实验 MS培养基母液和常用试剂的配制PPT
MS培养基配方
MS 培养基配方1、配置MS母液母液配置：加热都是用温水浴加热，全部都要避光保存，用装乙醇的棕色瓶来保存在4度即可表2.1大量元素母液药品20x g/L 500ml（20 x）KNO338g 19gNH4NO333 g 16.5gMgSO4•7H2O7.4 g 3.7gCaCl2 6.644g 3.322gKH2PO4 3.4g 1.7g溶于200ml蒸馏水,定容至500ml 需要加热才能完全溶解CaCL2.2H2O 4.4g/L表2.2微量元素母液药品100x g/L 500ml（100x g/L）KIH3BO3MnSO4.4H2OZnSO4.7H2ONa2MoO4.2H2OGuSO4.5H2O CoCl2.6H2O 0.083g0.6222.3 g0.86 g0.025 g0.0025 g0.0025 g0.0415 g0.31 g1.115 g0.43 g0.0125 g0.00125 g0.00125 g溶于100ml蒸馏水,定容至500ml表2.3有机母液药品100x 1L500ml(100x)肌醇10g5g烟酸0.05g0.025gVB60.05g0.025gVB10.1g0.05g甘氨酸0.2g0.1g表2.4铁盐母液药品100x g/L500mlFeSO4•7H2O 2.78g 1.39gNa2-EDTA. 2H2O 3.73g 1.865g铁盐配制将FeSO4·7H2O和Na2-EDTA.2H2O分别溶于100ml蒸馏水中，加热，（很重要）不断搅拌，溶解后，两液混合，加水定容至500ml，置于小口瓶中，贴上标签2、固体MS培养基材料•找到4种母液：大量元素，微量元素，有机微量元素，铁盐母液•蔗糖，琼脂锥形瓶MS培养基配方：母液都稀释至1xMS培养基配方（1L）母液体积或重量(1L) 200ml大量元素20x50mL 10ml铁盐100x 微量100x 10mL 2ml 10mL 2ml有机100x10mL 2ml 蔗糖15g（15g/L）3g琼脂8g（8g/L） 1.6gPH先调至 5.85-5.88，最终灭菌后pH接近5.81）。
组织培养实验MS培养基及配制注意事项
一、MS培养基母液的配制注意：1．除CaCl2·2H2O单独配制外，大量元素按照使用时高10倍的数值称取，将各种化合物称量后，分别用少量水在不同的容器内充分溶解，然后在500ml烧杯中按顺序加入各溶液，加适量蒸馏水，用玻璃棒搅拌促溶，倒入1000ml容量瓶中用蒸馏水定容至刻度，置小口瓶中保存，贴上标签注明化合物名称（或编号），浓缩倍数，配制日期和配制者姓名，CaCl2·2H2O配制同上置于另一小口瓶中。
2．微量元素母液的配制按要求浓缩100倍的数值称取，分别将各种化合物称量除铁盐（FeSO4·7H2O和Na2-EDTA.2H2O）作为一组单独配制外，其余化合物可混合置于烧杯内加少量蒸馏水溶解后，定容在1000ml容量瓶中，置小口瓶中保存，贴上标签。
3．铁盐配制将FeSO4·7H2O和Na2-EDTA.2H2O分别溶于450ml蒸馏水中，加热，（很重要）不断搅拌，溶解后，两液混合，调PH至5.5加水定容至1000ml，置于小口瓶中，贴上标签。
4．有机物母液配制，按母液要求浓缩50倍，除蔗糖按3%单独临时称量外，其余分别称量后，溶解，定容在500ml容量瓶中，置于小口瓶中保存，贴上标签。
