培 养 基 配 制
培养基配制的四大原则
培养基配制的四大原则第一原则：选择合适的培养基类型根据需求选择适合的培养基类型非常重要。
常见的培养基类型包括液体培养基、固体培养基和选择性培养基等。
液体培养基适用于大规模培养和微生物液体发酵，而固体培养基能够提供可见菌落形成的平面。
选择性培养基则通过添加特定的抗生素或抑制剂来选择一些特定菌群的生长。
根据实验需求选择合适的培养基类型有助于提高实验效果。
第二原则：确定合适的营养成分和浓度不同的微生物对营养成分的需求不同，需要根据不同微生物的生长要求来确定所需的营养成分和浓度。
一般来说，培养基的营养成分包括碳源、氮源、矿物质、生长因子等。
碳源可以是葡萄糖、果糖、麦芽糖等，氮源可以是硝酸盐、氨盐等，矿物质可以是钾盐、钠盐等。
有些微生物需要特殊的生长因子，如血红蛋白、维生素等。
根据微生物的生长需求，确定合适的营养成分和浓度，可以提供有利于微生物生长的环境。
第三原则：控制培养基的pH值微生物对pH值的要求也各不相同，选择合适的pH值可以促进菌落的生长和繁殖。
一般来说，大多数微生物生长的pH值范围在6.5-7.5之间，但也有一些微生物对酸性或碱性环境适应能力较强。
因此，在培养基配制时需要控制好pH值，可以通过使用缓冲溶液来维持培养基的稳定性。
第四原则：采取无菌操作无菌操作是培养基配制的重要环节，它可以防止微生物污染，保证培养基质量的稳定性。
在无菌操作中，需要使用灭菌器对培养器具进行高压高温的处理，杀死所有的微生物。
同时，还需要在无菌工作台或无菌环境下操作，使用经过灭菌的培养器具和培养基，并及时封闭容器，避免外界污染。
通过严格的无菌操作，可以有效保证培养基质量的合格。
综上所述，培养基配制的四大原则包括选择合适的培养基类型、确定合适的营养成分和浓度、控制培养基的pH值和采取无菌操作。
正确遵循这些原则可以提高培养基质量，促进微生物的生长和研究。
培养基配方
一、LB培养基：Yeast extract 5 g/LTryptone 10 g/LNacl 10 g/LPH为7.0 若配制固体培养基加入1.5%的琼脂。
二、YEB培养基:Yeast extract 1 g/LPeptone(或Tryptone) 5 g/LBeef extract 5 g/LSucrose 5 g/LMgSO4 2 mmol/LPH为7.0 若配制固体培养基加入1.5%的琼脂。
三、N6D2培养基(2,4D浓度2mg/L)：① N6大量母液1：20×大量元素(1L) 50mlKNO356.6g(NH4)2SO49.26gKH2PO48g② N6大量母液2：40×大量元素(500ml) 25mlCaCl2·2H2O 3.32g③ N6大量母液3：40×大量元素(500ml) 25mlMgSO4∙7H2O 3.7g④ B5微量元素I：100×微量元素（1L） 10ml溶液A：MnSO4∙H2O 781mgZnSO4∙7H2O 200mg溶于400ml无菌水溶液B：H 3BO3300mgKI 75mg溶于400ml无菌水然后缓慢将溶液A和溶液B混合，定容至1L⑤ B5微量元素II：1000×微量元素（500ml） 1mlNa2MoO4·2H2O 125mgCuSO4·5H2O 12.5mgCoCl2·6H2O 12.5mg⑥ B5维生素I：100×维生素（500ml） 10ml盐酸硫胺素 500mg盐酸吡哆醇 50mg烟酸 50mg⑦ B5维生素II：100×维生素（500ml） 10ml甘氨酸 100mg⑧200×铁盐(500ml) 5mlNa2-EDTA 3730mgFeSO4·7H2O 2780mg⑨ 2,4 D：100×2,4 D 10ml200mg 2,4 D，先溶于1ml 无水乙醇中，再定容到1L。
