细胞组织培养重点
动物细胞组织培养及分类-文档资料
成纤维样
可成上皮样
悬浮生长型
概念 培养时不贴附于底物而呈悬浮状态生长 或以机械方法使保持悬浮状态下生长
来源 自血，脾或骨髓， 尤以血中白细胞 癌肿细胞也可能
特点 在悬浮中生长良好 细胞圆形，单个或小细胞团
优点 生存空间大，提供数量大 传代方便(不需消化) 易于收获 可获得稳定状态
缺点 观察不方便 很多细胞不能悬浮生长(尤以正常细胞)
优点
3.应用广： 学科多： 对象广： 各种动物：低等动物--高等动物--人类 一种动物：不同年龄-不同组织-正常或异常（肿瘤--）
4.较经济： 可提供大量、同时、重复性好的、 生物学性状相似的实验对象
ห้องสมุดไป่ตู้
细胞培养的缺点
现人工模拟体内环境的技术已经很高, 但, 人工所模拟的条件与体内实际情况 仍不完全相同.
含义 两方面 结果 基于粘附特性，使细胞与细胞之间相互结合形成
组织， 有机体的绝大多数细胞必须 粘附于一固相表面 才能生存和生长。
培养时：这些细胞被放到体外环境中以后,同样需要粘附 于某一固相表面才能生存和生长，因而 属于粘附型细胞。
粘附(锚定或锚着)依赖型(性)细胞：唯有粘附于固相表 面才能生存的细胞
形态：似体内成纤维细胞的形态 胞体梭形或不规则三角形 胞质向外伸出2—3个长短不等的突起 中有卵圆形核
生长特点 排列成放射状，漩涡状
并不紧靠连成片， 细胞—细胞接触易断开而
单独行动 游离的单独的成纤维样细胞，
常有几个伸长的细胞突起
贴附生长型--类型
1. 与体内同名的细胞不完全相同 如：形态相似的成纤维细胞，可不同来源 自同一动物不同组织的成纤维样细胞相似但 发展趋向不同
生长类型
细胞及组织培养实验报告
一、实验目的1. 熟悉细胞及组织培养的基本原理和操作步骤；2. 掌握无菌操作技术，培养植物愈伤组织；3. 了解植物细胞全能性的表现，加深对植物细胞分化和发育过程的认识。
二、实验原理1. 植物细胞具有全能性，即每个植物细胞都包含有该物种的全套遗传基因，在一定培养条件下每个细胞都可发育成一个与母体一样的植株。
2. 细胞及组织培养是将植物器官、组织或单个细胞在人工条件下，利用培养基的营养成分和适宜的环境条件，使其继续生长、分化、发育成一完整植株的过程。
3. 愈伤组织是指在培养基上，原本已分化停止生长的细胞，在一定条件下重新分裂，形成没有组织结构的细胞团。
4. 再分化是指在愈伤组织内部形成具有分生能力的小细胞团，进而分化成不同的器官原基。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：豌豆种子、MS培养基、乙醇、HgCl2（或次氯酸钠）、6-BA、琼脂等。
2. 实验仪器：高压灭菌锅、水浴锅、解剖刀、三角烧瓶（100mL）、烧杯、量筒、培养皿、超净工作台、分析天平、长镊子、剪刀、橡皮筋等。
四、实验步骤1. 配制培养基：将MS培养基、蔗糖、2,4-D、琼脂等试剂按比例混合，高压灭菌后备用。
2. 种子消毒：将豌豆种子用乙醇消毒，再用HgCl2（或次氯酸钠）消毒，然后用无菌水冲洗干净。
3. 取材：将消毒后的豌豆种子放入解剖刀，取豌豆的茎、叶等部位作为外植体。
4. 切割外植体：将外植体切成小块，用无菌手术刀将其切成约0.5cm×0.5cm的小块。
5. 接种：将切好的外植体接种到培养基上，注意保持无菌操作。
6. 培养过程：将接种好的培养基放入培养箱中，温度控制在25℃，光照强度为2000lx，光照时间为12小时。
7. 观察与记录：定期观察愈伤组织的形成和生长情况，记录愈伤组织的颜色、形状、大小等特征。
8. 再分化培养：当愈伤组织形成后，将其转移到再分化培养基上，观察根、芽等器官原基的形成。
五、实验结果与分析1. 愈伤组织形成：经过一段时间培养，豌豆茎、叶外植体在培养基上形成了愈伤组织，愈伤组织呈淡黄色，质地柔软。
2024年高考生物复习重点、难点、热点专项解析—细胞工程与基因工程