5．母液最好在2~4℃的冰箱中贮存，特别是有机类物质，贮存时间不宜过长，无机盐母液最好在一个月内用完，如发现有霉菌和沉淀产生，就不能再使用。
A.制备母液和营养培养基时，所用蒸馏水或无离子水必须符合标准要求，化学药品必须是高纯度的（分析纯）。
B.称量药物采用高灵敏度的天平，每种药品专用一药匙。
二、培养基配制和灭菌一．养培养基配制程序(一).母液吸取量的计算配制培养基的升数母液吸取量= 母液体积（CC）×——————————母液浓缩倍数（二）各种母液按顺序编号排列A.大量元素；B.CaCl2.2H2O；C.微量元素；D.铁盐；E.有机物；F．生长素萘乙酸（NAA）：配制0.5mg/ml的NAA称取50mg ， NAA用少量95% 酒精溶解后加蒸馏水定容至1000ml；G..细胞分裂素、激动素（KT）配制0.5mg/ml的KT 称50mgKT 用少量1N HCL溶解后,加蒸馏水定容至100ml。
实验1-1MS培养基母液和常用试剂的配制
其他常用试剂的保存
配制好的其他试剂应保存在密封的玻璃瓶中 ，并放置在阴凉干燥处。避免阳光直射和高 温环境，以防变质。对于一些易挥发或易氧 化的试剂，应特别注意密封保存和使用。
04
实验操作流程与注意事项
03
04
配制好的培养基应尽快使用，避 免长时间存放。
实验安全须知
避免直接接触培养基和化学试剂，如不慎接 触，应立即用大量清水冲洗。
对于有毒有害的化学试剂，应遵循相关规定 进行操作和处理，不得随意倾倒或排放。
在实验过程中，应注意防范火灾、爆炸等安 全事故，遵循实验室安全规定。
05
实验结果与数据分析
03
常用试剂的配制与保存
植物生长调节剂的配制与保存
植物生长调节剂的配制
根据实验需求，将植物生长调节剂溶解于相应的溶剂中，如 水、乙醇等。按照所需的浓度进行配制，并充分摇匀。
植物生长调节剂的保存
配制好的植物生长调节剂应保存在低温、避光、干燥的环境 中，避免长时间暴露在空气中，以防氧化失效。
无机盐与微量元素的配制与保存
实验过程中严格控制了操作步 骤和试剂质量，确保了实验结 果的准确性和可靠性。
实验结果符合预期，证明了实 验方案的有效性和可行性。
实验中存在的问题与改进建议
实验中存在试剂配制误差和操 作不规范的问题，可能导致实
验结果的不准确。
建议加强实验操作规范性培 训，提高实验人员的操作水 平，确保试剂配制的准确性
熟悉实验操作流程与注意事项
实验操作流程
准备所需试剂和器材→按照配方配制 母液和常用试剂→过滤除菌→分装→ 储存。
实验 MS培养基母液和常用试剂的配制学习资料
2 实验原理
▪ 培养基是植物离体培养组织和细胞赖以生 存的营养基质。配制培养基时，为了减少 试剂称取时的工作量和少量称取时出现的 误差，以及避免多种营养成分混合导致沉 淀产生或相互反应而失去培养效果，预先 要将各种营养成分配制为一定倍数的培养 基母液，待使用时稀释到要求的浓度。母 液的浓度为培养基浓度的10倍、20倍、50 倍、100倍等或更高。
50
CuSO4 • 5H2O 0.025
5
CoCl2 • 6H2O 0.025
5
5.3.3 有机成分母液的配制
▪ MS培养基中所需的维生素和氨基酸等有机 成分母液应分别单独配制（具体配制见下 表）。配制的步骤为：确定母液的浓度和 体积→计算各种化合物用量→称量→溶解 →定容→装瓶→贴标签→放入冰箱保存。
母 液
种
成分
类
规定 用量
/mg• L-1
浓 称取 母液 配1L
缩 量/mg 定容 培养
倍
体积 基吸
数
/ml 取量 /ml
