细胞表型实验介绍ppt
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实验方案-细胞表型检测
细胞表型检测1 材料与方法1.1 实验材料1.1.1 供试品名称：人胎盘间充质干细胞、猴胎盘间充质干细胞的P4、P6、P8细胞1.1.2 主要试剂B液自配天津昂赛细胞基因工程有限公司D液自配天津昂赛细胞基因工程有限公司血清新西兰胎牛血清(特级) 上海依科赛生物制品有限公司 IgG-FITC BD公司货号：555748CD19-FITC BD公司货号：555412CD34-FITC BD公司货号：555821CD44- FITC BD公司货号：CD31- FITC BD公司货号：IgG-PE BD公司货号：555749CD11b-PE BD公司货号：555483CD45-PE BD公司货号：555388CD73-PE BD公司货号：550257CD90-PE BD公司货号：555596CD105-PE Serotec公司货号：MCA1557PEHLA-DR-PE BD公司货号：555812CD29-PE BD公司货号：1.1.3 主要仪器CO2培养箱离心机超净工作台显微镜1.1.4 主要耗材50ml离心管、5ml/10ml移液管、1.5ml EP管。
1.1.5 实验设计依据通过传代培养，我们可以得到相对纯的间充质干细胞，参考国际细胞治疗协会提出的间充质干细胞表型方面的标准，CD73、CD90和CD105阳性率不低于95％；CD45、CD34、CD11b、CD19 和HLA-DR阳性率不高于2％[1]。
检测在传代过程中的细胞的表型是否会发生变化。
我们设计检测P4代、P6和P8代细胞表型。
1.2 实验方法1.2.1细胞消化1、将原培养液倒净,用移液管取D液10ml冲洗细胞，倒净,此操作重复洗2 次；2、用移液管吸取加入B液2ml,盖上培养瓶盖子,摇晃使B液均匀覆盖瓶底,待细胞从培养壁脱落下来；3、用移液管吸取加入C液0.5ml, 终止消化，再加D液10ml，吹打细胞制成细胞悬液，将细胞悬液收集至离心管中；1.2.2 流式检测方法1、收集细胞，1000rpm离心5min，用D液洗一次，过滤；2、用适量D液将细胞重悬，100μl每管分装到1.5mlEP管中，每管细胞不少于用1×105，在每管中加入4μl要检测表型的抗体,室温避光放置30min；加入1mlD液混匀，离心弃上清，再用1mlD液混匀，离心弃上清，每管加入350-500μl D液重悬，移入流式管待测即可；3、用流式细胞仪检测荧光值,每管计数3000-10000个细胞；4、分析数据。
细胞生物学实验技术一 ppt课件
– 体内：神经和体液的调节、细胞间相互影响 – 体外：缺乏动态平衡的稳定环境 – 发生的变化
• 分化现象减弱 • 形态功能趋于单一化 • 一定时间后死亡或者转化获得不死性
细胞生物学实验技术一
• 体外培养的细胞仍具有研究的意义
– 许多性状仍与体内相同
• 如体外培养的心肌细胞仍可博动，
– 细胞在培养中的表现，存在相应基因关闭／ 开启引起的现象，在培养的细胞中某些特定 功能的丧失，可为该基因的表达与调控提供 线索。
细胞生物学实验技术一
• 成纤维细胞型
– 梭型或不规则三角形，生长时呈放射状。 – 除真正的成纤维细胞外，凡由中胚层间充质起源的组织，
如心肌、平滑肌、成骨细胞、血管内皮等常呈本型状态。 – 凡培养中形态与成纤维类似时皆可称为成纤维细胞。
细胞生物学实验技术一
细胞生物学实验技术一
– 上皮型细胞： • 扁平不规则多角形，彼此紧密相连。生长时呈膜状移动， 细胞很少单独行动。 • 起源于内、外胚层的细胞如皮肤表皮及其衍生物、消化 管上皮、肝胰、肺泡上皮等皆成上皮型形态。
