全自动DNA测序仪和蛋白质自动测序仪
西南科技大学分析测试中心公共实验平台仪器设备介绍
①检测无机原子团的结构及络合物的结构；②无机化合物组成成分分析；③可进行无机离子、分子及其络合物分析；④有机化合物结构分析；⑤有机化合物定量分析；⑥石油烃分析；⑦高聚物单体结构分析
液相色谱-质谱仪
Varian 1200LC/MS
美国Varian公司
质量范围：10～1500u
扫描速率：500～6000u/s
灵敏度：ESI SIM：10pg利血平S/N＞50：1
可进行有机化合物的定性定量分析，尤其是沸点较高和热稳定性较差的化合物，如染料、农药、药物、生物碱、核酸、石油产品，高分子化合物及其中间体等。
扫描探针显微镜
SPI3800N
日本精工
扫描范围：XY：20μm，Z：2μm
分辨能力XY：0.2nm, Z：0.01nm；
XY扫描电压/分辨率：±200V/18 bit，
Z轴扫描电压/分辨率：±200V/21 bit；
样品最大尺寸为：φ25mm×10mm (H)
配置真空Chamber
Contact AFM（接触式原子力模式）；DFM (动态力模式，包括非接触式和间歇接触式原子力模式)；Phase Mode（相位模式）；
③农业：植物、土壤、肥料的成分分析。
食品工业：营养卫生监督。④生物医药：人体血、尿等体液及毛发中微量元素的分析、药物成分分析。⑤化学工业：水泥、化学试剂及工业污染的成分分析。⑥材料化学：做晶体、宝石、半导体膜及其它各种镀层材料的吸收、透射、反射谱图。
全自动DNA测序仪
ABI310型
美国应用生物公司
临床医学检验：临床检验仪器预测题
临床医学检验：临床检验仪器预测题1、名词解释干化学技术正确答案：干化学技术是指将液体样品直接加到固定在特定载体的干试剂上，并以样品中的水作为溶剂，使样品中的待测成分与试剂进行化学反应，从而进行分析测定的方法。
2、（江南博哥）多选荧光定量PCR仪的荧光强度减弱或不稳定，可能的原因有（）。
A.滤光片发霉B.光源损耗C.半导体模块故障D.荧光染料污染E.光电倍增管灵敏度下降正确答案：A, B, E3、多选毛细管电泳仪的主要结构有（）。
A.高压源B.毛细管柱C.检测器D.缓冲液槽E.记录装置正确答案：A, B, C, D, E4、多选Sanger双脱氧链末端终止法和Maxam-Gilbert化学降解法的共同点包括（）。
A.反应体系中均有ddNTPB.都是根据在某一固定的点开始核苷酸链的延伸，随机在某一个特定的碱基处终止C.均产生A、T、C、G四组不同长度的一系列核苷酸链D.均在变性聚丙烯酰胺凝胶上电泳进行片段的分离和检测E.均可检测DNA的一级结构正确答案：B, C, D, E5、单选不属于全自动血凝仪的主要优点的是（）。
A.智能化程度高、功能多B.自动化程度高、检测方法多C.通道多，速度快D.测量精度好、易于质控和标准化E.价格便宜正确答案：E6、单选进行尿液电泳分析时，对尿标本进行浓缩处理所要求的尿液中蛋白质的浓度是（）。
A.3g/L～5g/LB.5g/L～10g/LC.10g/L～15g/LD.15g/L～20g/LE.20g/L～30g/L正确答案：D7、单选微量快速血糖仪的质量控制措施不包括下述哪一项（）。
A.质控物的测定B.密码牌校准C.及时清洁终点法白参考片D.室间质量控制E.血糖仪与大生化仪结果的比对正确答案：C8、问答题连续流动式和分立式自动生化分析仪在结结构上有哪些区别？正确答案：分立式与连续流动式自动生化分析仪在结构上的主要区别为前者各个样品和试剂在各自的试管中起反应，而后者是在统一管道中起反应；前者采用由加样器和加液器组成的稀释器来加样和加试剂，而不用比例泵；前者一般没有透析器，如要除蛋白质等干扰，需另行处理。
临床检验仪器第十四章全自动DNA测序仪和蛋白质自动测序仪习题