MnSO4 • H2O 16.9
3380
ZnSO4 • 7H2O
微 量
H3BO3
元
KI
8.6
1720
6.2
1240
0.83 200 166 1000 5
素 Na2MoO4 • 2H2O 0.25
▪ 亦可配制成混合母液（不主张采用）。
母
规定 浓 称 母液 配1L
液
用量 缩 取 定容 MS培
种 类
成分
/mg• 倍 L-1 数
量 /mg
体积 养基 /ml 吸取
MS培养基及配制注意事项
2． 称量药物采用高灵敏度的天平，每种药品专用一药匙。 ．生长调节剂母液配制：
为了操作方便，节约时间，生长调节剂也可如同配制母液一样，先配 成原液，这样配制培养基时只要稍加计算，按需要量取即可。
不同药品在配制时若不溶于水，可用少量不同的溶剂先溶解，萘乙酸 （NAA），吲哚乙酸（IAA）,赤霉素（GA3），2，4-D等生长素和玉米 素（ZT）可先用少量95%酒精溶解，然后加水，如溶解不完全再加热。 激动素（KT）和6-苄基嘌呤（BA）可溶于少量1mol/L的盐酸中，叶酸 需用少量稀氨水溶解。 称取50mg生长调节物质，溶解后，在100ml的容量瓶中定容，配制的母 液每毫升则含有生长调节物质0.5mg，配制后一般要求在低温（0~4℃） 保存，配制培养基时如每升（1000ml）需添加的生长调节剂物质为 0.5mg时，则取1ml母液即可。
2.无菌操作可按以下步骤进行：
（1）在接种3天前用甲醛熏蒸接种室，并于接种前3小时打开其内紫外 线灯进行杀菌； （2）在接种前20分钟，打开超净工作台的风机以及台上的紫外线灯； （3）接种员先洗净双手，在缓冲间换好专用实验服，并换穿拖鞋等； （4）上工作台后，用酒精棉球搽拭双手，特别是指甲处。然后搽拭工 作台面； （5）先用酒精棉球搽拭接种工具，再将镊子和剪刀从头至尾过火一 遍，然后反复过火尖端处，对培养皿要过火烤干； （6）接种时，接种员双手不能离开工作台，不能说话、走动和咳嗽 等； 材料吸干后，一手拿镊子、一手拿剪刀或解剖刀，对材料进行适当的切 割。（如叶片切成0.5cm2的小块；茎切成含有一个节的小段。微茎尖要 剥成只含1-2片叶原基）在接种过程中要经常灼烧接种器械，防止交叉 污染。
MS培养基的配制步骤
MS培养基的配制步骤大量元素(母液Ⅰ) mg／LNH4NO3 33 000KNO3 38 000CaCl2·2H2O 8 800MgSO4·7H2O 7 400KH2PO4 3 400微量元素(母液Ⅱ)KI 166H3BO3 1 240MnSO4·4H2O 4 460ZnSO4·7H2O 1 720Na2MoO4·2H2O 50CuSO4·5H2O 5CoCl2·6H2O 5铁盐(母液Ⅲ)FeSO4·7H2O 5 560Na2-EDTA·2H2O 7 460有机成分(母液Ⅳ)ⅣA肌醇 20 000ⅣB烟酸 100盐酸吡哆醇(维生素B6) 100盐酸硫胺素(维生素B1) 100甘氨酸 400以上各种营养成分的用量，除了母液Ⅰ为20倍浓缩液外，其余的均为200倍浓缩液。
上述几种母液都要单独配成1 L的贮备液。
其中，母液Ⅰ、母液Ⅱ及母液Ⅳ的配制方法是：每种母液中的几种成分称量完毕后，分别用少量的蒸馏水彻底溶解，然后再将它们混溶，最后定容到1 L。
母液Ⅲ的配制方法是：将称好的FeSO4·7H2O和Na2-EDTA·2H2O分别放到450 mL蒸馏水中，边加热边不断搅拌使它们溶解，然后将两种溶液混合，并将pH调至5?5，最后定容到1 L，保存在棕色玻璃瓶中。
