不规则抗体筛查试验
不规则抗体筛查流程步骤
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不规则抗体筛查标准操作规程
不规则抗体筛查标准操作规程(一)检验目的检测受血者、孕妇等血清中是否存在抗A、抗B以外的不规则抗体，为交叉配血、ABO血型正确定型(不规则抗体干扰反定型)以及新生儿溶血病产前、产后诊断提供参考依据。
(二)检验原理1.盐水介质法IgM类不规则抗体可以在室温盐水介质中发生凝集反应，使用手工试管法就可以判断受检者血液中是否存在IgM类不规则抗体。
2.凝聚胺法利用多聚季胺盐类——凝聚胺携带很多正电荷，可以中和红细胞表面的负电荷，使红细胞之间距离减少，引起正常红细胞可逆性凝集。
无抗体致敏的红细胞被凝聚胺凝集，当加入中和液后，则凝集消散，而被不规则抗体致敏的红细胞被凝聚胺凝集，则不能消散，以此来判断受检者血液中是否存在不规则抗体。
3.微柱凝胶法微柱凝胶卡的微管中装填有葡聚糖凝胶颗粒和抗人球蛋白试剂，红细胞表面抗原与其对应的IgG抗体结合以后，在离心力的作用下不断向管底沉降，并与抗人球蛋白结合形成红细胞凝集，凝胶颗粒具有分子筛的作用，可以阻滞凝集的红细胞在离心力的作用下通过凝胶颗粒，使其悬浮在凝胶上端，未凝集的红细胞则可以通过凝胶颗粒到达微管底部。
4.玻璃珠微柱法微柱卡的每一个微管中装填有直径均一的玻璃微珠和抗人球蛋白试剂(抗-IgG和抗补体C3)，红细胞表面抗原与其对应的IgG抗体结合以后，在离心力的作用下不断向管底沉降，并与抗人球蛋白结合形成红细胞凝集，玻璃微珠具有分子筛的作用，可以阻滞凝集的红细胞在离心力的作用下通过玻璃微珠，使其悬浮在玻璃微珠层的上端，而未凝集的红细胞则可以通过玻璃微珠之间的微小空隙到达微管底部。
(三)适用范围适用于手工凝聚胺法、手工微柱凝胶法、手工玻璃珠微柱法、全自动微柱凝胶法、全自动玻璃珠微柱法不规则抗体筛查及鉴定试验。
(四)设备性能参数各种用于不规则抗体筛查试验的检测系统性能指标参见相应说明书。
(五)器材与试剂1.器材KA-2200血清学专用离心机、B600-A型低速离心机、WADiana全自动血型配血系统、SWING-SAXO血型配血系统、Techno全自动血型配血系统、Othro Au-toVuelnnova全自动血型配血系统、阅片灯箱、卡式专用离心机、孵育器、塑料软试管、塑料硬质试管(75m m×l2mm)、试管架、一次性塑料滴管、记号笔、移液器、一次性移液枪头。
不规则抗体筛选
取4支小试管，按表标记及加入相应试剂。
1#
2# 3# 自 身
受检者血清
2滴 2滴 2滴 2滴
筛选用红细胞悬液1# 1滴
筛选用红细胞悬液2#
1滴
筛选用红细胞悬液3#
1滴
受检者5%红细胞悬液
1滴
混匀后3400rpm离心15秒，立即观察结果 同前
注意事项
标本编号清楚！！ 试剂红细胞是保存在保存液中，一旦用生理盐
低离子聚凝胺法（LIP-IAT）：所需试验时间 少（3～5分钟）、方法灵敏度高，准确性高， 但无法排除无临床意义抗体的干扰。
间接抗人球方法：是很灵敏且有效的检测抗 体的方法，同时此方法可以有效的避免无临 床意义抗体的干扰。缺点：耗时间长，步骤多。
试剂
抗体筛选用红细胞悬液（1#、2#、3#） 试剂红细胞必须含有下列抗原：
3、有利于早期发现和确认具有临床意义的抗体，获得充足的时间来 选择相配合的血，避免由于寻找不到相合的血液而造成患者病情 的延误。
抗体筛选检查
一、什么叫“抗体筛选”检查 1、不规则抗体的含义：通常把抗A、抗B以
外的所有红细胞血型抗体称为不规则抗体。如 抗D、抗N、抗M、jk-抗体。
2、“抗体筛选”的含义：用具备有临床意 义的血型抗原的O型红细胞，检测病人血清 （含多种抗体）；如果出现聚集现象，则提示 病人有不规则抗体存在，可判为“抗体筛选” 阳性。