第十三章全自动DNA测序仪和蛋白质自动测序仪一、名词解释1.荧光标记引物法：将荧光染料预先标记在测序反应所用引物的5′端，称为荧光标记引物法。
2.荧光标记终止底物法：将荧光染料标记在作为终止底物的双脱氧单核苷酸上，称为荧光标记终止底物法。
3.多色荧光标记引物法：是DNA测序反应常用的一种荧光标记方法。
将荧光染料预先标记在测序反应所用引物的5′端，当相同碱基排列的寡核苷酸链作为骨架分别被4种荧光染料标记后，便形成了一组（4 种）标记引物。
特定颜色荧光标记的引物则与特定的双脱氧核苷酸底物保持对应关系。
4.多色荧光标记终止底物法：是D NA 测序反应常用的一种荧光标记方法。
将荧光染料标记在作为终止底物的双脱氧单核苷酸上。
反应中将4种d dNTP 分别用4种不同的荧光染料标记，带有荧光基团的ddNTP 在掺入DNA 片段导致链延伸终止的同时，也使该片段3′端标上了一种特定的荧光染料。
根据荧光颜色的不同来判断所代表的不同碱基信息。
5.Edman降解法：是检测蛋白质一级结构的方法。
在弱碱条件下，多肽链N末端N H2与P ITC 反应，生成PTC－多肽。
在无水强酸如三氟醋酸的作用下，可使PTC－多肽形成ATZ 衍生物和一个失去末端氨基酸的剩余多肽。
剩余多肽链可以进行下一次以及后续的降解循环。
如此不断循环，可依次使多肽链的氨基酸逐一降解，形成A TZ 衍生物。
ATZ 衍生物经水溶酸处理转化为稳定的P TH 氨基酸。
6.Sanger 双脱氧链末端终止法：是检测D NA 序列的一种方法。
其原理是利用P CR，但反应体系中除了dNTP 外，还有ddNTP。
ddNTP 可掺入到正在延伸的DNA 链中，但不能同后续的dNTP 形成磷酸二酯键，从而使正在延伸的DNA 链在此终止。
由于存在ddNTP 与dNTP 的竞争，生成的反应产物是一系列长度不同的多核苷酸片段。
7.平板电泳型DNA测序仪：为D NA 测序仪的一种类型。
平板型电泳的凝胶灌制在两块玻璃板中间，聚合后厚度一般小于 0.4mm 或更少，因此又称为超薄片层凝胶电泳。
全自动dna测序仪的原理和应用
全自动DNA测序仪的原理和应用1. 前言DNA测序技术是现代生物学、医学研究中的重要工具之一。
随着技术的不断进步，全自动DNA测序仪在DNA测序领域占据重要地位。
本文将介绍全自动DNA测序仪的原理和应用。
2. 原理全自动DNA测序仪基于Sanger测序技术，通过离心分离、扩增和合成等步骤来获取DNA序列信息。
其原理主要包括以下几个步骤：2.1 模板制备全自动DNA测序仪需要将待测的DNA样品进行模板制备。
一般采用PCR（聚合酶链式反应）技术来扩增目标DNA片段，以增加其浓度和复制数目。
2.2 扩增产物净化PCR扩增产生的扩增产物中会包含引物和杂质，需要进行净化处理。
常用的方法是利用凝胶电泳分离扩增产物，并使用各类商业化学试剂盒进行提取和净化操作。
2.3 DNA片段测序将净化后的DNA片段进行测序。
全自动DNA测序仪采用Dye-termination测序方法，使用一系列特殊的引物，通过DNA链延伸过程中的不同颜色发光来标记每个碱基。
之后，仪器会通过激光扫描读取每个碱基的发光信号。
2.4 数据分析与测序结果全自动DNA测序仪会生成一系列的发光数据，这些数据需要进行分析和处理。
通常会使用相关软件进行碱基识别、序列拼接和测序结果的校正等步骤，从而获得准确的DNA序列信息。
3. 应用全自动DNA测序仪广泛应用于各个领域，例如：3.1 生物学研究在生物学研究中，全自动DNA测序仪可以用于基因组测序、转录组测序、蛋白质相互作用的研究等。
通过测序获得的DNA序列信息可以帮助研究者了解生物体的遗传信息、功能和相互关系。
3.2 医学领域在医学领域，全自动DNA测序仪可以用于诊断遗传性疾病、癌症等疾病的基因突变。
通过测序可以快速准确地分析患者的基因组信息，从而为临床医生提供准确的诊断和治疗方案。
