293细胞培养
293T细胞培养攻略
293T细胞培养攻略1.培养基准备293T细胞通常使用DMEM（Dulbecco's Modified Eagle Medium）作为培养基，配以10%胎牛血清（FBS），1%青霉素/链霉素（Penicillin/Streptomycin）。
在培养293T细胞之前，首先将适量的DMEM加热至37°C，并将相应数量的胎牛血清和抗生素加入其中。
2.细胞传代传代细胞是保持293T细胞健康生长和细胞性能的重要步骤。
当细胞达到80-90%的密度时，可以开始细胞传代。
首先，用无菌PBS（磷酸盐缓冲液）将细胞培养瓶中的培养基洗涤一次，然后用0.25%胰酶/EDTA（乙二胺四乙酸）溶液将细胞溶解5-10分钟。
溶解后，加入与胰酶/EDTA液体相等的培养基，轻轻悬浮细胞，并将其移至新的培养瓶中。
将新的培养基加入新瓶中，以使其达到适当的细胞密度。
3.293T细胞的培养条件4.细胞转染293T细胞被广泛用于转染实验。
细胞转染是将外源DNA转运到293T 细胞中的方法，以研究基因功能或进行蛋白表达。
293T细胞的易于转染性质使其适合于多种转染实验，包括常规的钙磷法和化学法（如聚乙烯亚胺）以及电穿孔法。
在进行转染实验之前，应将细胞培养至80-90%的密度，并在转染之后对其进行恢复。
5.结束实验时的保存和冻存细胞在完成实验后，如果有需要保存细胞的需求，可以将293T细胞冻存。
为此，收集细胞，并用DPBS（无菌磷酸盐缓冲液）洗涤细胞。
然后，用0.25%胰酶/EDTA液解细胞5分钟，并加入相等体积的培养基以停止胰酶的作用。
将细胞离心，并以适当的速度冻存保护液（如10%DMSO和90%FBS）重新悬浮细胞。
将细胞悬浮液分装至冻存管中，并使用液氮保存。
总结：293T细胞是一种常用的细胞系，在生物医学研究中发挥着重要作用。
通过遵循上述培养攻略，可以获得高质量和可靠的293T细胞培养结果。
有针对性的细胞传代、定期更换培养基、温度和CO2的适当控制以及正确的细胞转染和细胞冻存步骤可以确保细胞的生长和稳定性，为细胞实验提供最佳条件。
293T细胞的培养[1]
![293T细胞的培养[1]](https://img.taocdn.com/s3/m/d6a8872378563c1ec5da50e2524de518964bd36d.png)
293T细胞的培养[1]293T细胞的培养293T细胞是由293细胞派生, 表达SV40大T抗原的人肾上皮细胞系, 被广泛应用于瞬时转染以过表达各种目标蛋白, 或是用以包装病毒。
293T为贴壁细胞, 这种细胞对培养基的营养成分要求并不高。
培养条件为: 完全培养基: 高糖DMEM, 10%胎牛血清; 冻存液: 胎牛血清或完全培养基, 10% DMSO。
传代方法为:1．吸掉293T细胞培养瓶内的培养液;2．吸取适量的无Ca 2+和Mg 2+的PBS, 轻轻把贴壁的细胞洗两遍;3．加少量的0.05%胰蛋白酶-EDTA (一般25 cm2的培养瓶加1 ml, 75 cm 2的培养瓶加2~3 ml), 放到培养箱温育20 s;4．细胞消化完毕, 加适量培养液终止消化, 并吹打细胞, 制成均匀的细胞悬液;5．加足量的培养液, 分装到新的培养瓶中。
值得注意的是, 293T细胞的贴壁性不强, 轻微的干扰就可能使它们脱落。
所以, 在更换新鲜培养液或者用PBS冲洗的时候应该小心地添加新的培液进去, 以液体不冲打到贴壁的细胞为好。
传代的时候, 只需要用0.05%胰蛋白酶-EDTA即可轻松把细胞消化下来, 不需要消化很长时间。
有些同学反映293T细胞容易结团不易被吹打开来。
