实验室常用培养基的配制方法

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实验室常用培养基的配制方法

实验室常用培养基的配制方法

实验室常用培养基的配制方法在实验室中,培养基是微生物生长和繁殖的重要物质基础,正确配制培养基对于实验结果的准确性和可靠性至关重要。

不同的微生物对营养物质的需求有所不同,因此需要根据实验目的和微生物的特性选择合适的培养基,并掌握正确的配制方法。

接下来,我将为大家详细介绍几种实验室常用培养基的配制方法。

一、LB 培养基(LuriaBertani 培养基)LB 培养基是一种常用于培养细菌的通用培养基,其成分包括胰蛋白胨、酵母提取物和氯化钠。

配制 1L 的 LB 培养基,所需材料如下:胰蛋白胨 10g酵母提取物 5g氯化钠 10g配制步骤:1、称取上述成分,将其放入一个干净的 1L 烧杯中。

2、加入约800ml 的去离子水,用玻璃棒搅拌,直至溶质完全溶解。

3、用去离子水将溶液定容至 1L。

4、调节 pH 值至 70(通常使用 1mol/L 的 NaOH 或 1mol/L 的 HCl 进行调节)。

5、将培养基分装到锥形瓶中,每瓶的装液量不要超过锥形瓶体积的三分之二。

6、盖上瓶塞,用报纸或牛皮纸包扎瓶口。

7、放入高压灭菌锅中,在 121℃下灭菌 20 分钟。

二、牛肉膏蛋白胨培养基牛肉膏蛋白胨培养基是一种常用的细菌培养基,适用于多种细菌的培养。

配制 1L 该培养基,需要准备以下材料:牛肉膏 3g蛋白胨 10g氯化钠 5g具体配制步骤如下:1、称取牛肉膏、蛋白胨和氯化钠,放入干净的烧杯中。

2、加入适量的去离子水,搅拌溶解。

3、定容至 1L,搅拌均匀。

4、用 1mol/L 的 NaOH 或 HCl 调节 pH 至 72 74 之间。

5、分装、包扎、灭菌,方法同上。

三、马铃薯葡萄糖培养基(PDA 培养基)PDA 培养基常用于培养真菌,尤其是霉菌。

配制 1L 的 PDA 培养基,材料如下:马铃薯 200g葡萄糖 20g琼脂 15 20g配制流程:1、将马铃薯去皮,切成小块,称取 200g,放入锅中,加入约1000ml 去离子水,煮沸 20 30 分钟,直到马铃薯块变软。

实验室平板培养基配方

实验室平板培养基配方

实验室用平板培养基配方
1.MRS培养基:
液体:蛋白胨 10g 牛肉膏 10g 柠檬酸铵2g 乙酸钠 5g(无水乙酸钠3g) 酵母粉 5g 葡萄糖 20g
磷酸氢二钾 2g 吐温 1.0ml
盐液甲 5.0ml 蒸馏水: 1000ml
溴甲酚紫 0.8g
[备注]盐液甲的配制:MgSO
4.7H
2
O 11.5g ,MnSO
4
.4H
2
O 2.8g
蒸馏水 100ml
固体:在MRS液体培养基中加入1.6%~2%的琼脂
PH=6.5~7.0 121℃灭菌30min
2.YB培养基:
液体:蛋白胨 5g 葡萄糖 5g 酵母粉 5g 磷酸氢二钾4g
3.08%硫酸锰 1.0ml 蒸馏水 1000ml
固体:在YB液体培养基中加入1.4%~1.7%的琼脂
PH=6.0~7.0 121℃灭菌30min
3.PYD培养基:
液体:酵母粉 10g 蛋白胨 20g
葡糖糖20g 蒸馏水1000ml
固体:在PYD液体培养基中加入2%的琼脂
[备注]灭菌时要将葡萄糖和蛋白胨、酵母粉分开,溶解后单独灭菌,防止三者在高温下发生化学反应。

