影响鲎试验结果的常见因素
鲎试剂法测定细菌内毒素影响因素的研究
法 大 致 可分 为 凝 胶 法 、 比浊 法 、 比色 法 （ 色法 ） 。 显 等
凝胶 法 为 限度试 验 ， 比浊法 、 比色 法 （ 色法 ） 作 为 显 常 定 量 检测 。本 文综 述介 绍 用 此法 测 定 细菌 内毒 素 时 发 现 的一些 影 响 因素及 消 除 方法 的研究 进 展 。
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参 考 文 献
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鲎试验检查细菌内毒素应注意的问题
鲎试验检查细菌内毒素应注意的问题鲎试验检查细菌内毒素应注意的问题发布时间02年09月05日 09时18分方法：通过对干扰鲎试验准确性干扰因素的分析(包括鲎试剂本身、操作条件、配制原料等)，提出了鲎试验中应注意的问题。
结果：只要克服了检查中的干扰因素，鲎法具有比家兔法更简便、快速、灵敏度高、重现性好等优点。
鲎试验是利用鲎的变形细胞与微量内毒素产生凝集反应的现象，作为判断供试品中细菌内毒素限量是否符合规定的一种方法[1]。
它具有比家兔法更简便、快速、灵敏度高、重现性好等优点。
中国药典1995年版已收载细菌内毒素检查法(简称鲎试验)，但只用于几种输液的检查。
根据现有的实验证明，凡不干扰细菌内毒素检查或虽有干扰，但可以克服的药品注射剂，将能够全部以鲎法代替家兔热原检查法。
但是该法受到许多因素的影响，故在做鲎试验检查时，应注意下列问题。
1鲎试剂本身1.1鲎试剂灵敏度 为了保证检查细菌内毒素结果的准确性，用于试验的鲎试剂应首先核对灵敏度。
因为在我们的实际工作中，发现鲎试剂均符合药典规定标准前提下，由于生产厂家不同，部分鲎试剂的实测灵敏度与标示值有差异而导致检测同一检品时，用相同标示值的鲎试剂，出现不同结果。
因而先核对灵敏度可避免因鲎试剂本身造成的判断失误。
建议法定部门和生产单位应注意鲎试剂的质量检查。
1.2供试品稀释 在取样品时，一定要熟悉中国药典的内容，不能直接取大输液原液0.1ml进行检查，这是排除干扰因素的简单有效的方法。
因药典已明确规定试验中鲎试剂的灵敏度不超过0.5EU/ml，根据供试品的稀释公式： 供试品稀释倍数= L/λυL ：供试品的内毒素限量(1EU/ml)λυ：鲎试剂灵敏度的标示值(EU/ml)故检测大输液均应稀释后才能进行试验，如选用更高灵敏度的鲎试剂，则应增加样品的稀释倍数。
稀释用的细菌内毒素检查用水药典作了规定。
在4h内不得与鲎试剂产生凝集反应。
如果直接用供试品原液试验，就会使供试品的内毒素提高到0.5EU/ml或0.5EU/ml以下，这样，根据目前大输液的生产和贮藏条件，有些就会达不到，鲎法检出的阳性率会提高，兔法复核的机遇也将增多，势必会浪费人力物力。
细菌内毒素试验(鲎试验)要点及控制方法
细菌内毒素试验（鲎试验）要点及控制方法一般细菌毒素可分为两类，一类为外毒素(Exotoxin)；它是一种毒性蛋白质，是细菌在生长过程中分泌到菌体外的毒性物质。
产生外毒素的细菌主要是革兰氏阳性菌。
如白喉杆菌、破伤风杆菌、肉毒杆菌、金黄色葡萄球菌以及少数革兰氏阴性菌。
另一类为内毒素(Endotoxin)，是革兰氏阴性菌的细胞壁的产物。
细菌在生活状态时不释放出来，只有当细菌死亡自溶或粘附在其它细胞时，才表现其毒性，内毒素的主要化学成分是脂多糖中的类脂A 成分。
和热原的关系热原(pyrogen)系指能引起恒温动物体温异常升高的致热物质。
它包括细菌性热原、内源性高分子热原、内源性低分子热原及化学热原等。
热原是否就是内毒素？细菌内毒素是热原的一种，即细菌性热原。
细菌内毒素被认为是热原的本质，此事在学术上仍有争议，热原不仅是细菌内毒素。
