核酶和抗体酶
抗体酶核酶和固定化酶的基本概念和应用
抗体酶核酶和固定化酶的基本概念和应用咱们今天聊聊抗体酶核酶和固定化酶，这些东西听起来是不是有点绕？别着急，咱们慢慢讲，保证你听了以后啥都懂。
咱得说一下这些词到底是什么意思。
抗体酶核酶？嗯，乍一听是不是像是医学科幻片里的东西？它的原理比想象的要简单得多。
你可以把它看作是一种“聪明”的工具，它集合了抗体、酶和核酸三者的优点。
这些东西就像是“超能战士”，可以识别特定的物质，还能加速化学反应，甚至还能解决一些日常生活中的难题。
举个例子，它们可以帮助检测疾病，或者像化学工厂一样促进化学反应，真的是神奇得不要不要的。
那什么是固定化酶呢？这个就更简单了。
你可以把固定化酶想象成你家厨房里的调料瓶，酶就是调料，而固定化就是把它固定在瓶子里。
这样，你在做菜的时候，调料不会掉来掉去，方便又省事。
固定化酶的工作原理也是一样的。
它把酶固定在一个“平台”上，这个平台可以是塑料、玻璃，甚至是一些天然的东西。
这样一来，酶就能一直待在那里，不容易被浪费掉，而且还能多次重复使用，像是永不干涸的泉水，节省了大量的成本。
你看这些酶其实都不是什么新鲜的东西。
早在很久以前，人类就发现了酶的神奇作用。
它们是自然界里的“催化剂”，就像是车上的加速器，不推动车走就没意思了。
科学家们早就知道，酶能加速化学反应，甚至能在没有高温高压的情况下，完成那些看似不可能的反应。
但是酶也有个小问题，那就是它们容易被环境影响，比如温度、酸碱度，甚至是空气中的一些物质。
一不小心，酶就像跑得太快的马，飞驰到一个无法控制的地方，反而啥也做不成了。
为了让酶更稳定、更高效，科学家们就想出了固定化的办法。
想象一下你做饭的时候，如果把调料瓶随便扔在桌上，它可能就会翻倒、撒一地，到时候你得重新找，浪费时间。
可是如果你把调料瓶固定在一个固定的位置，它不仅不容易乱，还能更方便地拿取。
固定化酶就是这么一个聪明的发明，它让酶能在合适的环境中更好地工作，减少浪费，增加效率。
就好像是做事的“老司机”，让一切变得得心应手。
酶 答案
第四章 酶一、名词解释1．酶：是生物体内一类具有催化活性和特定空间构象的生物大分子，包括蛋白质和核酸。
2．酶的专一性：一种酶只作用于一类化合物或一定的化学键，以促进一定的化学变化，生成一定的产物。
这种现象称为酶的专一性或称酶的特异性。
3．酶的活性中心：或称活性部位。
指酶分子中直接和底物结合，并和酶催化作用直接有关的部位。
4．2.抗体酶（abzyme ）：是一种具有催化能力的蛋白质，其本质上是免疫球蛋白，但是在易变区被赋予了酶的属性，所以又称为“催化型抗体”。
5．米氏方程：6．激活剂：使酶活性增加的物质称为激活剂。
7．酶活力：也称为酶活性，是指酶催化一定化学反应的能力。
8．米氏常数Km ：酶的特征常数，其含义是酶促反应速度为最大反应速度一半时的底物浓度。
9．可逆抑制作用：抑制剂常以非共价键与酶可逆结合，使酶活性降低或丧失。
可以用透析或超滤等物理方法去除，这种抑制作用称可逆抑制作用。
10．不可逆抑制作用：抑制剂常以共价键与酶活性中心上的必需基团相结合，抑制剂与酶的结合牢固不能用透析或超滤等物理方法去除，这种抑制作用称不可逆抑制作用。
11．变构酶：除具有酶的活性中心外，还具有与调节物结合的调节中心的寡聚酶称为变构酶。
12．同工酶：指催化相同化学反应，而酶蛋白的分子结构、理化性质不同的一组酶。
13．单体酶：只有一条多肽链的酶。