水或Liss液洗涤后则应该在24小时内使用，否 则会因污染、抗原丢失导致试验错误。 加血清和红细胞悬液的量必须准确不能多加， 少加,以免引起前带和后带效应 转速不能太快或太慢、时间不能过长或过短， 以免引起假阳性或假阴性。
Polybrene法
不规则抗体筛查方法
不规则抗体筛查方法
嘿，朋友们！今天咱就来讲讲不规则抗体筛查方法。
你说这不规则抗体筛查啊，就好比是我们身体里的一个小侦探，专门去寻找那些可能捣乱的“坏家伙”。
咱先来说说盐水法。
这就像是个直接干脆的小卫士，能快速地初步判断有没有问题。
就好像你去一个地方找东西，先大致看一眼有没有明显的目标。
虽然简单，但有时候也能发现一些大问题呢！
还有凝聚胺法，这可是个厉害的角色！它就像是个敏锐的神探，能把那些隐藏得比较深的不规则抗体给揪出来。
你想想看，就像是在一堆杂物里找出那个特别的小物件，需要更仔细、更用心地去分辨。
酶法呢，就有点特别啦！它就像一个有特殊技能的高手，对于一些特定情况特别在行。
好比你有个专门对付某种难题的法宝，一用就能解决。
抗球蛋白法更是不能小瞧。
它就如同一个超级严谨的检查员，不放过任何一个蛛丝马迹。
可以说，它是给不规则抗体筛查上了一道保险，确保万无一失。
咱为啥要这么重视不规则抗体筛查呢？你想想啊，如果不把这些可能捣乱的家伙找出来，那万一在关键时刻给咱来个“突然袭击”，那不就麻烦啦！这就好像家里有个小隐患，你不及时发现处理，哪天说不定就酿成大祸了呢！
所以啊，大家可别小看了这不规则抗体筛查。
它就像是我们健康的守护者，默默地为我们保驾护航呢！我们要积极配合医生，该做检查就做检查，这样才能让自己心里踏实呀！这难道不是很重要的事情吗？难道你不想给自己的身体多一份保障吗？别等到出了问题才后悔莫及呀！总之，不规则抗体筛查真的很关键，大家一定要重视起来哟！。
不规则抗体筛查卡式法
不规则抗体筛查卡式法不规则抗体筛查卡式法，听起来有点复杂对吧？别担心，我们今天就来聊聊这个话题，让它变得简单又有趣！大家都知道抗体是什么。
就像是身体里的小卫士，保护我们免受各种病菌的侵害。
不过，有些人呢，身体里会出现一些“不听话”的抗体，或者说是不规则抗体。
这些家伙就像是那种在球场上不守规矩的球员，时不时给你带来点麻烦。
没错，这就是我们要筛查的对象了。
什么是筛查卡式法呢？嘿，这个听起来可就像个科学实验室的高科技产品了。
其实吧，它就是一种简便、快速的检测方法。
想象一下，你在家里做实验，不需要太多的仪器，也不需要太复杂的步骤，简单易懂。
你只需要一张小卡片，加上一点样本，等待一段时间，就可以看到结果，轻轻松松。
就像在煮泡面，等个几分钟就可以吃上一碗热腾腾的美食，谁不爱呢？再说到这些不规则抗体，为什么要筛查它们呢？想想，身体里有个“小坏蛋”在作乱，肯定得赶紧找出来啊。
那些不规则抗体可能会导致各种疾病，像过敏反应、免疫系统紊乱，甚至更严重的病情。
筛查就像是医生的“侦探工作”，帮助找到潜在的健康隐患。
相信我，早发现早治疗，才是王道！这就好比在海里钓鱼，提前知道哪儿有鱼，绝对能大获全胜。
说到检测的过程，其实也没那么复杂。
你只需要用小针扎一下，取一点血液，像是在做一个小实验。
然后，把这点血液放到那张神奇的卡片上，等待个十几分钟，期间你可以喝杯茶，看看电视，完全不影响你的生活。
等到时间到了，看看卡片上的结果。
如果出现了一条线，那恭喜你，没问题！如果有两条线，哎呀，可能就得去医院进一步检查了。
这卡式法还有个大优点，操作方便，结果直观。
就像是考试成绩一样，分数高低一目了然，谁也不用再去揣测。
很多人都害怕去医院抽血，想象中都是一阵紧张，结果搞得自己心慌慌的。
可这卡式法，简直就是解放双手，既省时又省力，真是给人一种“轻松搞定”的感觉。
这个方法也不是万能的。
有些复杂的情况，可能还得通过其他的检测手段来进一步确认。
不过，作为初步筛查，卡式法无疑是个好选择。
不规则抗体筛查试验操作规程
XXX医院不规则抗体筛查试验操作规程1.目的为规范红细胞不规则抗体筛选、鉴定的技术操作，保证检查结果准确和临床输血安全、有效，依据《输血实验室管理程序》有关条款的要求制定本规程。
