轮 状 病 毒 检 测
猪轮状病毒病的临床症状和防控措施
猪轮状病毒病是由猪轮状病毒(porcine rotavirus,PoRV)引起的一种以腹泻、呕吐、厌食、脱水为临床症状的急性胃肠炎传染病。
猪轮状病毒是导致世界范围内仔猪剧烈腹泻的主要病原之一，给全球养猪业造成巨大的经济损失。
猪轮状病毒感染具有潜伏期短、传染性强、流行范围广、发病率高等特征，常与其他细菌、病毒混合感染而使病情加重，导致患病猪群死亡率升高，是我们养猪人需要重点关注的病原之一。
01、病原学特点猪轮状病毒是导致仔猪严重腹泻的主要病原之一，属于呼肠孤病毒科(Reoviridae)，轮状病毒属(Rotavirus)。
猪轮状病毒粒子没有囊膜结构，形状类似球形，呈20面体对称结构，在电镜观察下病毒颗粒直径约为70nm，有三种蛋白质衣壳：核衣壳、内衣壳和外衣壳。
外衣壳包裹着内衣壳，它是由厚度约20nm的光滑薄膜组成，形成了轮状病毒特有的车轮状特征，因此根据其特征将其命名为轮状病毒。
猪轮状病毒全基因组长约18522bp，由11节段的双股RNA（16~21 kb）组成，分别编码6种结构蛋白（VP1~VP4、VP6和VP7）和5种非结构蛋白（NSP1~NSP5），其中，VP1~VP3为髓芯蛋白；VP4、VP7为外衣壳蛋白，共同构成轮状病毒的外层衣壳结构蛋白，VP7为糖蛋白，VP4为非糖基化蛋白，VP4经胰蛋白酶裂解可产生具有增强病毒感染性的VP5和VP8，对病毒的传染性至关重要；VP6构成中间一层衣壳，决定了血清群的特异性，是最重要的免疫原性蛋白。
图1 猪轮状病毒结构模式图轮状病毒具有不同的血清群和血清型，根据 VP6分为7个抗原性存在差异的血清群。
猪轮状病毒已被证实至少有五个血清群（A、B、C、E和H）可以感染猪。
其中血清A型是引起断奶前后仔猪腹泻最常见的亚型，在由PoRV引起商品化猪群的腹泻病中占90%以上。
根据vp7和vp4抗原分型，又可分为G和P型，其中G型有27个血清型，P型有37个血清型。
图2 猪轮状病毒血清型分类（数据引自肖少波教授）02、流行特点2.1传染源病猪、隐性感染猪及带毒猪是本病的传染源。
SOP034A群轮状病毒
A群轮状病毒检测SOP文件一、检验目的本试纸剂应用免疫层析法原理定性检测大便之中A群轮状病毒，适用于临床婴幼儿腹泻A群轮状病毒感染的辅助诊断。
二、检测原理：本试剂盒采用免疫层析双抗体夹心法，在硝酸纤维薄膜上的检测区被A群轮状病毒抗体，同时用胶体金标记A群轮状病毒单克隆抗体。
检测时，如果样品中有A群轮状病毒时，样品中的病毒与检测卡前端的“胶体金-抗体”结合，形成免疫复合物，复合物沿膜带层析移动，并在包被了抗体的检测区出现一条红色线，判读为阳性；如样品中不含A群轮状病毒时，检测区不会出现红色线，判读为阴性。
三、样品采集：当日新鲜大便上清液。
四、试剂：北京万泰生物药业股份有限公司A群轮状病毒检测试剂盒五、检测方法：1.旋开滴管，取出采便勺，从便中收取一勺，取后抹平勺面，放入装有样品稀释液的滴管中，旋紧滴管。
2.震动混匀，折断滴管盖帽。
3.将测试卡平方在干燥的平面上。
4.垂直缓慢的滴加2-3滴混悬液后的样品至测试卡加样端中心。
5.5-10分钟内判读结果，结果判读不可以超过10分钟。
