血即α溶血;（2）数目较多,划线沿线都有；较小；乳白色、光滑、湿润、半透明、圆形;（3）少,只出现在四个点；中型；乳黄色、光滑、半湿润、不透明、形状不规则;在此种菌落下方的培养基出现了透明溶血环,发生了完全溶血即β溶血;（4）1个菌落；较大；乳白色、光滑、湿润、半透明、圆形;粘稠;取1、2、3进行革兰氏染色,结果如下;（1）G+,链球菌,根据不完全溶血推断,为甲型链球菌;（2）G-,球菌,细胞个体小,形状像金黄色葡萄球菌,但是染色为阴性;（3）G-,球菌;2. 手指消毒前后细菌的采样培养结果：1消毒前：仅出现2个菌落,较小；乳白色、光滑、湿润、有光泽、圆形;革兰氏染色结果：G-,杆菌2消毒后：无菌落出现;3. 硬币正反面的细菌采样培养结果：1正面三种菌落：113个菌落；较小；乳白色、光滑、湿润、有光泽、圆形;和手指消毒前的菌落一样;21个菌落；较大；白色、光滑、湿润、近似圆形;35个菌落；较大；中央乳黄色边缘颜色变浅、光滑、湿润、中间凸、不规则、边缘光滑取其中2、3进行革兰氏染色,结果如下：2G-,杆菌;和手指消毒前的细菌一样3G-,链杆菌;形态较大,形状像炭疽芽胞杆菌,但是没有芽孢且染色为阴性;2反面两种菌落：12个；较大,乳白色、光滑、湿润、有光泽、圆形;2多个,沿硬币边缘线连成一片；针尖大小、无色、光滑、湿润、透明;4. 空气培养结果平皿敞开在实验室的窗台上放置了约20分钟,当时阳光照在上面：平皿出现了五种菌落：111个；中等大小；白色、光滑、湿润、半透明、圆形22个；较大；周围白色,中间有一个透明圈,光滑、湿润、中间凹的圆饼状31个；较大；周围黄色,中间有一个透明的圆形区域,半湿润、没有光泽41个；较大；边缘橘黄色,中央偏白、明显凸起、干燥、形状不规则51个；较大；边缘透明,中央乳黄色,光滑、湿润、半透明、圆形取其中3、4进行革兰氏染色,结果如下：3G-,杆菌;和手指消毒前、硬币正面菌落2的细菌一样4出现三种细菌：G-,双球菌G+,双球菌G-,梭菌六、思考与讨论1．巴氏消毒法的利用巴氏消毒法是一种低温消毒法,包括：低温维持法：摄氏度维持30分钟；高温瞬时法：摄氏度作用15-30秒;该法适用于食品的消毒;现主要应用于乳制品;2．为什么湿热消毒法的温度比干热消毒法低课堂上讲到的干热消毒法温度都比湿热消毒法要高,说明湿热灭菌法可在较低的温度下达到的灭菌效果可以与干热法相同,分析原因如下：（1）湿热中蛋白吸收水份,更易凝固变性；（2）水分子的穿透力比空气大,更易均匀传递热能,在干热状态下,由于热穿透力较差,微生物的耐热性较强,必须长时间受高温的作用才能达到灭菌的目的（3）蒸汽潜热大,每1克水由气态变成液态可释放出529卡热能,可迅速提高物体的温度; 3．细菌分布试验结果讨论咽部正常菌群主要为：溶血和非溶血性链球菌、球菌等,不同人由于个体差异和取样部位差异,所得菌种也有所不同手的消毒是有效的,消毒后细菌明显减少了;同时手上的菌是很多的,所以需要常洗手;手上较常见的是四联球菌;硬币上的菌也相对较多,因为它经历的环境很多;在咽部、硬币和未消毒的手上,都得到了一种很像大肠杆菌的革兰氏阴性杆菌,说明这种菌分布非常广泛;4．