2.适用范围本规程适用于本院红细胞不规则抗体的筛查。
3.职责输血科具有专业技术资格的人员负责红细胞不规则抗体的筛选和鉴定，但只对所筛选或鉴定的标本负责。
4.相关文件试剂采购、保存和使用管理程序设备采购、使用管理程序消毒与清洁管理程序标本采集、运输、保存和报废管理程序5.相关记录仪器设备的采购、使用和维护记录仪器的温度记录恒温水温箱的换水和消毒记录消毒液的配置记录清洁消毒记录试剂采购、使用记录标本交接和报废记录6.实验原理采用盐水介质法、凝聚胺法或抗球蛋白法等试验使受检者血清（血浆）与筛选红细胞反应，检测受检者血清（血浆）中是否存在红细胞不规则抗体，红细胞不规则抗体阳性者进一步与谱红细胞反应，根据反应格局鉴定抗体特异性。
7.仪器设备和检测环境7.1.仪器设备等：玻璃试管(75X12mm)、玻片、记号笔、一次性塑料滴管、显微镜、交叉配血专用离心机、试管架、恒温水温箱、试剂保存冰箱、标本保存冰箱。
7.2. 检测环境：室温应控制在18~27℃，湿度应保持在30~70%。
8.试剂①生理盐水、凝聚胺试剂、直接抗人球蛋白试剂（抗IgG,C3d），均为有合格证件的正品。
②市售O型筛选红细胞：为三支以上不同人份的3%筛选红细胞，均为有合格证件的正品。
或自制O型筛选红细胞：选择已确认ABO血型为O型的健康者，采集EDTAK抗凝血2标本离心，取少许红细胞置于试管中，用生理盐水离心洗涤3次得压积红细胞[3400转/分钟（1000g），每次离心1分钟，离心后将上清液全部倒出]，再取30µl游离红细胞加入到标记为Ⅰ号的试管中，然后加入1ml生理盐水混匀，即得Ⅰ号O型3%的筛选红细胞；依同样方法分别制备不同人份的Ⅱ号和Ⅲ号O型3%的筛选红细胞。
不规则抗体筛选和鉴定标准操作规程
不规则抗体筛选和鉴定标准操作规程1.检验目的不规则抗体筛选和鉴定可在交叉配合之前进行或一起进行，这样有利于患者抗体的早期确认及鉴定，发现临床上有意义的抗体，避免一些可能的情况而造成病情的延误。
2.检验方法分盐水介质法、抗球蛋白法和微柱凝胶法。
3.检验原理让待检者的血清与已知血型的试剂红细胞即筛选红细胞（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ套）起反应，以发现在37℃中有反应活性的抗体。
这种抗体可引起新生儿溶血病、溶血性输血反应、或使输入的红细胞存活期缩短等。
当不规则抗体筛选试验阳性后，再进行不规则抗体鉴定，即利用谱红细胞（11套鉴定细胞）与待检者的血清反应，根据反应结果判断机体所产生的同种抗体类别。
4.标本要求受检者不抗凝静脉血4.0ml，分离血清，48小时内使用5.试剂5.1.筛选红细胞：由2或3人份的O型红细胞组成为一套试剂，每套试剂筛选红细胞中至少有以下常见的抗原：D、C、E、c、e、M、N、S、s、P、Le a、Le b、K、k、Fy a、Fy b、Jk a、Jk b等。
每次用3套试剂（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ）进行抗体筛选，见表1005-1。
5.2.鉴定谱细胞：除包括常见的抗原以外还有：C w、Kp a、Kp b、Js a、Js b、Lu a、Lu b、Xr/min a等。
每次用11套试剂进行抗体鉴定，见表1005-2。
5.3.抗球蛋白试剂：多特异性抗球蛋白血清（IgG、C3d）。
5.4.致敏红细胞（质控细胞）。
5.5.0.9%生理盐水。
5.6.Coombs微柱凝胶卡。
6.器材试管、吸管、37℃水浴箱、台式离心机、滤纸、微量加样器等。
7.操作程序7.1.盐水介质法7.1.1．取受检者血清2滴于标记有Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ的3支小试管中。
7.1.2．对应加入Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ套2%～5%筛选红细胞生理盐水悬液1滴，37℃孵育30分钟。