培养基配方
1. LB培养基：10 g/L胰蛋白胨(进口)，5 g/L酵母提取物(进口)，10 g/L NaCl。
若配制固体培养基，加入15 g琼脂粉；
2. YPD培养基：22 g/L的一水合葡萄糖，20 g/L胰蛋白胨(进口)，10 g/L酵母提取物(进口)。
若配制固体培养基，加入20 g琼脂粉；
3. SC-Ura培养基：22 g/L含一水合葡萄糖，6.7 g/L YNB（无氨基酸酵母氮源），1.224g/L 氨基酸粉末（除Leu , Trp , His , Ura, Ade, Lys, Met以外的），配制相应缺陷型则补加其他7种氨基酸。
4. YPX 培养基：蛋白胨，20 g/L；酵母粉，10 g/L；木糖，20 g/L或50 g/L。
5. YPD+G418：G418：1ml/L
Leu（亮氨酸）0.38 g/L，
Ura（尿嘧啶）0.076 g/L，
100xHis（组氨酸）7.6g/L，加入10mL/L
100xTrp（色氨酸）7.6g/L, 加入10mL/L
100xAde（鸟嘌呤）7.6g/L 加入10mL/L
100xLys（赖氨酸）7.6g/L 加入10mL/L
100xMet（甲硫氨酸、蛋氨酸）7.6g/L 加入10mL/L
加入碱液调节pH至6.10左右。
若配制固体培养基，加入20 g琼脂粉；
全部氨基酸：。
培养基配制的四大原则
培养基配制的四大原则1.确定微生物所需的营养成分各种微生物有着不同的生长要求，因此需要在培养基中添加适当的营养成分。
培养基的配制需要先了解所需培养微生物的营养成分需求，例如氮、碳、磷、镁、铁等元素和氨基酸、维生素、核苷酸等有机物。
如果不添加足够的必需营养素，微生物无法正常生长和繁殖，因此配制培养基时需要首先确定微生物所需的营养成分。
2.选择合适的碳源和氮源在培养基中，碳源和氮源也是微生物生长所需的重要成分。
不同的微生物对碳源和氮源的要求不同，因此选择合适的碳源和氮源是极其重要的。
碳源可以是葡萄糖、果糖、乳糖等，而氮源可以是胰蛋白水解物、酵母提取物、氨基酸等。
需要根据不同微生物的要求选择合适的碳源和氮源，以保证微生物的正常生长。
3.考虑微生物对pH值和温度的要求微生物对pH值和温度的敏感度较高，因此在培养基的配制中需要考虑微生物对pH值和温度的要求。
常规的抗生素筛选培养基在制备时一般采用pH为7.0-7.2的中性环境，而一些微生物只能在酸性或碱性环境中生长。
此外，微生物对温度的要求也需要被考虑到。
常规的培养温度为30℃至37℃，但是也有一些微生物需要更低或更高的温度才能生长，因此在配制培养基时需要根据微生物的生长特性进行适当的温度调节。
4.配置时使用无菌技术微生物对细菌、真菌和其他微生物的污染敏感，因此在配制培养基时需要使用无菌技术。
使用无菌技术可以保证培养基中没有任何细菌或其他微生物的存在影响微生物的生长和繁殖。
在使用无菌技术时需要注意，将培养基加热到正确的温度，以确保培养基中的细菌和其他微生物都被杀灭，以免影响到有创意研究和生产。
总之，培养基配制是微生物学研究以及微生物技术应用的重要环节。
在配制培养基时，需要了解所需微生物的营养成分需求，选择合适的碳源和氮源，考虑微生物对pH值和温度的要求，并使用无菌技术保证培养基的无菌。
只有按照这四个原则进行培养基配制，才能得到优质的培养基，使微生物能够良好地生长和繁殖。
培养基配方及配制方法