PH自然121℃灭菌30min
中国农业大学动物科技学院
饲料生物技术实验室
张得龙
2013.10.31。

实验室常用培养基配方及制备方法

实验室常用培养基配方及制备方法

实验室常用培养基配方及制备方法实验室中常用的培养基有很多种,不同的培养基适用于不同类型的微生物,如细菌、真菌或细胞系等。

下面将介绍几种常用培养基的配方及制备方法。

1. LB培养基(Luria-Bertani培养基)LB培养基常用于大肠杆菌等细菌的培养。

其配方如下:- Tryptone:10g/L- Yeast extract:5g/L-NaCl:10g/L将上述成分完全溶解于适量蒸馏水中,调节pH至7.0。

用自动过滤器过滤液体得到无菌的LB培养基。

分装后在121℃高压灭菌器中高压灭菌20分钟即可。

2. Sabouraud葡萄汁蘑菇培养基Sabouraud培养基常用于真菌的培养。

其配方如下:- Peptone:10g/L- Dextrose:40g/L将上述成分完全溶解于适量蒸馏水中,调节pH至5.6、用自动过滤器过滤液体得到无菌的Sabouraud培养基。

分装后在121℃高压灭菌器中高压灭菌20分钟即可。

3. DMEM培养基(Dulbecco's Modified Eagle Medium)DMEM培养基常用于细胞系的培养。

其配方如下:-DMEM粉:每升DMEM培养基50g-细胞因子或血清等:根据实验要求添加将DMEM粉溶解于适量蒸馏水中,并根据实验要求添加适量的细胞因子或血清。

调节pH至7.2-7.4、用自动过滤器过滤液体得到无菌的DMEM 培养基。

分装后在121℃高压灭菌器中高压灭菌20分钟即可。

4.M9液体培养基M9液体培养基是一种常用于细菌的最小培养基,适用于检验细菌的营养需求。

其配方如下:-Na2HPO4:6g/L-KH2PO4:3g/L-NaCl:0.5g/L-NH4Cl:1g/L-MgSO4·7H2O:0.1g/L-CaCl2:0.01g/L将上述成分完全溶解于适量蒸馏水中,调节pH至7.0-7.4、用自动过滤器过滤液体得到无菌的M9液体培养基。

分装后在121℃高压灭菌器中高压灭菌20分钟即可。

微生物实验室常见20种培养基配方大全

微生物实验室常见20种培养基配方大全

微生物实验室培养基配方大全一、糖发酵管成分:牛肉膏 5g蛋白胨 10g氯化钠 3g磷酸氢二钠2g0.2%滇麝香草酚蓝溶液 12mL蒸馏水 1000mLPH 7.4制法1. 葡萄糖发酵管按上述成分配好后,按0.5%加入葡萄糖,分装于有一个倒置小管的小试管内,121℃高压灭菌15min。

2. 其他各种糖发酵管可按上述成分配好后,分装每瓶1000 mL,121℃高压灭菌15min。

另将各种糖类分别配好10%溶液,同时高压灭菌。

将5mL糖溶液加入于100 mL培养基内,以无菌操作分装小试管。

蔗糖不纯,加热后会自行水解者,应采用过滤法除菌。

从琼脂斜面上挑取小量培养物接种,于36℃±1℃培养,一般观察2~3d。

迟缓反应需观察14~30d。

二、乳糖胆盐发酵管成分:蛋白胨 20g猪胆盐(或牛、羊胆盐)5g乳糖 10g0.04%滇甲酚紫水溶液 25mL蒸馏水 1000mL制法:将蛋白胨,胆盐及乳糖溶于水中,校正pH,加入指示剂,分装每管10 mL,并放入一个小倒管,115℃高压灭菌15min。

双料乳糖胆盐发酵管除蒸馏水外,其他成分加倍。

三、5%乳糖发酵管成分:蛋白胨 0.2g氯化钠 0.5g乳糖 5g2%溴麝香草酚蓝水溶液 1.2mL蒸馏水 100mLpH 7.4制法:除乳糖以外的各成分:溶解于50mL蒸馏水内,校正pH。