空气培养取样染色时,为什么得到三种菌图1 空气培养取样革兰氏染色10100一般认为,菌落形成是一个菌落到培养基上并增殖而来,但是在空气培养得到的菌落取样染色时,发现了三种形态完全不同的菌如图1,较大的双球菌和梭菌为革兰氏阴性,较小的双球菌为革兰氏阳性;可能的原因有：（1）取样的污染,该菌落被两次取用,可能遭到污染（2）在非常小的概率下,三个不同的菌掉到了同一处,同时这三种菌的生长互不影响甚至互利,于是形成了混合菌群;（3）三个菌落在生长过程中由于靠得很近而融合了;。
微生物实验 细菌的培养及消毒与灭菌
固体斜面接种法 液体培养基接种法
细菌的分离接种法
平行划线接种法: 被检标本中菌量少
分区（四分区）划线接种法: 被检标本中菌量多
菌苔
固体培养基中的琼脂 平板培养基，经平板 划线分离培养，可见 单个菌落。
菌落
菌苔
细菌的纯培养
琼脂斜面接种法:
肉膏汤接种法
肉膏汤接种法
半固体穿刺法
【实验内容二】消毒与灭菌
1. 熟悉常用的物理、化学消毒灭菌法。 2. 了解微生物的分布。
【实验内容与方法】
1. 物理因素对细菌的影响─紫外线杀菌实验。 2. 化学因素对细菌的影响─皮肤消毒实验。
1.物理因素对细菌的影响─紫外线杀菌实验
细菌 黑纸片
紫外灯下垂直照射30分 钟后， 37℃温箱培养18-24h
实验三 细菌的培养及消毒灭菌
【目的要求】
1.掌握细菌的分离接种及纯培养的方法观察其生长现象。 2.熟悉常用的物理、化学消毒灭菌法。 3.了解微生物的分布。
病原生物学与免疫学教研室
【实验内容一】细菌的培养
1.培养基的概念及种类。
2.培养基的制备
调配
溶化
调pH
过滤
分装
灭菌
鉴定
3.细菌的分离培养法
平行划线法 分区（四分区）划线法
细菌Leabharlann 2.化学因素对细菌的影响─皮肤消毒实验
未消毒手指接 触培养基
1
2
5
4
3
75%酒精 1分钟
流动水洗手指 接触培养基
口腔中的微生物
环境中的微生物
【实验报告】
1.记录： 四分区划线接种 琼脂斜面接种法 方法及生长现象 肉膏汤接种法
细菌分布实验报告原理(3篇)
第1篇一、实验背景细菌是自然界中广泛分布的微生物，它们在人类的生活和环境中扮演着重要的角色。
了解细菌的分布情况，对于研究细菌与人类健康、环境以及生态系统之间的关系具有重要意义。
细菌分布实验旨在探究细菌在不同环境中的分布规律，分析影响细菌分布的因素，为细菌的防治和利用提供理论依据。
二、实验原理1. 细菌分布与生态环境细菌分布受多种生态环境因素的影响，包括温度、湿度、pH值、营养物质、氧气含量等。
这些因素共同构成了细菌生长的微环境。
实验中，通过对比不同环境条件下细菌的分布情况，可以了解生态环境对细菌分布的影响。
2. 细菌培养与计数细菌培养是研究细菌分布的基础。
实验中，采用适宜的培养基和培养条件，使细菌在培养基上生长繁殖。
通过观察菌落形态、颜色等特征，可以初步判断细菌的种类。
利用计数器对菌落进行计数，可以得到细菌的浓度。
3. 细菌分离与纯化为了研究特定细菌的分布情况，需要对混合细菌进行分离和纯化。
实验中，采用平板划线法、稀释涂布法等方法，将混合细菌分离成单个菌落。
通过纯化后的细菌，可以进一步研究其生物学特性。