细胞生物学实验技术一
细胞生物学实验技术一
组织块接种：牛胎儿成纤维细胞
细胞生物学实验技术一
• 传代期：
– 原代培养细胞一经传代后便改称做细胞系 （Cell Line）。此期的持续时间最长。
– 在培养条件较好情况下，细胞增殖旺盛，并 能维持二倍体核型。
– 为保持二倍体细胞性质，细胞应在原代培养 期或传代后早期冻存。
• 特点
– 细胞群是异质的（Heterogeneous） – 细胞克隆形成率（Cloning Efficiency）低，即细胞独立生
存性差。 – 由于原代培养细胞和体内细胞性状相似性大，是检测药物很
• 分化现象减弱 • 形态功能趋于单一化 • 一定时间后死亡或者转化获得不死性
细胞生物学实验技术一
• 体外培养的细胞仍具有研究的意义
– 许多性状仍与体内相同
• 如体外培养的心肌细胞仍可博动，
– 细胞在培养中的表现，存在相应基因关闭／ 开启引起的现象，在培养的细胞中某些特定 功能的丧失，可为该基因的表达与调控提供 线索。
细胞生物学实验技术一
• 成纤维细胞型
– 梭型或不规则三角形，生长时呈放射状。 – 除真正的成纤维细胞外，凡由中胚层间充质起源的组织，
如心肌、平滑肌、成骨细胞、血管内皮等常呈本型状态。 – 凡培养中形态与成纤维类似时皆可称为成纤维细胞。
细胞生物学实验技术一
细胞生物学实验技术一
– 上皮型细胞： • 扁平不规则多角形，彼此紧密相连。生长时呈膜状移动， 细胞很少单独行动。 • 起源于内、外胚层的细胞如皮肤表皮及其衍生物、消化 管上皮、肝胰、肺泡上皮等皆成上皮型形态。
细胞生物学实验技术一
细胞生物学实验技术一
组织块接种：牛胎儿成纤维细胞
细胞生物学实验技术一
• 传代期：
– 原代培养细胞一经传代后便改称做细胞系 （Cell Line）。此期的持续时间最长。
– 在培养条件较好情况下，细胞增殖旺盛，并 能维持二倍体核型。
– 为保持二倍体细胞性质，细胞应在原代培养 期或传代后早期冻存。
• 特点
– 细胞群是异质的（Heterogeneous） – 细胞克隆形成率（Cloning Efficiency）低，即细胞独立生
存性差。 – 由于原代培养细胞和体内细胞性状相似性大，是检测药物很
细胞生物学实验PPT课件
细胞生物学实验ppt课件
目录
• 引言 • 细胞生物学基础知识 • 实验操作流程 • 实验结果分析 • 结论
01 引言
实验目的
01
02
03
04
掌握细胞生物学的基本 实验技能
了解细胞的结构和功能
学习细胞培养和细胞转 染技术
探究细胞信号转导的机 制
实验背景
细胞是生命的基本单位，是生物体结 构和功能的基础
能量转换
细胞中的线粒体和叶绿体 可以将光能或化学能转换 为细胞可利用的ATP等能 量形式。
信息传递
细胞通过分泌化学信号和 电信号传递信息，协调各 种生理活动。
细胞的生命活动
细胞分裂
通过有丝分裂和减数分裂，细胞 可以复制自身并产生新的子细胞。
细胞分化
在发育过程中，细胞会逐渐失去其 全能性，并获得特定的功能和形态。
定性分析
根据实验结果，对实验现象进行解释 和推理，探究可能的机制和影响因素 。
结果解读与讨论
结果解读
根据实验结果，结合理论知识，对实验结果进行解释和解读，明确实验目的和 结论。
结果讨论
对实验结果进行深入讨论，探讨实验的局限性和改进方向，提出可能的假设和 研究方向。
05 结论
实验总结
实验目的
通过实验，学生能够掌握细胞生物学的基本实验技能，了 解细胞的结构和功能，以及细胞的生命活动规律。
实验步骤
实验包括细胞培养、显微观察、细胞计数等步骤，每个步 骤都有详细的操作说明和注意事项。