3.3 农业和食品安全全自动DNA测序仪在农业和食品安全领域也有广泛的应用。
它可以用于鉴定转基因作物、检测食品中的基因改造成分、追溯食品来源，保证食品安全和品质。
微生物发展历史
设为首页收藏本站各章知识扩充gezhangzhishikuochong第一章概论第二章显微镜技术与显微镜第三章离心技术与离心机第四章光谱分析技术与相关仪器第五章色谱分析技术和色谱分析仪器第六章电泳技术和常用电泳仪第七章电化学分析技术和临床相关仪器第八章微生物检测技术和相关仪器第九章生物安全柜第十章细胞培养技术和培养箱第十一章流式细胞技术和流式细胞仪第十二章血液分析技术与相关仪器第十三章尿液分析技术和相关仪器第十四章自动血沉分析仪微生物检测技术和相关仪器您目前的位置：首页- 各章知识扩充自动血培养仪进展血培养检查是用于检验血液样品中有无细菌存在的一种微生物学检查方法，对于快速检测临床上严重危及患者生命的败血症、菌血症患者血液中是否有细菌生长以明确诊断有十分重要的作用，是临床有效治疗的关键。
近年来，随着科学技术进步和微生物学的发展，微生物学家、计算机专家和工程技术人员相结合，已经创造出许多自动化、电脑化的智能型自动血培养仪。
一、自动血培养仪的基本结构和检测原理自动血培养仪包括培养系统或恒温孵育系统、检测系统、计算机及外围设备。
培养系统设有恒温装置和震荡培养装置，其中培养瓶的支架根据容量不同分为50瓶、120瓶、240瓶等。
自动血培养仪根据各自检测原理设有相应的检测系统。
计算机及外围设备用于判断发出阴性、阳性结果报告，记录和打印结果，进行数据储存和分析等。
自动血培养第十五章自动生化分析仪和相关仪器第十六章免疫分析技术和免疫分析仪第十七章PCR基因扩增仪第十八章全自动DNA测序仪和蛋白质自动测序仪第十九章即时检测技术和相关仪器第二十章实验室自动化系统知识扩充仪的检测原理主要有二氧化碳感受器、荧光检测和放射性标记物质检测三种检测技术。
出于对环保和安全性方面的考虑放射性标记物质检测已较少使用。
美国BD公司BACTEC系列自动血培养仪荧光增强检测技术的原理是细菌在代谢过程中利用培养基内营养成分，释放出二氧化碳，二氧化碳与培养瓶底部含有荧光染料的感应器反应，使感应器内结合二氧化碳的荧光物质被激发出荧光，系统每10min自动测定一次荧光水平，24h连续进行，通过电脑数据系统处理得出培养结果，并立即以声、光信号报警。
临床医学检验：临床检验仪器真题
临床医学检验：临床检验仪器真题1、问答题常用的离心方法分几类？正确答案：常用的离心方法大致可分为平衡离心法、等密度离心法、经典式沉降平衡离心法等三类。
2、问答题简述蛋白质测序仪的主要应用。
正确答案：蛋白质测序仪（江南博哥）获得的蛋白质序列信息主要应用在以下三个方面。
（1）新蛋白质的鉴定：在凝胶电泳中出现的未知条带可以利用蛋白质测序仪来测定其序列，为探索蛋白质的功能提供线索。
（2）分子克隆探针的设计：是蛋白质序列信息的基本用途之一。
用蛋白质序列信息设计PCR引物和寡核甘酸探针。
可以利用这些探针进行cDNA文库或基因组文库的筛选。
（3）抗原的人工多肽合成：由合成多肽免疫产生的抗体常用来证实和纯化新发现的蛋白质。
此外，合成的多肽类似物能够揭示蛋白质重要结构特征和提示蛋白质的功能特性。
3、问答题第三代自动血培养仪有哪些性能特点？正确答案：（1）培养基营养丰富；（2）以连续、恒温、振荡方式培养，细菌易于生长；（3）培养瓶多采用不易碎材料制成，提高了使用的安全性；（4）采用封闭式非侵入性的瓶外监测方式，避免标本交叉感染，且无放射性污染；（5）自动连续监测，缩短了检测时间，阳性标本检测可快速、准确；（6）结果报告及时，85%以上的阳性标本能在48小时内被检出；（7）培养瓶多采用双条形码技术，只需用电脑上的条码阅读器扫描报告单上的条码，就可直接查询到病人的结果及生长曲线；（8）培养瓶可随时放入培养系统，并进行追踪检测；（9）数据处理功能较强，数据管理系统随时监测感应器的读数，依据数据的变化来判定标本的阳性或阴性，并可进行流行病学的统计分析；（10）设有内部质控系统，可保证仪器的正常运转；（11）可进行血液及所有无菌体液的细菌培养检测。