14．寡聚酶：由几条或几十条相同或不同的多肽链亚基以非共价键结合的酶。
15．多酶复合体：由几种功能相关的酶彼此嵌合形成复合体。
16．核酶：化学本质为RNA 的酶。
17．酶的活力单位：单位时间内转化单位物质的量的底物所需要的酶量。
18．比活力：指每单位质量样品中的酶活力。
19. 诱导酶（inducenzyme ）是细胞内在正常状态下一类很少存在或没有的酶，当细胞中因加入了诱导物后而被诱导产生的酶，它的含量在诱导物存在下显著增高，这种诱导物往往是该酶底物的类似物或底物本身。
20. 全酶；即蛋白质部分和非蛋白质部分（辅助因子）。
核酶和抗体酶
将不同的重链和轻链基因随机组合，克隆 到合适的表达载体中，在原核细胞表达不 同的抗体，形成一个抗体库，从这个抗体 库中，用抗原可以筛选到相应的抗体基因。
引入法
随着噬菌体抗体库技术的完善，可根据需 要构建适当序列的基因片断，绕过免疫学 方法，构建全新的抗体酶。 噬菌体展示技术将组建亿万种不同特异性 抗体可变区基因库和抗体在大肠杆菌中功 能性表达，与高效快速的筛选手段结合起 来，彻底改变了抗体酶生产的传统途径。
A. 酯酶的底 物–酯
B.酯的羧基碳原子 受到亲核攻击形成 四面体过渡态
C.设计的磷酸酯 类似物,作为抗原 去免疫实验动物
O –C –
磷酸酯类似物 免
(半抗原)
疫
对酯水解反应有 催化作用的单克
隆抗体
抗体酶用于有机酯的水解，过渡态类似 物磷酸盐和磷酸酯作为免疫原诱导产生 的单克隆抗体催化水解反应比未催化反 应快104倍。
L-19IVS
G- P
- OH +
15nt
P399nt
图 13- 四膜虫 35S RNA 内含子剪接 的转酯反应模型
L-19具有酶的主要特 征：专一性强，加快 反应速度，反应前后 酶分子保持不变
L-19 IVS所催化的水解反应和连接反应
异议
引入法
用基因工程方法改造和制备全新的抗体酶 是一种很有前途和发展潜力的抗体酶制备 方法。
将催化基因引入到特异抗体的抗原结合 位点上，使其获得催化功能。 也可以针对性地改变抗体结合区的某些 氨基酸序列，以获得高效的抗体酶。
引入法
对于已产生的单抗，分析抗体结合部位 的氨基酸顺序或对应的碱基顺序。 通过对抗体酶结合部位氨基酸对应的基 因序列进行定点突变，希望能在抗体结 合部位换上有催化作用的氨基酸。 改变抗体酶的催化效率。
核酶抗体酶ppt课件
3、核酶作用的特点
化学本质 RNA 底物 RNA 肽键 ā-葡聚糖分支酶 反应特异性(专一性）碱基 催化效率 低 产物
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4.核酶的分类
锤头核酶
发夹核酶 剪切型核酶 丁型肝炎病毒（HDV)核酶
根据催化反应
RNaseP
I内含子
剪接型核酶 II内含子
2. 免疫源性低，很少引起免疫反应。 3. 针对锤头核酶而言，催化结构域小，既可作为转基因表达产 物，也可以直接以人工合成的寡核苷酸形式在体内转运。
二、在其他领域的应用
防治动、植物 病毒侵害：马铃薯纺锤形块茎类病毒负链 的多价核酶构建，马铃薯卷叶病毒复制酶基因负链的突变 核酶的克隆等
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剪切位点
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RNaseP底物的二级结构