实验原理
实验涉及细胞培养、显微观察、细胞计数等技术，通过这 些技术，学生可以深入了解细胞的结构和功能，以及细胞 分裂、分化等生命活动过程。
实验结果
实验结果清晰，学生能够观察到细胞的形态、结构和功能 ，并得出准确的实验结论。
目录
• 引言 • 细胞生物学基础知识 • 实验操作流程 • 实验结果分析 • 结论
01 引言
实验目的
01
02
03
04
掌握细胞生物学的基本 实验技能
了解细胞的结构和功能
学习细胞培养和细胞转 染技术
探究细胞信号转导的机 制
实验背景
细胞是生命的基本单位，是生物体结 构和功能的基础
能量转换
细胞中的线粒体和叶绿体 可以将光能或化学能转换 为细胞可利用的ATP等能 量形式。
信息传递
细胞通过分泌化学信号和 电信号传递信息，协调各 种生理活动。
细胞的生命活动
细胞分裂
通过有丝分裂和减数分裂，细胞 可以复制自身并产生新的子细胞。
细胞分化
在发育过程中，细胞会逐渐失去其 全能性，并获得特定的功能和形态。
定性分析
根据实验结果，对实验现象进行解释 和推理，探究可能的机制和影响因素 。
结果解读与讨论
结果解读
根据实验结果，结合理论知识，对实验结果进行解释和解读，明确实验目的和 结论。
结果讨论
对实验结果进行深入讨论，探讨实验的局限性和改进方向，提出可能的假设和 研究方向。
05 结论
实验总结
实验目的
通过实验，学生能够掌握细胞生物学的基本实验技能，了 解细胞的结构和功能，以及细胞的生命活动规律。
实验步骤
实验包括细胞培养、显微观察、细胞计数等步骤，每个步 骤都有详细的操作说明和注意事项。
实验原理
实验涉及细胞培养、显微观察、细胞计数等技术，通过这 些技术，学生可以深入了解细胞的结构和功能，以及细胞 分裂、分化等生命活动过程。
实验结果
实验结果清晰，学生能够观察到细胞的形态、结构和功能 ，并得出准确的实验结论。
细胞实验技术课堂PPT第九讲细胞培养总结
D 0.051 2.632 2.681 2.681 2.611 2.484 2.438 2.545 2.502 0.061 0.052 0.057 450
E 0.051 2.652 2.661 2.617 2.448 2.579 2.641 2.665 2.62 0.05 0.051 0.049 450
（二）细胞培养常用试剂
1：水
细胞培养用水必须非常纯净，不含有离子和其他的杂质。 需要用新鲜的双蒸水、三蒸水或超纯水
2：细胞培养基
• 市场上可提供干粉培养基和液体培养基 • 常用的培养基种类
– RPMI-1640、高糖DMEM、低糖DMEM、F12 等
细胞培养基应用选择
• 选择培养基没有一定的标准，有几点建议可供参考： •
储存温度 杀灭细菌
-20℃
G(+)
-20℃
G(+) , G(-)
-20℃ G(+) , G(-), 支原体
-20℃
真菌
-20℃
真菌
（三）、器材和液体的准备
• 细胞培养用的玻璃器材
– 培养瓶、吸管等在清洗干净以后，装在铝盒和铁筒 中，160℃，2小时干烤灭菌后备用
• 手术器材、瓶塞、配制好的PBS液
21 A 0.215 B 0.042 C 0.042 D 0.045 E 0.07 F 0.041 G 0.045 H 0.042
2 0.042 1.979 2.085 2.096 2.26 2.22 2.323 0.044
3
4
G
0.2573 0.1023 0.2913 0.0693 0.2773 0.1063 0.2643 0.1123 0.0013 0.0013
H
观察动植物细胞的结构实验(共24张PPT)
观察动植物细胞
能否将一个洋葱或黄瓜直接放到显微镜下观察呢?