如果遇到这样的情况可以在加了胰蛋白酶温育一段时间后即拿1 ml移液枪反复轻轻吹打, 直至肉眼看不到大的细胞块为止, 然后加适量的培养液混匀, 这时候在显微镜下观察, 可见大多数细胞都是单个的, 只有少量的2~3个细胞聚在一起。
一般293T细胞可以长在塑料的培养瓶底面上直到90%融合, 再以1∶4~1∶8的比率传代。
合适的传代周期为2~3天。
传代过程中,消化的时间越短越好, 显微镜下观察到80%细胞脱落即可加培养液中止。
完成传代后放入培养箱前,应该把培养瓶或培养皿沿X、Y轴方向水平移动几下, 防止细胞都聚在中间或者四周。
冷冻293T细胞的冻存液可以用95%小牛血清加5%二甲基亚砜, 复苏率很高。
293t细胞冻存步骤
293T细胞是一种广泛应用于细胞生物学和分子生物学研究中的细胞系，冻存293T细胞的 步骤如下：
1. 细胞培养：将293T细胞在含有适当培养基（如DMEM）和10%胎牛血清（FBS）的细 胞培养皿中培养。细胞应保持在37℃、5% CO2的培养箱中，并定期更换培养基。
2. 细胞准备：当293T细胞生长至80%-90%的密度时，准备细胞用于冻存。将细胞从培养 皿中用胰酶或三胰蛋白酶等酶解剂进行胶原酶消化，使细胞分散成单细胞悬浮液。
3. 细胞计数：使用细胞计数板或自动细胞计数仪对细胞进行计数，以确定细胞的浓度。
293t细胞冻存步骤
4. 细胞冻存液的配制：根据细胞密度计算所需的冻存液量。常用的冻存液配方包括含有 10% DMSO（二甲基亚砜）的培养基。将DMSO缓慢加入到培养基中，充分混合。
5. 细胞冻存：将细胞悬浮液冻存液按照适当比例混合，使细胞最终的浓度为1-2×10^6 细胞/mL。将混合液分装到冻存管中，每管约放入1-2 mL的混合液。然后将冻存管放入冷冻 容器中，以-80℃或液氮中的-196℃进行冷冻。
6. 细胞保存：将冻存管转移到液氮罐中进行长期保存。细胞在液氮中保存时可以长期保持 其生物学特性。
293t细胞冻存步骤
需要注意的是，在进行细胞冻存时，应注意细胞的健康状态、冻存液的配制和细胞密度的 控制，以确保冻存后的细胞能够保持其生物学特性和可用性。
293e细胞培养方法
293e细胞培养方法
一、细胞株选择
293e细胞株是一种常用于病毒包装和基因表达研究的人肾上皮细胞株。
选择健康、活力好的293e细胞株是培养成功的关键。
二、培养基和添加剂
293e细胞适宜在含有10%胎牛血清、1%青霉素/链霉素和1%谷氨酰胺的DMEM培养基中生长。
根据细胞生长状况，可适当调整血清浓度和谷氨酰胺的用量。
三、传代和扩增
当细胞密度达到80%以上时，可进行传代和扩增。
传代时，将细胞悬液以1:3的比例传至新的培养瓶中。
扩增时，将细胞悬液接种到多孔板或液滴中，以实现细胞的规模化培养。
四、细胞鉴定
通过形态观察、免疫荧光染色等方法对293e细胞进行鉴定，确保细胞的纯度和特性。
五、培养条件控制
保持培养室内温度为37℃，湿度为5% CO2。
定期更换培养基，并根据细胞生长状况调整培养条件，如温度、湿度、CO2浓度等。
六、细胞冻存与复苏
为保证细胞的长期保存和快速复苏，可以采用细胞冻存技术。
将细胞悬液与冷冻保护剂混合后，迅速冷冻并保存在-80℃冰箱中。
复苏时，将细胞悬液快速融化并接种到新的培养瓶中。
七、细胞污染防控
为防止细胞污染，需严格控制培养环境，定期对培养基、添加剂和细胞进行无菌检测。
如发现污染，应立即停止培养并采取相应措施。
八、细胞凋亡检测
采用流式细胞术、荧光染色等方法对293e细胞的凋亡情况进行检测，以了解细胞的生长状况和死亡情况。
HEK293细胞培养心得
HEK293细胞培养心得首先，为了成功培养HEK293细胞，一个优良的细胞培养基是必不可少的。
一般来说，培养基应包含必需的营养物质，比如氨基酸、维生素、糖类和无机盐等。
同时，培养基还应该含有足够的抗生素以预防细菌和真菌的污染。