4、单选库尔特原理中血细胞的电阻与电解质溶液电阻的关系是OoA.相等B.大于C.小于D.大于或等于E.小于或等于正确答案：B5、问答题电泳技术根据分离原理如何分类？正确答案：根据分离原理可分为移界电泳、区带电泳、等速电泳、等电聚焦、免疫电泳等。
《国内外医疗器械原理图解与操作标准及维修技术实用全书》
《国内外医疗器械原理图解与操作标准及维修技术实用全书》 本书作者:中国医科大学医学工程教授 图书册数:1380 出 版 社:中国知识出版社 定 现 价:1380 元 价:690 元《国内外医疗器械原理图解与操作标准及维修技术实用全书》 本店是实体店，坚决抵制各类盗版、劣质图书及附件，严格控 制图书进货渠道，遵守国家新闻出版、发行的相关规定，直接 从经过国家出版发行行政部门审核批准的出版社进货，与国图、 中华书局、三联书店、商务印书馆、人民文学、上海古籍、上 海世纪出版集团、中国社科、社科文献、电子工业、机械工业、 化学工业、科学、法律、上海外教、北大、清华、人大、复旦、 武大、南大、广西师大、北京出版集团、浙江少儿、江苏少儿、 21 世纪、作家、春风文艺、长江文艺、接力、漓江等全国知名 的 300 余家出版社建立了良好的合作关系，所采购的图书均经 所在地图书市场审读办公室审读合格后， 方上市发行， 100%正 版、优质，订购速度快，数据提供及时，加工全方位，能全面1 / 13符合客户的需求。
公司经营的图书科目品种齐全，涉及学科面广，涵盖文学、文 化、教育、体育、科技、历史、工具图书、艺术、哲学、语言、 政治、经济、学术专著、工具书及其它社科综合类图书等。
经 营风格全方位，适合各文化层次读者学习和阅读需要。
内容介绍：商品简介商品编码：pdf94281 出版社：中国知识出版社 册 数： 作者:中国医科大学医学工程教授2 / 13出版时间:2013 年 3 月 印刷时间 2013 年 3 月 isbn： 版次：第二版 装帧：精装 纸张：胶版纸 印次：第二次 页数： 正文语种：中文 开本：16 开 目录 最新国内外医疗 器械原理图解与操作标准及维修技术实用全书 最新国内外医疗器械原理图解与操作标准及维修技术实用全书 第一篇 医疗电子仪器原理图解与操作标准及维修技术 第一章 概论 第二章 医用传感器 第三章 心电仪器 第四章 医用监护仪器 第五章 脑电图机 第六章 医用 CT 机3 / 13第七章 医用超声诊断仪器 第八章 核医学仪器 第九章 医用电子仪器操作安全第二篇 医疗电动仪器原理图解 与操作标准及维修技术 第一章 口腔科设备 第二章 离心机 第三章 呼吸机 第四章 麻醉机 第五章 血液透析机 第六章 血液分析仪器 第七章 体外循环机第三篇 临床医疗仪器原理图解与操作标准 及维修技术 第一章 医用遥测设备 第二章 医用激光器 第三章 医用 X 线电视 第四章 核磁共振成像设备 第五章 听力检查仪器 第六章 耳聋与康复设备 第七章 红外线探测器 第八章 血流量测量仪器第四篇 临床检验常规仪器原理图解与 操作标准及维修技术 第一章 自动生化分析仪4 / 13第二章 徽生物快速检测仪 第三章 生物安全柜 第四章 免疫分析仪 第五章 电化学临床分析仪器 第六章 尿液分析仪器第五篇 理疗、治疗仪器原理与操作标准 及维修技术 第一章 光线治疗机 第二章 电疗机 第三章 磁疗机 第四章 康复治疗仪器 第五章 人工心肺机 第六章 体外碎石机 第七章 放射治疗机第六篇 医用色谱仪、电泳仪、显徽镜原理 与操作标准及维修技术 第一章 色谱仪器 第二章 电泳仪 第三章 毛细管电泳仪 第四章 光学显徽镜 第五章 电子显徽镜第七篇 生化检验仪器原理与操作标准及维 