2024年高考生物复习重点、难点、热点专项解析—细胞工程与基因工程高考感知课标要求——明考向近年考情——知规律12.1植物细胞工程包括组织培养和体细胞杂交等技术12.2动物细胞工程包括细胞培养、核移植、细胞融合和干细胞的应用等技术12.3对动物早期胚胎或配子进行显微操作和处理以获得目标个体12.4基因工程是一种重组DNA技术12.5蛋白质工程是基因工程的延伸12.6转基因产品的安全性引发社会的广泛关注12.7举例说出生殖性克隆人面临的伦理问题12.8世界范围内应全面禁止生物武器2023·湖南基因工程在农牧业、制药及环境等方面的应用2023·湖北DNA重组技术的基本工具、基因表达载体的构建、目的基因的检测与鉴定2023·广东DNA的粗提取及鉴定的方法2023·新课标DNA重组技术的基本工具、基因表达载体的构建2023·北京动物细胞融合与单克隆抗体的制备2023·山东植物细胞工程的实际应用2023·广东植物体细胞杂交技术2023·广东动物的体外受精、胚胎的体外培养、胚胎移植技术2023·浙江动物的体外受精、胚胎的体外培养2023·浙江生物技术的安全性和伦理问题综合2023·海南将目的基因导入受体细胞、目的基因的检测与鉴定、基因工程的应用2023·山东PCR扩增的原理与过程、DNA重组技术的基本工具、基因表达载体的构建2023·湖北动物细胞融合与单克隆抗体的制备2023·浙江动物细胞融合与单克隆抗体的制备、动物体细胞核移植技术和克隆动物2023·全国遗传信息的翻译、基因表达载体的构建、目的基因的检测与鉴定命题趋势1.细胞工程，胚胎工程的命题多以选择题呈现，基因工程的命题多以简答题呈现，属于年年必考的题目。
2.试题情境以下列几种居多：（1）以单克隆抗体为情境考查细胞工程。
组织细胞培养
组织细胞培养概述组织细胞培养一般泛指所有的体外培养，包括组织培养、细胞培养和器官培养。
其中，组织培养（Tissue Culture）指从活体内取出组织，模拟体内生理环境，在体外无菌、适当温度和一定培养条件下，使之生存和生长，并维持其结构和功能的方法。
细胞培养（Cell Culture）则是指离散细胞的培养，这些细胞通过酶学的、机械的或化学方法从来源组织中获得，培养物是单个细胞或细胞群。
器官培养（Organ Culture）是指以器官的原基、器官的一部分或整个器官为培养物，应用与组织培养相似的条件，使培养物保持着体内组织部分或全部组织学特征，在体外生存、生长并保持一定的功能。
组织培养与细胞培养并无严格区别，组织培养可出现细胞单一化现象，即趋向变成单一类型细胞，最终也变成了细胞培养。
细胞在培养过程中的生命活动是互相依存的，呈现着一定的“组织”特性。
（一）体外培养方式的分类体外培养可分为原代培养和传代培养。
原代培养，又称初代培养（Primary Culture），即对从生物体内取出的细胞、组织和器官进行实效培养的过程，这样的细胞称为原代细胞，通常只能培养10-50代左右即退化死亡。
传代培养（Passage Culture），是指无论是否稀释，将细胞从一个培养瓶转移或移植到另一个培养瓶。
原代培养物经首次传代成功后即为细胞系（Cell Line）。
如细胞系的生存期有限，则称之为有限细胞系（Finite Cell Line），而已获无限繁殖能力能够持续生存的细胞系，称连续细胞系或无限细胞系（Infinite Cell Line）。
由某一细胞系分离出来的、在性状上与原细胞系不同的细胞系，称该细胞的亚系（Subline）。
（二）体外培养细胞的分型根据离体细胞在培养皿中生长时是否贴壁，可将体外培养细胞分为贴壁型和悬浮型两类。
1.贴壁型细胞：培养细胞需贴附在支持物上生长，大多数细胞属于此型，也称锚着依赖性细胞（anchorage-dependent cells）。
生物实验高考复习细胞观察与组织培养实验技巧
生物实验高考复习细胞观察与组织培养实验技巧生物实验在高考复习中占据了重要的地位，其中细胞观察与组织培养实验是必须要掌握的一项技巧。