最好使用无血清的培养基，以避免动物源性成分对细胞培养的影响。
其次，准备一个合适的细胞培养环境也是至关重要的。
温度、湿度和二氧化碳浓度等条件应符合HEK293细胞的生长要求。
一般来说，细胞应在37°C的温度下培养，在5%的二氧化碳气氛中保持培养皿内的湿度。
细胞的传代是维持细胞活力和健康状态的重要步骤。
对于HEK293细胞，通常使用胰酶进行消化和洗涤来分离细胞。
对于细胞的新鲜分离，可以将细胞培养皿放入冰箱中进行预冷却，然后使用含有胰酶的PBS缓冲液进行洗涤。
定期检查细胞的密度和健康状况，并及时进行传代是非常重要的。
在培养细胞的过程中，细胞污染是一个常见的问题。
为了避免细菌和真菌的污染，可以在细胞培养过程中添加抗生素。
此外，操作时应注意细胞培养器具的无菌性，使用经过消毒的培养器具并保持培养环境的清洁是必要的。
细胞的冻存是为了保存和传递细胞的重要方法。
在将细胞冻存之前，应通过使用逐渐降低培养基中血清含量的方法适应细胞在无血清条件下生长。
然后使用冷冻保护剂配制适当的冻存液，将细胞分装到冻存管中，并使用液氮罐进行快速冷冻。
最后，定期检查细胞的健康和生长状态是维持细胞培养的重要步骤。
观察细胞的形态和贴壁情况，并使用显微镜检查细胞的活力和细胞数目。
如果细胞出现异常形态或生长减慢，可能是因为细菌或真菌污染，应及时采取相应的措施。
总之，HEK293细胞的培养需要一定的技巧和经验。
通过优化培养基、培养条件和消毒措施，加强细胞观察和细胞传代，可以有效地培养和维持HEK293细胞的活性和生长。
这些心得经验将有助于研究人员在实验室中更好地使用HEK293细胞进行相关研究。
体外细胞的实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的本实验旨在研究体外细胞培养技术，通过观察细胞在不同条件下的生长、形态变化和生物学特性，探讨细胞培养方法在生物学研究中的应用。
二、实验材料与仪器1. 材料：- 人胚胎肾细胞（HEK293细胞）- DMEM培养基- 胎牛血清（FBS）- 0.25%胰蛋白酶- 10%胎牛血清- 无菌培养皿- 移液器- 吸管- 显微镜- 紫外可见分光光度计2. 仪器：- 培养箱- 恒温培养箱- CO2培养箱三、实验方法1. 细胞培养：- 将HEK293细胞接种于无菌培养皿中，置于37℃、5%CO2的培养箱中培养。
- 每2-3天更换一次培养基。
2. 细胞传代：- 当细胞生长至80%-90%时，用0.25%胰蛋白酶消化细胞，收集细胞。
- 将收集到的细胞用DMEM培养基稀释至所需浓度，接种于新的培养皿中。
3. 细胞形态观察：- 使用显微镜观察细胞在不同培养时间下的形态变化。
- 拍照记录细胞形态。
4. 细胞活力检测：- 使用MTT法检测细胞活力。
- 将细胞接种于96孔板中，培养24小时后，加入MTT溶液，继续培养4小时。
- 使用酶标仪检测吸光度值。
5. 细胞增殖实验：- 将细胞接种于培养皿中，培养不同时间后，收集细胞，进行细胞计数。
- 计算细胞增殖率。
四、实验结果1. 细胞形态观察：- 初始接种的细胞呈梭形，细胞间连接紧密。
- 随着培养时间的延长，细胞逐渐增多，细胞间连接变稀疏，部分细胞出现变圆、萎缩等现象。
2. 细胞活力检测：- 细胞活力随培养时间的延长而降低。
3. 细胞增殖实验：- 细胞增殖率随培养时间的延长而降低。
五、实验讨论本实验成功培养了HEK293细胞，并通过观察细胞形态、细胞活力和细胞增殖实验，初步了解了细胞在不同条件下的生物学特性。
细胞培养技术在生物学研究中具有重要意义，可以用于研究细胞生物学、分子生物学、药理学等领域。
六、实验结论1. 体外细胞培养技术可以成功培养HEK293细胞。
2. 细胞在不同培养条件下表现出不同的生物学特性。