但在药检的范畴，细菌内毒素是主要的热原物质，可以说无内毒素就无热原，控制内毒素就是控制热原。
热原反应：含有热原的注射剂注入人体可引起发热反应，使人体产生发冷、寒战、体温升高、出汗、恶心、呕吐等症状，有时体温可升至40℃，严重者甚至昏迷、虚脱，如不及时抢救，可危及生命。
来源和控制方法1、细菌内毒素的特性2、去除细菌内毒素的方法(1)吸附法此法是利用活性炭对热原的吸附作用达到去除作用的方法。
常用的吸附剂中，活性炭对热原的吸附作用最强，一般用量为总容量的0.1%-0.5% ，将溶液加热到70℃左右保温一定时间效果更好。
使用的活性炭应符合药典规定要求。
(2)蒸馏法此法是利用热原具有不挥发性而达到去除目的。
因此，凡适于蒸馏的药品均可用蒸馏法除去热原。
(3)热破坏法此法是利用热高温能破坏热原质达到去除目的。
因此，凡适用于高温处理的如热原检查试验中接触药液的容器，可用180℃干烤3小时，或250℃干烤30min以上。
(4)强酸强碱处理法此法利用强酸强碱能破坏热原而达到去除的目的。
(5)其他，也可以采用过滤等方法去除热原。
内毒素检测影响因素
内毒素检测影响因素
1．有些物质对鲎试剂一内毒素凝胶反应有干扰作用，得出假阳性结果。
据报道：氨基酸、抗生素、碳水化合物、电解质、维生素、络合剂和添加剂产生抑制干扰；二价阳离子、右旋糖酐一40、鲎试剂反应物质、某些蛋白质、凝血酶等则能产生强化干扰得出假阳性结果。
2．葡聚糖的存在可致阳性结果，却不引起家兔发热，具有葡聚糖结构的物质包括血制品里的白蛋白、抗凝血酶、免疫球蛋白等故目葡聚糖及其类似物又称真菌多糖，这些成分在药品制备过程中有可能存在，此外．抗凝血酶、胰蛋白酶，免疫球蛋白、多棱苷酸、棕榈酰右旋糖酐磷酸盐、铜铵人造膜、纤维索膜等都能与TAL发生凝胶反应．导致实验结果的假阳性；
3．弃G因子鲎试剂排除了某些激活G因子这一旁路的干扰，使鲎试剂对内毒素发生反应具有专一性．去G因子鲎试剂即是一种只对内毒素起反应，而对r1—31一B—D—Glucan及类似物不起反应的鲎试剂因此．在有条件的情况下，采用去G因子鲎试剂，也是减少假阳性发生的有欢方法之～。
4．鲎试剂与内毒素的反应的最适宜pH值在6．5—8．0；TAL最佳反应pH值为6．5～7，低于5．7时TAL几乎没有反应活性，pH小于3或大于9时，酶的活性受到抑制，直接检查，甚至改变整个酶分子系统使其变性失活。
故鲎试验时，供试品pH最好应预调到6．5—7．0为好。
鲎试验实验报告
鲎试验实验报告鲎试验实验报告引言：鲎试验是一项旨在探索海洋生态系统的研究项目。
通过对鲎的观察和实验，我们可以更好地了解海洋生物的行为、适应能力和生态功能。
本报告将详细介绍鲎试验的目的、实验设计、结果和结论，并对未来的研究方向进行展望。
一、目的鲎是一种生活在海洋底部的甲壳动物，其生态功能对海洋生态系统的平衡具有重要影响。
本次实验的目的是探究鲎在不同环境条件下的生存能力和行为习性，以及其对环境变化的适应能力。
二、实验设计1. 实验设备：为了模拟鲎在自然环境中的生活状态，我们准备了一个大型水槽，并在其中设置了适当的水温、盐度和光照条件。
水槽底部铺设了沙子和岩石，以提供鲎理想的栖息环境。
2. 实验组和对照组：我们将实验分为两组，分别为实验组和对照组。
实验组中的鲎将暴露在不同的环境刺激下，例如温度变化、盐度变化和光照强度变化。
对照组中的鲎则保持在稳定的环境条件下。
3. 实验观察：我们对鲎的行为、食欲和生长进行了观察。
通过记录鲎的活动时间、食物摄入量和体重变化，我们可以评估鲎在不同环境条件下的适应能力和生态功能。
三、实验结果在实验过程中，我们发现以下几个有趣的结果：1. 温度变化对鲎的行为和食欲有显著影响。
在较高温度下，鲎的活动时间减少，食欲下降。
而在较低温度下，鲎的活动时间增加，食欲增强。
2. 盐度变化对鲎的生长和体重变化有明显影响。
在高盐度环境中，鲎的生长速度较慢，体重增长缓慢。