要看得清楚被观察的物体,应该要让被观察的材料具备什么样 的条件?
薄而透明
玻片标本类型
玻片标本
切片
涂片
装片
用从生物体上切取的薄片制成
用液体的生物材料经过涂抹制成 用从生物体上撕下或挑取的少量材料制成 （非常微小的生物可直接做成装片）
按存放的时间
临时的 不可长期保存 永久的 可长期保存
观察植物细胞
实验:制作并观察植物细胞临时装片（洋葱）
（一）目的要求
（二）材料用具
（三）方法步骤
（一）目的要求:
☆制作植物细胞临时装片，学习制作临时装片的基本方法。 ☆认识植物细胞的基本结构。 ☆练习画细胞结构简图。
（二）材料用具:
洋葱鳞片叶，清水，碘液，镊子，滴管，纱布，吸水纸，载 玻片，盖玻片，显微镜。
制作洋葱鳞片叶内表皮细胞临时装片
① 把一滴碘液滴在盖玻片的一侧进行染色。
生理盐水与人体内细胞液浓度差不多,可以保持人体细胞的生活状态，由于无细胞壁，若使用清水会使细胞由于吸水而破裂。
为什么要染色？所有细胞都需要染色吗？
制作洋葱鳞片叶内表皮细胞临时装片
动植物细胞结构的异同点
不是所有的植物细胞都有叶绿体
擦 滴 刮 涂盖
染吸
染吸
植物: 细胞膜 细胞核 细胞质 线粒体 细胞壁 叶绿体 液泡 动物: 细胞膜 细胞核 细胞质 线粒体
制作洋葱鳞片叶内表皮细胞临时装片
显微镜视野中的洋葱内表皮细胞
用从生物体上撕下或挑取的少量材料制成
① 用镊子从洋葱鳞片叶内侧撕取一小块透明薄膜──内表皮。
边缘较黑较宽，圆形或椭圆形,大小不一
制作人的口腔上皮细胞临时装片 用吸水纸从盖玻片的另一侧吸引，使碘液浸润标本的全部。
能否将一个洋葱或黄瓜直接放到显微镜下观察呢?
要看得清楚被观察的物体,应该要让被观察的材料具备什么样 的条件?
薄而透明
玻片标本类型
玻片标本
切片
涂片
装片
用从生物体上切取的薄片制成
用液体的生物材料经过涂抹制成 用从生物体上撕下或挑取的少量材料制成 （非常微小的生物可直接做成装片）
按存放的时间
临时的 不可长期保存 永久的 可长期保存
观察植物细胞
实验:制作并观察植物细胞临时装片（洋葱）
（一）目的要求
（二）材料用具
（三）方法步骤
（一）目的要求:
☆制作植物细胞临时装片，学习制作临时装片的基本方法。 ☆认识植物细胞的基本结构。 ☆练习画细胞结构简图。
（二）材料用具:
洋葱鳞片叶，清水，碘液，镊子，滴管，纱布，吸水纸，载 玻片，盖玻片，显微镜。
制作洋葱鳞片叶内表皮细胞临时装片
① 把一滴碘液滴在盖玻片的一侧进行染色。
生理盐水与人体内细胞液浓度差不多,可以保持人体细胞的生活状态，由于无细胞壁，若使用清水会使细胞由于吸水而破裂。
为什么要染色？所有细胞都需要染色吗？
制作洋葱鳞片叶内表皮细胞临时装片
动植物细胞结构的异同点
不是所有的植物细胞都有叶绿体
擦 滴 刮 涂盖
染吸
染吸
植物: 细胞膜 细胞核 细胞质 线粒体 细胞壁 叶绿体 液泡 动物: 细胞膜 细胞核 细胞质 线粒体
制作洋葱鳞片叶内表皮细胞临时装片
显微镜视野中的洋葱内表皮细胞
用从生物体上撕下或挑取的少量材料制成
① 用镊子从洋葱鳞片叶内侧撕取一小块透明薄膜──内表皮。
边缘较黑较宽，圆形或椭圆形,大小不一
制作人的口腔上皮细胞临时装片 用吸水纸从盖玻片的另一侧吸引，使碘液浸润标本的全部。
常用检测肿瘤细胞表型的实验手段及原理
常用检测肿瘤细胞表型的实验手段及原理
常用检测肿瘤细胞表型的实验手段主要包括细胞免疫表型分析、蛋白质表达诸分析和基因表达诸分析等。
1.细胞免疫表型分析:通过检测肿瘤细胞表面的抗原标记物，可以确定肿瘤细胞的免疫表型，从而了解肿瘤细胞的免疫应答和免疫逃逸机制。
2.蛋白质表达诸分析:通过比较肿瘤细胞和正常细胞之间的蛋白质表达谱，可以发现与肿瘤发生、发展相关的差异表达蛋白质，进-步揭示肿瘤细胞的生物学特征。