7.1.3.以3000r/min离心10秒，观察凝集和溶血情况，并记录反应情况于表1005-1中。
如果抗体筛选试验阳性，继续做以下试验。
不规则抗体筛查
不规则抗体检查不规则抗体检查也称红细胞抗体检查。
不规则抗体是指抗Ａ、抗Ｂ以外的血型抗体。
ＡＢＯ系中的亚型,变异型抗Ａ1或某种抗Ｂ等抗体,也称为不规则抗体。
其多为ＩｇＧ抗体。
主要是经输血或妊娠等免疫刺激产生,在盐水介质中不能凝集而只能致敏相应抗原的红细胞,必须通过特殊介质才能使致敏红细胞出现凝集反应。
临床上通常所称的“同型血”实际上是指ＡＢＯ血型系统和Ｒｈ血型系统相同,其它红细胞血型系统未必相同。
如果交叉配血不仔细,或者只用盐水介质配血,则有可能检查不出ＡＢＯ血型系统之外的不规则抗体,而此抗体与相应抗原发生免疫反应,可导致溶血性输血反应的发生。
红细胞血型抗体检查适用于下列情况：1、ABO血型鉴定发现受检者血清中有意外抗体时；2、供血者血清抗体筛检；3、输血前受者血清抗体检查；4、输血后溶血反应疑为由同种抗体引起时；5、孕妇血清的抗体检查；6、新生儿溶液血病婴儿血液中抗体检查；7、直接抗球蛋白试验阳性红细胞上抗体的检查。
1. 原理利用筛选细胞（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ）上存在的多种红细胞抗原与被检血清在凝聚胺介质中反应，如果出现凝集表示血清中存在不规则抗体。
2. 试剂2.1 5%筛选细胞（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ）2.2 凝聚胺试剂2.3 直接抗人球试剂外周血或静脉血3. 操作步骤3.1 取试管三支，标明Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ并往各管加病人血清（血浆）2滴，加5%筛选细胞（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ）各1滴。
3.2 各加LIM0.7ml，混合均匀后，再各加Polybrene 溶液2滴，并混合均匀。
3.3 用BASO专用离心机1000G离心力，离心10秒，然后把上清液倒掉，不要沥干，让管底残留约0.1ml液体。
3.4 轻轻摇动试管，目测红细胞有无凝集，如无凝集，则必须重作。
3.5 最后加入Resuspending 2滴，轻轻转动试管混合并同时观察结果。
如果凝集散开，表示是由Polybrene引起的非特异性聚集，抗体筛检结果为阴性；如凝集不散开，则为红细胞抗原抗体结合的特异性反应，抗体筛检结果为阳性，应进一步作抗体鉴定。
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不规则抗体筛查试验（SOP）
【产品名称】
通用名称：不规则抗体检测试剂（人血红细胞）
英文名称：Red Blood Cells Reagent for Irregular Antibody Test
【包装规格】每盒有O
Ⅰ、O
Ⅱ
、O
Ⅲ
红细胞各1瓶，5ml/瓶，浓度4%。
【生产企业】
企业名称：长春博迅生物技术有限责任公司
【预期用途】
有临床意义的不规则抗体会导致溶血性输血反应，破坏输入的红细胞或缩短其寿命，轻则影响治疗效果，重则危及病人生命；对于孕妇而言，不规则抗体会引起新生儿溶血病，影响新生儿脏器及智力发育，严重者则会危及新生儿的生命。
对受血者和献血者进行不规则抗体检测，能够发现有临床意义的抗体，从而减少溶血性输血反应。
本品采用凝聚胺方法检测待检血浆（血清）是否存在不规则抗体，只用于临床检测，不用于血源筛查。
【检验原理】
本实验原理为血凝试验。
红细胞上含有D、C、E、c、e、Jk a、Jk b、M、N、s、Fy a、Fy b、k、Le a、Le b、P
1