本文将介绍一些关于细胞观察与组织培养实验的技巧，以帮助同学们在高考中取得好成绩。
一、细胞观察实验技巧1. 样本准备细胞观察的前提是获得样本，一般可以使用生物玻璃片或载玻片。
在准备样本时，要注意选择适当的细胞类型，并确保细胞在良好的生理状态下。
此外，还需要注意样本的保存，避免细胞死亡或变形。
2. 使用显微镜观察细胞时，需要使用显微镜。
在使用显微镜之前，应先调节镜头，使其对焦。
然后，将样本放置在载玻片上并加上适当的染色剂，以增加对比度。
在观察过程中，要逐渐调节镜头的放大倍数，以获得清晰的细胞图像。
3. 观察与记录在观察细胞时，要仔细观察细胞的形态、结构和功能。
可以观察细胞的细胞壁、细胞核、质团等部分。
同时，也要注意记录观察到的现象和结论，以备复习和整理。
二、组织培养实验技巧1. 材料准备组织培养需要准备适当的培养基、培养皿和组织样本。
培养基应根据实验的需要选择合适的种类，并注意其配制和储存条件。
同时，还需要注意使用无菌操作，以避免细菌和真菌的污染。
2. 培养条件控制组织培养需要控制适宜的温度、湿度和光照条件。
一般来说，温度应保持在适宜的范围内，湿度要保持恒定，光照也要符合组织的需要。
此外，还要注意培养皿的通气性和培养基的更新。
3. 观察与记录在培养过程中，需要定期观察组织的生长情况和形态变化。
可以通过显微镜观察细胞的形态和分裂情况，通过生长曲线分析生长速率等。
同时，也要及时记录观察到的数据和现象，以备后续复习和整理。
三、实验注意事项1. 安全意识在进行实验时，要始终保持安全意识，遵守实验室的安全规定。
使用显微镜时，要注意避免眼睛受伤，避免化学溶液的直接接触。
2. 仔细操作实验操作要细致、耐心、准确。
操作过程中要注意各种实验仪器和试剂的使用方法，严格按照实验步骤进行操作。
3. 认真总结实验结束后，要仔细总结实验结果和经验教训，思考实验中出现的问题，并进行复习和整理。
细胞和组织培养技术在植物育种中的应用
细胞和组织培养技术在植物育种中的应用1 植物育种中的重要性植物育种是通过人工的手段提高植物的遗传品质，以获得更高产、更适应环境的新品种。
在植物育种研究中，细胞和组织培养技术已经成为一种重要的技术手段。
2 细胞和组织培养技术细胞和组织培养技术是通过对植物的组织和细胞进行培养，实现植物育种目标的一种技术方式。
该技术有很多优点，如可以加快植物繁殖的速度，提高植物的遗传品质，并且可以通过对细胞和组织的特定处理来培育出特定的性状和特性的植株。
3 细胞和组织培养技术的应用细胞和组织培养技术在植物育种领域中应用广泛。
例如，可以通过细胞和组织培养技术来实现以下植物育种目标。
3.1 新品种的选育通过细胞和组织培养技术，可以通过选择不同的细胞和组织的特性，实现新品种的选育。
3.2 繁殖控制采用细胞和组织培养技术，可以用于植物的繁殖控制。
例如，可以通过组织培养来实现体细胞的多倍体化，从而增加植物的染色体数目，提高早期杂交的成功率。
3.3 再生和转化再生和转化是细胞和组织培养技术的主要应用之一。
该技术被用于生产快速生长和具有特定性状的植株，从而实现对植物遗传性状和生物合成途径的调控和改善。
4 细胞和组织培养技术的潜在应用除了上述应用之外，细胞和组织培养技术还具有一些潜在的应用前景。
如工程植物通过CRISPR/Cas针对性地修饰植物遗传物质，从而修改植物的基因组。
此外，与传统育种方法相比，细胞和组织培养技术还具有更快的反应速度和更灵活的模拟性，可推动植物育种领域的发展。
5 小结细胞和组织培养技术可以作为一种有力的技术手段，应用于植物育种研究中，包括新品种的选育、繁殖控制和再生与转化等方面。
这些技术在实践中已经得到广泛的应用，并且在未来仍然具有很大的潜力和发展空间。
生物技术实践 专题3--植物组织培养 常考知识点整理和练习
《植物的组织培养技术》1．植物组织培养的理论基础：细胞全能型。
2．植物组织培养的流程：离体的植物组织或细胞→愈伤组织→根或芽等器官3．愈伤组织的细胞排列疏松而无规则，是一种高度液泡化的呈无定形状态的薄壁细胞。