293e细胞培养方法
293e细胞培养方法293E细胞是一种常用的哺乳动物细胞系，广泛应用于生物医学研究和重组蛋白表达等领域。
本文将介绍293E细胞的培养方法，包括细胞培养基的配制、细胞的传代和细胞的冻存。
一、细胞培养基的配制293E细胞的培养基配制相对简单，常用的培养基是DMEM （Dulbecco's Modified Eagle Medium）基础上加入适当的补充剂。
1.1 DMEM的配制将DMEM粉末加入无菌的蒸馏水中，并加热至溶解。
待完全溶解后，调节pH值至7.4，并加入适量的无菌纤维素。
1.2 培养基的补充剂将DMEM中加入10%的胎牛血清（FBS），1%的L-谷氨酰胺（L-Gln），100 U/mL的青霉素和100 μg/mL的链霉素。
混匀后滤过以获得无菌的培养基。
二、细胞的传代293E细胞的传代是维持细胞生长和增殖的重要步骤。
下面将介绍293E细胞的传代方法。
2.1 细胞解离用PBS（磷酸盐缓冲液）将培养皿中的细胞洗涤一次，去除培养基。
加入适量的胰酶或胰酶-乳酸酐（Trypsin-EDTA）溶液，并在37°C的恒温培养箱中孵育5-10分钟，直至细胞从培养皿上脱落。
2.2 细胞传代将细胞解离液转移至离心管中，离心300×g，室温下离心3-5分钟。
去除上清，加入适量的培养基悬浮细胞，并用移液器进行混匀。
将细胞悬液装入新的培养皿中。
2.3 细胞的培养条件将新传代的293E细胞放入37°C的恒温培养箱中，培养基的补充和细胞的观察一般每两天进行一次。
当细胞生长至80%-90%的密度时，可以进行下一次的传代。
三、细胞的冻存3.1 冻存液的配制将培养基中的FBS浓度提高至20%，添加相同体积的DMSO（二甲基亚砜），混匀后过滤灭菌得到冻存液。
3.2 细胞冻存将培养皿中的293E细胞加入足够量的培养基，离心300×g，室温下离心3-5分钟。
去除上清，加入冻存液悬浮细胞，并用移液器进行混匀。
293细胞培养
293细胞培养1.培养基DMEM ++丙酮酸钠++10%血清++青链霉素2.复苏：（1）37度融化后，擦干冻存管酒精擦，细胞加入15ml离心管，加5ml培养基，500g离心5min，弃上清，加1ml培养基重悬后加入到培养瓶中，5~6ml左右，记得晃匀。
3. 传代吸出旧培基，加5mlPBS洗1-2遍，用移液管加1ml胰酶，滚2遍吸出，37度放1min左右计时，看到变圆即加入新培基吹打，几下就好了，分到新瓶里。
我个人认为：293细胞贴壁后形成圆形，可能是细胞本身状态不是很好，细胞不够饱满，细胞的贴壁后的棱角不易显露出来，所以看上去类似圆形，而且细胞较小。
293细胞是用5型腺病毒75株系转化，含有Ad5 E1区的人胚肾亚三倍体细胞系，是一种E1区缺陷互补细胞系。
它是加拿大McMaster University的F.L.Graham与ey 于1976年用DNA转染技术构建而成。
293细胞是贴壁依赖型呈上皮样细胞，表现出典型的腺病毒转化细胞的表型，细胞允许Ad5和其他血清型腺病毒在其上增殖。
哺乳细胞的大规模培养方式有三种：贴壁培养、微载体培养、无血清悬浮培养。
这三种方式均可用于293细胞的大规模培养。
293细胞在无Ca2+或含Ca2+培养基中可同样生长，也可生长在血清浓度降低的培养基中。
单层培养细胞在5-10％FBS-DMEM中能生长很好。
一般来讲，1:10传代后，一周可以长满。
严禁过度生长，这点很重要。
因为会导致细胞密度加大和堆积，影响病毒斑的形成和转染，传代时也不易打散。
悬浮的293细胞很容易大规模培养，但不容易长期保持稳定。
293细胞在传代120次以后，其表型可能改变，生长状况不再完全是单层的了，偶尔会形成局部的细胞成团聚集，应立即抛弃，重新引入新传代的细胞。