修技术 第一章 GD—821 型光电比色计 第二章 DU 型临床生化分析仪5 / 13第三章 紫外—可见光光度计 第四章 质谱仪 第五章 酸度计 第六章 PC—603 型血细胞计数器 第七章 磁共振波谱分析仪 第八章 计数器 第九章 荧光分析仪器 第十章 原子光谱分析仪第八篇 医用 X 线检查设备原理与操作 标准及维修技术 第一章 医用 X 线检查设备的结构、基本原理 第二章 X 线发生器主要参量的检测与调校 第三章 X 线检查设备的维护和质量控制 第四章 X 线检查设备的故障及检修方法 第五章 X 线发生器低压系统 第六章 X 线发生器高压系统 第七章 工频 X 线发生器故障检修综合举例 第八章 中高频 X 线发生器故障检修 第九章 附属设备的故障检修 第十章 X 线影像增强、电视系统故障检修 第十一章 牙科 X 线机的故障检修 第十二章 口腔曲面体层 X 线机第九篇 细胞、分子生物学仪器 原理与操作标准及维修技术6 / 13第一章 培养箱 第二章 PCR 基因扩增仪 第三章 全自动 DNA 测序仪和蛋白质自动测序仪 第四章 流式细胞仪巨邦文化发展有限公司服务宗旨 让客户“买得放心、买得开心”是本公司的一贯服务宗旨，而 且，我们也会始终将这一宗旨贯彻到底，并赋与其更丰富的涵 义。
分子生物学常用仪器技术介绍
一、全自动DNA测序仪的检测原理
（二）新生链的荧光标记原理
1. 多色荧光标记法 将荧光染料标记在作为终止底物的双脱氧单核苷酸上。 反应中将4种ddNTP分别用4种不同的荧光染料标记，带有 荧光基团的ddNTP在掺入DNA片段导致链延伸终止的同时， 也使该片段端标上了一种特定的荧光染料。 经电泳后将各个荧光谱带分开，根据荧光颜色的不同来判 断所代表的不同碱基信息。 2. 单色荧光标记法 单色荧光标记法所用荧光染料仅一种，与多色荧光标记法 不同的是，单色荧光标记引物法和荧光标记终止底物法均 需将A、T、C、G四个反应分别在不同扩增管中进行，电泳 时各管产物也分别在不同泳道中电泳。
2. 变温气流式实时荧光定量PCR扩增仪 PCR扩增样品槽被设计成可以 旋转的类似离心转子的结构， 借助空气加热，转子在腔内旋 转。 样品孔之间的温度差异小于 0.01℃，加热均匀。 激发光源采用寿命较长的发光 二极管（LED）冷光源。
3. 各孔独立控温的实时荧光定量PCR扩增仪 不同样品槽分别拥有独立的智能升降温模块，各孔独立控 温，可以在同一台定量PCR仪上分别进行不同条件的定量 PCR反应， 随时利用空置的样品槽开始其他定量PCR实验，使用效率 非常高。 升降温速度高达10℃/s，控温精度高。 每个模块独立控制的激发光源和检测器直接与反应管壁接 触，保证荧光激发和检测不受外界干扰。 整合多通道光学检测系统，能有效分辨多种荧光染料，可 对同一样品进行多靶点分析，同时检测四种荧光信号。
缓冲系统：
（三）TaqMan荧光标记探针实时PCR技 术的基本原理 在普通PCR反应体系中加入了 TaqMan荧光标记探针
•TaqMan荧光标记探针特点：
探针序列能与待测模板中部某段序列互补结合； 探针的5＇端标记荧光报告基团，3＇端标记荧光淬灭基团。 完整的探针因荧光报告基团和荧光淬灭基团距离过近而使荧 光报告基团发射的荧光被淬灭； 当探针被降解时，荧光报告基团和荧光淬灭基团分离，这时 才能发射出荧光，被荧光检测器所检测到。 •Taq DNA聚合酶在具有5＇→3＇方向的聚合酶活性的同时， 还具有5＇→3＇外切核酸酶活性。 •在实时荧光PCR的反应过程中，变性步骤完成后在Taq DNA 聚合酶的作用下，从引物的3‘端开始复制新链，当复制到探 针的5’端时会逐一水解探针的每一个核苷酸。
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本章内容提要
第一节 全自动DNA测序仪