4．离体的（高度分化的）植物组织或细胞形成愈伤组织的过程，称为脱分化（去分化）。
脱分化产生的愈伤组织继续进行培养形成根或芽等器官的过程叫做再分化。
再分化形成的试管苗，移栽到地里，可以发育成完整的植物体。
5．生物个体发育过程中细胞在形态、结构和生理功能上出现稳定性差异的过程叫细胞分化。
6．细胞分化本质：基因选择性表达。
7．植物组织培养技术的应用有：实现优良品种的快速繁殖；培育脱毒作物；制作人工种子；培育作物新品种以及细胞产物的工厂化生产等。
8．菊花组织培养一般选择未开花植物的茎上部新萌生的侧枝（生长旺盛嫩枝）作材料。
9．植物的组织培养的培养基：MS 培养基。
10．MS 培养基营养的（一般情况下只有①～⑤）成分：①大量元素是N 、P 、S 、K 、Ca 、Mg ，②微量元素是Fe 、Mn 、B 、Zn 、Cu 、Mo 、I 、Co ，③植物激素，④蔗糖，⑤琼脂，⑥有机物有甘氨酸、烟酸、肌醇、维生素等。
（大量元素和微量元素提供植物细胞所必需的无机盐；蔗糖提供碳源，维持细胞渗透压；甘氨酸、维生素等物质主要是为了满足离体植物细胞在正常代谢途径受到一定影响后所产生的特殊营养需求。
）11．植物激素主要是生长素和细胞分裂素，是启动细胞分裂、脱分化和再分化的关键激素。
在培养基使用顺序 实验结果 生长素／ 细胞分裂素比值与结果先生长素，后细胞分裂素 有利于分裂但不分化 比值高时 促根分化，抑芽形成先细胞分裂素，后生长素 细胞既分裂也分化 比值低时 促芽分化，抑根形成同时使用 分化频率提高 比值适中 促进愈伤组织生长12．植物组织培养的影响因素：PH 、温度、光等。
13．MS 培养基采取的灭菌方法是高压蒸汽灭菌。
植物组织培养与细胞培养知识重点
第一个发明的培养基为White 培养基培养基中的铁盐采用Fe-EDTA 形态IAA/CTK比例高时，促进生根培养，比例低时，促进芽的分化植物组织培养：（广义）人工控制条件下培养形成再生植株（狭义）对植物组织器官产生愈伤组织进行培养直至生成完整植株。
外植体：从植物体上分离下来的用于离体培养的材料愈伤组织：在离体培养的条件下切口处形成的一团具有分生能力的不规则的细胞团分化：细胞在分裂过程中发生结构和功能上的改变形成各类组织和器官的过程脱分化：已分化好的细胞在人工诱导条件下恢复分生能力恢复到分生组织状态的过程再分化：由脱分化的细胞重新形成各类组织和器官的过程初代培养：诱导愈伤组织、侧芽或不定芽、胚状体（形似胚，具有配的功能）过程继代培养：更换新鲜培养基繁殖同一类型材料生根培养：将芽苗转移到生根培养基上培养形成完整植株驯化培养：将组培苗经人工炼苗驯化使其能够在苗床上生长器官培养：是指对植物体各种器官的离体培养离体胚培养：指从植物种子中分离出胚组织进行离体培养的技术细胞悬浮培养：将植物的细胞或细胞小聚体悬浮在液体培养基上进行培养，使之在体外繁殖、生长、发育，并在培养过程中能保持很好的分散性的技术原生质体培养：指从细胞中分离出来的原生质体经过离体培养使其分裂、增殖进而分化成完整植株的技术。
器官发生：又名器官形成，是指植物根茎叶花果实等器官的分化与形成灭菌：用物理或化学方法，杀死物体表面或空隙间的微生物消毒：杀死，消除或抑制部分微生物，使之不发生作用褐化：接种后外植体表面产生酚、醌类棕褐色物质，细胞停止代谢生长玻璃化：离体植物嫩茎或叶呈半透明水状，生理失调不能进行光合作用指示植物：能够对病毒汁液产生迅速和特有的反应的某类转株寄主植物细胞的全能性：每个植物细胞都具有母体的全部遗传特性；每一个细胞都可以在特定条件下发育成与母体一样的植株灭菌方法：物理法：灼烧、常压蒸煮，紫外线，超声波，微波，过滤清洗。