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1、转核苷酸作用 2CpCpCpCpC CpCpCpCpCpC +CpCpCpC
2、水解作用 CpCpCpCpC CpCpCpC + pC
3、转磷酸作用 CpCpCpCpCpCp+UpCpU
CpCpCpCpCpC + UpCpUp 4、去磷酸作用
核糖核酸酶P(RNaseP)是内切核酸酶，是核
糖核蛋白体复合物，能剪切所有tRNA前体的 5‘端，除去多余的序列，形成3’-OH 和 5’磷酸末端。
RNaseP由M1RNA和蛋白质亚基组成。
体外： M1RNA具催化作用
蛋白质作为辅助因子
体内： M1RNA和蛋白质对酶活性都是必需的。
2、1剪切机制 Mg 2+
2、2结构与功能的关系 M1RNA 5‘端完 整结构对维持催化活性是必需的。
酶工程 核酶和抗体酶(6.4)--6.1
什么是抗体酶？抗体酶有何特性？答：抗体酶指既是抗体又具有催化功能的蛋白质。
因为它是具有催化活性的抗体，故又称为“催化性抗体”。
抗体酶具有典型的酶反应特性；与配体(底物)结合的专一性，包括立体专一性，抗体酶催化反应的专一性可以达到甚至超过天然酶的专一性；具有高效催化性，一般抗体酶催化反应速度比非催化反应快104～108倍，有的反应速度已接近于天然酶促反应速度；抗体酶还具有与天然酶相近的米氏方程动力学及pH依赖性等。
抗体酶与天然酶相比，最大的优点在于抗体的种类繁多，抗体的精细识别性使其能结合几乎任何天然的或合成的分子，制备成功的抗体酶不但能催化一些天然酶能催化的反应，而且还能催化一些天然酶不能催化的反应。
简述抗体酶的制备原理。
答：抗体酶的制备主要有诱导法、引入法、拷贝法等方法。
诱导法是利用反应过渡态类似物为半抗原制作单克隆抗体，筛选出具高催化活性的单抗即抗体酶；引入法则借助基因工程和蛋白质工程将催化基因引入到特异抗体的抗原结合位点上，使其获得催化功能；拷贝法主要根据抗体生成过程中抗原-抗体互补性来设计的。
核酶是如何发现的? 核酶的发现有什么重要意义？答：1982年，美国的T.Cech等研究发现原生动物四膜虫的26SrRNA前体能够在完全没有蛋白质的情况下，自我加工、拼接，得到成熟的rRNA。
1983年，S.Altman等研究RNaseP时发现，将RNaseP的蛋白质与RNA分离，分别测定，发现蛋白质部分没有催化活性；RNaseP的蛋白质部分除去并提高Mg2+，则留下的RNA部分具有与全酶相同的催化活性。
1986年，T.Cech与连接，具有核糖核酸酶和RNA聚合酶的活性。
核酶的发现，证明了核酸既是信息分子，又是功能分子，对于研究生命的起源，了解核酸新功能，以及重新认识酶的概念等都具有重要意义。
简述L19 RNA（L19 IVS）的生成及其催化反应。
答：1982年Cech等人在研究四膜虫前体rENA拼接机制时发现，在没有仟何蛋白质酶参与下，几秒钟内自动切除含有413nt的IVS(间插序列片段interveningsequcnce，IVS)，并产生成熟的rRNA，但反应体系需镁离子和鸟苷酸或鸟苷(均需有3¢-OH)参与。
Chapter9核酶和抗体酶解析
需鸟苷（或5′鸟苷酸）和Mg2+参与。
Ⅱ型IVS ：结构与四膜虫的不同，而与细胞核mRNA前体中的IVS相 似。它催化自我剪接反应不需要鸟苷或鸟苷酸参与，但仍需Mg2+
2．自我剪切ribozyme的分类
自我剪切ribozyme, 自我剪切的RNA结构有锤头结构和发 夹结构，其中尖头指出自我剪切的部位。