一、工作原理 （一）双脱氧链末端终止法测序原理
（二）新生链的荧光标记原理 （三）荧光标记DNA的检测原理
二、全自动DNA测序仪的结构与功能 （一）仪器的组成
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（二）新生链的荧光标记原理
• 荧光标记引物法
Primer Primer Primer Primer
A
G
C
T
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图18-8 荧光标记引物法原理 ► ◄ ■
（二）新生链的荧光标记原理
多色荧光标记法 -- 荧光标记终止底物法
定义：将荧光染料标记在作为终止底物的双脱氧单核苷 酸上
反应中将4种ddNTP分别用4种不同的荧光染料标记， 带有荧光基团的ddNTP在掺入DNA片段导致链延伸终 止的同时，也使该片段端标上了一种特定的荧光染料 经电泳后将各个荧光谱带分开，根据荧光颜色的不同来 判断所代表的不同碱基信息
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（二）新生链的荧光标记原理
• 荧光染料 标记法
单色荧光标记法
荧光标记引物法
荧光标记终止底物法 荧光标记引物法 荧光标记终止底物法
多色荧光标记法
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（二）新生链的荧光标记原理
多色荧光标记法 -- 荧光标记引物法
定义：将荧光染料预先标记在测序反应所用引物的5’端
一组（4种）荧光标记引物，其序列相同，但标记的荧光 染料颜色不同 测序反应中，模板、反应底物、DNA聚合酶及标记引物 等按A、T、C、G编号被置于4支微量离心管中，A、T、 C、G四个测序反应分管进行，上样时合并在一个泳道内 电泳。特定颜色荧光标记的引物则与特定的双脱氧核苷酸 底物保持对应关系
T TGACCGGA T
G C
T
T T G
T
C C A A C
G C
A T
G
G C
T
G
A
A
图18-4 双脱氧链末端终止法测序反应原理（2） ◈ ⊃
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（一）双脱氧链末端终止法测序原理
T
图18-5 双脱氧链末端终止法测序反应原理（3） ◈ ⊃
►
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（一）双脱氧链末端终止法测序原理
A
C
G
◈
图18-6 双脱氧链末端终止法测序反应原理（4） ◄ ■ ⊃ ►
(1)自动进样器区功能
①自动进样器受程序控制进行三维移动，因负极 电极和毛细管均固定不动，故许多操作如毛细管 进入样品盘标本孔中进样、电极和毛细管在电极 缓冲液瓶、洗涤液和废液管中移动等均依靠自动 进样器的移动完成；
◈
⊃
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（二）仪器各组成部分的功能
②电极为电泳的负性电极，测序过程中，正、负 极之间的电势差可达15000伏，如此高的电势差 可促进DNA分子在毛细管中很快泳动，达到快速 分离不同长度DNA片段的目的；
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⊃
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◄
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（一）双脱氧链末端终止法测序原理
利用DNA的体外合成过程－－聚合酶链反应 （polymerase chain reaction, PCR）