化学法：升汞，过氧化氢，甲醛，酒精，高锰酸钾，漂白粉，次氯酸钠，抗菌素四大母液：大量元素母液，微量元素母液、铁盐母液、有机物质母液、激素母液实验室安排：贮藏室、药品室、洗涤间、消毒室、接种室，准备室、暗室、分析室、培养室离体培养基本设备：天平、酸度计、移液管、容量瓶、三角瓶添加活性炭的目的：活性炭具有吸附作用，可吸附非极性物质和色素大分子物质，茎尖初代培养使可防止褐化，促进生根，防止玻璃化苗几种维生素：VB1：有利于植株生根，促进愈伤组织产生VB6：促进根的生长VC：防止褐化VB5：影响植物代谢和胚的发育VE、VB12各培养基的特点：White：无机盐浓度低，适宜于生根培养；MS：无机盐浓度高，为比较稳定的离子平衡溶液，其养分的数量和比例比较合适，可满足植物的营养和生理需要，硝酸盐含量相对较高，广泛应用于植物器官，花药，细胞和原生质体培养，效果良好；B5：含较低的铵对不少培养物的生长有抑制作用。
细胞组织培养技术
细胞组织培养技术细胞组织培养技术是指利用体外培养方法，通过营养液、胶体培养基或固体培养基等，使细胞和组织在人工条件下继续存活、繁殖和发育的技术。
这一技术可以促进细胞和组织的生长、分化和分裂，为细胞学、生物学、生物化学及医学等领域的研究提供了可靠的实验材料。
一、细胞组织培养技术的原理细胞组织培养技术的技术原理是将细胞和组织收集出来，在实验室条件下，通过调整培养液的成分和pH值，再加入所需要的生长因子和荷尔蒙等刺激，来促进细胞生长、分化和分裂的过程。
细胞组织培养技术的实验操作过程非常重要，需要严格控制细胞的环境条件和生长因子的添加量，以确保细胞在培养过程中得到最佳的生长和繁殖的环境。
细胞组织培养技术的主要原理包括：1、原位组织培养：主要指直接用细胞培养的方法，解剖取出组织后立即进行细胞培养。
这种方法不需要组织分解的过程，可以直接获得组织原有的形态和生理功能，从而对生物学和医学研究提供良好的实验材料。
2、前处理组织培养：主要是在组织培养前，先对组织进行处理，以增加细胞的次级培养性。
这种方法可以通过对组织进行过渡性细胞重编程和激发达成目的，通常用于经过冷冻或提取后的组织培养过程中。
3、细胞单元培养：主要是通过将细胞分离成单元，然后按照需要的比例进行培养。
这种方法可以用于细胞的标本化处理和细胞单元组合的构建实验。
4、组织切片培养：主要是将组织切成小片后进行培养，可以见到切片上不同类型的细胞和细胞间的互动关系，从而对互动的生理和生化机制进行研究。
5、体外培养：主要是将选定的器官或细胞培养在培养基中，可以整个器官进行培养或只培养除器官的特定区域。
这种方法可以通过体外培养方法，获得特异性的细胞发育和生长特征，为医学研究提供可靠的依据。
6、半体外培养：是将生物体内的组织、细胞或其部分在体内带血供状态下结合体外培养技术，在一定范围内自动控制生物体的内环境和外环境，进行长期的实验操作，以便于控制和研究细胞生长和分化的机制。
3.植物细胞培养（植物组织培养）
3.植物细胞培养（植物组织培养）第三章植物细胞培养植物细胞培养：指对从植物器官或由愈伤组织上分离的单细胞（或⼩细胞团）进⾏培养，形成单细胞⽆性系或再⽣植株的技术。
Haberlandt（1902）⾸次尝试分离和培养植物叶⽚单细胞。
细胞培养的意义有利于进⾏细胞⽣理代谢以及各种不同物质对细胞代谢影响的研究。
进⾏细胞培养，通过单细胞的克隆化，即称为“细胞株”（cell line），可以把微⽣物遗传技术⽤于⾼等植物以进⾏农作物的改良。
细胞培养的增殖速度快，适合⼤规模悬浮培养，⽣产⼀些特有的产物，如许多种植物的次⽣代谢产物，包括各种药材的有效成分等，⽤于医药业、酶⼯业及天然⾊素⼯业，这是植物产品⼯业化⽣产的新途径。
由于植物组织培养中细胞之间在遗传和⽣理⽣化上会出现种种变异，这些细胞形成的植株也都表现出⼀定的差异。
这种差异反映在它们的植株的形态、产量、品质、抗病⾍和抗逆性等⽅⾯。
所以由单细胞培养获得的单细胞⽆性繁殖系，并对不同的细胞进⾏研究，在理论上和实践上都有很重要的意义。
细胞培养就是从⾼等植物的某个特定的器官或组织中取得单个细胞进⾏培养，并诱导其分裂增殖，由细胞分裂形成细胞团，再通过细胞分化形成芽根等器官或胚状体，长成完整植株。