293细胞培养特性：1、293细胞明显适应酸性环境,pH值在6.9～7.1时,可顺利贴壁生长, 换液时动作要轻。
一般用高糖的DMEM培养基。
2、传代：倒去废液，PBS洗一次（轻），用0.02%EDTA与0.25%Trypsin消化，生长良好细胞，培养瓶中轻摇,使之流遍所有细胞表面,即将其吸除或弃去消化30s，然后吸去，再让剩下的EDTA/Trypsin作用30s,镜下观察细胞变圆,就可加DMEM终止消化，反复吹打至细胞全成单个悬浮细胞即可。
293细胞培养
293 细胞是腺病毒载体的包装细胞。腺病毒是继逆转录病毒后用于基因治疗研究的热门 载体。直接将腺病毒载体导入人体内表达目的基因，治疗恶性肿瘤、心血管疾病或一些遗传 疾病已取得可喜进展；利用腺病毒载体在包装细胞 293 中表达分泌性蛋白质，如蛋白酪氨酸 激酶 1C 等亦成为生产重组蛋白的一条途径。因此完善 293 细胞的大规模培养技术具有越来 越重要的市场意义。哺乳细胞的大规模培养方式有三种：贴壁培养、微载体培养、无血清悬 浮培养。这三种方式均可用于 293 细胞的大规模培养。
微载体培养
微载体是目前公认的最有发展前途的一种动物细胞大规模培养技术，其兼具悬浮培养和 贴壁培养的优点，放大容易。目前微载体培养广泛用于培养各种类型细胞，生产蛋白质产品， 如 293 细胞、成肌细胞、Vero 细胞、CHO 细胞。常用商品化微载体有三种：Cytodex?，Cytopore 和 Cytoline。
悬浮培养时，由于缺少血清和蛋白的保护作用，293S 对剪切力的敏感度增加，难以达 到高密度培养，导致 293S 产生病毒的数量比贴壁培养低 5-10 倍左右。细胞接种后，灌流培 养 7 天，达到细胞密度 5×106/ml，增殖 5-10 倍。
结论
不管是哪种培养方式，首要的一点是必须操作规范、防止污染；其次根据需要选择合适 的 293 细胞培养方式，对细胞生长状况实行有效的监控，以便获得稳定的蛋白或病毒产物。
无血清悬浮培养
无血清悬浮培养是用已知人源或动物来源的蛋白或激素代替动物血清的一种细胞培养 方式，它能减少后期纯化工作，提高产品质量，正逐渐成为动物细胞大规模培养的研究新方 向。要实现 293 细胞无血清悬浮培养必须先将贴壁培养 293 改造为悬浮培养 293S 细胞并寻 找适合高密度无血清培养的培养液配方。
293t细胞培养说明书
293T细胞培养说明书一、实验简介293T细胞是由肾脏细胞系统转染外源基因而产生的细胞系，具有较好的培养性和转染性。
因此，293T细胞常用于基因表达研究，尤其是蛋白表达和病毒载体的构建。
二、培养条件1. 培养基：293T细胞培养最常用的培养基是Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM)，其次是RPMI-1640培养基。
2. 氧气浓度：293T细胞培养一般需要一个较高的氧气浓度，如5%~10%。
3. 温度：293T细胞的培养温度一般为37℃。
4. 水分：293T细胞的培养液中的水分一般为95%~100%。
5. 添加物：293T细胞的培养液中通常会添加10%的牛血清，以促进细胞生长。
三、细胞培养步骤1. 将293T细胞从细胞库中取出，放入清洗后的培养皿中，以DMEM培养基浸泡；2. 将培养皿放入培养箱，调节温度为37℃，氧气浓度为5%~10%；3. 将添加10%牛血清放入培养液中，搅拌均匀；4. 用细胞活性检测试纸测定细胞活性；5. 根据细胞活性的变化情况，调整培养液中的水分，以维持细胞的生长；6. 将培养液更换，每1~2天更换一次；7. 定期观察细胞形态，记录细胞生长情况。