1．酰基转移反应
2．重排反应
3．氧化还原反应
4．金属螯和合反应
5．磷酸酯水解反应
6．磷酸酯闭环反应
7. 光诱导反应
a.光聚合反应（二聚作用）
b.光裂解反应
四. 制备方法
i. 诱导法：即用设计好的半抗原，通过间隔链与载体蛋白 （例如牛血清白蛋白等）偶联制成抗原，然后采用标准 的单克隆抗体来制备、分离、筛选抗体酶。
自我剪接ribozyme：包含剪切与连接两个步骤。
几种能进行自我剪切的RNA结构
3．催化分子间反应的ribozyme的分类
如：L-19IVS具有5种酶活性，可催化多种分 子间反应。
三．Ribozyme研究进展与展望
对各种已知ribozyme结构与功能关系的研究。可找出其 结构功能域和必需基团，据此可进行分子改造，以获得 分子更小的、高效的ribozyme
连接酶活性 金属螯合酶活性 磷酸酯酶活性
生物学意义
第二节结束
点击返回
第三节 抗体酶
一. 概念 是一种具有催化功能的抗体分子，在其可变 区赋予了酶的属性。
二. 抗体酶概述
酶与抗体的差别：酶是能与反应过渡态选择结合
核酶和抗体酶2
内含子
Ⅰ
型
5'外显子
5'
U pA
3'外显子
G pU
3'
内
第一次转酯反应
含
pG-OH
子
pGpA
的 5'
UOH
G pU
3'
自
我
第二次转酯反应
剪
5' pGpA
接
5'
U pU
3'
GOH 3'
I类内含子催化其他RNA分子 反应的几种类型
1、转核苷酸作用
2CpCpCpCpC CpCpCpCpCpC+CpCpCpC
• 这两个位点对于剪接是十分重要的，一旦发 生突变无论在体内还是在体外，会抑制剪接。
• 此法则几乎适合于所有真核生物的核基因， 这意味着它们切除内含子的机制是相同的， 但不适用于Ⅰ类内含子。
RNA的催化功能
• 核酶首先是美国 Colorado 大学Cech在研 究四膜虫rRNA剪接机制时发现的。
–一方面证明了四膜虫rRNA的剪接机制； –另一方面证明了L-19 分子的催化活性。
四膜虫rRNA内含子 ---Ⅰ型内含子
I型内含子的结构特点
1、拼接点序列为 5U··· ···G3
2、中部核心结构 3、内部引导序列 4、剪接通过转酯反应进行
引导序列
保守序列 G结合位点
剪接部位
Ⅰ型内含子二级结构通式
内部引导序列
• 内含子中可与外显子配对的序列称为内部引导序列 • 其作用是决定剪接的专一性。
+ 外显子1 外显子2 内含子1
•剪接产物通过凝胶电泳见到: rRNA前体 + + + + 核抽取物 - + - + GTP - + + -
分子酶学名词解释简答
分子酶学复习重点1 剪接型核酶:定义：指RNA分子被磷酸二酯酶切割后，伴随着形成新的磷酸二酯键，即磷酸二酯键的转移反应或称转酯反应。
2 剪切型核酶: 这类核酶的作用是只剪不接，催化自身RNA或不同的RNA分子，切下特异行核苷酸序列。
3 探针酶：既保持高度的反应性，又能在DNA中任意选定的区域内进行切割的酶。
实质是核酸内切酶，由两部分组成，第一部分叫做切割系统，为核酸切割试剂或酶，第二部分叫做识别系统，可以识别核酸底物的特定核苷酸序列。
4 人工酶：人工合成的具有催化活性的蛋白质或多肽。
5 模拟酶：利用有机化学合成的一些比酶结构简单得多但具有催化功能的非蛋白质分子。
6 抗体酶：又称催化抗体，是一类具有催化能力的免疫球蛋白，即通过一系列化学与生物技术方法制备出的具有催化活性的抗体，它既具有相应的免疫活性，又能像酶那样催化化学反应。