第⼀节植物细胞培养⼀. 单细胞培养(⼀)单细胞分离1.机械法2.酶解法3.从愈伤组织中分离(⼆)单细胞的培养⽅法1、平板培养（细胞的⽣长周期）2、看护培养3、微室培养 4. 条件化培养⼆. 细胞悬浮培养（⼀）悬浮培养的⽅法1、分批培养（细胞的⽣长周期）2、半连续培养3、连续培养——封闭型、开放型（化学、浊度恒定式）4、固定化培养（⼆）培养细胞的同步化1. 化学⽅法(饥饿法、抑制法、有丝分裂抑制法）2. 物理⽅法（分选、低温）（三）培养基振荡⼀、单细胞培养（⼀）单细胞的分离1.机械法: Ball(1965)⾸次由花⽣成熟叶⽚利⽤机械的⽅法使叶⾁细胞得到分离的技术。
⑴⼑⽚刮: 取下叶⽚→叶⽚消毒(75%酒精或7%次氯酸钠)→撕去下表⽪(露出叶⾁细胞) →⽤解剖⼑刮下细胞→单细胞悬浮培养⑵研磨离⼼法: 取下叶⽚→叶⽚消毒(75%酒精或7%次氯酸钠) →研磨匀浆(10g叶⽚+40ml研磨介质)→匀浆过滤(细纱布) →离⼼(先低速去碎屑) →游离细胞沉降到底部(净化细胞) →植株培养或悬浮培养研磨介质: 20µmol蔗糖+ 10µmol MgCl2 + 20µmol Tris-HCl (pH7.8)机械法的特点：⑴细胞不受酶的伤害；⑵不发⽣质壁分离。
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体外培养包括组织培养、细胞培养、器官培养Tissue culture: 从体内取出组织摹拟体内的生理环境，在无菌、适当温度、和一定营养条件下，使之生存和生长并维持其结构和功能的方法。
细胞培养：培养物是单个细胞或细胞群。
细胞在培养时都要生活在人工环境中，由于环境的改变，细胞的移动或受一些其他因素的影响，培养时间加长，传代导致细胞出现单一化型。
器官培养：与组织培养条件相似，培养的是器官的原基，器官的一部分或整个器官，以便能够在体外生存、生长和保持一定功能的方法体内外细胞分化的差异：“反祖”（Atavism)现象：细胞失去原有组织结构和细胞形态、分化减弱或不显；表现为细胞趋于单一化，或获得永生性，或变成具有恶性性状的细胞群。
不适应（deadaption) 细胞在原体内时所拥有的分化特征减弱或不显。
（培养的肝细胞酪氨酸转移酶特性丧失）。
生存条件改变使分化阻抑。
脱分化或去分化：细胞失掉发生分化的能力（培养的肝细胞失掉产生精氨酸酶、氨基转移酶等特性后，则失去储存肝糖原能力）。
是基因突变所致培养细胞在体外生存时间与其分化能力呈反向关系。
细胞分化的关键在于是否存在有诱导细胞发生分化的因子原代培养（primary Culture) 从体内取出组织接种培养到第一次传代阶段。
细胞群是异质的，细胞相互依赖性强。
细胞独立生存性差。
传代培养：当细胞增殖达到一定密度后，需要分离出一部分细胞和更新培养液，继续接种进行培养。
这一过程称为传代。
否则将影响细胞的继续生存。
组织培养细胞生命期：原代培养期传代期衰退期细胞系（cell line)：初代培养细胞一经传代后，称做细胞系。
无限细胞系：细胞获永久性增殖能力。
核型大多变成异倍体。
克隆形成率（Cloning Efficiency)：细胞被稀释分散成单个细胞进行培养时，形成细胞小群（克隆）的百分数。
克隆细胞株:从一个经过生物学鉴定的细胞系用单细胞分离培养或通过筛选的方法,由单细胞增殖形成的细胞群冻存配方：向培养液中加入DMSO或甘油，封与安瓶，存于温度达-196℃液氮中长期储存连续细胞系：获得持久性增殖能力的细胞群体。
细胞获得永生性或称为恶性性，而获得不死性的细胞核型大多变成异倍体，接触抑制消失“一代”指细胞接种到分离再培养的所用的时间。
与细胞倍增一代不是一个含义。
在细胞一代中，细胞能倍增3～6次，经历三个阶段：潜伏期：接种——经过——悬浮期（细胞质回缩，胞体呈球形）——贴壁初代培养细胞经过10~24h或更多连续细胞系和癌细胞系经过10~30min指数增生期：细胞增殖最旺盛，细胞分裂相增多。
是细胞一代中活力最好的时期，是进行各种实验最好和最主要的阶段。