六、结果判读：复合物沿膜带层析移动，并在包被了抗体的检测区形成一条红线，判读为阳性；如果样品中不含A群轮状病毒时，检测区不会出现红色线，判读为阴性。
七、质量控制：1.试剂应该平衡在室温下20分钟后，再打开铝箔袋使用。
在室温条件下，测试卡取出后应该在20分钟内使用完，以免影响测试结果。
2.不要使用放置时间过长，长菌，有异味的样品。
样品过于粘稠可以用样品稀释液稀释后离心再取上清液滴入加样端中心测试。
3.实验时，检测卡应该放平。
以免造倾斜造成层析速度过快或过慢，影响检测结果。
4.滴加样品稀释液不可过多或过少，均可影响检验结果的准确性。
5.在规定时间内观察结果，时间过长或过短，均影响检测结果。
八、结算方法：九、生物参考区间：阴性十、操作性能：十一、超出可报告范围的处理：十二、危急值：十三、干扰因素：十四、临床意义：适用于临床婴幼儿腹泻A群轮状病毒感染的辅助诊断。
婴幼儿腹泻轮状病毒检测及结果分析
婴幼儿腹泻轮状病毒检测及结果分析一、概述腹泻是指排便次数增多、粪便疏松、水样或黏液血便的症状。
在婴幼儿中，轮状病毒是导致腹泻的主要病原体之一。
轮状病毒（Rotavirus，RV）是一种双链RNA病毒，属于轮状病毒科，包括7种血清型（G1～G4、G9～G11），其中G1、G2和G3分别为临床上较为常见的三个亚型。
RV感染多发生在6个月到2岁的婴幼儿中，是导致婴幼儿腹泻的主要原因之一。
因此，早期发现并诊治婴幼儿轮状病毒感染非常重要。
本文将介绍婴幼儿轮状病毒检测及结果分析的相关知识。
二、检测方法1. 肠道病毒培养法肠道病毒培养法是传统的病毒检测方法之一，包括传统培养法和快速培养法。
传统培养法需要3~7天才能获得结果，一般只适用于研究目的。
快速培养法和传统培养法相比具有更高的灵敏度和特异性，且可以在1~2天获得结果，但仍需要技术人员有丰富的操作经验才能获得准确的结果。
2. 免疫学检测法（1）酶联免疫吸附试验（ELISA）轮状病毒ELISA检测法是一种简单、快速、经济的方法。
该方法以特异性的抗轮状病毒抗体为探针，检测样本中的轮状病毒抗原。
该方法操作简便，成本低廉，适用范围广，但灵敏度和特异性不如PCR法。
（2）荧光抗体检测法（FA）荧光抗体检测法是一种快速的免疫学检测方法，它同样以抗体或探针为基础进行检测。
相比ELISA，FA法具有更高的灵敏度和特异性，且可以检测多种病毒。
3. 分子生物学检测法（1）聚合酶链式反应（PCR）PCR是一种灵敏、特异且可重复的检测方法，能够对低剂量病毒进行检测。
PCR法的灵敏度高，能够检测到病毒抗原在样本中的微量存在，同时可对病毒血清学分型，有助于了解不同血清型的轮状病毒在流行病学意义上的分布情况。
（2）实时荧光定量PCR（qPCR）qPCR技术结合PCR技术和荧光测定技术，其结果可以快速、准确地分析并定量RNA分子的数目。
相比传统PCR技术，qPCR具有较高的灵敏度和特异性，且能够快速、准确、定量检测病原体。
猪轮状病毒检测卡说明书(完整版)
猪轮状病毒金标检测卡使用说明书【简介】猪轮状病毒病是由猪轮状病毒(Porcine Rotavirus Infection ,RV)所致的一种幼龄猪急性消化道传染病。
仔猪感染后引起厌食、下痢、呕吐，中猪和大猪为亚临床症状或隐性感染。
