药科大生物制药工艺学期中大题考试

三

1.去除发酵液中杂蛋白有哪几种方法？

加入凝聚剂，加入絮凝剂，吸附，等电点沉淀，加各种沉淀剂沉淀，变性沉淀

2. 去除发酵液中钙、镁、铁离子的方法有哪些

离子交换法，沉淀法

3. 影响絮凝效果的主要因素有哪些？

絮凝剂的分子量，絮凝剂的用量，溶液pH值，搅拌速度和时间

4.细胞破碎有哪些方法？各有什么特点？

机械法，物理法，化学法

5.超声波破碎细胞的原理？

利用超声波的空穴作用

术语：凝聚作用，絮凝作用，错流过滤，渗透压冲击法

四

1.溶剂萃取法的基本原理，其特点是什么？

抗生素在不同的pH条件下，有不同的化学状态，分配系数有差别，若适度改变pH，可将抗生素自水相转入有机相，或从有机相再转入水相，这样反复萃取，可以达到浓缩和提纯的目的。

①操作可连续化，速度快，生产周期短；

②对热敏物质破坏少；

③采用多级萃取时，溶质浓缩倍数大、纯化度高

2.溶剂萃取法按操作方式不同，可分为哪几类？各有什么特点？

单级萃取，多级萃取（错流，逆流）。

萃取次数越多，萃取越完全

3.乳化剂为何能使乳状液稳定？

界面膜的形成，界面电荷的影响，介质粘度

4.破坏乳状液的方法有哪些？

加入表面活性剂，离心，加电解质，加热，吸附法破乳，高压电破乳，稀释法

5.影响乳状液类型的因素有哪些？

相体积的影响，乳化剂分子空间构型，界面张力，容器壁性质

6.影响双水相萃取的因素有哪些？

成相高聚物的分子量，成相聚合物浓度，电化学分配，疏水效应，温度及其他因素7.影响超临界流体萃取的因素有哪些？

压力，温度，助溶剂，物料性质

8.影响反胶束萃取的因素有哪些？

表面活性剂种类，水相pH，温度，离子强度，亲和反胶束萃取

术语：有机溶剂萃取，多级错流萃取，多级逆流萃取，反胶束萃取，超临界流体萃取，双水相萃取，萃取因素

五

1.什么是“盐析沉淀”？盐析的基本原理？

盐析法是利用各种生物分子在浓盐溶液中溶解度的差异，通过向溶液中引入一定数量的中性盐，使目的物或杂蛋白以沉淀析出，达到纯化目的的方法

形成离子对，部分中和了蛋白质的电性，排斥作用减弱而能相互靠拢，聚集起来。

中性盐的亲水性比蛋白质大，使蛋白质脱去了水化膜，使其沉淀。

2.影响盐析效果的因素有哪些？

无机盐的种类，溶质的种类，蛋白质浓度，温度，PH

3.影响有机溶剂沉淀的因素有哪些？

有机溶剂的种类和用量，PH，温度，无机盐的含量，某些金属离子助沉淀，样品浓度4.有哪些方法可形成过饱和溶液？

蒸发，温度诱导，盐析结晶，透析结晶，有机溶剂结晶法，等电点法微量扩散，化学反应结晶，共沸蒸馏结晶

5.哪些因素可影响晶体的大小？

过饱和度，温度，搅拌速度，晶种

6.等电点沉淀有哪些特点？如何应用

操作简便，试剂消耗少，给体系带来杂质少，适用于水化程度不大

采用时必须注意溶液PH应首先满足所需物质的稳定性

术语：Ks盐析，β盐析，盐析分布曲线，透析结晶法，亲和沉淀，选择性变性沉淀

六

1.化学吸附与物理吸附的区别？

2.吸附剂及被吸附物的极性对吸附的影响如何？

极性吸附剂易吸附极性物质，非极性吸附剂易吸附非极性物质；极性吸附剂适宜从非极性溶剂中吸附极性物质；非极性吸附剂适宜从极性溶剂中吸附非极性物质

3.吸附剂用量及被吸附物浓度对吸附效果的影响如何？

对蛋白质或酶进行分离时要求浓度1%以下

4.例举两种以上常用吸附剂的性质和用途。

活性炭(activated carbon ):粉末状，颗粒状，锦纶活性炭是吸附能力很强的非极性吸附剂雾霾口罩，空气净化，有害物质，家具除异味，汽车除味

人造沸石：无极阳离子交换剂

磷酸钙凝胶：主要是其中的钙与蛋白质的负电基团结合

5.大网格高聚物吸附剂（大孔吸附树脂）与传统吸附剂相比有何优点？

1、选择性好、解吸容易、理化性质稳定、机械强度好、可反复使用等优点。

2、其孔隙大小、骨架结构和极性，可按照需要，根据不同的原料和合成条件而改变，因此可适用于吸附各种有机化合物。

3、适合弱电解质及非离子型化合物分离

术语：正吸附，负吸附，大网格高聚物吸附剂

九

1.亲和层析原理？主要特点是什么？

（1）配基固定化：配基与载体偶联，结合成具有特异亲和性的分离介质。

（2）吸附样品：亲和层析介质选择性吸附生物活性物质.

（3）样品解吸：选择适宜的条件使被吸附物活性物质解吸

特点：经过一次处理可得到高纯度活性物质；设备要求不高、操作简便、特异性强、分离速度快、分离效果好、分离条件温和；亲和吸附剂通用性较差，专用的吸附剂

2.选择配基应注意些什么？

1、配基与配体有足够大的亲和力（亲和势），KL 在10-4～10-8之间。

2、配基与配体的结合应是专一的。

3、配基应具有化学活性。

3.何谓“手臂”？其长短与亲和层析效果有何联系？为什么？

在载体与配基之间插入一段适当长度的手臂以增加与载体相连的配基的活动度并减轻载体的空间，多为烃链。

4.如何制得高亲和力的亲和吸附剂？

配基浓度，空间障碍，配基与载体的结合位点，载体孔径，微环境

5.非专一性吸附包括哪些？如何克服？

离子效应，疏水集团，复合亲和力

6.亲和层析有哪些洗脱方法？

非专一性洗脱，特殊洗脱，专一性洗脱

7.什么是二次作用亲和沉淀？

亲和介质结合目标分子后，通过改变物理场使介质与目标分子共同沉淀的方法

8.亲和错流过滤的原理？

用膜对混合液进行错流过滤，复合体因分子巨大可被保留，杂质随液体透过膜，目标物与其它成分分离。

术语：生物亲和作用，亲和吸附剂，配基，阻留值，正洗脱，负洗脱，金属离子亲和层析，有机染料亲和层析，拟生物亲和层析，亲和膜，亲和萃取，亲和反胶团萃取