持续3-5天。
停滞期/平顶期：细胞量和密度达到饱和，细胞停滞增殖。
表明细胞进入到停滞期,细胞数量持平。
特点：细胞不增殖,有代谢活动。
培养液中的营养已逐渐耗尽,代谢产物积累增多,pH 降低，此时需要传代,否则细胞将会中毒,发生形态改变,细胞会从底物脱落死亡。
细胞分裂指数（Mitotic Index, MI)：细胞群中每1000个细胞中的分裂相数。
条件：分裂相数与细胞种类、培养成分、pH培养箱温度有关。
接触抑制：细胞相互接触抑制细胞运动的现象。
肿瘤细胞没有此现象培养细胞生存环境、条件和代谢：一、无污染环境二、温度：37℃耐低温不耐高温三、气体环境和pH：95%氧气+5%二氧化碳pH 7.2~7.4 耐酸不耐碱HEPES：防止pH迅速变动，维持pH恒定四、培养细胞生存所需基本物质1、糖2、氨基酸3、各种维生素4、促生长因子* ：血清*5、其他物质五、渗透压谷胺酰胺的作用：可促进各种氨基酸进入细胞膜。
所含的氨是核酸中嘌呤和嘧啶的来源；是合成3，2和一磷酸腺苷时所需物;是能源和碳的来源。
谷胺酰胺在溶液中不稳定，应放置在－20℃冰箱保存，用前加入培养液内。
已含有谷胺酰胺的培养液在4℃冰箱内可放置两周以上时重新加入原来量的谷胺酰胺。
增加难培养细胞成功率的物质：促生长因子：培养液除营养成分外，也需要激素类物质起到促进细胞增殖生长作用。
胰岛素(1~10单位)促进细胞利用葡萄糖和氨基酸；氢化可的松(10-8~10-7M)促进表皮上皮细胞和乳腺上皮细胞增殖生长的作用，提高神经胶质细胞和成纤维细胞的克隆形成率；其它物质：在细胞生长过程中,需要钾、钠、钙、镁氮和磷以外，还需要微量元素，如铁、锌、硒铜、锰、钼钒等。
培养基种类分为半固体和液体两类。
液体培养基又可分为合成、天然和无血清培养基血清的主要作用提供细胞生存、生长和增殖所必需的生长调节因子。
补充培养液中没有或量不足的营养成分。
含有生长基质成分使细胞易贴附在培养器皿上。
提供载体蛋白，可结合维生素、脂质、金属离子等。
有中和毒性物质保护细胞不受伤害。
提供蛋白酶抑制剂，保护细胞不受死细胞释放的蛋白酶的损害。
饲细胞(Feeder cells)：也称为滋养细胞，用成纤维细胞或其它细胞长成单层后，用大剂量射线照射，使细胞失去增殖能力，但能存活和有代谢活动。
将其作为底物，其它细胞接种上面；饲细胞的代谢产物也有利于其它细胞生长。
用于特殊难培养细胞，注意避免用同源细胞。
体外培养细胞成功率分析成功的关键:培养物必须贴附在底物上细胞生长和增殖一、组织和细胞的供体年龄二、培养条件三、贴附底物四、培养方法：酶消化分离细胞培养中应培养哪些液体：水：不含内毒素和有机污染物最好用玻璃或石英蒸馏器制备的三蒸水放置不超过2周Hanks’平衡盐溶液：钙镁有促使细胞凝聚作用,配制离散细胞用的消化液和细胞洗涤液时,宜采用D-Hanks培养基：合成培养基滤过消毒DMEM (高糖和低糖）低糖对肿瘤细胞有力。
增加了各成分的用量HamF12 和Mc-Coy5A 多用于难培养的细胞。
2-巯基乙醇作用：（1）能诱导细胞增殖；（2）避免过氧化物对培养细胞的损害。
生长培养液血清10%-20% 维持液血清2%-5%消化液：胰蛋白酶溶液：主要作用是使细胞间的蛋白质水解，使细胞相互离散。
胰酶溶液在pH8.0，温度为37℃时，作用能力最强。
注意：钙离子、镁离子和血清蛋白的存在会降低胰酶活力，故胰酶溶液常用无钙镁的D-Hanks’平衡盐溶液配制。
常用浓度为0.25% 或0.125%。
-20℃冰箱中保存EDTA·4Na 溶液：螯合二价离子，对细胞有一定的离解作用，而且毒性小。
常用工作液浓度为0.02%。
通常与0.25%的胰蛋白酶溶液按1：1 混合使用（混合液）。
注意：使用EDTA 处理细胞后，一定要用Hanks 液冲洗干净EDTA 溶液配制：用无钙、镁的D-Hank’s 平衡盐溶液溶解后，高压蒸汽灭菌，分装成小瓶，室温或4℃冰箱保存胶原酶溶液：对细胞间质等胶原具有很强的消化作用，常用于消化上皮组织、纤维性组织和癌组织等。