轮状病毒主要存在于病猪及带毒猪的消化道，随粪便排到外界环境。
有些临床健康猪粪便也可检出病毒。
【检测原理】采用渗滤式免疫胶体金技术，利用金颗粒作为示踪剂，选择性捕捉标本中轮状病毒抗原。
斑点反应板上的固相单克隆抗体特异地与标本中的轮状病毒抗原结合形成复合物，胶体金标记的抗体再与复合物结合，形成肉眼可见的红色斑点。
【试剂及用品】●猪轮状病毒金法检测卡（50份）●一次性塑料滴管（50支）●塑料一次性手套（5只）●使用说明书（1份）【样品收集及准备】1、用生理盐水沾湿的棉签从直肠取样，或从新鲜粪便中直接取样；2、采集样品时注意多部位同时收集新鲜及有效样品，充分在试管中搅拌稀释；静置10分钟（建议离心3分钟）后，用一次性滴管取上清液；3、样品一般须当即进行检测，否则应冷藏保存，超过24小时的，应该冷冻保存。
【检测步骤】1、试纸条恢复室温；2、取出试纸，开封后平放在桌面，从滴管中缓慢而准确地逐滴加入2-3滴混合液。
3、加样品液后，红色的液体从靠样品孔的观察窗边缘涌出，朝另一方向流动。
4、5-10分钟后判断结果，半小时后结果判读无效。
【结果判定】阳性（+）：当位置C显示出红色线条，而位置T同时显示出红色线条时，判为阳性。
阴性（-）：当位置C显示出红色线条，而位置T不显色时，判为阴性。
无效：当位置C不显示出红色线条，则无论位置T显示出红色线条与否，均判为无效。
【注意事项】1．仅用作体外诊断。
2．注意样品具有潜在传染性，注意防止交叉感染。
3．该试纸及配套试管、棉签均为一次性产品，不可交叉及重复使用。
4．包装袋破损或产品过期请勿使用。
5．试纸2-8℃冷藏保存，勿要冷冻。
猪轮状病毒病临床特点及防治措施
Veterinary clinical science | 兽医临床科学64 ·2021.230 引言腹泻性疾病原因多种多样，包括细菌、病毒。
轮状病毒病对哺乳仔猪断奶仔猪造成严重危害。
如果养殖环境突然发生变化，养殖管理不当，猪群身体抵抗能力下降后，会给该种病毒性疾病的传播流行提供条件。
轮状病毒在生猪养殖场中一旦爆发流行，将会短时间内向整个猪群快速传播蔓延，虽然造成的死亡率相对较低。
关于猪轮状病毒病还没有特效，药物一旦爆发流行，会给养殖场造成必要的经济损失，需要养殖户提前采取措施进行针对性防控。
1 流行特点猪轮状病毒外观呈现车轮状，直径70 nm 左右，该种病毒在外界具有较强的抵抗能力，对温度pH 值和化学物质具有一定的耐受性，pH 值3～9，保持相对稳定的特征，粪便中能长时间存在。
该类病毒主要会造成1日龄到断奶阶段的仔猪发病，病毒侵入猪体后，会造成肠壁出现不同程度的损伤，不断刺激肠绒毛膜收缩，影响肠道对营养物质的消化和利用。
发病后病变肠管十分敏感，表现为不耐乳的现象。
如果猪群采食的食物没有被消化，会进入小肠和大肠，会引发不良后果，一方面会给多种病原菌的繁殖生长提供营养基础，引发继发传染性疾病，另一方面还会增加大肠的通透作用，影响水分的再吸收，结果会引发不同程度的腹泻症状，排除糊状粪便，或者含有白色黄色絮状物的水样粪便。
出生8～10 h 感染疾病后，短时间内就会出现典型的临床症状[1]。
