RNA提取方法汇总-2017年度
RNA提取心得(组织RNA提取和培养细胞的RNA提取)
一.组织RNA提取1.最好新鲜组织，这样RNA提取的效果比较好，这是肯定的。
2. 如果不是新鲜的（最好在半年之内，-80℃或者液氮中冻存的）组织，注意不要反复冻融，从冰冻状态拿到0-4℃，注意不要拿到常温，待组织解冻后，用 DEPC泡过的剪刀剪一小块组织，称重后，放到预冷的匀浆器中，然后加入一定量的TRIZOL试剂，然后匀浆。
注意：速度不要太快，要匀一会挺一会，否则由于摩擦产热，RNA遇热会加速降解。
如果一次做多个标本的RNA提取，也要这样做，更不能急。
后面的步骤和细胞RNA提取一样。
二.培养细胞的RNA提取1.贴壁细胞，需要先用胰酶消化后，然后收集到离心管中，离心，去上清，然后用PBS多洗2-3次，以去除多余的胰酶。
悬浮细胞，直接用吸管或者加样枪吹打评壁，以使细胞基本可以被吹下来。
然后离心去上清，不需要用PBS洗。
2.然后将少量细胞悬液转移到预冷的DEPC泡过的1.5毫升EP管中，然后加入一定量的TRIZOL(细胞多的话加1毫升，细胞少的话加0.5毫升就可以)，然后用枪头吹打混匀5-10分钟。
（如果有时间就继续往下做，如果没有时间，可以把加了TRIZOL后的细胞裂解液冻存到-80℃，用的时候提取和新的提取的效果一样。
）在冰上操作。
3.上面的混匀5-10 分钟，基本可以使细胞裂解，然后可以进行下面的步骤，详细的步骤我就不介绍了。
我只介绍一些需要注意的地方。
1.一定要注意冰上操作，低温离心。
2.戴口罩和勤换手套，去任何东西都要带着手套去取。
3.每次去器材的时候都要用镊子去夹，镊子要在酒精灯上烧一下。
4.所有的器材都要经过DEPC浸泡后高压后才可以使用，所需要的氯仿，酒精，异丙醇等都保证没有被RNA 酶污染，不能用没有泡过DEPC的枪头去提取液体，一定要用DEPC浸泡过的枪头去吸，如果发现试剂有可能被污染了，要立即更换。
5. 吸取上清一定不要吸到中间层的蛋白，如果吸到蛋白一定要重新用氯仿抽提，因为，吸到的蛋白很可能会对RNA产生降解作用。
rna的提取方法
rna的提取方法
1.细胞或组织的采集：采集样品时应尽量避免RNA的降解或污染，可使用RNase-free工具和试剂，避免手套和工作表面受到RNase污染。
2. 细胞或组织的破碎：可使用机械方法、化学方法或冻融法等
方法将细胞或组织破碎，释放RNA。
3. RNA的纯化：RNA的纯化可使用酚/氯仿法、商用RNA纯化试
剂盒等方法。
其中，酚/氯仿法是最常用的RNA纯化方法。
该方法利
用酚将RNA从DNA和蛋白质中分离，然后通过氯仿的密度梯度离心分离出RNA。
4. RNA的质量检测：RNA的纯化后，需要进行质量检测，以确保RNA的完整性和纯度。
可使用紫外线吸收法、琼脂糖凝胶电泳等方法进行检测。
5. RNA的保存：RNA的保存应避免RNA降解，需使用RNase-free 的保存液，如RNAlater等，或在零下80℃的冷冻库中保存。
- 1 -。
RNA提取方法总结
RNA提取方法总结这篇文章主要讲的是几种常用的RNA提取方法。
1、异硫氰酸胍氯化铯超速离心法原理：使用蛋白质变性剂异硫氰酸胍有效抑制RNA酶的活性，经过起始密度为 1.78g/ml的氯化铯介质，进行密度梯度超速离心，RNA 沉淀于管底，而DNA与蛋白质在上清中。
使用这种方法，不但能得到高质量的RNA，而且能同时分离出细胞染色体DNA.本法对于冷冻时间长、细胞质和细胞核不易分离的组织标本以及富含RNA酶的组织细胞(如胰腺)的RNA提取尤其适合。
此法提取的RNA 的质量好和成功率高，已成为提取哺乳动物细胞RNA的常规方法。
其缺点是操作复杂、流程长，一次提取的样品数量有限。
2、盐酸胍-有机溶剂法本法有MacDonald 1987年在Strohman报道的方法基础上改进而成的，适用于没有超速离心及设备的情况下提取细胞总RNA。
它利用盐酸胍抑制RNA酶，匀浆裂解细胞，有机溶剂抽提去除蛋白质，通过选择性沉淀RNA分子而去除DNA，提取的RNA质量较好，但整个操作过程繁杂费时。