培养基配方1 斜面菌种保存培养基1.1PDA培养基（马铃薯葡萄糖琼脂培养基）称取200g马铃薯，洗净去皮切碎，加水1000ml煮沸0.5h，纱布过滤，滤液补足1000ml，再加15g葡萄糖和15-20g琼脂，充分溶解后趁热纱布过滤，分装试管，每试管约5-10ml（视试管大小而定），121℃灭菌20分钟左右后取出试管摆斜面，冷却后贮存备用。
1.2麦芽汁琼脂培养基麦芽汁的制备：干麦芽首先进行粉碎（不能太粗，也不必太细。
太粗影响糖化效率，过细影响过滤速度），按麦芽重量的3~4倍加水，搅拌均匀后，37℃左右浸泡1小时，然后缓缓加温至55~63℃（在升温过程中应不断搅拌使温度均匀），保温4~6小时（用0.02摩尔/升碘液测定为黄色至无色时），糖化结束。
在糖化过程中，应每小时搅拌一次。
取过滤后的清液，加1.8%琼脂，分装试管，每试管约5-10ml （视试管大小而定），121℃灭菌20分钟左右后取出试管摆斜面，冷却后贮存备用。
2基菌落总数检测2.1平板计数琼脂培养基将胰蛋白胨5.0g、酵母浸膏2.5g、葡萄糖1.0g、琼脂15.0g加入蒸馏水1000ml中，煮沸溶解后，调pH，然后在121℃下灭菌15min，取出，稍微冷却后，带热倒入培养皿中。
3志贺氏菌检测3.1 GN增菌液成分：胰蛋白胨：20g，葡萄糖：1g，甘露醇：2g，柠檬酸钠：5g，去氧胆酸钠0.5g，磷酸二氢钾4g，磷酸氢二钾1.5g，氯化钠5g，蒸馏水1000ml。
pH7.0制法：将上述物品加入蒸馏水中，加热溶解煮沸，调pH为7.0，分装，在115℃高压灭菌15min。
3.2 HE琼脂成分：胨：12g，牛肉膏3g，乳糖12g，蔗糖12g，水杨素2g，胆碱20g，氯化钠5g，琼脂18~20g，蒸馏水1000ml0，0.4%溴麝香草酚蓝溶液16ml，Andrade指示剂20ml.，甲液20ml，乙液20ml。
pH7.5 制法：将上述前七种成分加入400ml蒸馏水中作为基础液，将琼脂加入到600ml蒸馏水中加热溶解，加入甲液乙液到基础液中，调pH，再加入指示剂，并与琼脂液合并，待冷却至50~55℃，倾注浇平板。
培养基配制的过程和注意事项
培养基配制的过程和注意事项一、培养基配制的基本步骤1. 材料准备：首先，需要准备培养基所需的各种原料和试剂。
常用的培养基原料包括蛋白胨、葡萄糖、琼脂等。
此外，还需要准备适量的水和试剂的称量工具。
2. 称量试剂：按照配方中的比例，准确地称取所需的试剂。
在称量过程中，应注意保持实验环境的清洁，并使用洁净的称量工具，以避免试剂受到污染。
3. 溶解试剂：将称取好的试剂溶解于适量的水中。
在溶解过程中，可以通过搅拌或加热的方式促进试剂的溶解。
溶解完毕后，应检查溶液的透明度和均匀性，确保试剂充分溶解。
4. 调整pH值：根据具体的培养基配方，使用酸碱溶液调整培养基的pH值。
通过逐滴加入酸碱溶液，并经过搅拌均匀，逐步调整pH 值至所需范围。
在调整pH值的过程中，应注意避免过度调节，以免对培养细胞产生不良影响。
5. 加热消毒：将配制好的培养基加热至沸腾，保持沸腾状态持续5-10分钟，以达到消毒的目的。
在加热过程中，应注意避免溢出和烧焦，同时要保持试剂的充分混合。
6. 灭菌冷却：将消毒完毕的培养基冷却至适宜的温度，通常为45-50摄氏度。
在冷却过程中，应避免引入环境中的微生物污染，可使用无菌工作台或灭菌过滤器进行操作。
7. 分装保存：将冷却好的培养基分装到无菌培养皿或试管中，并密封保存。
在分装过程中，要注意避免试剂接触到外界空气，以防止污染。
二、培养基配制的注意事项1. 实验环境要保持清洁，操作过程要注意无菌操作，以避免试剂受到污染。