将乳糖溶解于另外50mL蒸馏水内,分别灭菌121 ℃ 15min,将两液混合,以无菌操作分装于灭菌小试管内。

在此培养基内,大部分乳糖迟缓发酵的细菌可于ld内发酵。

四、缓冲葡萄糖蛋白胨水(MR和VP试验用)成分:磷酸氢二钾 5g多胨 7g葡萄糖 5g蒸馏水 1000mL制法:溶化后校正pH,分装试管,每管1mL ,121℃高压灭菌15min。

甲基红(MR)试验:自琼脂斜面挑取少量培养物接种本培养基中,于36±1℃培养2~5d,哈夫尼亚菌则应在22~25℃培养。

滴加甲基红试剂一滴,立即观察结果。

实验室常用培养基

实验室常用培养基

.常用培养基的制备(1)马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA)和马铃薯蔗糖琼脂(PSA)培养基培养真菌最常用的培养基,成分如下:去皮马铃薯200 g 葡萄糖或蔗糖20g琼脂15-20g 水1000 ml配制方法:将马铃薯洗净去皮,称取200 g,切成小块(不必大小)放入锅中,加水1000ml,煮沸半小时,稍冷后用双层纱布过滤,在滤液中加蔗糖20g,加水补足到1000ml。

配成的培养基一般呈酸性,用于培养真菌,可以不必调pH。

如配制固体培养基,在加蔗糖前先加15-20g 琼胶加热熔化,最后加入蔗糖,混匀并加水补是至1000ml,趁热分装在试管或三角瓶中。

标准试管(15×150mm)分装量如下:一般用作斜面培养的每试管装培养基3-5ml,用作平面培养的每试管约10ml,加棉花塞后灭菌。

培养细菌用的培养基必须调节其酸度值到中性(pH7.0左右)。

(2)牛肉汁蛋白胨培养基(NA)是培养细菌最常用的培养基,又称营养琼脂或肉汤培养基。

成分如下:酵母浸膏1g 牛肉浸膏3g蛋白胨5-10g 蔗糖(或葡萄糖)l0g琼脂15-20g 水1000mlpH7.0配制方法:称取牛肉浸膏及蛋白胨溶于少量热水中备用,在其余水中加入琼脂,加热溶化后将牛肉浸膏和蛋白胨溶液加入混匀,然后加水补足到1000 ml,用NaOH或HCL调整至pH7.0,趁热分装,加棉花塞后灭菌。

(3)玉米叶培养基取一定数量的玉米叶片,洗净后剪成1㎝2左右的小块,放在250ml的三角瓶中,盛放量一般为三角瓶的1/3,然后加少量的水以保持湿润,加棉花塞后灭菌。

天然培养基一般不必调整pH。

(4)查氏(Czapek)培养基查氏培养基是一种组合培养基,其成分如下:NaNO3 2g K2HPO4 1 gMgSO4·7H2O 0.5g KCl 0.5gFeSO4 0.01g 蔗糖30g水1000ml(5)灭菌水的配制蒸馏水(或自来水)经过灭菌处理即成灭菌水,是实验室用量最大的必备品之一,常用于病原菌的分离、稀释、保湿等。

实验室常用培养基的配制方法

实验室常用培养基的配制方法

实验室常用培养基的配制方法Ampicillin(氨卡青霉素)(100 mg/ml)组份浓度100 mg/ml Ampicillin配制量50 ml配制方法 1.称量5 g Ampicillin置于50 ml离心管中。

2.加入40 ml灭菌水,充分混合溶解后,定容至50 ml。

3.用0.22 µm过滤膜过滤除菌。

4.小份分装(1 ml/份)后,-20℃保存。

IPTG(异丙基-β-D-硫代半乳糖苷)(24 mg/ml)组份浓度24 mg/mL IPTG配制量50 mL配制方法 1.称1.2 g IPTG置于50 ml离心管中。

2.加入40 ml灭菌水,充分混合溶解后,定容至50 ml。

3.用0 22 µm过滤膜过滤除菌。

4小份分装(1 ml,份)后,-20℃保存。

X-Gal (20 mg/ml)组份浓度20 mg/ml X-Gal配制量50 ml配制方法 1.称量l g X-Gal置于50 ml离心管中。

2.加入40 ml DMF(二甲基甲酰胺),充分混合溶解后,定容至50 ml。

3.小份分装(1 ml/份)后,-20℃避光保存。

LB培养基组份浓度1%(W/V)Tryptone(胰蛋白胨),0.5%(W/V)Y east Extract(酵母提取物),1%(W/V)NaCl配制量1 L配制方法3.滴加5 N NaOH(约0.2 m1),调节pH值至7.0。