3、氯化锂-尿素法本法首先由Auffray报道，利用高浓度尿素变性蛋白质同时抑制RNA 酶，3mol/L LiCl选择性沉淀RNA。
其缺点是有时会存在DNA污染，LiCl 沉淀RNA会丢失一些小分子量的RNA，如5S RNA等。
优点是快速简捷，尤其适用于大量样品少量组织细胞的RNA提取，其质量可以满足Northern分析，Oligo(dT)提取mRNA，SI核酸酶或RNase保护实验等。
本法每提取107个细胞能提取总RNA约10 g。
4、热酚法本法主要用于少量细胞样品RNA提取，其产量不高，但简单易行。
5、快速提取法本法主要用于培养细胞，通过0.5%SDS裂解细胞，酚抽提去除蛋白质和DNA沉淀，快速纯化RNA。
6、细胞质RNA提取法本法主要适用于培养细胞，首先去除细胞核，然后用蛋白酶K消化蛋白质，酚/氯仿抽提去除蛋白质。
操作简单，同时能进行多个样品操作，多数步骤在室温下进行，提取的RNA质量较高，可满足体外无细胞翻译系统、cDNA合成、引物延伸以及核酸酶SI保护实验。
rna提取方法
rna提取方法RNA提取方法。
RNA提取是分子生物学研究中的重要步骤，其质量和纯度直接影响后续实验结果的准确性和可靠性。
在进行RNA提取时，我们需要选择合适的提取方法，并严格按照操作规程进行操作，以确保提取到高质量的RNA样品。
本文将介绍常用的RNA提取方法及其操作步骤，希望能对您的实验工作有所帮助。
1. 常用的RNA提取方法。
（1）酚/氯仿法，这是最常用的RNA提取方法之一，通过酚和氯仿的相分离，将RNA从细胞裂解液中提取出来。
该方法操作简单，适用于大多数样品类型，但需要注意的是酚/氯仿对操作者和环境有一定的危害性，需要在安全通风下进行操作。
（2）硅基柱法，该方法利用硅基柱上的硅胶膜吸附RNA，通过洗脱的方式提取RNA。
该方法操作简便，提取效率高，且对DNA和蛋白质有较好的去除效果，适用于高质量RNA的提取。
（3）磁珠法，磁珠法利用磁珠载体对RNA进行特异性结合，通过磁场的作用实现RNA的分离和提取。
该方法操作简单，易于自动化，且对样品量要求较低，适用于高通量样品的提取。
2. RNA提取操作步骤。
（1）样品裂解，将待提取RNA的样品进行裂解，一般使用细胞裂解液或组织裂解液进行细胞破碎，释放RNA。
（2）酚/氯仿提取，将裂解液与酚/氯仿按比例混合，离心分离出上清液中的RNA。
（3）酒精沉淀，向上清液中加入等体积的异丙醇或乙醇，使RNA沉淀出来，再经过洗涤和干燥步骤得到RNA沉淀物。
（4）溶解RNA，用无DEPC的水或TE缓冲液溶解RNA沉淀物，得到可用于后续实验的RNA样品。
3. 注意事项。
（1）操作环境，在进行RNA提取时，需要在RNase-free的环境下进行操作，避免RNA受到RNase的污染。
（2）样品保存，裂解后的样品需要在-80℃的环境下保存，以避免RNA的降解。
（3）避免污染，在操作过程中需要避免外源RNA的污染，使用RNase-free的试剂和耗材，并注意操作规范。
（4）质量检测，提取得到的RNA样品需要进行质量检测，包括浓度、纯度和完整性的检测，以确保提取到高质量的RNA。
RNA提取方法汇总情况-20171222
CTAB+Licl过夜
植物
三七
根
药用植物提取法
植物
桑树
根、茎、叶、花芽
Trizol、天根试剂盒（花
芽）
植物
桑树
花芽
天根kit
植物
沙冬青
花
CTAB
植物
沙棘
根、茎、叶、果实
Planteasy
植物
沙枣
根
天根试剂盒
植物
山核桃
果仁
CTAB+LiCl
植物
山核桃
种仁
Easyspin kit
植物
山核桃
胚乳
CTAB法+过柱（柱上消
动物
豚鼠
视网膜
TRIzol
动物
耗牛
耳软骨
Trizol+过住
动物
摇蚊
整虫
Trizol
动物
叶蝉
Trizol
动物
夜蛾
Trizol
动物
云南切梢小蠹
虫蛹、幼虫、成虫
TRIzol
动物
肿瘤细胞
Trizol