4. 细菌鉴定细菌鉴定是研究细菌分布的关键步骤。
实验中，根据细菌的形态特征、生理生化特性、分子生物学方法等进行鉴定。
常用的鉴定方法包括显微镜观察、生化反应、DNA指纹分析等。
三、实验方法1. 空气中细菌分布检测（1）采样：采用无菌采样器采集空气样品，如空气采样管、空气采样盒等。
（2）培养：将采样器中的空气样品注入含有适宜培养基的培养皿中，进行培养。
（3）计数：培养一段时间后，统计菌落数量，计算细菌浓度。
2. 土壤中细菌分布检测（1）采样：采用无菌工具采集土壤样品，如土壤采样管、土壤铲等。
（2）培养：将土壤样品进行稀释，将稀释后的样品接种于培养基上，进行培养。
（3）计数：培养一段时间后，统计菌落数量，计算细菌浓度。
3. 水体中细菌分布检测（1）采样：采用无菌采样器采集水样，如无菌水桶、无菌试管等。
（2）培养：将水样进行稀释，将稀释后的样品接种于培养基上，进行培养。
食品微生物实验报告
⾷品微⽣物实验报告霉菌的培养与形态学观察实验⼀真菌培养基的配制与灭菌实验⽬的：（1）了解培养基的配置原理和⽅法，掌握分离培养微⽣物的有关准备⼯作。
（2）掌握⾼压灭菌⽅法及原理实验原理：（1）培养基的制备原理：1. 培养基是供微⽣物⽣长、繁殖、代谢的混合养料。
2. 从营养⾓度分析：营养：碳源、氮源、能源、⽣长素、⽔分和⽆机盐等；适宜的酸碱度(pH值)和⼀定缓冲能⼒；⼀定的氧化还原电位；合适的渗透压。
琼脂是从⽯花菜等海藻中提取的胶体物质，是应⽤最⼴的凝固剂。
加琼脂制成的培养基在98～100℃下融化，于45℃以下凝固，不容易被微⽣物污染。
但多次反复融化，其凝固性降低。
（2）湿热灭菌原理－⾼压蒸汽灭菌在密闭的蒸锅内，其中的蒸汽不能外溢，压⼒不断上升，使⽔的沸点不断提⾼，从⽽锅内温度也随之增加。
在0.1MPa的压⼒下，锅内温度达121℃。
在此蒸汽温度下，可以很快杀死各种细菌及其⾼度耐热的芽孢。
实验材料与⽅法配制培养基所需器材实验设备：⾼压蒸汽灭菌器。
实验器材：500ml三⾓烧瓶、蓝盖瓶、5ml刻度吸管、培养基、天平、砝码、称量纸、药勺、500ml、100ml量筒、⽜⽪纸、硫酸纸、橡⽪筋、铁丝筐、平⽫、剪⼑等。
培养基等集中放讲台前⾼压桶内，送到洗刷室统⼀⾼压灭菌条件及注意事项⾼压灭菌条件：121.3℃，15min 。
含糖培养基113 ℃，15min 。
倒平板电炉加热灭菌好的培养基打开平⽫包装倒平板（10块）注意事项：空⽓环境⽆菌（应在酒精灯⽕焰周围⽆菌区）。
a.在酒精灯⽕焰处，倾斜打开瓶⼝。
b.瓶⼝要过⽕焰。
c.左⼿掀开平⽫⼩⼝。
d.倾注满⽫底再多⼀点，约10ml（7cm直径平⽫）。
e.推放⼀边要轻缓，不能晃起琼脂挂壁，易在培养过程中污染杂菌。
f.完全凝固再翻转平板放塑料筐内，4℃备⽤。
分析与讨论（1）如何证明培养基灭菌是否彻底?把灭菌后的培养基按灭菌锅内的不同位置，每处抽取数管(瓶)，标上记号，置25℃～30℃培养⼀周左右进⾏检查。
微生物分区划线实训报告
一、实训目的本次实训旨在通过分区划线法，学习微生物的分离培养技术，掌握微生物纯化分离的基本原理和方法，提高实验操作技能，为后续微生物学实验和科研工作打下基础。