2. 在配制过程中，应准确称取试剂的质量，并按照配方中的比例进行配比，以保证培养基的质量和配方的准确性。
3. 在试剂溶解和调整pH值时，应充分搅拌均匀，确保试剂充分溶解和均匀混合。
4. 加热消毒时，应注意控制加热时间和温度，以避免试剂烧焦或溢出。
5. 冷却过程中，要避免污染和细菌的侵入，可使用无菌工作台或灭菌过滤器进行操作。
6. 培养基的分装要在无菌条件下进行，并尽快密封保存，避免试剂受到外界空气和微生物的污染。
完全培养基配制
1.准备：移液枪、移液器、移液管、超净工作台紫外线照射20min。
37℃水浴恒温，基本
培养基预热，血清室温放置预热，双抗溶液室温预热。
2.配置：火焰灭菌基本培养基瓶口和血清瓶口，将50ml血清悬空倒入450ml基本培养基
中，再取出少量基本培养基清洗血清瓶，倒回培养基瓶中。
3.加双抗：按照1:500加入双抗溶液，即500ml培养基中加入1ml双抗。
火焰消毒瓶口。
4.整理：封口膜密封培养液瓶口，培养液放回4℃冰箱。
离心管、移液管清水冲洗，晾干。
酒精擦拭超净台，熄灭火焰，紫外照射10min。
注：血清分装成小瓶，可在50ml离心管中加入25ml血清，封口-20摄氏度保存，现用现取。
双抗可配置成母液（一千万U），分装成1ml一只，封口-20摄氏度保存，现用现取。
培养基的配制过程
培养基的配制过程
培养基的配制过程
培养基是实验中常用的培养材料，其质量和性能对试验数据的准确性有很大的影响。
合理配制培养基，是保证实验质量和可靠性的重要一步。
以下分步介绍培养基配制过程。
第一步，准备原料。
准备所需培养基原料，包括氮来源、碳来源、催化剂、维生素、矿物质和无机盐。
这些原料及添加量应按照培养基配方要求准备好。
第二步，蒸馏水灭菌。
所有材料，包括悬浮成分在内的所有培养基，都应使用蒸馏水加热灭菌。
第三步，全部成分混合。
将所有成分混合搅拌均匀，直到培养基完全溶解，形成无色透明液体。
第四步，灭菌处理。
将混合后的培养基放入灭菌器中，以121℃、
15psi的压力对培养基进行30-60分钟的高温杀菌处理。
第五步，检测培养基。
检测培养基的 pH 值，通常可用 pH 计或试纸检测。
第六步，培养基存储。
将灭菌后的培养基储存在4℃的冰箱内，以避免受到可能的污染。
以上就是培养基的配制过程，它可以有效地确保培养基的质量和可靠
性，从而确保实验效果的准确性。
正确的配制培养基非常重要，只有这样才能确保实验的可靠性和准确性。
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培养基配制
1)血平板：5%脱纤维绵羊血琼脂平板。
英国Oxoid公司哥伦比亚琼脂（或TSA琼脂或脑心浸液琼脂）加热溶化后，高温高压灭菌，用时冷却至500C左右，加入无菌5-10%脱纤维绵羊血，充分轻摇混匀后，倾制平板，血平板厚4mm。
2)巧克力平板：应用马血或兔血制备，市售哥伦比亚琼脂热溶化后，高温高压灭菌，约在800C左右加入无菌血液配成5-10%，摇匀后置800C左右水浴中维持15分钟，使之成为巧克力色，絮状，取出冷却至500C左右倾制平板。
因其中含有X和V因子，嗜血杆菌、奈瑟氏菌等生长良好。
若用绵羊血制备，则要加入X、V因子添加剂（按产品操作说明）。
3)庆大霉素血平板：（分离肺炎链球菌培养基）
哥伦比亚琼脂250mL
绵羊血12.5mL
庆大霉素0.5mL
附：庆大霉素配法：4万单位+16mL水=2.5mg/mL
1万单位（u）=10mg 4万单位=40mg