动物
猪
干细胞、十二指肠、眼
肌、肝脏、心
肌、大脑、巨噬细胞、
肺、肌肉
Trizol
原核和真菌
变色菌
Trizol
原核和真菌
TRIzol
植物
谷子
谷籽、种子
Trizol
植物
桂花
叶
TRIzol
植物
海带
藻体
天根试剂盒
植物
海棠
果实和叶子
天根试剂盒/planteasy
植物
核桃
叶片
planteasy/CTAB/天根试剂
rna的提取方法
rna的提取方法RNA的提取是从生物样品中获取RNA的过程，这个过程通常包括以下几个步骤：1. 样品收集：根据需求选择生物样品，如细胞、组织、血液等，并采用合适的方法收集。
2. 细胞破碎：通过细胞破碎，将细胞内的RNA释放到溶液中。
破碎方法包括机械破碎、超声波破碎、化学破碎等。
3. RNA分离：分离RNA和其他分子，如DNA、蛋白质等。
4. RNA纯化：将RNA纯化，去除杂质，获得高质量RNA。
纯化方法包括硅胶柱层析、离心管基质层析等。
下面详细介绍三种常用的RNA提取方法：1. 酚-氯仿法这种方法可用于组织和细胞的RNA提取。
首先使用酚将细胞或组织破碎，然后加入等体积的氯仿，混匀，使DNA和蛋白质沉淀于底部，RNA在上层水相中得到富集。
再通过异丙醇沉淀，将RNA分离出来。
最后，通过洗涤和纯化过程，得到高质量RNA。
酚-氯仿法是一种经济、简单和高收率的提取RNA的方法。
2. 硅胶柱纯化法该方法是一种高效、快速且高纯度的RNA提取方法，适用于多样品处理。
该方法使用硅胶柱将RNA分离，并消除DNA和酶的污染。
该方法能够从各种样本中提取高品质RNA，可用于测序、杂交和原位杂交等分子生物学应用。
3. 针头粘贴法这种方法是一种快速简单的RNA提取法，特别适用于某些免疫细胞和细胞样品。
利用针头从样品中取出细胞，将其粘贴在聚丙烯酰胺凝胶上，通过离心将RNA分配到凝胶上。
该方法提取RNA量小，但可以高度升质和纯化的RNA，是一种快速且相对简单的RNA提取方法。
总之，根据不同的实验目的，可选择适用于不同的RNA提取方法。
rna提取方法
rna提取方法RNA提取方法。
RNA提取是分子生物学研究中的重要步骤，它能够从细胞或组织中分离出RNA，并为后续的实验和分析提供可靠的样本。
在实验室中，有多种方法可以用来提取RNA，每种方法都有其特点和适用范围。
本文将针对常用的RNA提取方法进行介绍和比较，希望能为科研工作者提供一些参考和帮助。
一、酚/氯仿提取法。
酚/氯仿提取法是一种经典的RNA提取方法，它通过酚和氯仿的相分离特性来分离RNA。
首先，细胞或组织样本被加入到酚中，然后加入氯仿和异丙醇，最后进行离心分离。
这种方法简单易行，适用于大多数样本类型，但对RNA的纯度要求较高，且操作过程中需要注意避免RNA的降解。
二、硅基柱法。
硅基柱法是一种基于硅基质的RNA提取方法，它通过硅基柱的亲和吸附作用来富集RNA。
样本经过细胞裂解后，加入硅基柱柱子进行离心，然后通过洗脱步骤得到纯净的RNA。
这种方法操作简便，适用于高通量提取，但对样本量和纯度要求较高。
三、磁珠法。
磁珠法是一种利用磁珠颗粒来富集RNA的提取方法，它具有操作简便、高效快速的特点。
样本经过裂解后，加入磁珠颗粒进行混合，然后通过磁场分离得到RNA。
这种方法适用于多样本处理和自动化操作，但对磁珠颗粒的选择和配比要求较高。
四、酶法。
酶法是一种利用酶来选择性降解DNA而保留RNA的提取方法，它适用于需要高纯度RNA的实验。
通过加入DNA酶和蛋白酶K来去除DNA和蛋白质，最终得到纯净的RNA。
这种方法操作简便，适用于小样本和特定实验要求，但需要注意酶的活性和浓度控制。
五、TRIzol法。
TRIzol法是一种利用TRIzol试剂来提取RNA的方法，它通过酚-醇混合物和氯仿的相分离特性来富集RNA。
样本经过混合后，加入氯仿进行离心分离，最后得到RNA。
这种方法适用于多种样本类型，但需要注意操作过程中的酚和氯仿的使用安全。
综上所述，不同的RNA提取方法各有特点，科研工作者可以根据实验需求和样本特性选择合适的方法。