而在低盐度环境中，鲎的生长速度加快，体重增长较快。
3. 光照强度对鲎的行为和生态功能有重要影响。
在光照较强的环境下，鲎的活动时间减少，食欲下降。
而在光照较弱的环境下，鲎的活动时间增加，食欲增强。
四、实验结论通过对鲎的观察和实验，我们得出以下结论：1. 鲎对温度、盐度和光照强度等环境因素具有一定的适应能力。
它们能够调整自己的行为和生理机制，以适应不同的环境条件。
2. 鲎在适宜的环境条件下能够保持良好的生态功能，对海洋生态系统的平衡具有重要作用。
鲎试验热原检测法结果判定误差的原因及分析
鲎试验热原检测法结果判定误差的原因及分析许玉冰;刘杜娟【期刊名称】《西北国防医学杂志》【年(卷),期】2001(22)1【摘要】@@鲎试验热原检测法常用于医院供应室对输液器具和注射器具的洗涤质量检测，它要求准确性高，检测结果真实可靠。
1997年以来，我们通过1 743例鲎试验的实际检测发现，鲎试验法虽然具有简便、易行、灵敏、快速等特点，但在试验中易受到多种因素的影响，从而出现假阳性和假阴性结果的判定。
为更精确地做好热原检测工作，作者结合近年文献和实践经验总结介绍和分析如下。
rn1 材料和方法rn1．1 材料：鲎试剂(0.5 EU／支)、鲎试剂溶解水 (即无热原蒸馏水)、细菌内毒素工作标准品(10 EU／支)，均由福建厦门鲎试剂厂生产。
rn1．2 方法rn1．2．1 检品的采样：开放式输液瓶，一次性输液器均注入鲎试剂溶解水5 ml；50 ml 、20 ml、10 ml注射器分别注入鲎试剂溶解水2.5 ml；行荡洗和反复推拉后，放入保温箱中，在(50±5)℃的温度下保温30 min。
其间要转动输液瓶2次，并揉挤输液管部分；注射器要分别进行2次推拉荡洗，以使鲎试剂溶解水充分冲洗输液器具和注射器具内壁作为被检品。
【总页数】2页(P89-90)【作者】许玉冰;刘杜娟【作者单位】兰州军区兰州总医院消毒供应科，甘肃兰州730050;兰州军区兰州总医院消毒供应科，甘肃兰州730050【正文语种】中文【中图分类】R47【相关文献】1.无菌用品鲎试验检测结果的误差分析与对策 [J], 刘筱英;周仕林;杨凤英;周正红;李惠枝;蒋小兵2.乙肝标志物试剂盒中结果判定标准的误差分析 [J], 柴云飞3.以不明原因发热收治的鼻咽部感染1例及131例感染r性发热患者致热原因分析 [J], 吴莉琴;张燕敏;唐亮4.以不明原因发热收治的鼻咽部感染1例及131例感染性发热患者致热原因分析[J], 吴莉琴;张燕敏;唐亮;5.电器绝缘电阻测试中的误差分析及结果判定 [J], 王献举因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
影响鲎试验结果的常见因素
影响鲎试验结果的常见因素药品细菌内毒素检查法，是一项操作简便、快速、标准化程度高，应用成本低廉的新技术，又是一项生物学反应复杂的体外检测方法。
由于影响因素较多，实验操作的准确性尤为重要。
其次是目前美国药典收载的药品品种达680多种，但是在我国因人体重与国外的差异，供试品的内毒素限量值不尽相同。
所以，在实际工作中对美国药典收载的品种和文献报道的方法只能作为参考，对同一种药品的检查法不能照搬以免造成工作的失误。
因此在实际工作中应注意如下几个问题：1、实验前应复合鲎试剂产品的灵敏度和自身凝集时间，因为鲎试剂本身灵敏度的改变或质量不符合要求，能影响您的实验结果。
2、细菌内毒素工作品效价误差或效价不稳定，可影响实验结果。
建议您选用中检所提供的细菌内毒素标准品，必要时或有条件者应标定细菌内毒素标准品的效价。
3、请您选用厂家配备的细菌内毒素检查用水。
因为：BET用水是一种特殊的水，它不仅是要求细菌内毒素限值<0.03Eu/ml，而且要求有严格的PH （6.0-8.0）范围，不能用注射用水替代使用。
4、实验操作的误差：操作顺序和熟练程度尤为重要。