4)杆菌肽巧克力平板：（分离流感嗜血杆菌培养基）
哥伦比亚琼脂250mL
兔血（马血）12.5mL
杆菌肽lmL
附：杆菌肽配制：1.含760mg杆菌肽加10mL灭菌水。
2. 250mL兔血巧克力加入1mL(76mg/mL)杆菌肽。
杆菌肽最终浓度：0.3mg/mL(300mg/L)
5)万古霉素巧克力平板（分离流感嗜血杆菌培养基）
哥伦比亚琼脂 250mL
兔血（马血） 12.5mL
万古霉素 1.0mL (5mg/250mL)
附：万古霉素配制法：（去甲万古霉素400mg/瓶，相当500mg/瓶万古霉素，分装80支）
①一瓶400mg去甲万古霉素加0.85％NaCl 10mL=50mg/mL
②1mL万古霉素（50mg/mL）加0.85％NaCl 9mL=5mg/mL
6)高盐甘露醇琼脂：（分离金黄色葡萄球菌培养基）
蛋白胨10g 牛肉浸膏1g
氯化钠7g 琼脂15g
水 1000mL 甘露醇10g
0.2%酚红25mL
煮溶后调pH7.4，冷却用大试管倾倒斜面保存。
7)吕氏血清培养基：（分离白喉棒状杆菌用）
1. 1%葡萄糖肉汤（pH 7.6）100mL
2. 无菌动物血清（牛、羊、猪）300mL
肉汤与动物血清混合，分装于无菌试管，每管5mL，在血清凝固器或流动蒸汽灭菌器内灭菌制成斜面。
灭菌方法：
第一天：800C1小时
第二天：850C1小时，于370C过夜
第三天：900C1小时，于370C过夜
8)亚碲酸钾琼脂：（分离白喉棒状杆菌用）
1 pH7.6肉汤琼脂100mL
2 10%葡萄糖肉液2mL
3 1%亚碲酸钾溶液 4.5mL
4 0.5%胱氨酸水溶液1mL
5 脱纤维绵羊血 5～10mL
先将肉浸汤琼脂溶化后，待冷至500C左右，无菌加入已灭菌的葡萄糖，亚碲酸钾和胱氨酸溶液、血液混匀后倾注平板。
9)气管分泌物标本运送培养基（Transportation medium）
TSB大豆培养基 3g 葡萄糖 0.5g
脱脂奶粉 2g 甘油 10mL
蒸馏水 100mL
先将1、2项加入温水中煮溶后，再加脱脂奶粉，摇匀，再煮沸，最后滴加甘油，每管1.0-1.5mL分装进塑料小管。
10)大便转送培养基
①甘油盐水保存液：
无水磷酸氢二钾 3.1g 无水磷酸二氢钾 1g
氯化钠 4.2g 甘油 300mL
0.1%酚红溶液 10mL 蒸馏水 700mL
先将盐类溶于蒸馏水中，加入甘油，充分混匀。
调pH7.2，再加入酚红。
每管4mL 分装于大试管中， 1210C15分钟灭菌后备用。
②磷酸盐缓冲盐水（PBS）（小肠结炎耶尔森氏菌标本冷增菌）
Na
2HPO
4
8.23g Na
2
HPO
4
·H
2
O 20g
氯化钠 5g 蒸馏水 1000mL
将上述成分溶于蒸馏水中，调pH7.6，每管10mL分装，高压1210C15分钟，置于冰箱备用。
③改良磷酸盐缓冲盐水（SB）
在1000mLPBS中加入山梨醇10g，胆盐1.5g，溶解后，每管10mL分装，高压1210C15分钟，置于冰箱备用。
④霍乱弧菌增菌转送培养基
采用杭州天和生物制品有限公司碱性蛋白胨水运送培养基。
按产品说明书溶解后，调节pH8.6，分装每支8～10ML。
加入适量甲酚红着色，便于与大便肛管识别。
⑤空肠弯肠菌转送培养基
采用杭州天和生物制品有限公司Cary-Blair运送培养基（C-B培养基）。
按产品说明配制，分装5mL/支，高温高压灭菌后备用。
⑥增菌肉汤肛管
采用杭州天和生物制品有限公司增菌肉汤，按产品说明书配制分装成3Ml/支，用棉花肛管做塞，高温高压灭菌后备用。
11)庖肉培养基：