四、注意事项1. 在培养293T细胞时，需要注意细胞的温度、氧气浓度以及水分，以保证细胞的正常生长；2. 培养液的清洗和更换要及时，以保证细胞的正常生长；3. 在操作293T细胞时，一定要注意实验室的清洁卫生，以防止细胞的污染。
五、总结293T细胞培养是一种常用的培养方法，在培养293T细胞时，要注意培养液的温度、氧气浓度以及水分，并及时更换培养液，以保证细胞的正常生长。
在实验操作中，还要注意实验室的清洁卫生，以防止细胞的污染。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
比细胞丢失了对微生物和有毒物的防御能力，一旦被污染或自身代谢物质积累等，可导致细 胞死亡。因此在进行培养中，保持细胞生存环境无污染、代谢物及时清除等，是维持细胞生 存的基本条件。
2、上皮型细胞 此类型细胞在培养器皿支持物上生长具有扁平不规则多角形特征，细胞中央有园形核， 细胞紧密相连单层膜样生长。起源于内、外胚层细胞如皮肤、表皮衍生物、消化管上皮等组 织细胞培养时，皆呈上皮型形态生长。 3、游走型细胞 本型细胞在支持物上散在生长，一般不连成片。细胞质经常伸出伪足或突起，呈活跃的 游走或变形运动，速度快且不规则。此型细胞不很稳定，有时亦难和其它型细胞区别。在一 定的条件下，由于细胞密度增大联成片后，可呈类似多角型或成纤维细腻包形态。常见于羊 水细胞培养的早期。 五、培养细胞形态分析 培养细胞随贴附支持物形状不同而形态各异，最常见的是贴附于平面支持物细胞。在一 般光镜下生存中的细胞是均质而透明的，结构不明显。细胞在生长期常有 1-2 个核仁在细胞 机能状态不良时，细胞轮廓会增强，反差增大。若胞质中时而出现颗粒、脱滴和腔泡等，表 明细胞代谢不良。
293 细胞的大规模培养
293 细胞是腺病毒载体的包装细胞。腺病毒是继逆转录病毒后用于基因治疗研究的热门 载体。直接将腺病毒载体导入人体内表达目的基因，治疗恶性肿瘤、心血管疾病或一些遗传 疾病已取得可喜进展；利用腺病毒载体在包装细胞 293 中表达分泌性蛋白质，如蛋白酪氨酸 激酶 1C 等亦成为生产重组蛋白的一条途径。因此完善 293 细胞的大规模培养技术具有越来 越重要的市场意义。哺乳细胞的大规模培养方式有三种：贴壁培养、微载体培养、无血清悬 浮培养。这三种方式均可用于 293 细胞的大规模培养。
2、常用设施及设备 （1）超净工作台：也称净化工作台，分为侧流式、直流式和外流式三大类。 （2）无菌操作间：一般由更衣间、缓部间和操作间三部分组成。操作间放置净化工作 台及二氧化碳培养箱、离心机、倒置显微镜等。缓冲间可放置电冰箱、冷藏器及消毒好的无 菌物品等。 （3）操作间：普通培养箱、离心机、水浴锅、定时钟、普通天平及日常分析处理物品。
293 细胞特性
293 细胞是用 5 型腺病毒 75 株系转化，含有 Ad5 E1 区的人胚肾细胞。它是加拿大 McMaster University 的 F.L.Graham 与 ey 于 1976 年用 DNA 转染技术构建而成。293 细胞是贴壁依赖型成上皮样细胞，表现出典型的腺病毒转化细胞的表型，细胞允许 Ad5 和 其他血清型腺病毒在其上增殖。293 细胞为人亚三倍体细胞系。293 细胞在无 Ca2+或含 Ca2+ 培养基中可同样生长，也可生长在血清浓度降低的培养基中。
现在使用的转瓶培养系统包括二氧化碳培养箱和转瓶机两部分。293 细胞接种后，维持 适当的转速培养。不同的细胞转速略有不同。细胞的均匀分散贴壁情况与培养液温度、瓶子 的转动速度和细胞特性有关。在 5-6 天的培养周期中，细胞量可增殖 20 倍。
反应器贴壁培养
此种培养方式中，细胞贴附于固定的表面生长，不因为搅拌而跟随培养液一起流动，因 此比较容易更换培养液，不需要特殊的分离细胞和培养液的设备，可以采用灌流培养获得高 细胞密度，能有效地获得一种产品；但扩大规模较难，不能直接监控细胞的生长情况，故多 用于制备用量较小、价值高的生物药品。
