2014微生物限度检查实验
版药典微生物限度检查方法验证方案
版药典微生物限度检查方法验证方案验证微生物限度检查方法的方案一、实验目的：验证药典中的微生物限度检查方法的准确性、可靠性和可行性。
二、实验材料：1.药典中规定的微生物限度检查方法；2.待验证的药品样品；3.适用的培养基和培养条件；4.培养基的质量控制菌种。
三、实验步骤：1.制备适用的培养基：按照药典中规定的方法和成分制备适用的培养基，并进行批次记录。
2.准备质量控制菌种：3.制备菌液悬液：从购买的质量控制菌种中，挑取一株菌种进行连续传代培养至活性最佳的生长阶段。
然后制备菌液悬液，以备后续试验使用。
4.扩大悬液应用范围：从第3步得到的菌液悬液中，取适量接种于适用培养基上，培养出代表性的细菌菌液悬液。
然后，通过菌液的光学检测、显微镜检查和菌落计数，确定菌液的细菌浓度。
5.验证方法的准确性：将待验证的药品样品加入培养基，根据药典中的方法将培养基分成不少于3组。
每组培养基中分别加入一定量的菌液悬液，并在药典规定的温度和时间下培养。
同时，设置对照组，只加入菌液悬液和培养基。
6.菌落计数：取适量的培养基样品，分别进行菌落计数，并根据培养基的数量、培养基总菌落数、对照组的菌落数等数据，计算菌落形成单位。
7.验证方法的可靠性：将待验证的药品样品按照药典中的方法进行连续验证，至少重复3次。
然后，对比不同验证结果的一致性和稳定性，评估方法的可靠性。
8.验证方法的可行性：根据实际的样品情况和验证结果，评估方法在操作上和技术上的可行性。
如，是否存在样品的特殊要求，检测方法是否能满足检测要求等。
四、数据处理与分析：根据实验结果的菌落计数和验证的次数，进行数据处理和统计分析。
评估验证结果的一致性、可靠性和可行性。
五、结论：根据实验结果和数据分析，得出关于药典中微生物限度检查方法的准确性、可靠性和可行性的结论。
如果验证结果与药典一致，说明方法可靠并可以使用。
如果验证结果与药典不一致，需要进一步分析原因和进行修正或优化。
微生物限度、控制菌检查记录
产品名称
批号
数量
供货单位
取样量
检验日期
温度
湿度
报告日期
检验依据
供试液制备
取供试品（g），加pH7.0无菌氯化钠蛋白胨缓冲液至ml，混匀，作为1:10的供试液；细菌检查：吸取本品1ml至5个平皿，每个平皿0.2ml；霉菌和酵母菌检查：吸取本品1ml至平皿
平皿号
细菌
培养基/批号
营养琼脂培养基/
供试品
阳性对照
阴性对照
结果
□检出□未检出（规定：）
备注
结论
本品按进行检验，结果。
检验人
复核人
2天
3天
3天
4天
4天
5天
5天
5
1天
1天
2天
2天
3天
3天
4天
4天
5天
5天
每组菌落总数
平均数
平均数
结果
（规定：）
结果
（规定：）
备注
结论
本品经按进行检验，结果。
检验人
复核人
控制菌检查记录
检验编号：
产品名称
批号
数量
供货单位
取样量
检验日期
温度
湿度
报告日期
检验依据
一、大肠埃希菌检查
供试品制备：取供试品（g/ml/cm2），加PH7.0无菌氯化钠蛋白胨缓冲液至ml，混匀，作为的供试液。
培养基信息：①营养肉汤培养基配制批号：②四硫磺酸钠亮绿培养基配制批号：
③胆盐硫乳琼脂培养基配制批号：④EMB配制批号：
培养温度：培养时间：培养箱编号：
营养肉汤预增菌（18～24h）
四硫磺酸钠亮绿增菌（18～24h）
微生物限度检查
02
微生物限度检查的实验 步骤
实验前的准备
实验器材
准备所需的培养皿、培养基、吸管、显微镜等实验器 材，确保其清洁度。
实验环境
确保实验室内无菌环境，进行空气灭菌，减少室内微 生物数量。
实验人员
实验人员需穿戴无菌工作服、口罩和手套，避免交叉 污染。
实验操作步骤
样品处理
将样品进行稀释、搅拌、离心等处理，使微 生物充分分散。
接种
将处理后的样品接种到培养基上，用涂布器 均匀涂布，确保微生物分布均匀。
培养
将接种好的培养基放入恒温培养箱中，设定 适宜的温度和时间进行培养。
观察与计数
培养后观察菌落生长情况，计数并记录结果。