3.基因表达诸分析:通过检测肿瘤细胞和正常细胞之间的基因表达诸，可以发现与肿瘤发生、发展相关的差异表达基因，从而了解肿瘤细胞的基因组特征。
这些实验手段的原理主要是基于分子生物学和生物信息学的方法，通过对肿瘤细胞表面或内部的分子进行检测和分析。
从而获得肿瘤细胞的表型信息。
这些信息对于理解肿瘤细胞的生物学特征、寻找新的治疗靶点以及评估治疗效果具有重要意义。
细胞表型实验介绍PPT课件
6
第6页/共23页
荧光信号
荧光强度（FL）：细胞上的荧光染料被激光激发后发射出的荧光，不同的荧光 染料其发射波长不同。 有荧光标记的细胞与无荧光标记的区分开来（阴阳） 高FL细胞与低FL细胞区分开来（强弱） 一般的流式细胞仪只装有一个激光光源（488nm），可测出三个FL，即FL1、 FL2、FL3。
UL：上左区；一般认为是死亡细胞, UR：上右区；认为是晚期凋亡细胞, LL：下左区； 正常阴性细胞, LR：下右区; 早期凋亡细胞,
12
第12页/共23页
2.细胞迁移
• 划痕实验:细胞划痕法是测定了肿瘤细胞的运动特性的方法之一。 在体外培养的单层细胞上，划痕致伤，然后在加入药物等实验条 件下观察其对肿瘤细胞迁移的影响。
• 细胞侵袭
实验实例：孵育24h
17
第17页/共23页
4.细胞增殖（克隆形成）
单个细胞在体外增殖6代以上（时间约1周以上），其后代所组 成的细胞群体，成为集落或克隆。每个克隆含有50个以上的细胞， 大小在0.3-1.0mm之间。集落形成率表示细胞的独立生存能力强弱。 细胞培养环境的改变或药物、基因等外源性因素的作用能导致细胞 克隆形成能力以及细胞集落的大小发生改变。
目录
1. 研究内容目的与意义 2. 实验原理 3. 实验过程 4. 结果分析
1
第1页/共23页
细胞表型实验
• 定义：由基因型所产生的细胞的物理表观和可观察到的性质。 • 研究主要内容：细胞凋亡、周期、迁移、侵袭、趋化、增殖、生
长等。 • 细胞表型分析目的意义： 检测细胞的表型，可以帮助了解相关
基因、蛋白、药物的机理，是科学研究不可或缺的手段。
2
第2页/共23页
1.细胞凋亡、周期
第6页/共23页
荧光信号
荧光强度（FL）：细胞上的荧光染料被激光激发后发射出的荧光，不同的荧光 染料其发射波长不同。 有荧光标记的细胞与无荧光标记的区分开来（阴阳） 高FL细胞与低FL细胞区分开来（强弱） 一般的流式细胞仪只装有一个激光光源（488nm），可测出三个FL，即FL1、 FL2、FL3。
UL：上左区；一般认为是死亡细胞, UR：上右区；认为是晚期凋亡细胞, LL：下左区； 正常阴性细胞, LR：下右区; 早期凋亡细胞,
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2.细胞迁移
• 划痕实验:细胞划痕法是测定了肿瘤细胞的运动特性的方法之一。 在体外培养的单层细胞上，划痕致伤，然后在加入药物等实验条 件下观察其对肿瘤细胞迁移的影响。
• 细胞侵袭
实验实例：孵育24h
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4.细胞增殖（克隆形成）
单个细胞在体外增殖6代以上（时间约1周以上），其后代所组 成的细胞群体，成为集落或克隆。每个克隆含有50个以上的细胞， 大小在0.3-1.0mm之间。集落形成率表示细胞的独立生存能力强弱。 细胞培养环境的改变或药物、基因等外源性因素的作用能导致细胞 克隆形成能力以及细胞集落的大小发生改变。
目录
1. 研究内容目的与意义 2. 实验原理 3. 实验过程 4. 结果分析
1
第1页/共23页
细胞表型实验
• 定义：由基因型所产生的细胞的物理表观和可观察到的性质。 • 研究主要内容：细胞凋亡、周期、迁移、侵袭、趋化、增殖、生
长等。 • 细胞表型分析目的意义： 检测细胞的表型，可以帮助了解相关