悬浮培养时，由于缺少血清和蛋白的保护作用，293S 对剪切力的敏感度增加，难以达 到高密度培养，导致 293S 产生病毒的数量比贴壁培养低 5-10 倍左右。细胞接种后，灌流培 养 7 天，达到细胞密度 5×106/ml，增殖 5-10 倍。
结论
不管是哪种培养方式，首要的一点是必须操作规范、防止污染；其次根据需要选择合适 的 293 细胞培养方式，对细胞生长状况实行有效的监控，以便获得稳定的蛋白或病毒产物。
无血清悬浮培养
无血清悬浮培养是用已知人源或动物来源的蛋白或激素代替动物血清的一种细胞培养 方式，它能减少后期纯化工作，提高产品质量，正逐渐成为动物细胞大规模培养的研究新方 向。要实现 293 细胞无血清悬浮培养必须先将贴壁培养 293 改造为悬浮培养 293S 细胞并寻 找适合高密度无血清培养的培养液配方。
使用较多的反应器有两种：贝朗公司的 BIOSTAT?B 反应器，使用双桨叶无气泡通气搅 拌系统；NBS 公司的 CelliGen、CelliGen PlusTM 和 Bioflo3000 反应器，使用 Cell-lift 双筛 网搅拌系统。两种系统都能实现培养细胞和收获产物的有效分离。
微载体培养 293 细胞，首先要选择合适的微载体类型和搅拌速度。接种细胞可用 1L spinner 微载体培养系统或是其它贴壁培养方式准备，采用灌流培养，培养周期 10-15 天，能 达到的细胞密度为 5-10×106/ml。
微载体培养
微载体是目前公认的最有发展前途的一种动物细胞大规模培养技术，其兼具悬浮培养和 贴壁培养的优点，放大容易。目前微载体培养广泛用于培养各种类型细胞，生产蛋白质产品， 如 293 细胞、成肌细胞、Vero 细胞、CHO 细胞。常用商品化微载体有三种：Cytodex?，Cytopore 和 Cytoline。
2、恒定的温度 维持培养细胞旺盛生长，必须有恒定适宜的温度。人体细胞培养的标准温度为 36.5℃± 0.5℃，偏离这一温度范围，细胞的正常代谢会受到影响，甚至死亡。培养细胞对低温的耐 受力较对高温强，温度上升不超过 39℃时，细胞代谢与温度成正比；人体细胞在 39-40℃1 小时，即能受到一定损伤，但仍有可能恢复；在 40-41℃1 小时，细胞会普遍受到损伤，仅 小半数有可能恢复；41-42℃1 小时，细胞受到严重损伤，大部分细胞死亡，个别细胞仍有 恢复可能；当温度在 43℃以上 1 小时，细胞全部死亡。 3、气体环境 气体是人体细胞培养生存必需条件之一，所需气体主要有氧气和二氧化碳。氧气参与三 羧酸循环，产生供给细胞生长增殖的能量和合成细胞生长所需用的各种成分。开放培养时一 般把细胞置于 95%空气加 5%二氧化碳混合气体环境中。 二氧化碳既是细胞代谢产物，也是细胞生长繁殖所需成分，它在细胞培养中的主要作用在于 维持培养基的 PH 值。大多数细胞的适宜 PH 为 7.2-7.4，偏离这一范围对细胞培养将产生有 害的影响。但细胞耐酸性比耐碱性大一些，在偏酸环境中更利于细胞生长。有资料显示，原 代羊水细胞培养 PH6.8 时最适。 细胞培养液 PH 浓度的调节最常用的为加 NaHCO3 的方法，因为 NaHCO3 可供 CO2， 但二氧易于逸出，故最适用于封闭培养，而羟乙基哌嗪乙硫磺酸（HEPES）因其对细胞无 毒性，也起缓冲作用，有防止 PH 迅速变动的特性而用于开放细胞培养技术中，其最大优点 是在开放式培养或细胞观察时能维持较恒定的 PH 值。 4、细胞培养基 培养是既是培养细胞中供给细胞营养和促使细胞生殖增殖的基础物质，也是培养细胞生 长和繁殖的生存环境。培养基的种类很多，按其物质状态分为半固体培养基和液体培养基两 类；按其来源分为合成培养基和天然培养基。 （1）合成培养基：合成培养基是根据细胞所需物质的种类和数量严格配制而成的。内 含碳水化合物、氨基酸、脂类、无机盐、维生素、微量无素和细胞生长因子等。单独使用细 胞虽有生存但不能很好的生长增殖。