二、实训内容1. 实验原理分区划线法是一种常用的微生物分离纯化方法，其原理是利用微生物在固体培养基上生长的菌落会逐渐扩散，但由于营养物质的限制，菌落不会无限扩大，从而在划线过程中形成单个菌落，实现微生物的纯化。
2. 实验材料- 细菌培养箱- 细菌接种环- 细菌接种针- 琼脂培养基- 细菌样本- 灭菌器材- 实验记录本3. 实验步骤1. 准备工作：将琼脂培养基倒入培养皿中，待凝固后，用无菌镊子将培养皿翻转放置。
2. 划线：用接种环取适量细菌样本，在培养基表面划出一条或多条平行线，划线长度约为2-3cm。
3. 划线操作：将接种环在酒精灯上灼烧，待冷却后，蘸取细菌样本，沿划线方向轻轻划线，每次划线后需将接种环在酒精灯上灼烧消毒。
4. 观察与记录：将培养皿置于37℃恒温培养箱中培养24-48小时，观察菌落生长情况，并记录菌落特征。
5. 分纯：用接种环挑取单个菌落，转接至新的培养基上，重复上述步骤，直至获得纯化菌株。
4. 实验结果与分析通过分区划线法，成功分离纯化了目标菌株。
观察菌落特征，发现该菌株为革兰氏阳性菌，菌落呈圆形、光滑、边缘整齐，颜色为白色。
三、实训总结1. 实训收获通过本次实训，我掌握了分区划线法的基本原理和操作步骤，提高了实验操作技能，为后续微生物学实验和科研工作打下了基础。
2. 实验注意事项- 操作过程中应严格无菌操作，避免污染。
- 划线时应保持接种环清洁，避免菌落交叉污染。
- 观察菌落时，注意观察菌落形态、颜色、大小等特征，为后续鉴定提供依据。
3. 改进建议- 在实验过程中，可尝试不同划线方法，如连续划线、交叉划线等，比较其优缺点。
- 可增加实验次数，提高实验成功率。
- 在实验过程中，注重与同学交流，共同探讨实验问题。
四、实训体会通过本次实训，我深刻体会到微生物实验操作的重要性。
微生物免疫学实验报告
1实验内容：2显微镜油镜的使用与保护。
3细菌的形态与结构的观察。
4实验目的：5学会显微镜的使用，重点掌握油镜的使用与保护。
6进一步认识细菌的形态，明确细菌的大小与测量单位。
7熟悉细菌的特殊结构。
8实验材料：显微镜、擦镜纸、液体石蜡、消毒液、细菌的基本形态标本、细菌的特殊结构标本。
4实验方法：(1)显微镜油镜的使用与保护显微镜是一种贵重的光学仪器，而油镜又是显微镜的最精密部分，是观察细菌最重要的工具。
因此，要求大家必须熟练地掌握显微镜的使用和保护，尤其是油镜，避免损坏。
1识别油镜：95╳、100╳、HI、OeL。
2对光：自然光用平面反光镜，人工光用凹面反光镜；先用低倍镜对光，次用高倍镜。
对好光源后，染色标本将聚光器升高，光圈放开。
3、调节焦距：选一张细菌染色标本置于载物台上，用推进器固定，用低倍镜先找准物象，再用高倍镜看清物体，于标本上加镜油一滴。
⑴用眼从侧面观察，转动粗螺旋调节器，将油镜头徐徐下降浸入其中，切不可用力过猛，以免损坏油镜。
⑵用左眼从接目镜观察，徐徐向上转动粗螺旋调节器，见模糊物象后，再用细螺旋调节器，直到物象完全清晰为止。
4、显微镜的保护：⑴所有的光学部分结构都不能用手指、普通布擦拭，用过的油镜头应立即先用擦镜纸蘸少许二甲苯擦拭，再用干擦镜纸擦去二甲苯，以防二甲苯镜头上的固定胶，致使镜片脱落。