实验顺序如下所示：①制备内毒素标准溶液→②稀释检品→③溶解鲎试剂→④摆放试管→⑤加样或加试剂→⑥封口恒温→⑦观察结果并记录5、实验器具的洁净度影响：一般用硫酸清洁液浸泡4小时，用自来水冲洗干净，再用新鲜蒸馏水冲洗三道，并干热（250℃）恒温1.5h即可。
实验用的玻璃器具必须严格无菌无热原，建议不要使用一次性朔料制品。
6、实验条件：实验室要求洁净，无尘埃空气流通，若是空调室，应备有一台超净工作台。
7、温度：实验室温度为25±2℃较好，恒温水浴箱温度为37±1℃为宜。
8、样品本身干扰，对含有多糖类药品，应选用特异性鲎试剂或普通鲎试剂加G因子抑制剂使用。
对PH较低的样品应调节PH值。
定量鲎试验法检测细菌内毒素的几种干扰因子
定量鲎试验法检测细菌内毒素的几种干扰因子
孔祥文;丘文
【期刊名称】《中国生化药物杂志》
【年(卷),期】1998(19)1
【摘要】基因工程蛋白类药物产生中常用的２－巯基乙醇（２－ＭＥ）、二硫疏糖醇（ＤＴＴ）和还原型谷胱甘肽（ＧＳＨ）对鲎试验显色反应有干扰作用。
通过外加已知含量的内毒素溶液至不同浓度的２－ＭＥ、ＤＴＴ和ＧＳＨ，并与相同的内毒素含量的样品比较，结果表明，５．０ｍｍｏｌ／Ｌ２－ＭＥ，ＤＴＴ和ＧＳＨ均呈强烈抑制作用，抑制显然达８０％，７８％、７０％，当稀释到５．０μｍｏｌ／Ｌ时，抑制作用近乎消除。
高温处理内毒素样品会
【总页数】3页(P32-34)
【作者】孔祥文;丘文
【作者单位】西江大学生物系应用生物教研室;西江大学生物系应用生物教研室【正文语种】中文
【中图分类】R927.12
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5.特异性鲎试剂和普通鲎试剂用于大输液中细菌内毒素检测的对比 [J], 厉苏琪因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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影响鲎试验结果的常见因素
药品细菌内毒素检查法，是一项操作简便、快速、标准化程度高，应用成本低廉的新技术，又是一项生物学反应复杂的体外检测方法。
由于影响因素较多，实验操作的准确性尤为重要。
其次是目前美国药典收载的药品品种达680多种，但是在我国因人体重与国外的差异，供试品的内毒素限量值不尽相同。
所以，在实际工作中对美国药典收载的品种和文献报道的方法只能作为参考，对同一种药品的检查法不能照搬以免造成工作的失误。
因此在实际工作中应注意如下几个问题：
1、实验前应复合鲎试剂产品的灵敏度和自身凝集时间，因为鲎试剂本身灵敏度的改变或质量不符合要求，能影响您的实验结果。
2、细菌内毒素工作品效价误差或效价不稳定，可影响实验结果。
建议您选用中检所提供的细菌内毒素标准品，必要时或有条件者应标定细菌内毒素标准品的效价。
3、请您选用厂家配备的细菌内毒素检查用水。
因为：BET用水是一种特殊的水，它不仅是要求细菌内毒素限值<0.03Eu/ml，而且要求有严格的PH （6.0-8.0）范围，不能用注射用水替代使用。
4、实验操作的误差：操作顺序和熟练程度尤为重要。
实验顺序如下所示：
①制备内毒素标准溶液→②稀释检品→③溶解鲎试剂→④摆放试管→⑤加样或加试剂→⑥封口恒温→⑦观察结果并记录
5、实验器具的洁净度影响：一般用硫酸清洁液浸泡4小时，用自来水冲洗干净，再用新鲜蒸馏水冲洗三道，并干热（250℃）恒温1.5h即可。
实验用的玻璃器具必须严格无菌无热原，建议不要使用一次性朔料制品。
6、实验条件：实验室要求洁净，无尘埃空气流通，若是空调室，应备有一台超净工作台。
7、温度：实验室温度为25±2℃较好，恒温水浴箱温度为37±1℃为宜。
8、样品本身干扰，对含有多糖类药品，应选用特异性鲎试剂或普通鲎试剂加G因子抑制剂使用。
对PH较低的样品应调节PH值。