各种母液配完后，分别用玻璃瓶贮存，并且贴上标签，注明母液号、配制倍数、日期等，保存在冰箱的冷藏室中。
MS培养基中还需要加入：2，4-二氯苯氧乙酸(2，4-D)、[烈宜醄NAA)、6-苄基嘌呤(6-BA)等植物生长调节物质，并且分别配成母液(0?1 mg/mL)。
其配制方法是：分别称取这3种物质各10 mg，将2，4-D和NAA用少量(1 mL)无水乙醇预溶，将6-BA用少量(1 mL)的物质的量浓度为0.1 mol/L 的NaOH溶液溶解，溶解过程需要水浴加热，最后分别定容至100 mL，即得质量浓度为0?1 mg/mL 的母液。
MS培养基配方
0.43
钼酸钠 Na2M oO4.2 H2O
241.95
0.25
0.0125
硫酸铜 CuSO4.5 H2O
249.68
0.025
0.00125
氯化钴 CoCl2.6H2O
237.93
0.025
0.00125
定容至 500ml， 使用时取 10ml/l
铁盐
乙二胺四乙酸二钠 Na2.EDTA 372.25
MS 培养基配方
成分
分子量
使用浓度 (mg/L)
称取的量（g）
硝酸钾 KNO3
101.11
1900
95
硝酸铵 NH4NO3
80.04
1650
82.5
大量元素
磷酸二氢钾 KH2PO4 硫酸镁M gSO4.7H2O
136.09 246.47
170
8.5
370
18.5
氯化钙 CaCl2.2H2O （单独配）147.02
22（定容至 500ml，使
440
用时取 10 ml/l）
定容至 1000ml，使用时取 20ml/l
碘化钾 KI
166.01
0.83
0.0415
硼酸 H3BO3
61.83
6.2
0.31
硫酸锰 M nSO4.4H2O
223.01
22.3
0.845
微量元素 硫酸锌 ZnSO4.7 H2O
287.54
8.6
硫酸亚铁 FeSO24.7H2O
278.03
37.3
1.865
27.8
1.39
定容至 500ml， 使用时取 10 ml/l
肌醇
植物组织培养MS培养基配方
植物组织培养MS培养基配方（一）母液配制与保存配制培养基时，如果每次配制都要按着杨成分表依次称量，既费时，又增加了多次称量误差。
为了提高配制培养基的工作效率，一般将常用的基本培养基配制成10～200倍，甚至1000倍的浓缩贮备液，即母液。
母液贮存于冰箱中，使用时，将它们按一定的比例进行稀释混合，可多次使用，并在配制较多数量的培养基时，降低工作强度，也提高试验的精度。
基本培养基的母液有四种：大量元素（浓缩20倍），微量元素（浓缩100倍），铁盐（浓缩200倍），除蔗糖之外的有机物质（浓缩100倍）1大量元素配制大量元素母液时要分别称量，分别溶解，在定容时按表1中的序号依次加入容量瓶中，以防出现沉淀。
倒入磨口试剂瓶中，贴好标签和做好记录后，可常温保存或放入冰箱内保存。
表1大量元素母液（配1L20倍的母液）2微量元素母液在配制微量元素母液时，也应分别称量和分别溶解，定溶时不分先后次序，可随意加入溶量瓶中定容（表2），一般不会出现沉淀现象。
倒入磨口试剂瓶中，贴好标签和做好记录后，可常温保存或放入冰箱内保有存。
由于铁盐无机化合物不易被植物吸收利用，只有基螯合物才能被植物吸收利用，因此需要单独配成螯合物母液表3）。