⑵显微镜的光学部分应避免日光直射。
避免接触强酸、强硷、氯仿、酒精。
⑶显微镜用毕，将物镜转成品字形并下降集光器和镜筒，用软布擦拭各部件后覆盖于接目镜上，双手端平送入镜箱内。
置于干燥处，以防受潮。
(二)细菌形态观察1、细菌的基本形态；球菌：肺炎球菌、脑膜炎球菌、葡萄球菌、链球菌杆菌：大肠杆菌、炭疽杆菌、结核杆菌、白喉杆菌弧菌：霍乱弧菌2、细菌的特殊结构：荚膜：肺炎球菌、产气荚膜杆菌鞭毛：水弧菌（周毛菌）一、实验内容：3细菌标本片的制备（操作）4革兰染色法（操作）二、实验目的：1进一步了解细菌特殊结构在鉴别细菌过程中的实用意义。
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微生物实验微生物实验细菌形态观察细菌分布消毒灭菌细菌形态观察一、实验目的1.掌握光学显微镜油镜的使用及日常维护2.掌握细菌的三种形态3.掌握临床常见细菌的形态及染色4.掌握细菌的特殊结构5.了解支原体、衣原体、立克次氏体、螺旋体及真菌的结构特点二、实验原理1. 普通光学显微镜油镜的使用1. 在标本欲检部位滴一滴香柏油,然后转换油镜头2. 从侧面观察并慢慢转动粗调节器,使油镜头浸没在油滴内,当油镜头几乎接触玻片时停止转动,以免碰撞玻片,用双眼观察目镜,同时调节细调节器,直至细菌清晰3. 根据需要调节显微镜亮度2. 普通光学显微镜的维护1.移动显微镜时,用右手持镜壁,左手托镜座,平端于胸前2.油镜用毕后, 要立即用擦镜纸擦去香柏油；再用滴有二甲苯的擦镜纸擦油镜头；最后,用干净擦镜纸将镜头上的二甲苯擦去,以免损伤油镜头3.镜头擦净后,降低接物镜并将其转成八字形,罩好镜罩放入柜内4.做好使用记录3．微生物知识1．细菌按形态分类：球菌：球形包括双球菌、四联球菌、八叠球菌、葡萄球菌、链球菌等杆菌：杆状包括单杆菌、双杆菌、链杆菌、分枝杆菌、双歧杆菌等螺旋菌：螺旋状包括螺旋菌、弧菌等2．细菌的基本结构细胞壁、细胞膜、细胞质、核质、核蛋白体3．细菌的特殊结构荚膜：如肺炎双球菌鞭毛：又分单毛菌、双毛菌、丛毛菌、周毛菌;如：变形杆菌为周毛菌菌毛芽胞：如破伤风梭菌、炭疽芽胞杆菌、肉毒梭菌4．微生物是一切肉眼看不见或看不清的微小生物的总称,包括原核类、真核类和非细胞类;原核类：细菌、放线菌、蓝藻、衣原体、支原体、立克次氏体真核类：真菌、原生动物、显微藻类非细胞类：病毒、亚病毒5．真菌单细胞：圆形、芽生孢子;如：酵母菌多细胞：菌丝及孢子、孢子出芽;如：霉菌6．白假私酵母菌白念生物学性状：G+单细胞真菌、芽生孢子、类酵母型菌落厚膜孢子、假菌丝有助于鉴定致病性：皮肤粘膜——鹅口疮、内脏感染、CNS感染微生物学检查：直接涂片、染色后镜检——菌体、芽生孢子、假菌丝7．新型隐球菌生物学性状：圆形酵母型菌、外周有厚荚膜比菌体大1-3倍致病性：吸入后侵犯皮肤、粘膜等——慢性炎症和脓肿；侵袭CNS——亚急性或慢性脑膜炎微生物学检查：脑脊液离心后取沉淀、痰和脓标本直接检查；墨汁负染见出芽菌体外围有宽厚荚膜为阳性三、实验材料记号笔：1支；大镊子：1支；火柴：1盒；蜡笔：1支；试管架：1个；酒精灯：1个；接种环：1支；Olympus显微镜：1台；显微镜使用记录本：1个四、实验内容1. 