基因、蛋白、药物的机理，是科学研究不可或缺的手段。
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1.细胞凋亡、周期
细胞培养实验课件(共16张PPT)
用柱形图预测A、B、C三组细胞增殖情况（至 少表示3次检测结果）。
细胞数
A组 B组 C组
0
时间
物质P对细菌X增殖影响示意图
• 若物质P能极大缩短分裂间期，从而促进动
物细胞增殖，请画出实验组与对照组细胞数
量与分裂指数曲线示意图（*17年11月改）
细胞数
③
①
分裂指数
④
② ①实验组细胞数
②对照组细胞数
细胞数量与细胞总数
2、同位素示踪法：通常在培养液中加入同位 素标记的物质是_胸__腺__嘧__啶_脱__氧__核_苷__，原因是 _胸__腺_嘧__啶__脱_氧__核__苷__是_D__N_A_合_成__的__原__料_，__其__进__入_细__胞_
的量可反映细胞的增殖情况
（*11年高考、17年11月）
细菌增殖的检测方法？
1、血细胞计数板计数法 2、利用浑浊度估测法 3、平板菌落计数法 （详见课后思考）
亚硝酸盐的检测方法：
• 应先对培养后细菌进行___破__碎___处理， ___离__心____或__过__滤______，取上清液或滤液， 加入对氨基苯磺酸和__N_-1_-_萘__基_乙__二__胺__并进行
（2）溶液中物质或结构分离纯化的常用方法 有哪些？ 离心、过滤、沉淀、虹吸、层析等
（详见课后思考）
• 请简要说出2种检测荚膜的方法（具体操作 不要求）
法一：将细菌X悬液制成临时装片，用显微镜 观察
法二：将细菌X悬液接种到固体平板上，观察 单菌落的特征
实验分组？（*12年高考、16年4月）
• A组：细菌X悬液+培养液 • B组：细菌X悬液+培养液+物质P
甲状腺功能 脊蛙反射分析 细菌M培养过程中细胞数、酶浓度变化 不同浓度NaCl对肝细胞体积与数量的影响 生物制剂W对细菌B增殖的影响 甲状腺与甲状腺激素的功能 利用染色剂鉴定细胞种数 药物甲、药物乙对海拉细胞增殖的影响 海拉细胞增殖研究（多种检测技术） 细胞计数、血糖调节、甲状腺功能、二次免疫 脊蛙反射分析
细胞数
A组 B组 C组
0
时间
物质P对细菌X增殖影响示意图
• 若物质P能极大缩短分裂间期，从而促进动
物细胞增殖，请画出实验组与对照组细胞数
量与分裂指数曲线示意图（*17年11月改）
细胞数
③
①
分裂指数
④
② ①实验组细胞数
②对照组细胞数
细胞数量与细胞总数
2、同位素示踪法：通常在培养液中加入同位 素标记的物质是_胸__腺__嘧__啶_脱__氧__核_苷__，原因是 _胸__腺_嘧__啶__脱_氧__核__苷__是_D__N_A_合_成__的__原__料_，__其__进__入_细__胞_
的量可反映细胞的增殖情况
（*11年高考、17年11月）
细菌增殖的检测方法？
1、血细胞计数板计数法 2、利用浑浊度估测法 3、平板菌落计数法 （详见课后思考）
亚硝酸盐的检测方法：
• 应先对培养后细菌进行___破__碎___处理， ___离__心____或__过__滤______，取上清液或滤液， 加入对氨基苯磺酸和__N_-1_-_萘__基_乙__二__胺__并进行
（2）溶液中物质或结构分离纯化的常用方法 有哪些？ 离心、过滤、沉淀、虹吸、层析等
（详见课后思考）
• 请简要说出2种检测荚膜的方法（具体操作 不要求）
法一：将细菌X悬液制成临时装片，用显微镜 观察
法二：将细菌X悬液接种到固体平板上，观察 单菌落的特征
实验分组？（*12年高考、16年4月）
• A组：细菌X悬液+培养液 • B组：细菌X悬液+培养液+物质P