RNA的提取总结
一、总的RNA的提取基础知识：(1)DEPC：中文名为焦碳酸二乙酯。
分子式为C6H10O5，分子量为162.14。
是一种强烈的RNA酶抑制剂。
它通过和RNA酶的活性基团组氨酸的咪唑环结合使蛋白质变性，从而抑制酶的活性。
DEPC水一般是指千分之一浓度的DEPC,在搅拌器上搅拌至完全溶解，即看不到“油珠”为止，DEPC气味芳香浓烈，强挥发性，有毒，需在通风橱中操作。
(2)RNA分子：哺乳动物细胞有3种rRNA：28S、18S和5S。
一个典型的哺乳动物细胞含有10-5μg RNA，其中80～85％为rRNA，其余15～20％主要由各种类型的低分子量RNA组成(tRNA、核内小分子RNA等)，这些高丰度的RNA分子具有确定的大小和核苷酸序列、并能用电泳、密度梯度离心、阴离子交换或高效液相层析等技术分离纯化。
mRNA与上述RNA不同，其含量为细胞总RNA的1～5％，大小和核苷酸序列各不相同，从数百至数千碱基不等。
..多数真核细胞mRNA在其3端均有一poly(A）尾，使得mRNA可以通过挂有oligo(dT)-纤维素的亲和层析柱分离纯化，获得的异源性分子集群的总体，可编码细胞内所有的多肽。
RNA酶变性剂RNA酶：水解RNA。
•含有链内二硫键，使其能抵抗长时间的煮沸和温和变性剂。
另外，变性后可迅速折叠，目前，尚无RNA酶失活的简易办法。
•该酶不需要二价阳离子激活，难以被金属离子鳌和剂（EDTA）失活。
——只好避免污染！用强烈变性剂，如盐酸胍或硫氰酸胍溶液能迅速溶解蛋白质，导致细胞结构破碎，核蛋白由于其二级结构的破坏而从核酸上解离下来。
..RNA酶可耐受多种处理(例如煮沸)而不失活，但却会被4 mo1/L硫氰酸胍和β-疏基乙醇等还原剂所灭活。
因此可联用上述试剂，从组织中提取完整无损的RNA实验准备工作：器具和试剂的消毒..（1）尽可能使用无菌、一次性塑料制品，已标明RNase-Free且未开封过的塑料制品，不必再进行其他处理，对于国产塑料制品，应按下列方法进行处理：在一玻璃烧杯中注入含终浓度为0.1%DEPC的去离子水，将要处理的塑料制品浸泡其中12小时以上，弃DEPC水溶液，适温烘烤干燥已处理过的塑料制品，再经103.4kPa，121℃高压灭菌15分钟，70-80℃烘烤干燥即可使用..（2）所用的玻璃器皿，置于干燥烘箱中200℃烘烤2小时以上。
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植物
乌桕
嫩叶
Trizol
植物
香蕉
果肉、果皮、叶片、根
天根试剂盒/异硫氰酸胍二步法
植物
香蕉
嫩叶
planteasy
植物
香雪兰
花序
Planteasy+天根Dnase I处理
植物
小麦
茎秆、叶片、根、花蕊、胚
天根试剂盒/Trizol
植物
小球藻
Trizol
Trizol
植物
小桐子
叶片、芽
天根试剂盒
植物
植物
拟南芥
叶片、幼苗
Trizol
植物
苹果
叶片、果皮、果实
CTAB
植物
葡萄
叶片
CTAB+LiCl、Planteasy
植物
青清过柱（消化DNA）
植物
榕树
雌花
CTAB+Licl过夜
植物
三七
根
药用植物提取法
植物
桑树
根、茎、叶、花芽
Trizol、天根试剂盒（花芽）
植物
桑树
花芽
天根kit
植物
植物
紫萁
叶片
Trizol、天根kit
动物
Hela细胞
Trizol
动物
按蚊
卵巢、细胞、个体
Trizol
动物
白蜡虫
整虫、卵巢
Trizol
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斑马鱼
胚胎、精巢
Trizol
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草地贪夜蛾
Trizol
动物
草鱼
Trizol
动物
赤拟谷盗
Trizol
动物
赤眼蜂
Trizol
动物
刺参
肠道
Trizol
动物
大鲵
性腺