观察细菌三种形态1球菌链球菌、葡萄球菌、肺炎双球菌子弹形、脑膜炎双球菌蚕豆形、四联菌2杆菌破伤风杆菌、白喉杆菌异染颗粒、绿脓杆菌、伤寒杆菌、变形杆菌3螺形菌弧菌——霍乱弧菌；螺菌；螺杆菌——幽门螺杆菌；弯曲菌2. 观察细菌的特殊结构芽胞、鞭毛、荚膜、异染颗粒、钩端螺旋体、幽门螺杆菌3. 绘图葡萄球菌staphyloccocus；肺炎双球菌pneumo coccus；脑膜炎球菌meningococcus；破伤风杆菌Clostridium Tantenus；霍乱弧菌vibrio cholera；芽胞spore；鞭毛flagellum；荚膜capsule；钩端螺旋体leptospira五、实验结果绘8幅细菌镜下图,已交;六、思考与讨论1．显微镜高倍镜使用时看不清楚的常见原因1 未滴加镜油2 镜头不干净3 标本放置反了,所以达不到对焦平面4 制片问题：标本太厚、染色误差等细菌分布一、实验目的1. 掌握固体培养基的制备2. 掌握机体常见部位及环境中的细菌采样、培养、及初步鉴定3. 掌握革兰氏染色方法及结果判定二、实验原理1. 培养基：1．细菌生长所需营养物质：水、碳源、氮源、无机物和生长因子2．培养基分类：1根据营养物质：营养培养基、选择培养基、鉴别培养基2根据物理性质：液体培养基、固体培养基和半固体培养基3．细菌在培养基中的生长状况：表面生长、均匀浑浊生长、沉淀生长2. 革兰氏染色：革兰阳性细菌细胞壁的肽聚糖peptidoglycan层较厚,经乙醇处理后使之发生脱水作用而使孔径缩小,通道弯曲,结晶紫与碘的复合物保留在细胞内而不被脱色；而革兰阴性细菌的肽聚糖层很薄,脂肪含量高,经乙醇处理后孔径仍可使结晶紫与碘的复合物通过,因而将染料洗去而被脱色;三、实验材料咽拭子、羊血培养皿：1套/人；大号普通培养皿：1块/2人；载玻片：1片/人；A、B菌：6套/桌；NS：1份/人；滤纸：1张/人；消毒液：4套/桌；三角瓶、电天平、营养琼脂、称药纸、称药勺、量筒：1套/桌四、实验内容1. 培养基制备1按产品要求称取营养琼脂2每实验桌制备200ml3高压蒸汽灭菌后,在洁净工作台内倒平皿4所制备的普通平皿用于空气培养2. 机体不同部位的细菌采样、培养1咽部正常菌群的采样、培养咽拭子擦拭咽部,平行划线法接种于羊血平皿;2手指消毒前后细菌的采样培养未消毒手指平行划线法接种于普通平皿；同一手指碘酒、酒精消毒后平行划线法接种于普通平皿;3. 环境中细菌采样培养1空气培养将培养皿打开暴露于空气中,20分钟后盖好平皿盖儿2流通纸币或硬币的细菌采样培养将硬币正反面分别在培养基上充分接触3采样结束后,将培养皿底部朝上放入铁丝筐,统一置培养箱：37℃18-24小时4. A、B、C菌鉴定革兰氏染色法1. 细菌涂片制备程序：1取一干净玻片,火焰上方缓缓通过三次去油2蜡笔画线将玻片分割为A、B、C三区域3接种环取生理盐水分别滴入A、B两区域各一滴4分别取少许A、B 、C菌,与生理盐水充分混匀成菌液,风干后形成菌膜5固定火焰上方缓缓通过三次6革兰氏染色7滤纸吸干水分,油镜观察2. 