不受钙、镁影响。
常用浓度为0.1-0.3mg/mlpH 调整液：NaHCO3 溶液常用浓度为7.5%。
4℃冰箱或室温保存。
消毒：紫外线消毒、湿热消毒、干热消毒、滤过消毒、高压消毒冷冻保存要点：（1）冷冻过程要缓慢。
需要冷冻保存的细胞先在4℃冰箱中放置30－60 分钟；然后转入-20℃，放置30 分钟；然后再转入-80℃放置16－18 小时（或过夜）；最后放入液氮中长期保存。
有条件的地方，可用程控降温仪，按每分钟-1 到-3℃速度降温，一直到-80℃以下，然后直接放入液氮中长期保存。
（2）冻存细胞必须处在对数生长期，活力大于90％，无微生物污染。
（3）细胞浓度控制在：1×107－5×107/ml。
（4）使用高浓度血清或蛋白保护剂。
（5）使用合适的细胞冷冻保护剂，保护细胞在冷冻过程中免受冰晶破坏。
目前，最常用的冷冻保护剂是DMSO(二甲基亚砜)，使用终浓度为5－10％。
但是，有些细胞系不能用DMSO 作为冷冻保护剂，如人白血病细胞系HL-60，可选用其它冷冻保护剂，如甘油（glycele）,羟乙基淀粉等。
冻存特别注意：（1）细胞在冷冻过程中在-20℃冰箱内放置时间不可超过1 小时，以防止冰晶过大而破坏细胞。
也可跳过-20℃这一步骤直接放入-80℃冰箱中，但这样做细胞存活率要低一些。
（2）DMSO 稀释时会释放大量热量。
因此，DMSO 不能直接加到细胞液中，必须事先配制。
（3）DMSO 必须是细胞培养级别的。
新买的DMSO 本身处于无菌状态，第一次开瓶后应立即少量分装于无菌试管或瓶中，4℃保存。
避免反复冻融造成DMSO 裂解产生有害物质。
并可减少污染机会。
如要过滤DMSO，必须选用耐DMSO 的尼龙滤膜。
冷冻保存细胞的解冻与复苏要点：（1）快速解冻。
冻存细胞从液氮中取出后，应立即放入37℃水浴中，轻轻摇动冷冻管，使其在1 分钟内全部融化（不要超过3 分钟）。
（2）解冻操作过程动作要轻。
由于冷冻保存过的细胞变得非常脆弱，不仅解冻速度要快，而且动作要轻。
一般情况下，解冻后的细胞可直接接种到含完全生长培养液的细胞培养瓶中直接进行培养（1ml 冻存细胞液加入到25－30ml 新鲜完全培养液中），24 小时后再用新鲜完全培养替换旧培养液，以去除DMSO。
如果细胞对冷冻保护剂特别敏感，那么，解冻后的细胞应先通过离心去除冷冻保护剂，然后再接种到含完全生长培养液的培养瓶中。
传代培养法细胞生长增殖形成单层后进行传代1、吸除培养瓶内旧培养液2、加入胰蛋白酶和EDTA混合液，以能覆盖平底为限。
3、显微镜下观察，当发现胞质回缩、细胞间隙增大，立即终止消化4 吸出消化液，加入Hanks液吹打5 计数细胞大鼠大脑皮层神经组织细胞培养新生大鼠1-2日龄，碘酒、洒精消毒。
取出大脑，分离脑膜，夹取两侧大脑皮质放入接种培养液中，用D-Hank’s冲洗二遍。
剪碎，0.5-1mm3,用D-Hank’s充分洗去残血加入5-10倍量0.25%胰蛋白酶，移入离心管中放到水370C浴箱中消化20-25分钟。
终止消化离心洗涤1000转/分，5分钟弃上清。
吹打制成细胞悬液。
台盼兰染色计数后接种于事先涂好多聚赖氨酸培养板中。
37℃5%CO2培养2天后换生长培养液原代培养法1、将孕鼠或新生小鼠拉颈椎致死，置75%酒精泡2—3秒钟（时间不能过长、以免酒精从口和肛门浸入体内）再用碘酒消毒腹部，取胎鼠带入超净台内（或将新生小鼠在超净台内）解剖取肝脏，置平皿中。
2、用Hank’s液洗涤三次，并剔除脂肪，结缔组织，血液等杂物。
3、将肝脏剪成小块（1mm2），再用Hank’s液洗三次，转移至小青霉素瓶中。
4、视组织块量加入5—6倍的0.25%胰酶溶液，37℃中消化20—40分钟，每隔5分钟振荡一次，或用吸管吹打一次，使细胞分离5、加入3—5ml培养液以终止胰酶消化作用（或加入胰酶抑制剂）。
6、静置5—10分钟，使未分散的组织块下沉，取悬液加入到离心管中。