4.加去离子水将培养基定容至1 L。

5高温高压灭菌后,4℃保存。

组份浓度配制量1L配制方法 1.配制磷酸盐缓;中液(0.17 M KH2PO4,0.72 M K2HPO4)100 ml。

溶解2.31 g KH2PO4和l2.54 g K2HPO4于90 ml的去离子水中,搅拌溶解后,加去离子水定容至100 ml,高温高压灭菌。

4.加去离子水将培养基定容至1 L后,高温高压灭菌。

5.待溶液冷却至60℃以下时,;加入100 ml的上述灭菌磷酸盐缓冲液。

几种微生物培养基配方

几种微生物培养基配方

几种微生物培养基配方微生物培养基是用来培养和繁殖各类微生物的营养基质,其配方可以根据不同微生物种类和研究需求进行调整。

下面将介绍几种常见的微生物培养基配方。

1.普通营养琼脂培养基普通营养琼脂培养基是最常见的一种培养基,适用于大多数微生物的培养。

其主要成分包括肉汤,琼脂,氨基酸和糖类等。

普通营养琼脂培养基的配方如下:-肉汤:10克-酵母浸泡液(菌种培养基,可选):5克-琼脂:15克-蒸馏水:1000毫升将肉汤和酵母浸泡液加入蒸馏水中,搅拌均匀后加热至溶解,再加入琼脂,继续加热至完全溶解。

搅拌均匀后,将溶液倒入培养皿中,冷却凝固后即可使用。

2.高营养琼脂培养基高营养琼脂培养基适用于对营养需求较高的微生物,如快速生长的细菌或真菌。

其配方相对于普通营养琼脂培养基略有不同,具体配方如下:-肉汤:10克-蛋黄粉:10克-葡萄糖:5克-琼脂:15克-蒸馏水:1000毫升将肉汤和蛋黄粉加入蒸馏水中,搅拌均匀后加热至溶解,再加入葡萄糖和琼脂,继续加热至完全溶解。

搅拌均匀后,将溶液倒入培养皿中,冷却凝固后即可使用。

3.铁琼脂培养基铁琼脂培养基用于培养铁菌等对铁元素营养要求较高的微生物。

其配方如下:-琼脂:15克-蔗糖:10克-磷酸二氢钾:0.2克-氯化铵:2克-硫酸亚铁:0.1克-蒸馏水:1000毫升将以上成分加入蒸馏水中,搅拌均匀后加热至溶解,然后继续加热至沸腾。