革兰氏染色：1细菌涂片、火焰固定2结晶紫初染1min3卢戈氏碘液媒染1min495%乙醇脱色30-40s5沙黄复染1min五、实验结果A：G+,球菌,推测为金黄色葡萄球菌；B：G-,短杆菌,推测为大肠杆菌；六、思考与讨论1．影响革兰氏染色的因素：1细菌本身因素：菌龄：如果菌龄太大,可能出现假阴性2操作因素涂片：取菌应适量,涂片要均匀,如果某个部分菌层太厚,可能在脱色时达不到,会导致局部假阳性固定：固定温度太高或时间太长都会导致细菌结构破坏而出现假阴性；但是固定不够,细菌会在水洗时被冲掉初染：初染时间虽然说是1分钟,但是可以适当延长,时间太短会出现假阴性；染色滴加不均匀可能出现半阴半阳媒染：和初染一样脱色：脱色时间不能过长,基本上用酒精滴过之后马上水冲就可以了,否则容易出现假阴性复染：复染时间需足够长,否则可能会染不上消毒灭菌一、实验目的1. 了解实验室常用消毒灭菌方法及其原理2. 掌握实验中所用仪器的使用方法3. 掌握机体常见部位及环境中的细菌培养物的初步鉴定4. 强化革兰氏染色技能二、实验原理1．口咽部及皮肤正常菌群鼻咽部及扁桃体：葡萄球菌、类白喉杆菌、肺链、溶血及非溶血性链球菌、奈瑟菌等口腔：链球菌多见、放线菌、螺旋体、G-杆菌等皮肤：表皮葡萄球菌、丙酸杆菌、类白喉杆菌、铜绿假单胞菌2．溶血类型α溶血：现象：草绿色溶血环常见菌种：机会致病菌甲链、肺链原理：细菌产生过氧化氢将血红蛋白氧化成深绿色的高铁血红蛋白β溶血：现象：透明溶血环常见菌种：致病菌乙链原理：细菌释放溶血素使红细胞破裂,血红蛋白释放三、实验材料咽拭子培养物：1套/人；空气、纸币、手指消毒前后培养物：1套/2；载玻片：1片/人；NS：1支/人；滤纸：1张/人四、实验内容1. 常用消毒灭菌方法：示教讲解1．热力灭菌：1干热灭菌法：焚化、烧灼、干烤160 ℃ ,2小时2湿热灭菌法：煮沸2%Na2CO3,105 ℃；高压蒸汽灭菌,20分钟,121℃,临床运用最广的灭菌方法2. 紫外线Ultraviolet radiation：波长265nm-266nmDNA吸收光谱杀菌能力最强;紫外光穿透力差,一般只用于不耐热物品表面的消毒;3. 过滤filtration用物理阻流的方法除去液体或空气中的细菌,用于不耐热物质的灭菌血清、毒素、抗生素等滤菌器：薄膜滤菌器、玻璃滤菌器、石棉滤菌器、素陶瓷滤菌器4. 低温保存菌种冷冻真空干燥法6．实验室常用化学消毒剂：70-75%乙醇洁净台消毒：来苏水擦拭防腐剂：三氯甲烷、硫柳汞、叠氮钠2．细菌分布结果鉴定1观察菌落2取部分菌落的细菌进行革兰氏染色并观察五、实验结果1. 咽部正常菌群的采样、培养结果：在羊血培养皿上出现四种菌落：（1）数目多,划线沿线都有；针尖大小；无色、光滑、湿润、透明、圆形;周围出现草绿色溶血环,发生了不完全溶血即α溶血;（2）数目较多,划线沿线都有；较小；乳白色、光滑、湿润、半透明、圆形;（3）少,只出现在四个点；中型；乳黄色、光滑、半湿润、不透明、形状不规则;在此种菌落下方的培养基出现了透明溶血环,发生了完全溶血即β溶血;（4）1个菌落；较大；乳白色、光滑、湿润、半透明、圆形;粘稠;取1、2、3进行革兰氏染色,结果如下;（1）G+,链球菌,根据不完全溶血推断,为甲型链球菌;（2）G-,球菌,细胞个体小,形状像金黄色葡萄球菌,但是染色为阴性;（3）G-,球菌;2. 