7 克隆酶：基因工程将某种酶基因导入宿主细胞中大量表达其产物为克隆酶，即用基因工程技术生产的酶。
8 突变酶：用基因定位突变技术修饰天然酶基因，然后用基因工程技术生产该突变基因的酶，被称为突变酶。
9 酶活力（enzyme activity）也称为酶活性，是指酶催化一定化学反应的能力。
10 酶的比活力：单位质量样品中的酶活力；1mg蛋白质中所含的U数；1Kg蛋白质中所含的Kat数。
11 酶的转换数（K cat）：当酶被底物饱和时每秒钟每个酶分子所转换底物分子数，又叫转换数（简称TN）, Kcat可以用来衡量酶的催化效率，越大效率越高。
12 亲和标记：利用酶对S的特殊亲和力，将酶加以修饰标记，故称之为亲和标记。
13差别修饰法（差别标记）：这种方法是非特异性试剂标记法的一个发展。
它利用竞争性抑制剂或底物预先占据活性中心，使非特异性试剂只修饰活性中心以外的基团，然后透析除去保护剂（即竞争性抑制剂或底物），再用同位素标记的非特异性试剂修饰活性中心的基团。
经氨基酸分析可知哪些基团位于活性中心。
抗体酶与核酸酶的名词解释
抗体酶与核酸酶的名词解释介绍：在生物学领域中，抗体酶与核酸酶是两个重要的概念。
它们分别代表了抗体与核酸相关的酶活性。
本文将对抗体酶和核酸酶进行详细解释，并探讨它们在生物学中的作用和应用。
一、抗体酶（Antibody Enzyme）抗体酶是将抗体与酶活性结合的一种融合蛋白质。
它的独特结构使其能够同时具备免疫识别和酶活性两种功能。
通常，抗体酶由通过基因工程技术构建的单克隆抗体与酶分子相结合而成。
抗体酶的作用：抗体酶在生物学研究、医学诊断和治疗等领域具有重要应用。
首先，它可以用于免疫组织化学分析，通过特异性抗体的结合，检测与某种蛋白质或细胞相关的特定抗原。
其次，抗体酶还广泛应用于免疫诊断试剂盒中，如妊娠试纸、艾滋病病毒检测试剂等。
此外，抗体酶对于治疗肿瘤和炎症疾病等方面也有很大作用。
二、核酸酶（Nuclease）核酸酶是一类能够分解核酸分子的酶，主要包括DNase（脱氧核酸酶）和RNase（核糖核酸酶）两种。
核酸酶能够加速酶解核酸链的过程，并参与核酸代谢和细胞生命周期的调控。
DNase的作用：DNase主要作用于DNA分子，能够在酶解作用下使DNA链断裂。
在细胞凋亡（细胞程序性死亡）过程中，DNase起到关键作用，它能够将DNA分子断裂成较小的片段，进一步促使细胞死亡。
此外，DNase还在DNA修复和DNA重组等生物过程中发挥重要作用。
RNase的作用：RNase主要作用于RNA分子，它能够酶解RNA链，从而控制RNA在细胞内的代谢。
RNase在维持基因表达平衡、调节蛋白合成等方面发挥着重要作用。
另外，RNase还参与RNA降解、RNA修复和基因调控等生物过程。
抗体酶与核酸酶的应用抗体酶与核酸酶不仅在生物学研究中发挥作用，还在医学诊断和治疗中得到广泛应用。
1. 生物学研究中的应用抗体酶可以通过免疫组织化学、免疫印迹等技术，用于鉴定和定位特定蛋白质或细胞上的抗原。
核酸酶在基因表达和调控研究中也起到关键作用，通过核酸酶酶切，可以获取特定片段的DNA或RNA，进行进一步的分析。
第八章核酶和抗体酶
大肠杆菌得4、5sRNA前体可被RNA亚基剪切,但如 果当蛋白质亚基存在时,则剪接速度可加快几百倍以上。 另外,RNA亚基对3’端带CCA顺序得前体tRNA比对3’ 端CCA顺序缺失得前体tRNA得裂解效率更高,但当有 蛋白质亚基存在时,则剪接这两类前体tRNA得效率几 乎相同,这说明蛋白质亚基决定着RNaseP全酶对不同 底物得剪接效率,可能对RNA亚基功能起着某种调控 作用。