搅拌均匀后,将溶液倒入培养皿中,冷却凝固后即可使用。

4.特殊需求培养基除了普通营养基外,一些微生物需要特定的培养基才能生长。

例如,大肠杆菌需要含有葡萄糖和氧气的LB培养基;霉菌需要含有麦芽提取物和琼脂的SDA培养基。

这些特殊需求培养基的配方可以根据具体要求进行调整,以适应不同微生物的生长。

总结:微生物培养基有许多种,以上仅介绍了几种常见的配方。

实际应用中,根据不同微生物种类和研究需求,配方可以根据需要进行调整。

制备培养基时,需要严格按照操作规程操作,避免外界污染,以保证培养基的质量和可靠性。

实验室常用培养基的配制方法

实验室常用培养基的配制方法

实验室常用培养基的配制方法实验室中常用的培养基有很多种,包括通用培养基、选择性培养基、富集培养基等。

下面以常用的LB培养基和M9培养基为例,介绍它们的配制方法。

1. LB培养基(Luria-Bertani agar)LB培养基是一种通用培养基,适用于许多不同类型的细菌。

它由三种主要成分组成:蛋白胨、酵母提取物和氯化钠。

配方如下:-蛋白胨:10克-酵母提取物:5克-NaCl:10克-精制水:1000毫升步骤如下:1)在一个大容量烧杯中加入蛋白胨、酵母提取物和NaCl。

2)加入适量的精制水,搅拌溶解。

3) 将溶液移至一个继续器中,并用精制水补足至1000ml。

4)蓄满培养基的瓶子,盖上盖子,并使用自动压力灭菌器进行高压灭菌,或者将瓶子放入高压灭菌器中,将压力调至15磅(每平方英寸)。

2.M9培养基M9培养基是一种无机盐培养基,常用于细菌的生长和培养。

它的配方相对简单,由无机盐、葡萄糖和维生素B1组成。

配方如下:-Na2HPO4:6克-KH2PO4:3克-NaCl:0.5克-NH4Cl:1克-葡萄糖:0.4克-维生素B1:0.1克-精制水:1000毫升步骤如下:1)在一个大容量烧杯中加入Na2HPO4、KH2PO4、NaCl和NH4Cl。

2)加入一部分的精制水,搅拌溶解。

3)加入葡萄糖和维生素B1,搅拌均匀。

4) 将溶液移至一个继续器中,并用精制水补足至1000ml。

5)蓄满培养基的瓶子,盖上盖子,并使用自动压力灭菌器进行高压灭菌,或者将瓶子放入高压灭菌器中,将压力调至15磅(每平方英寸)。

以上是LB培养基和M9培养基的配制方法的简要介绍。

当然,实验室中还有很多其他种类的培养基,它们的配制方法也各有不同,需要根据具体的实验目的和细菌类型进行调整。

在培养基配制过程中,应当注意严格按照配方比例配制,保持清洁卫生,避免污染,并注意高压灭菌的操作安全。

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实验室常用培养基的配制方法Ampicillin (100 mg/ml)IPTG(24 mg/ml)X-Gal(20 mg/ml)LB培养基■组份浓度 100 mg/ml Ampicillin■配制量 50 ml■配制方法 1. 称量5 g Ampicillin置于50 ml离心管中。

2. 加入40 ml灭菌水,充分混合溶解后,定容至50 ml。

3. 用0.22 μm滤器过滤除菌。

4. 小份分装(1 ml/份)后,-20℃保存。

■组份浓度 24 mg/ml IPTG■配制量 50 ml■配制方法 1. 称量1.2 g IPTG置于50 ml离心管中。

2. 加入40 ml灭菌水,充分混合溶解后,定容至50 ml。

3. 用0.22 μm滤器过滤除菌。

4. 小份分装(1 ml/份)后,-20℃保存。

■组份浓度 20 mg/ml X-Gal■配制量 50 ml■配制方法 1. 称量1 g X-Gal置于50 ml离心管中。

2. 加入40 ml DMF(二甲基甲酰胺),充分混合溶解后,定容至50 ml。

3. 小份分装(1 ml/份)后,-20℃避光保存。

■组份浓度 1%(W/V)Tryptone,0.5%(W/V)Yeast Extract,1%(W/V)NaCl■配制量 1 L■配制方法 1. 称量下列试剂,置于1 L烧杯中。

Tryptone 10 gYeast Extract 5 gNaCl 10 g2. 加入约800 ml的去离子水,充分搅拌溶解。

3. 滴加5 N NaOH(约0.2 ml),调节pH值至7.0。

4. 加去离子水将培养基定容至1 L。

5. 高温高压灭菌后,4℃保存。

TB培养基0.5%(W/V)Yeast Extract1%(W/V)NaCl0.1 mg/ml Ampicillin■配制量 1 L■配制方法 1. 称取下列试剂,置于1 L烧杯中。

Tryptone 10 gYeast Extract 5 gNaCl 10 g2. 加入约800 ml的去离子水,充分搅拌溶解。

3. 滴加5 N NaOH(约0.2 ml),调节pH值至7.0。

4. 加去离子水将培养基定容至1 L。

5. 高温高压灭菌后,冷却至室温。

6. 加入1 ml Ampicillin(100 mg/ml)后均匀混合。

7. 4℃保存。

■组份浓度 1.2%(W/V)Tryptone2.4%(W/V)Yeast Extract0.4%(V/V)Glycerol17 mM KH2PO472 mM K2HPO4■配制量 1 L■配制方法 1. 配制磷酸盐缓冲液(0.17 M KH2PO4,0.72 M K2HPO4)100 ml。