Trizol
原核和真菌
出芽短梗霉
Trizol
原核和真菌
大肠杆菌
Trizol
原核和真菌
稻瘟菌
菌丝
Trizol
原核和真菌
番茄与灰霉
Trizol
原核和真菌
放线菌
菌体
TRIzol+注射器吹打
原核和真菌
柑橘溃疡病菌
菌体
Trizol
原核和真菌
寡孢节丛孢
菌丝
Trizol+注射器
原核和真菌
黑粉菌
孢子、菌丝混合物
Trizol
原核和真菌
植物
马蹄莲
植株
天根试剂盒
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松针
天根试剂盒+RNA clean kit
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梅花
新芽
CTAB+Licl
植物
美人蕉
根
天根试剂盒
植物
棉花
叶片
天根kit/CTAB
植物
棉花
根、茎
CTAB
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木棉
根、茎、叶
天根kit+天根Rnase clean kit
植物
木薯
叶片
天根试剂盒
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苜蓿
叶子、芽
Planteasy
嗜热真菌
菌丝
Trizol
原核和真菌
嗜热真菌
菌丝
Trizol
原核和真菌
嗜铁钩端螺旋菌
Trizol
原核和真菌
腾冲嗜热厌氧菌
Trizol
原核和真菌
突脐蠕孢菌
Trizol
原核和真菌
喜温硫杆菌
TRIzol
原核和真菌
蛹虫草
天根试剂盒
原核和真菌
雨生红球藻
Trizol
叶片
Trizol
植物
梨
花粉、花柱、果肉、芽、果皮
CTAB
植物
栎树
叶片
天根试剂盒
植物
莲花
胚芽、藕
天根试剂盒
植物
裂壶藻
菌体
天根kit
植物
柳穿鱼
叶片、雄蕊、雌蕊、花粉
天根试剂盒
植物
柳树
枝条
Planteasy
植物
龙舌草
叶片
Trizol
植物
龙眼
果实、顶芽
天根试剂盒
植物
罗汉果
果肉
天根试剂盒
植物
马铃薯
叶片
TRIzol
绵羊
黄体
TRIzol
动物
绵羊痒螨兔亚种幼年痒
螨
Trizol
动物
棉铃虫
虫体、中肠
Trizol
动物
棉铃虫、盲蝽
Trizol
动物
牡蛎
Trizol
动物
牡蛎
TRIzol
动物
牛
肌肉、皮脂、肠脂、乳腺、血液
Trizol
动物
疟原虫
Trizol
动物
七鳃鳗
鳃、心
Trizol
动物
青蛤
Trizol
动物
人
癌细胞、间充质干细胞、眼、肺动脉
CTAB+异丙醇+天根Dnase I
植物
浒苔
叶片
TRIzol
植物
花生
叶片
TRIzol
植物
桦树
组培苗、叶片
天根试剂盒+RNA clean kit
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怀山药
茎
天根kit
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黄瓜
果实、叶片、果实表皮
天根试剂盒
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黄麻
叶、根、茎皮、茎骨
天根试剂盒
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姬蕨
叶片
Trizol
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甲藻
Trizol+天根Clean kit+Ambion柱子
东南景天
根茎叶
CTAB+LiCl
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草莓
果实
CTAB+LiCl
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丹参
叶片