，该实验用已知抗原的红细胞与待检血浆（血清）孵育，以发现待检血浆（血清）中是否存在不规则抗体。
【主要组成成份】
本品由3人份（单人份/瓶）直接抗人球蛋白试验阴性的O型健康成人红细胞组成，红细胞上含有能引起溶血性输血反应的抗原，抗原谱至少包括Rh系统的D、C、E、c、e抗原，Kidd系统的Jk a、Jk b抗原，MNS系统的M、N、s抗原，Kell系统的k抗原，Duffy系统的Fy a、
Fy b抗原，Lewis系统的Le a、Le b抗原，P系统的P
1
抗原。
每套试剂红细胞中至少有2人份红细胞含有D、C、c、e、s、Fy a、k抗原，至少1人份红细胞含有E、Jk a、Jk b、M、N、Fy b、Le a、
Le b、P
1
抗原。
O
Ⅰ
红细胞5ml×1
O
Ⅱ
红细胞5ml×1
O
Ⅲ
红细胞5ml×1
不同批号的红细胞试剂不可以互换。
【储存条件及有效期】
2~8℃保存。
有效期自检定合格之日起90天，试剂开瓶后在2~8℃下可保存60天。
【样本要求】
EDTA抗凝的血浆标本或血清。
溶血、严重脂血或污染的样本不得用于本实验。
【参与试剂】
试剂名称：凝聚胺介质试剂
试剂生产公司：珠海贝索生物技术有限公司
【检验方法】
1、取试管4支，标明Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、自身对照，并往各管加病人血清（血浆）2滴，
2、再分别向Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ管对应加入4%筛选细胞（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ）各1滴；自身对照管加入病
人3%-5%红细胞悬液1滴。
3、各管加BaSO试剂LIM0.65ml，混合均匀，室温放置1分钟。
4、再向各管加BaSO试剂Polybrene溶液2滴，混合均匀，放置15秒。
5、离心机1000g离心力，离心10秒，然后把上清液倒掉，不要沥干，让管底残留约0.1ml 液体。
6、轻轻摇动试管，目测红细胞有无凝集，如无凝集，则必须重作。
7、最后加入BaSO试剂Resuspending 2滴，轻轻转动试管混合并同时观察结果。
如果在1分钟内凝集散开，表示是由Polybrene引起的非特异性聚集，抗体筛检结果为阴性；如凝集不散开，则为红细胞抗原抗体结合的特异性反应，抗体筛检结果为阳性，应进一步作抗体鉴定。
【检验结果的解释】
1、红细胞与相应抗体发生凝集为阳性反应，红细胞不发生凝集为阴性反应。
2、实验结果为阳性反应，表明含有不规则抗体，可对照试剂红细胞抗原谱推测抗体种类或用谱细胞进行鉴定。
【检验方法的局限性】
1、本产品只作为不规则抗体检测使用，如果血浆（血清）中的不规则抗体需进一步鉴定，请使用谱细胞试剂。
2、不规则抗体检测试验不一定能检出所有有意义的抗体，一些低频率抗原的抗体可能被漏检。
3、凝聚胺法可漏检抗-K抗体。
【产品性能指标】
红细胞表达的抗原与随试剂所提供的红细胞抗原谱一致。
【注意事项】
1、细胞严禁在室温长期存放。
建议每日取出所用量，然后将剩余试剂放在2~8℃，效期内使用。
如细胞开启后在室温长期放置，建议用该细胞做阴性对照试验，以确定该细胞是否可以做本实验。
2、如红细胞试剂发生凝集，出现菌落或严重溶血，请不要使用。
3、严重溶血现象，强烈提示为红细胞抗原抗体阳性反应，也不排除其他原因所致溶血，故对此标本一定认真分析，并向上级主管技术人员报告并讨论。
4、所用红细胞来源于人血，试剂所接触的容器具按医疗垃圾进行处理。
【参考文献】
1.李勇,杨贵贞.人类红细胞血型学实用理论与实验技术[M].北京:中国科学技术出版
社,1999.
2.李勇,马学严.实用血液免疫学—血液理论和实验技术[M].北京:科学出版社,2006.
3.叶应妩,王毓三,申子瑜.全国临床检验操作规程第3版[M].南京:东南大学出版社,2006.。