牛肉 500g 葡萄糖 2g
蛋白胨 20g 氯化钠 5g 蒸馏水 2000mL
混匀后煮沸30分钟，冷却用18×180mm试管分装，加牛肉至6cm，加肉汤至8cm，再加入融化的白凡士林至10cm，121℃15min灭菌，冷却置冰箱备用。
12)中药微量培养基（金钱草培养基）：
取10%金钱草煮沸1小时后，过滤取滤液配成1%琼脂，用时每2mL加入2滴吐温80。
13)苯丙氨酸脱氨酶试验培养基：
DL-苯丙氨酸 0.2g 酵母浸膏 0.3g
Na
2HPO
4
0.1g(或Na
2
HPO
4
•12H
2
O 0.33g) 氯化钠 0.5g
琼脂 1.2g 蒸馏水 100mL
加热融化后，校正PH7.4分装每管1.8-2mL，121℃15min灭菌，倾成斜面。
14)MIU（动力－靛基质－尿素）试验培养基：
胰胨 1g（或蛋白胨2g）葡萄糖 0.2g
KH
2PO
4
0.2g NaCl 0.5g
琼脂 0.4g 蒸馏水 100mL
调PH至6.8，121℃15min灭菌，加入0.2％甲酚红0.6mL，再加入20％无菌尿素（用滤器除菌）10mL，分装，2～2.5mL/支。
20％尿素制备：2g尿素，加入少许蒸馏水溶解，隔水煮沸10～15min。
15)葡萄糖酸盐利用试验试剂（班氏试剂）
①CuSO
4.5H
2
O 2.5g（先用少量蒸馏水溶解）
②枸橼酸钠 10.6g
③无水Na
2CO
3
6.3g
②+③用少量蒸馏水溶解，再加入①，最后定容至250mL。
16)靛基质试验
试剂：对二甲氨基苯甲醛 2.5g；戊醇或丁醇 3.75mL。
徐徐加入浓盐酸12.5mL。
方法：被检菌接种于胰蛋白胨水，35℃孵育16～18小时，滴加试剂于培养物上，红色为阳性，黄色为阴性。
17)葡萄糖酸盐培养基
蛋白胨 1.5g 酵母浸膏 1g 磷酸氢二钾 1g 葡萄糖酸钾 40g（或葡萄糖酸钠37.25g）蒸馏水 1000mL
上述成分溶解、过滤，校正pH6.5，分装2.0mL/支，高压灭菌115℃15min冷却，取标准菌株作对照，合格后置冰箱备用。
18)枸橼酸盐培养基
采用英国OXOID公司成品琼脂粉，按说明配制，分装1.8mL/支，高温高压灭菌后倾成斜面，取标准菌株作对照，合格后置冰箱备用。
19)KIA培养基：
采用英国OXOID公司成品琼脂粉，按说明配制，分装成4.5 mL/支、高温高压灭菌后倾成斜面。
取标准菌株作对照，合格后置冰箱备用。
20）老玉米吐温-80培养基
采用杭州天和生物制品有限公司老玉米粉琼脂培养基，按产品说明书配制分装成5mL/支，高温高压灭菌后备用。
用时取一支培养基煮溶后用滴管加入3滴吐温-80混匀，用前以白色念珠菌作对照。
配制培养基添加成份
1)嗜血杆菌药敏琼脂（HTM）培养基添加成份：SR0158E,每支用灭菌蒸馏水
或生理盐水2mL溶解后，1支可加入500mL琼脂中。
（可1mL添加剂/300mL 琼脂）。
2)空肠弯曲菌（CCDA）培养基添加成份：SR155E，每支用灭菌蒸馏水2mL
溶解后，1支可加入500mL琼脂中。
（可1mL添加剂/300mL琼脂）。
3)沙保罗氏（SDA）培养基添加成份：300mL琼脂加1.5mL1％TTC（氯化三
苯四氮唑），再加1mL氯霉素（储存在无菌室内柜台里）。
4)碱性琼脂（CV）培养基添加成份：300mL琼脂加0.3mL1％亚碲酸钾（最
终浓度10μg/mL）。
5)巧克力琼脂培养基（用绵羊血制备时）添加成份：SR0090A，1支SR0090B
与SR0090C混匀后可作为500mL琼脂的添加剂。
江泰投资管理 JeJ6O31c6e2S。