甲状腺功能 脊蛙反射分析 细菌M培养过程中细胞数、酶浓度变化 不同浓度NaCl对肝细胞体积与数量的影响 生物制剂W对细菌B增殖的影响 甲状腺与甲状腺激素的功能 利用染色剂鉴定细胞种数 药物甲、药物乙对海拉细胞增殖的影响 海拉细胞增殖研究（多种检测技术） 细胞计数、血糖调节、甲状腺功能、二次免疫 脊蛙反射分析
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2020/2/8
18Байду номын сангаас
4.细胞增殖（克隆形成）
单个细胞在体外增殖6代以上（时间约1周以上），其后代所组 成的细胞群体，成为集落或克隆。每个克隆含有50个以上的细胞， 大小在0.3-1.0mm之间。集落形成率表示细胞的独立生存能力强弱。 细胞培养环境的改变或药物、基因等外源性因素的作用能导致细胞 克隆形成能力以及细胞集落的大小发生改变。
细胞感染
克隆形成
细胞固定
克隆计数
细胞染色
2020/2/8
19
5.细胞生长（MTT法）
MTT法原理
MTT比色法：是一种检测细胞存活和生长的方法。 原理：活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的 蓝紫色结晶甲瓒（Formazan）并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。 二甲基亚砜（DMSO）能溶解细胞中的甲瓒，用酶联免疫检测仪490nm波 长处测定其吸光值，可间接反映活细胞数量。
2020/2/8
8
荧光信号与细胞特性
荧光染料被激发而发射的光信号。
定量染色 荧光信号大小 被标记组分含量的定量
多荧光标记胞内多种组分，实现多参数测量
2020/2/8
9
激光束 侧向散射光， 荧光
细胞
前向散 射光
收集透镜
二色镜
1
2
3
带通滤波片 光电倍增管
2020/2/8
10
流式结果分析
散点图
密度图
细胞表型实验介绍
2018
2018年8月30日
目录
1. 研究内容目的与意义 2. 实验原理 3. 实验过程 4. 结果分析
2020/2/8
2
细胞表型实验
• 定义：由基因型所产生的细胞的物理表观和可观察到的性质。 • 研究主要内容：细胞凋亡、周期、迁移、侵袭、趋化、增殖、生长等。 • 细胞表型分析目的意义： 检测细胞的表型，可以帮助了解相关基因、
BD-Calibur
BD FACSVantage
2020/2/8
5
流式细胞作用机制
鞘液
液
流
Fluorescence signals
系 统
Focused laser beam
喷嘴
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分 析 系 统 光 学 系 统
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流式细胞仪可检测到的细胞参数
非荧光信号
颗粒度 细胞大小
前向角散射光（FSC）细胞相对大小及其表面积。 侧向角散射光（SSC）细胞颗粒度及细胞内细胞器的相对复杂性
ps:磷脂酰丝氨酸 Annexin-V:Ca2+依赖性磷脂 结合蛋白
UL：上左区；一般认为是死亡细胞, UR：上右区；认为是晚期凋亡细胞, LL：下左区； 正常阴性细胞, LR：下右区; 早期凋亡细胞,
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2.细胞迁移
• 划痕实验:细胞划痕法是测定了肿瘤细胞的运动特性的方法之一。在 体外培养的单层细胞上，划痕致伤，然后在加入药物等实验条件下观 察其对肿瘤细胞迁移的影响。
SDH
MTT
甲
瓒
DMSO
490nm测定OD值
在一定细胞数范围内，MTT结晶形成的量与细胞数成正比。