溶解2.31 g KH2PO4和12.54 g K2HPO4于90 ml的去离子水中,搅拌溶解后,加去离子水定容至100 ml,高温高压灭菌。

2. 称取下列试剂,置于1 L烧杯中。

Tryptone 12 gYeast Extract 24 gGlycerol 4 ml3. 加入约800 ml的去离子水,充分搅拌溶解。

4. 加去离子水将培养基定容至1 L,高温高压灭菌。

5. 待溶液冷却至60℃以下时,加入100 ml的上述灭菌磷酸盐缓冲液。

6. 4℃保存。

2.4%(W/V)Yeast Extract0.4%(V/V)Glycerol17 mM KH2PO472 mM K2HPO40.1 mg/ml Ampicillin■配制量 1 L■配制方法 1. 配制磷酸盐缓冲液(0.17 M KH2PO4,0.72 M K2HPO4)100 ml。

溶解2.31 g KH2PO4和12.54 g K2HPO4于90 ml的去离子水中,搅拌溶解后,加去离子水定容至100 ml,高温高压灭菌。

2. 称取下列试剂,置于1 L烧杯中。

Tryptone 12 gYeast Extract 24 gGlycerol 4 ml2. 加入约800 ml的去离子水,充分搅拌溶解。

3. 加去离子水将培养基定容至1 L后,高温高压灭菌。

4. 待溶液冷却至60℃以下时,加入100 ml的上述灭菌磷酸盐缓冲液和1 ml的Ampicillin(100 mg/ml)。

5. 均匀混合后4℃保存。

SOB 培养基SOC 培养基■ 组份浓度2%(W/V) Tryptone0.5%(W/V ) Yeast Extract 0.05%(W/V ) NaCl2.5 mM KCl 10 mM MgCl 2■ 配制量 1 L■ 配制方法 1. 配制250 mM KCl 溶液。

在90 ml 的去离子水中溶解1.86 g KCl 后,定容至100 ml 。

2. 配制2 M MgCl 2溶液。

在90 ml 去离子水中溶解19 g MgCl 2后,定容至100 ml ,高温高压灭菌。

3. 称取下列试剂,置于1 L 烧杯中。

Tryptone 20 gYeast Extract 5 g NaCl 0.5 g4. 加入约800 ml 的去离子水,充分搅拌溶解。

5. 量取10 ml 250 mM KCl 溶液,加入到烧杯中。

6. 滴加5 N NaOH 溶液(约0.2 ml ),调节pH 值至7.0。

7. 加入去离子水将培养基定容至1 L 。

8. 高温高压灭菌后,4℃保存。

9. 使用前加入5 ml 灭菌的2 M MgCl 2溶液。

■ 组份浓度2%(W/V ) Tryptone0.5%(W/V ) Yeast Extract 0.05%(W/V ) NaCl2.5 mM KCl 10 mM MgCl 2 20 mM 葡萄糖■ 配制量 100 ml■ 配制方法 1. 配制1 M 葡萄糖溶液。

将18 g 葡萄糖溶于90 ml 去离子水中,充分溶解后定容至100 ml ,用0.22 μm 滤器过滤除菌。

2. 向100 ml SOB 培养基中加入除菌的1 M 葡萄糖溶液2 ml ,均匀混合。

3. 4℃保存。

2×YT培养基Φb×broth ■组份浓度 1.6%(W/V)Tryptone,1%(W/V)Yeast Extract,0.5%(W/V)NaCl■配制量 1 L■配制方法 1. 称取下列试剂,置于1 L烧杯中。

Tryptone 16 gYeast Extract 10 gNaCl 5 g2. 加入约800 ml的去离子水,充分搅拌溶解。

3. 滴加5 N NaOH,调节pH值至7.0。

4. 加去离子水将培养基定容至1 L。

5. 高温高压灭菌后,4℃保存。

■组份浓度 2%(W/V)Tryptone,0.5%(W/V)Yeast Extract,0.5%(W/V)MgSO4·7H2O■配制量 1 L■配制方法 1. 称取下列试剂,置于1 L烧杯中。