DNA就是双股核酸,而且其分子量非常巨大, 因此无法自由卷绕成特定构象,都只就是形成 长长得双螺旋结构。
1982年,切赫(Cech)发 现四膜虫前体rRNA得自我剪接
1983年,阿尔特曼(Altman)发现核 糖核酸酶P得RNA部分具有催化能力。
1989年,二者获得诺贝尔化学奖
一、切赫:四膜虫rRNA前体得自我剪接实验
又如,白血病就是造血系统得恶性肿瘤,目前尚缺少有效得治 疗方法。核酶得发现,尤其就是锤头状核酶,为白血病得基 因治疗带来了新得希望。近些年,在国外得一些国家已经在 小白鼠体内得到较好得效果。
基因工程中得工具酶
基因工程中得工具酶: ------主要包括用于DNA和RNA分子得切割、连接、
聚合、逆转录等相关得各种酶类。
第八章核酶和抗体酶
RNA
碱基配对原则:
A —— U(T) G —— C
至于RNA得分子结构,就其化学组成上看,也就是由四种核苷 酸组成得多聚体。她与DNA得不同,
首先在于以U代替了T,其次就是用核糖代替了脱氧核糖,
此外,还有一个重要得不同点,就就是绝大部分RNA以单链形式 存在,但可以折叠起来形成若干双链区域。在这些区域内,凡互 补得碱基对间可以形成氢键(图)。但有一些以RNA为遗传物质 得动物病毒含有双链RNA。
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内容
• 第一节 ribozyme • 第二节 脱氧核酶 • 第三节 抗体酶
第一节 ribozyme
• 一、ribozyme的发现 • 二．Ribozyme的种类 • 三．Ribozyme研究进展与展望
一、ribozyme的发现
• 80年代初期，美国科罗拉多大学博尔德分校的Thomas Cech和美国耶鲁大学的Sidnery Altan各自独立地发现RNA具 有生物催化功能.从而改变了生物催比剂的传统概念。
• 为此，T.Cech和S.Altman共同获得了1989年度诺贝尔化学 奖。
二．Ribozyme的种类
• 自然界存在催化分子内反应（incis）的ribozyme(自我剪接 型和自我剪切型)和催化分子间反应(in trans)的ribozyme。
1．自我剪接ribozyme分类
• 自我剪接ribozyme可分为两类：
• 缺点：具有一定的盲目性和偶然性，并且不能产生新酶。
拷贝法示意
五．研究展望
• 1． 研究酶作用机理，获得蛋白质结构与功能间关系的一 般规律。
• 2． 获得一类新型的蛋白酶。 • 3． 催化天然酶不能催化的反应。
第三节结束 酰基转移反应 重排反应
氧化还原反应
抗体酶的催化反应
金属螯和合反应 磷酸酯水解反应
• Ⅰ型IVS：均与四膜虫大核rRNA前体的IVS结构相似、催化自我剪接需 鸟苷（或5′鸟苷酸）和Mg2+参与。
• Ⅱ型IVS ：结构与四膜虫的不同，而与细胞核mRNA前体中的IVS相似。 它催化自我剪接反应不需要鸟苷或鸟苷酸参与，但仍需Mg2+
2．自我剪切ribozyme的分类
• 自我剪切ribozyme, 自我剪切的RNA结构有锤头结构和发夹 结构，其中尖头指出自我剪切的部位。
研究热点：
• 从催化分子内反应的自我剪切ribozyme设计出催化分子间 反应的ribozyme.