DNA聚合酶的催化 以目的DNA为模板 按照碱基互补配对原则 在引物的引导下
单核苷酸聚合形成新DNA链
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⊃
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（一）双脱氧链末端终止法测序原理
◈ ⊃
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◄
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（二）新生链的荧光标记原理 单色荧光标记法
• 也包括荧光标记引物法和荧光标记终止底物法 • 与多色荧光标记法不同的是单色荧光标记引物法 和荧光标记终止底物法均需将A、C、G、T四个 反应分别在不同扩增管中进行，电泳时各管产物 也分别在不同泳道中电泳
◈
⊃
►
◄
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（二）新生链的荧光标记原理
• 普通的PCR反应体系中，加入 的核苷酸单体为 4种2’-脱氧核苷 三磷酸（dATP，dCTP，dGTP， dTTP）
图18-1 dNTP结构示意图 ◄ ■ ◈ ⊃ ►
（一）双脱氧链末端终止法测序原理
• 测序反应体系中，加入的核苷酸
单体为 2’,3’-双脱氧核苷三磷酸
（ddNTP）
图18-2 ddNTP结构示意图 ◄ ■ ◈ ⊃ ►
（二）仪器各组成部分的功能
三、全自动DNA测序仪的常见故障及维护
（一）毛细管电泳型DNA测序仪的常见故障及维护 （二）平板电泳型DNA测序仪的常见故障及维护
四、全自动DNA测序仪的进展 五、全自动DNA测序仪的主要应用
第二节
蛋白质自动测序仪
一、蛋白质测序仪的工作原理 二、蛋白质测序仪的结构及其各部件的功能 三、蛋白质测序仪的主要应用
③样品盘有48孔和96孔两种，可一次性连续测试 48或96个样本； ④电极固定螺母起固定电极及毛细管的作用。
◈
⊃
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◄
■
（二）仪器各组成部分的功能
(2)凝胶块区功能
①注射器驱动杆：给注射器提供正压力，将注射器 内的凝胶注入毛细管中。在分析每一个样品前，泵 自动冲掉上一次分析用过的胶，灌入新胶； ②样品盘按钮：控制自动进样器进出； ③注射器固定平台：起固定注射器的作用；
◈
⊃
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◄
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（二）新生链的荧光标记原理
A G C T
模板：T C C A T G A T 产物：A G AG G AGG T AGGT A AGGTA C AGGTAC T AGGTACT A
◈ ⊃ 新生链的荧光标记原理 ► 图18-9 ■ ◄
（二）新生链的荧光标记原理
荧光标记引物法和荧光标记终止底物法的异同点：
本章小结
◈ ⊃
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第一节 全自动DNA测序仪
DNA测序
早期：小片段重叠法 通过测定RNA序列来推测DNA序列
核苷酸序列
缺点：既费时又不准确
20世纪80年代以后 ：DNA自动测序仪 Sanger双脱氧链末端终止法
Maxam-Gilber化学降解法
优点：操作简单、安全、快速、准确
◈
⊃
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◄
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一、全自动DNA测序仪工作原理