研究结果表明，猪轮状病毒病一般发生在每年的冬春季节，尤其是在早春和冬季发病率最高，气温寒冷，湿度较大，卫生环境较差，饲料营养价值不足，或者受到致病性大肠杆菌污染，就会促使或诱发各种疾病的发生流行。
该种病毒能在不同动物群体当中直接传播或者间接感染，常呈爆发流行或者地方性，流行潜伏期通常在12～24 h ，任何年龄的猪都可以受到病毒的侵作者简介：李航（1977-），男，辽宁抚顺人，本科，高级兽医师，研究方向：动物医学。
轮状病毒检测技术概述
２ 免疫检测技术
目前在轮状病毒的检测技术 中， 可靠性 和实用性最好 的 依然是 ＷＨＯ推荐的免疫学技术。
腹泻至少造成 ８亿元损失ｉ 轮状病毒的预防控制需要快速 、 ｔ 】 。 准确的诊断技术支持 。 现就 目前轮状病毒检测技术及 其研究
立 了分离培养技术检测方法 。但此法灵敏度较低 ， 需要特 殊 培养条 件 ， 分离 时间也较 长 ， 目前 只有 Ａ组 轮状病毒可 以 且 培养 ， 故不 被临床检测所广泛应用 。
及其衍 生技术等分子生物学新方法的研 究进展 ， 并探讨 了其在病毒检测 中的优缺点及发展 趋势。
关键词 ： 轮状病毒 ； 测 ；Ｃ 检 Ｐ Ｒ衍 生技 术
中图分类号 ： ２ ． Ｒ１ ３１ 文献标识码 ： Ａ 文章编号 ：０ ５ ４ ５ （０ ９０ —０ １ － ２ １ ０ — ６０ ２ ０）２ ０ １ ０
（． １北京林业大学生物科学与技术 学院， 北京 １ ０ ８ ；． ０ ０ ３２中国科学 院生态环境研究 中心环境水质学 国家重点实验室，
北 京 １０ ８ ） ０ ０ ５
摘
要 ： 状病毒 是人 和动物急性腹泻的重要病原 ， 轮 对轮 状病毒进 行快速、 准确的检 测对 于疾病监
测和疫情控制极为重要。总结 了轮 状病毒 检测技术的发展概况 ， 综述 了经典检测技术 、 免疫技 术 、 Ｃ Ｐ Ｒ
Ｂ ｉ ｇ１０ ８ ， ｈｎ ） ｅｉ ０ ５ Ｃ ｉａ ｊ ０ ｎ
Ａ ｓ ａｔ Ｒ ｔ ｉ ｓｓａｅｔｅｍ ｊｒ ｃｌ ｃ ｇｎ ｆ ｃｔ ｄ ｒ ｅ ｌｅｓｏ ｕ ａ ｎ ｎ ｌ ｗ ｒ ｗｄ ， ｅｅ ｒ， ｂ ｔ ｃ： ｏ ｖ ｕｅ ｒ ｈ ａ ｏｏ ａ ａｅｔ ｏ ｕｅ ｉ ｒ ａｉｎ ｓ ｆ ｍ ｎａｄａｉ ｓ ｏｌ ｉｅｔ ｒ ｏｅｉｉ ｒ ａｒ ｏｅ ｇ ｌ ｉ ｓ ａ ａｈ ｌ ｈ ｍａ ｄ ｈ ｆ ｔｓ
轮状病毒检测及诊断研究进展
轮状病毒检测及诊断研究进展许春;谬如君;赖宇【摘要】轮状病毒是婴幼儿腹泻的重要病原体,对轮状病毒进行快速、准确地检测在临床诊断中极具价值和意义.目前实验室诊断主要依赖形态学检查、免疫学以及分子生物学技术,本文就轮状病毒检测技术的最新研究进展作一综述.【期刊名称】《医学理论与实践》【年(卷),期】2018(031)024【总页数】3页(P3663-3665)【关键词】轮状病毒;实验室诊断【作者】许春;谬如君;赖宇【作者单位】江西医学高等专科学校检验教研室,江西省上饶市 334000;江西医学高等专科学校第一附属医院检验科;江西省上饶市人民医院检验科;江西医学高等专科学校检验教研室,江西省上饶市 334000;江西医学高等专科学校第一附属医院检验科【正文语种】中文【中图分类】R446轮状病毒(Rotavirus，RV)是澳大利学者Bishop等在急性非细菌性胃肠炎儿童十二指肠黏膜超薄切片中首次发现的，属于呼肠病毒科，是感染人类，哺乳类动物和鸟类腹泻的重要的病原体。