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• MTT实验 比较转入miR-29c的细胞和空载细胞6d中的增殖能力，各做5个重复。
边缘各孔加200uL PBS液，防止蒸发。
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结果记录 结果处理
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Transwell
这是一类有通透性的杯状的装置，杯子底层的一张有通透性的膜， 这层膜带有微孔，孔径大小有0.1－12.0µm，根据不同需要可用不同材料， 一般常用的是聚碳酸酯膜（polycarbonate membrane）。
Transwell 小室
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• 细胞侵袭 实验实例：孵育24h
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荧光信号
荧光强度（FL）：细胞上的荧光染料被激光激发后发射出的荧光，不同的荧光 染料其发射波长不同。
有荧光标记的细胞与无荧光标记的区分开来（阴阳） 高FL细胞与低FL细胞区分开来（强弱）
一般的流式细胞仪只装有一个激光光源（488nm），可测出三个FL，即FL1、 FL2、FL3。
①
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②
③
④
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3.细胞侵袭
细胞侵袭:研究肿瘤细胞的侵袭能力或特定情况下肿瘤细胞的侵袭 能力。在聚碳酸酯膜上涂上一层基质胶，模仿细胞外基质，上室种肿瘤 细胞，下室加入FBS或实验设定的药物或者影响因子，肿瘤细胞在侵袭 能力较强的情况下，会分泌相关酶类消化基质胶，从而从上室迁移到下 室，通过计数进入下室的细胞量测定细胞的侵袭能力。
二维等高图
直方图
报告中常见的几种流式细胞图
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细胞周期
流式细胞仪PI染色法检测细胞周期
PI：碘化丙啶
细胞内的DNA和RNA都可以和PI结合,实验前需用RNase将RNA消化后进行检测。
细胞培养
细胞周 期同步
细胞加药
细胞固定
数据分析
流式上机
PI染色
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细胞凋亡
Annexin V/PI双染法检测 细胞凋亡
•细胞凋亡是指为维持内环境稳定，由基因控制的细胞自主的有序的 死亡。细胞凋亡不仅是一种特殊的细胞死亡类型，而且具有重要的生 物学意义及复杂的分子生物学机制。
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流式细胞术
1定义：是以流式细胞仪为检测手段的一项能快速、精确的对单个细胞理化特性 进行多参数定量分析和分选的新技术。 2.特点 测量速度快，每秒钟能测数千个乃至上万个细胞 可进行多参数测量 在分析的同时可把具有指定特征的细胞分离出来，即分选技术。
蛋白、药物的机理，是科学研究不可或缺的手段。
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1.细胞凋亡、周期
•细胞周期（cell cycle）是指细胞从一次分裂完成开始到下一次分裂结 束所经历的全过程，分为间期与分裂期两个阶段。依次经过G1-SG2/M，不同时期的细胞内部经历精确的调控，反应相应的机理。研 究细胞周期的变化，有利于了解基因、蛋白、药物对细胞周期产生的 影响，进而指导科研工作。