Tryptone 20 gYeast Extract 5 gMgSO4·7H2O 5 g2. 加入约800 ml的去离子水,充分搅拌溶解。

3. 滴加1 N KOH,调节pH值至7.5。

4. 加去离子水将培养基定容至1 L。

5. 高温高压灭菌后,4℃保存。

NZCYM培养基NZYM培养基NZM培养基■组份浓度0.5%(W/V)Yeast Extract0.1%(W/V)Casamino Acid1%(W/V)NZ胺0.5%(W/V)NaCl0.2%(W/V) MgSO4·7H2O■配制量 1 L■配制方法 1. 称取下列试剂,置于1 L烧杯中。

Yeast Extract 5 gCasamino Acid 1 gNZ胺 10 gNaCl 5 gMgSO4·7H2O 2 g2. 加入约800 ml的去离子水,充分搅拌溶解。

3. 滴加5 N NaOH(约0.2 ml),调节pH值至7.0。

4. 加去离子水将培养基定容至1 L。

5. 高温高压灭菌后,4℃保存。

■组份浓度0.5%(W/V)Yeast Extract1%(W/V)NZ胺0.5%(W/V)NaCl0.2%(W/V) MgSO4·7H2O■配制方法 NZYM培养基除不含Casamino Acid(酪蛋白氨基酸)外,其他成份与NZCYM培养基相同。

■组份浓度1%(W/V)NZ胺0.5%(W/V)NaCl0.2%(W/V) MgSO4·7H2O■配制方法 NZM培养基除不含Yeast Extract(酵母提取物)外,其他成份与NZYM培养基相同。

一般固体培养基的配制LB/Amp/X-Gal/IPTG 平板培养基■配制方法 1. 按照液体培养基配方准备好液体培养基,在高温高压灭菌前,加入下列试剂中的一种。

Agar(琼脂:铺制平板用) 15 g/LAgar(琼脂:配制顶层琼脂用) 7 g/LAgarose(琼脂糖:铺制平板用) 15 g/LAgarose(琼脂糖:配制顶层琼脂用) 7 g/L2. 高温高压灭菌后,戴上手套取出培养基,摇动容器使琼脂或琼脂糖充分混匀(此时培养基温度很高,小心烫伤)。

3. 待培养基冷却至50~60℃时,加入热不稳定物质(如抗生素等),摇动容器充分混匀。

4. 铺制平板(30~35 ml培养基/90 mm培养皿)。

■组份浓度1%(W/V)Tryptone0.5%(W/V) Yeast Extract1%(W/V) NaCl0.1 mg/ml Ampicillin0.024 mg/ml IPTG0.04 mg/ml X-Gal1.5%(W/V)Agar■配制量 1 L■配制方法 1. 称取下列试剂,置于1 L烧杯中。

Tryptone 10 gYeast Extract 5 gNaCl 10 g2. 加入约800 ml的去离子水,充分搅拌溶解。

3. 滴加5 N NaOH(约0.2 ml),调节pH值至7.0。

4. 加去离子水将培养基定容至1 L后,加入15 g Agar。

5. 高温高压灭菌后,冷却至60℃保存。

6. 加入1 ml Ampicillin(100 mg/ml)、1 ml IPTG(24mg/ml)、2 ml X-Gal(20 mg/ml)后均匀混合。

7. 铺制平板(30~35 ml培养基/90 mm培养皿)。

8. 4℃避光保存。

TB/Amp/X-Gal/IPTG 平板培养基■组份浓度 1.2%(W/V)Tryptone2.4%(W/V) Yeast Extract0.4%(W/V)Glycerol17 mM KH2PO472 mM K2HPO40.1 mg/ml Ampicillin0.024 mg/ml IPTG0.04 mg/ml X-Gal1.5%(W/V)Agar■配制量 1 L■配制方法 1. 配制磷酸盐缓冲液(0.17 M KH2PO4,0.72 M K2HPO4)100 ml。

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