④电极：为电泳的正性电极，始终浸泡在正极缓冲 液中；
◈
⊃
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（二）仪器各组成部分的功能
⑤正极缓冲液阀：当注射器驱动杆下移，将注射 器内的凝胶压入毛细管时，缓冲液阀关闭，以防 止胶进入缓冲液；电泳时此阀打开，提供电流通 道； ⑥玻璃注射器：储存凝胶高分子聚合物以及在填 充毛细管时提供必要的压力； ⑦毛细管固定螺母：固定毛细管； ⑧废液阀：在清洗泵块时控制废液流。
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（一）双脱氧链末端终止法测序原理
Template
dNTPs
Polymerase
Primer
Terminator
A
G
C
T
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图18-3 双脱氧链末端终止法测序反应原理（1） ◄ ■ ⊃ ►
（一）双脱氧链末端终止法测序原理
A C T G G C C TAAT C G A G T C A G T
单色荧光标记法与多色荧光标记法的异同点：
• 均可分为荧光标记引物法和荧光标记终止底物法 • 单色荧光标记法需将A、C、G、T四个反应分别在不同扩 增管中进行，电泳时各管产物也分别在不同泳道中电泳 • 多色荧光标记引物法需将A、C、G、T四个反应分别在不 同扩增管中进行，电泳时可合并在同一泳道中电泳 • 多色荧光标记终止底物法可将A、C、G、T四个反应在同 一扩增管中进行，电泳时在同一泳道中电泳
Sanger双脱氧链末端终止法 Maxam-Gilber化学降解法
都是根据在某一固定的点开始核苷酸链的延伸，随机在某 一个特定的碱基处终止，产生A、T、C、G四组不同长度 的一系列核苷酸链，在变性聚丙烯酰胺凝胶上电泳进行片 段的分离和检测，从而获得DNA序列 双脱氧链末端终止法更简便和更适合于光学自动探测，故 在全自动DNA测序仪中应用广泛
第十八章 全自动DNA测序仪 和蛋白质自动测序仪
前
言
了解生命现象、解释疾病的发生、诊断和 治疗疾病，是生命科学的核心内容之一 核酸和蛋白质是控制生命过程的两种重要 大分子，其结构或功能异常是导致遗传性 疾病或遗传相关性疾病的主要因素或相关 因素，是生命科学研究的主要对象
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言
核酸分子携带生命活动的全套信息，其基 本结构―核苷酸的线性排列构成它的一级 结构
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（三）荧光标记DNA的检测原理
测序反应一般以单引物进行DNA聚合酶延伸反应，绝大 多数产物均为单链 反应结束后，样品经简单纯化处理就可以放置到自动测序 仪中开始电泳 两极间极高的电势差推动着各个荧光DNA片段在凝胶高 分子聚合物中从负极向正级泳动并达到相互分离，且依次 通过检测窗口 由激光器发出的极细光束，通过精密的光学系统被导向检 测区，在这里激光束以与凝胶垂直的角度激发荧光DNA 片段
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（一）仪器的组成
主机： 主要包括电泳系统、激光器和荧光检 测系统 ；大致可分为自动进样器区 、凝胶 块区 和检测区等结构功能区
微型计算机 各种应用软件
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（一）仪器的组成 -- PE310 基因分析仪
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