天根试剂盒、Trizol
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鹅掌楸
叶片
改良Trizol
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沙棘
果实
planteasy+CTAB
植物
甜瓜
果实
CTAB+LiCl
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凤梨
Tranzolplant
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梨
叶片
天根试剂盒
植物
蓝莓
果实
CTAB+异丙醇+天根clean kit
植物
水稻
根
天根试剂盒
植物
凤梨
叶片
Transzol plant
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枸杞
花药
天根试剂盒
植物
核桃
根、
天根试剂盒
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香蕉
根系木质部
天根试剂盒
植物
葡萄
叶片
天根试剂盒
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山金柑
胚珠
天根试剂盒
植物
西瓜
果肉
天根试剂盒、CTAB+LiCl
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巴西蕉
叶片
天根试剂盒
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大豆
根、根瘤
天根试剂盒
植物
向日葵
叶片
天根试剂盒
植物
棉花
植物
海带
藻体
天根试剂盒
植物
海棠
果实和叶子
天根试剂盒/planteasy
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核桃
叶片
planteasy/CTAB/天根试剂盒
植物
核桃
胚
CTAB+上清过天根柱子
植物
核桃
果仁
CTAB
植物
红豆杉
木质部
异硫氰酸胍二步法
植物
红豆杉
树皮
异硫氰酸胍
植物
红花
叶片
天根kit
植物
红花石蒜
鳞茎盘、花
CTAB
植物
胡杨
叶、子根、茎
动物
大山雀
胚胎、前爪、喙、后肢
Trizol
动物
大鼠
脑
TRIzol
动物
东亚飞蝗
脂肪体和卵巢
Trizol
动物
短尾蝮
神经组织
Trizol
动物
对虾
内脏
TRIzol
动物
鹅
肌肉
Trizol
动物
二斑叶螨
整虫
Trizol
动物
仿刺参
疣足、体腔细胞
Trizol
动物
粉蚧
整虫
Trizol
动物
果蝇
Trizol
动物
海参
TRIzol
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生姜
叶片、地上茎
天根试剂盒
植物
石蒜
花
Planteasy+天根Dnase I
植物
柿子
叶片
CTAB+LiCl
植物
鼠尾藻
藻体
天根试剂盒
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整株幼苗、叶片、幼穗
Trizol
植物
松萝凤梨
叶片
CTAB/Trizol
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桃
果肉
CTAB+Licl
植物
甜瓜
叶片
天根试剂盒
植物
豌豆蚜
触角
TRIzol
植物
微藻
悬浮细胞
trizol
动物
小鼠
细胞
trizol
动物
双须骨舌鱼
性腺
trizol
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大菱鲆
卵巢
trizol
动物
线虫
线虫
trizol
动物
双壳贝
trizol
动物
人
心脏
Trizol