细胞培养技术
一、细胞培养基本概念 细胞培养是指从体内组织取出细胞摹拟体内出现环境，在无菌、适当温度及酸碱度和一
定营养条件下，使期生长繁殖，并维持其结构和功能的一种培养技术。细胞培养的培养物为 单个细胞或细胞群。
在医学遗传学研究中应用最广泛的是外周血淋巴细胞、皮肤或纤维细胞和各种能在体外 长期生长的细胞系。外周血淋巴细胞培养具有时间短、技术简便、可重复取材等优点，它在 临床染色体分析中使用最广泛。体外培养细胞株可在培养过程中发生自发的或在外界作用下 的转化，成为永久细胞系，也可直接建成永久细胞系，永久细胞系能在体外无取制的传代和 生长。永久细胞系通常具有非整倍体细胞和各个细胞的核型不完全相同特征。但细胞克隆的 细胞系其这一特征可以不明显。
转瓶培养
转瓶培养一般用于小量培养到大规模培养的过渡阶段，或作为生物反应器接种细胞准备 的一条途径。与传统静止单层培养相比，转瓶具有三大优点：为细胞提供较大的生长表面； 轻微的转动可以防止培养液中形成的某些成分对细胞生长可能产生的影响；细胞大部分时间 仅覆盖一薄层培养液，有利于气体交换。我们已成功实现 293 细胞的转瓶培养。由于 293 细胞对生长环境的改变较为敏感，细胞容易成团，因此维持稳定的温度、酸碱度和转动速度 对细胞正常均匀生长至关重要。
CelliGen、CelliGen PlusTM 和 Bioflo3000 反应器是常用的贴壁培养式生物反应器，用于 细胞的贴壁培养时可使用篮式搅拌系统和圆盘状载体。此载体是直径 6 毫米的无纺聚酯纤维 圆片，具有很高的表面积与体积比（1200cm2/g），有利于获得高细胞密度。篮式搅拌系统和 载体培养是目前贴壁细胞培养使用最多的方式，除用于 293 细胞的培养外，还用于杂交瘤细 胞培养、Hela 细胞培养、CHO 细胞培养及其它细胞培养。此种方式培养 293 细胞，细胞接 种后贴壁快，接种 1 小时后细胞贴壁率可达 98%以上，采用灌流培养。整个培养周期约 7-10 天，细胞增殖 25-50 倍。
（4）洗刷消毒间：烤箱、消毒锅、蒸馏水处理器及酸缸等。 （5）分析间：显微镜、计算机及打印机等。 3、培养器皿 细胞培养以玻璃器皿为主，常准备最需是使用最的三倍。器皿应选择透明度好、无毒、 中性硬度玻璃制品。常用的玻璃器皿有下面几种。 （1）液体储存瓶：用于储存各种配制好的培养液、血清等液体，常以 500ml、250ml、 100ml 生理盐水瓶或血浆瓶代替。 （2）培养瓶：根据培养细胞种类要求不同培养瓶的形态各异，用于细胞传代培养的细 胞要求瓶壁厚簿均匀，便于细胞贴壁生长和观察，瓶口要大小一致，口径一般不小于 1cm， 允许吸管伸入瓶内任何部位，规格有 200ml、100ml、50ml、25ml、10ml 等几种。用于外周 血培养的常用 10ml 普通圆瓶。两种培养瓶均要求选用优质玻璃制成。 （3）培养皿：用于开放式培养及其它用途。分直径 30mm、60mm、120mm 等几种。 （4）吸管：常用的有长吸管和短吸管两类，长吸管也称刻度吸管。其改良后管上部有 球型刻度称改良吸管，刻度吸管用于移动液体。常用 1ml 和 10ml 两种。短吸管也叫滴管， 分弯头和直头两种。 （5）离心管：离心管是细胞培养中使用最广泛的器皿，根据用途不同形态各样，常用 于细胞培养的离心管有大腹式尖底离心管和普通尖底离心管两类。前者分别为 50ml、30ml、 15ml；后者则多为 10ml 和 5ml。 （6）其它：如三角烧瓶、烧杯、量筒、漏斗、注射器等。