手指消毒前后细菌的采样培养结果：1消毒前：仅出现2个菌落,较小；乳白色、光滑、湿润、有光泽、圆形;革兰氏染色结果：G-,杆菌2消毒后：无菌落出现;3. 硬币正反面的细菌采样培养结果：1正面三种菌落：113个菌落；较小；乳白色、光滑、湿润、有光泽、圆形;和手指消毒前的菌落一样;21个菌落；较大；白色、光滑、湿润、近似圆形;35个菌落；较大；中央乳黄色边缘颜色变浅、光滑、湿润、中间凸、不规则、边缘光滑取其中2、3进行革兰氏染色,结果如下：2G-,杆菌;和手指消毒前的细菌一样3G-,链杆菌;形态较大,形状像炭疽芽胞杆菌,但是没有芽孢且染色为阴性;2反面两种菌落：12个；较大,乳白色、光滑、湿润、有光泽、圆形;2多个,沿硬币边缘线连成一片；针尖大小、无色、光滑、湿润、透明;4. 空气培养结果平皿敞开在实验室的窗台上放置了约20分钟,当时阳光照在上面：平皿出现了五种菌落：111个；中等大小；白色、光滑、湿润、半透明、圆形22个；较大；周围白色,中间有一个透明圈,光滑、湿润、中间凹的圆饼状31个；较大；周围黄色,中间有一个透明的圆形区域,半湿润、没有光泽41个；较大；边缘橘黄色,中央偏白、明显凸起、干燥、形状不规则51个；较大；边缘透明,中央乳黄色,光滑、湿润、半透明、圆形取其中3、4进行革兰氏染色,结果如下：3G-,杆菌;和手指消毒前、硬币正面菌落2的细菌一样4出现三种细菌：G-,双球菌G+,双球菌G-,梭菌六、思考与讨论1．巴氏消毒法的利用巴氏消毒法是一种低温消毒法,包括：低温维持法：摄氏度维持30分钟；高温瞬时法：摄氏度作用15-30秒;该法适用于食品的消毒;现主要应用于乳制品;2．为什么湿热消毒法的温度比干热消毒法低课堂上讲到的干热消毒法温度都比湿热消毒法要高,说明湿热灭菌法可在较低的温度下达到的灭菌效果可以与干热法相同,分析原因如下：（1）湿热中蛋白吸收水份,更易凝固变性；（2）水分子的穿透力比空气大,更易均匀传递热能,在干热状态下,由于热穿透力较差,微生物的耐热性较强,必须长时间受高温的作用才能达到灭菌的目的（3）蒸汽潜热大,每1克水由气态变成液态可释放出529卡热能,可迅速提高物体的温度; 3．细菌分布试验结果讨论咽部正常菌群主要为：溶血和非溶血性链球菌、球菌等,不同人由于个体差异和取样部位差异,所得菌种也有所不同手的消毒是有效的,消毒后细菌明显减少了;同时手上的菌是很多的,所以需要常洗手;手上较常见的是四联球菌;硬币上的菌也相对较多,因为它经历的环境很多;在咽部、硬币和未消毒的手上,都得到了一种很像大肠杆菌的革兰氏阴性杆菌,说明这种菌分布非常广泛;4．空气培养取样染色时,为什么得到三种菌图1 空气培养取样革兰氏染色10100一般认为,菌落形成是一个菌落到培养基上并增殖而来,但是在空气培养得到的菌落取样染色时,发现了三种形态完全不同的菌如图1,较大的双球菌和梭菌为革兰氏阴性,较小的双球菌为革兰氏阳性;可能的原因有：（1）取样的污染,该菌落被两次取用,可能遭到污染（2）在非常小的概率下,三个不同的菌掉到了同一处,同时这三种菌的生长互不影响甚至互利,于是形成了混合菌群;（3）三个菌落在生长过程中由于靠得很近而融合了;。