流行病学调查显示，轮状病毒是引起婴幼儿感染性腹泻的重要致病因子，全世界每年有约600 000人因感染轮状病毒而死亡[1]。
因此，发展快速、准确、早期的轮状病毒检测方法，对于预防轮状病毒暴发流行，早期诊断，早期治疗都具有重要意义。
本文就目前轮状病毒检测技术的发展做简要介绍。
1 形态学检查病毒颗粒微小需要借助电子显微镜才能观察到病毒的形态，电镜下观察是病毒检测的经典方法。
采用粪便标本，镜下观察车轮状病毒颗粒，这是最直观的检测方法。
和只借助形态学的普通负染电镜技术对比，免疫电镜技术(Immunoelectromicroscopy，IEM)基于抗原抗体能特异性结合的特性在电镜下识别凝集反应或者借助特异性标记抗体来检测抗原，其检测效率高的特点就很突出[2]。
但是因为病毒会发生降解，增加了诊断的假阴性，同时由于电镜设备成本高，所以采用电镜技术检测轮状病毒多用于科研，对临床的实际检测工作的开展具有一定的局限性。
牛轮状病毒病的诊治
4.1 诊断 依靠临床上犊牛的腹泻很 难区分是由轮状病毒引起的腹泻还是 由其他细菌、病毒引起的腹泻，所以临 床表现不能作为确诊依据。检测到病 原是最为可靠的诊断方法，检测病原可 以分为两种方法，一种是通过收集病料 得到病毒后在 MA104 细胞上进行培养， 通常成功率在 40% ～ 70% 之间，因成 功率较低且花费较大一般不作为临床 诊断的方法进行应用。另一种是电镜 技术，不论是直接电镜还是免疫电镜都 能够检测出轮状病毒的存在 [3]。相较于 检测病原，免疫学检测更加的方便，且 准确率也相对可靠，临床上经常应用的 有乳胶凝集反应、酶联免疫吸附试验，
敏感。
2 发病机理
轮状病毒可以在小肠的上皮细胞 中进行复制，当病毒在细胞胞浆中复制 时会引起细胞的功能减退甚至死亡，这 使得犊牛食入的乳糖不能很好的被消 化吸收而聚集在小肠中，小肠内的渗透 压增高，从而引起腹泻。
3 临诊症状
患病牛通常为 7 日龄内的犊牛，发 病较为突然，最初，患病犊牛精神沉郁， 哺乳量减少或不进行吮乳，体温有时升 高，出现白色或黄白色的粪便，质地粘 稠。随着病情的发展，腹泻逐渐明显， 观察患病犊牛排出的粪便，可以看到黏 液或血液。多数犊牛会有脱水症状，被 毛凌乱，最后出现心力衰竭和代谢性酸 中毒，直至死亡。在患病过程中，因病 犊牛的抵抗力较低，如果此时犊牛的饲 养管理欠佳，则很容易引起继发感染， 加重病情。
在国外，通常使用轮状病毒灭活疫 苗预防此病，但是在我国还没有成熟的 商品化疫苗可供选择，如果有条件的可 以用自家灭活疫苗对牛群进行免疫，通 常可以取得不错的效果。另外，还要加 强犊牛的饲养管理，该病主要是经过粪 便 - 口腔的途径进行传播的，所以应当 减少犊牛接触到粪便的机会，切断传播 途径，减少发病率。及时的饲喂初乳也 是减少该病发生的重要手段，初乳中有 大量的母源抗体，能够帮助犊牛建立自 身的抵抗力，所以在犊牛出生后应当尽 早的饲喂初乳，首次饲喂量应当在 2kg 以上，连续饲喂 3d。
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轮状病毒检测