配制方法：称取5.56g硫酸亚铁和7.46g乙二胺乙酸二钠，分别用450ml的去离子水溶解，分别适当加热不停搅拌，分别溶解后将硫酸亚铁溶液缓缓加入到乙二胺四乙酸二钠溶液中，将两种溶液混合在一起，最后用去离子水定溶于1000mL，倒入棕色贮液瓶中，贴好标签和做好记录后放入冰箱内保存注意配制时，应将两种成分分别溶解在少量蒸馏水中，其中EDTA盐较难完全溶解，可适当加热。
混合时，先取一种置容量瓶（烧杯）中，然后将另一种成分逐加逐剧烈震荡，至产生深黄色溶液，最后定容，保存在棕色试剂瓶中4、有机物母液按表4中的量分别称取各种有机物，分别溶解后，用蒸馏水或去离子水定容于1000mL，放入细口瓶中备用，贴好标签于4℃冰箱中低温保存。
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3 主要实验用具和仪器
▪ 冰箱、普通天平、分析天平、各种型号的 试剂瓶（棕色和白色）、移液管、量筒、 烧杯、容量瓶、搪瓷杯、药勺、称量纸、 玻棒、标签纸、pH试纸（pH5.4~7.0）， 电磁炉等。
4
4 药品和试剂
▪ 硝酸铵、硝酸钾、氯化钙、硫酸镁、磷酸 二氢钾、碘化钾、硫酸锰、硫酸锌、钼酸 钠、硫酸铜、氯化钴、乙二胺四乙酸二钠、 硫酸亚铁、甘氨酸、盐酸硫胺素、盐酸吡 哆素、烟酸、肌醇、2,4-D(2,4-二氯苯氧乙 酸)、NAA（α-萘乙酸）、 6-BA （ 6-苄 基腺嘌呤）、 KT、浓盐酸、氢氧化钠、浓 硫酸、重铬酸钾、95%酒精、蒸馏水等。
5
5 MS培养基母液和 常用试剂的配制流程
▪ 5.1培养基的成分
▪ 目前，不论液体培养还是固体培养，大多 数植物组织培养中所用的培养基都是由无 机营养物、碳源、维生素、生长调节物质 和有机附加物等几大类物质组成。
6
5.2 培养基的配制方法
▪ 配制培养基的最简单的方法是用市售培养 基干粉溶解在蒸馏水里，加上蔗糖、琼脂 和其他必要的补加物，再加入蒸馏水使之 达到最终的容积。最后调节pH值，高压灭 菌，于是制成所需要的培养基。
▪ 亦可配制成混合母液（不主张采用）。
15
母
规定 浓 称 母液S培
种 类
成分
/mg• 倍 L-1 数
量 /mg
体积 养基 /ml 吸取
量/ml
甘氨酸
2.0
100
有 盐酸硫胺素 0.1
5
机
成 盐酸吡哆素 0.5 200 25 250 5
分
烟酸
0.5
25
肌醇
100
5000
KH2PO4
170
3400
配1L MS培 养基 吸取 取量 /ml
50
12
5.3.2 微量元素母液的配制
▪ MS培养基中的微量元素可由MnSO4 • 4H2O、ZnSO4 • 7H2O、H3BO3、KI、 Na2MoO4 • 2H2O、CuSO4 • 5H2O、CoCl2 • 6H2O几种无机盐来供应，它们也可配在 同一母液中（具体配制见下表）。配制步 骤同大量元素（混合时不要求先后顺序）。
实验1 胡萝卜愈伤组织的诱导培养
▪ 实验内容：
▪ 1-1 MS培养基母液和常用试剂的配制 ▪ 1-2 胡萝卜愈伤组织诱导培养基的配制 ▪ 1-3 胡萝卜愈伤组织的诱导 ▪ 1-4 胡萝卜愈伤组织继代培养基的配制 ▪ 1-5 胡萝卜愈伤组织的继代培养
1
实验1-1 MS培养基母液 和常用试剂的配制
▪ 1 实验目的
50
CuSO4 • 5H2O 0.025
5
CoCl2 • 6H2O 0.025
5
14
5.3.3 有机成分母液的配制
▪ MS培养基中所需的维生素和氨基酸等有机 成分母液应分别单独配制（具体配制见下 表）。配制的步骤为：确定母液的浓度和 体积→计算各种化合物用量→称量→溶解 →定容→装瓶→贴标签→放入冰箱保存。