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Ribozyme的固定化
• Ribozyme的固定化已成功，将在医学、工业上获得应用。 • 意义： • 对各种RNA-蛋白质复合物酶的分离鉴定，对许多具有特别
重要生物功能的RNA和蛋白质构成的颗粒体。在自然界将 会发现更多的具有自我剪接或自我剪切的RNA分子和以非 RNA为底物的ribozyme
第一节结束
Ribozyme的发现 Ribozyme的种类
T.Cech和S.Altman
分子内（incis）的ribozyme (自我剪接型和自我剪切型) 分子间 (in trans)的ribozyme
Ribozyme研究进展与展望
第一节结束
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第二节 脱氧核酶
• 一．概念 • 具有酶活性的DNA分子称为脱氧核酶
• 自我剪接ribozyme：包含剪切与连接两个步骤。
几种能进行自我剪切的RNA结构
3．催化分子间反应的ribozyme的 分类
• 如：L-19IVS具有5种酶活性，可催化多种分 子间反应。
三．Ribozyme研究进展与展望
• 对各种已知ribozyme结构与功能关系的研究。可找出其结 构功能域和必需基团，据此可进行分子改造，以获得分子 更小的、高效的ribozyme
ii. 引入法
• 将催化基团或辅助因子引入到抗体的抗原结合部位，可采 用选择性化学修饰方法，亦可利用蛋白质工程和基因工程 技术
引入法
引入法举例
iii. 拷贝法
• 用酶作为抗原免疫动物得到抗酶的抗体，再将此抗体免疫 动物并进行单克隆化，获得单克隆的抗抗体。对抗抗体进 行筛选，应获得具有原来酶活性的抗体酶。
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第三节 抗体酶
• 一. 概念 • 是一种具有催化功能的抗体分子，在其可
变区赋予了酶的属性。
二. 抗体酶概述
• 酶与抗体的差别：酶是能与反应过渡态选择结合 的催化性物质，抗体是和基态分子结合的催化性 物质。
三. 抗体酶的催化反应
• 1．酰基转移反应
2．重排反应
3．氧化还原反应
4．金属螯和合反应
5．磷酸酯水解反应
6．磷酸酯闭环反应
7. 光诱导反应
• a.光聚合反应（二聚作用）
b.光裂解反应
四. 制备方法
• i. 诱导法：即用设计好的半抗原，通过间隔链与载体蛋白 （例如牛血清白蛋白等）偶联制成抗原，然后采用标准的 单克隆抗体来制备、分离、筛选抗体酶。
利用过渡肽类似物制备抗体示意 图
脱氧核酶的结构
• Carmi等通过体外选择技术合成了一种依赖 Ca2+的具有自我切割功能的手枪型二级结构 脱氧核酶分子
三．脱氧核酶的催化特性
• 1．效率高 • 2．高度专一性 • 3．活性依赖金属离子 • 4．其它辅助因子
四．酶促反应动力学特征
• 1．PH值和温度对酶反应速率的影响 • 2．激活剂 • 3．酶浓度对酶反应速率的影响
磷酸酯闭环反应
光诱导反应
a.光聚合反应（二聚作用）
b.光裂解反应
制备方法
诱导法 引入法 拷贝法
五．生物学意义
• 三种脱氧核酶的活性： 连接酶概念 结构 催化特性
反应动力学特 征
效率高 高度专一性 活性依赖金属离子 辅助因子
PH值和温度对酶反应速率的影响 激活剂 酶浓度对酶反应速率的影响
生物学意义
连接酶活性 金属螯合酶活性 磷酸酯酶活性
第二节结束