A群轮状病毒诊断试剂盒（胶体金法）检测粪便中的A群轮状病毒，适用于临床婴幼儿腹泻患者，尤其是慢性腹泻患者。
粪便常规显微镜镜检能看到脂肪球的标本，建议临床医生进一步检测粪便中的A群轮状病毒时，A群轮状病毒阳性结果高达90%以上，为临床医生提供了诊断治疗婴幼儿腹泻的可靠依据。
1 临床资料
1.1 一般资料门诊及住院婴幼儿腹泻患者，年龄范围在0-3岁。
1.2 检测方法A群轮状病毒诊断试剂盒（胶体金法），由检测卡、样本稀释液和样本采样器组成。
1.3 标本采集旋开滴管，取出采便勺，从粪便中收取一勺样本（约100mg）,取样后抹平勺面，放入装有样本稀释液的滴管中，旋紧滴管。
振荡混匀，折断滴管上的盖帽。
将测试卡平放在干燥平面上。
垂直而缓慢滴加3-4滴混匀后的样本（约120-150ul）至测试卡加样端中心位。
5-10分钟内判读结果，结果判读不可超过10分钟。
2 结果
所有检测对象均是腹泻或慢性长期腹泻的婴幼儿患者。
判读结果：阴性结果反应窗内只出现一条红色线。
阳性结果在反应窗内出现两条线（T带、C带）。
C带为测试卡质控带，若反应窗内在测试后不出现红色线，表明测试无效，建议使用新的测试卡。
3 讨论
3.1 婴幼儿腹泻是常见的多发性疾病，多见于春秋季节。
我们经过2年时间，将临床腹泻标本用A群轮状病毒诊断试剂盒（胶体金法）检测粪便中的A 群轮状病毒结果表明，对于婴幼儿腹泻标本，特别是外观为稀糊样便，显微镜镜检为脂肪球结果的标本，A群轮状病毒阳性结果达90%以上。
3.2 许多婴幼儿腹泻患者中，我们观察到，治疗效果并不佳，经常反复。
A 群轮状病毒诊断试剂盒（胶体金法）检测粪便中的A群轮状病毒检测结果表明，对临床诊断和治疗方面起到了指导性作用，使婴幼儿腹泻患者减轻病痛，尽快康复。
3.3 在检测粪便时，如果发现粪便外观为稀糊状，镜下可见脂肪球结果时，若临床医生没有开轮状病毒检测，我们会及时沟通有关医生，建议做轮状病毒检测，避免因轮状病毒感染引起的腹泻得不到有效的治疗。
因镜下脂肪球结果会按消化不良进行治疗，没有找到致病因素，会造成治疗效果不佳，表现为反复腹泻或长期腹泻的现象，影响婴幼儿腹泻治疗效果。
3.4 本试剂检测的阳性结果必须结合临床信息进行分析。
由于反应原理的限制，本试剂检测结果阴性并不排除A群轮状病毒感染的可能。
为定性实验，仅用于粪便上清液的检测。
3.5 不要使用放置时间过长或反复冻融标本，以避免标本污染，长菌而造成的非特异性反应。
应采集新鲜粪便标本，保证检测结果正确。
3.6 滴加测试卡标本不能过多，取上清液进行检测，否则引起错误结果。
3.7 检测线的显色速度及强度与标本中A群轮状病毒的含量相关，静置10分钟是为了保证达到最高灵敏度。
观察在规定的时间内，不论该色带颜色深浅，即使只有非常弱的色带也应判断为阳性结果。
3.8 标本和测试卡均应为室温下，检测反应超过10分钟以上的结果无临床意义。
通过A群轮状病毒诊断试剂盒（胶体金法）检测粪便中的A群轮状病毒，检测结果及结合临床症状表明，实验室检测工作非常重要，要有高度的责任心和爱心，及时反馈检测结果，给临床医生提供良好的建议，确诊病因，使婴幼儿腹泻疾病得到有效的治疗。
此检测方法简便快捷，经济实用，适用于各级医疗机构。