7
▪ 如果没有培养基干粉，则可采用以下两种 方法来配制：
▪ 一个是按照配方规定的数量分别称量出各 种成分，分别使它们溶解于水，然后再将 它们混合在一起。
▪ 另一个是先配制一系列的浓缩贮备液（母 液），贮存在2～4℃冰箱内，待配培养基 时取出，按比例稀释配用。此法较为常用。
8
5.3 MS 培养基母液的配制
▪ MS培养基中的9种大量元素除C、H、O外， 剩下的六种可由KNO3、NH4NO3、CaCl2 • 2H20、MgSO4 • 7H2O、KH2PO4几种无机 盐来供应，它们可配在同一母液中（具体 配制见下表）。配制的步骤为：确定母液 的浓度和体积→计算各种化合物用量→称 量→分别溶解→混合→定容→装瓶→贴标 签→放入冰箱保存。
▪ 注意： CaCl2 • 2H2O最后加入 11
母
规定 浓
母液
液
成分
用量 缩 称取量 定容
种
/mg• 倍 /mg 体积
类
L-1 数
/ml
KNO3
1900
38000
大
量
NH4NO3 1650 20 33000 1000
元 素
CaCl2 • 2H20
440
MgSO4 • 7H2O 370
8800 7400
▪ 通过本次实验，使学生能熟练准确配制MS 培养基母液和组培室常用的化学试剂，巩 固相关理论基础知识。
2
2 实验原理
▪ 培养基是植物离体培养组织和细胞赖以生 存的营养基质。配制培养基时，为了减少 试剂称取时的工作量和少量称取时出现的 误差，以及避免多种营养成分混合导致沉 淀产生或相互反应而失去培养效果，预先 要将各种营养成分配制为一定倍数的培养 基母液，待使用时稀释到要求的浓度。母 液的浓度为培养基浓度的10倍、20倍、50 倍、100倍等或更高。
▪ 通常把每种试剂单独溶解后再与别的也已 完全溶解的药品混合，或者待前一种化合 物完全溶解后再加入后一种化合物。混合 已溶解的各种矿质盐时还应注意先后顺序， 力求把Ca2+与SO42- 和PO43-错开，以免形 成硫酸钙或磷酸钙的不溶物。同时，要慢 慢地混合，边混合边搅拌。
10
5.3.1 大量元素母液的配制
16
5.3.4 铁盐母液的配制
▪ 铁盐母液宜单独配制，其配制步骤为： ▪ 确定母液的浓度和体积→计算各种化合物
用量→称量→分别溶解→混合→煮沸数分 钟→调节pH值至5.8 →定容→装瓶（棕色） →贴标签→放入冰箱保存。 ▪ 用时每配l L培养基取该溶液5ml。
▪ 母液的配制有两种方法： ▪ 一种是配制成单一化合物母液。此法适合
配制多种培养基都需要的同一种母液。
▪ 另一种是配成几种不同化合物的混合母液。 此法在大量配制同种培养基时省时省力。 由于MS 培养基较为常用，故配制MS 培养 基母液。
▪ 配好的母液应放在试剂瓶中贮存。
9
▪ 在配制MS培养基母液时，为减少工作量可 以把几种药品（如培养基中的大量元素或 微量元素）配在同一母液中，但应注意各 种化合物的组合以及加入的先后顺序，以 免发生沉淀。
13
母 液
种
成分
类
规定 用量
/mg• L-1
浓 称取 母液 配1L
缩 量/mg 定容 培养
倍
体积 基吸
数
/ml 取量 /ml
MnSO4 • H2O 16.9
3380
ZnSO4 • 7H2O
微 量
H3BO3
元
KI
8.6
1720
6.2
1240
0.83 200 166 1000 5
素 Na2MoO4 • 2H2O 0.25