实验后处理
01
02
03
清理实验器材
实验结束后，对使用过的 培养皿、吸管等器材进行 清洗和消毒。
废弃物处理
将实验产生的废弃物进行 灭菌处理后，按照实验室 规定进行废弃。
实验记录
对实验过程和结果进行详 细记录，以便后续分析和 总结。
03
微生物限度检查的实验 结果分析
实验结果解读
微生物种类
根据培养出的菌落形态和染色特征，确定微生 物的种类。
微生物数量
通过计数法或比例法，测定微生物的数量，以 判断样品中微生物的污染程度。
随着技术的进步，微生物限度检 查正朝着自动化和智能化的方向 发展，以提高检测效率和准确性。
快速检测技术
新型的快速检测技术如免疫学、 生物传感器和质谱技术等正在不 断涌现，有助于缩短检测时间。
基因组学技术的应
用
基因组学技术如宏基因组学和比 较基因组学为微生物限度检查提 供了新的手段，有助于更深入地 了解微生物种群结构和功能。
微生物限度检查与微生物总数检查
在实验结束后，应对实验室进行清洁消毒，避免对环境造成污染。同 时，对使用过的培养基、试剂等进行无害化处理。
THANKS
感谢观看
的接种和培养。
制备过程中，需根据不同样品类 型选择适当的处理方法，如破碎 、研磨、超声波破碎等，以充分
释放微生物。
同时，需注意避免供试液中微生 物的损伤和死亡，以保证后续实
验的准确性。
微生物接种与培养
微生物接种是将制备好的供试液转移到适当的培养基中，以促进微生物的生长和繁 殖。
接种过程中，需注意无菌操作，避免交叉污染。同时，需根据不同微生物的特性选 择适宜的培养基和培养条件。
微生物总数检查的重要性
食品安全
微生物总数是评估食品卫生质量 的重要指标，可以反映食品在生 产、加工、储存、运输等环节的
卫生状况。
药品安全
在药品生产过程中，微生物总数检 查有助于确保药品不受微生物污染 ，保障患者的用药安全。
环境监测
对环境中的微生物进行计数，可以 评估环境的卫生状况，预防疾病传 播。
03
微生物限度检查的实验步骤
供试液制备
供试液制备是微生物限度检查的第一 步，目的是将样品中的微生物充分释 放出来，以便后续的接种和培养。
制备好的供试液应尽快进行后续的接 种和培养，以免微生物死亡或繁殖。
制备过程中，需根据不同样品的性质 选择适当的处理方法，如震荡、超声 破碎、离心等，以充分释放微生物。
目的
确保产品在生产和处理过程中符合微 生物限量标准，保证产品的安全性和 有效性。
微生物限度检查的重要性
保障产品质量
通过微生物限度检查，可以及时发现 并控制微生物污染，从而保证产品的 质量和稳定性。
保障消费者权益
微生物限度检查项目实验报告
微生物限度检查项目实验报告
（一）培养基的制备：
Ⅰ测定微生物总量培养基：
1. 细菌培养基（牛肉膏蛋白胨琼脂培养基）牛肉膏Beefextract 5.0g 蛋白胨Peptone 10.0g NaCI 5.0g 蒸馏水H20
1000m1
PH 7.2~7.4
（二）实验方法：
1.样品采集
在靠近植株根系部, 去除表层0-5cm的表土，采集5~20 cm土壤剖面,多点采集, 混匀后四分法取1 kg, 装无菌塑料袋带回，4℃冰箱保存。
下图为倒平板
2.悬液制备
称取10g土壤样品，放入盛有90ml无菌水的三角瓶中，置于摇床上室温振荡20min，使土样与水充分混合，将土壤中的微生物细胞充分分散，从土壤中分离出来。
此为10-1土壤悬液，吸取lml此土壤悬液于9ml无菌水中，另用无菌吸管吹吸3次混匀，制成10-2土壤悬液。
以此类推依次制成10-3、10-4、10-5不同稀释度的土壤悬液。
3.细菌接种
将稀释的土壤悬液取100ul接种到事先准备好的培养基上，操作时注意必须是无菌操作。
下图为涂平板
4.培养
将平板置于37℃培养箱下培养24~48h，拍照计数并记录。
（三）实验记录：
由于平板放置太久，被空气中的虫卵污染，以至于长出了昆虫幼虫，使得下一步计数无法继续，实验失败。
微生物限度检查法
在30～35℃培养箱内倒置培养48h， 取出检查。 3个平板生长的平均菌落 数不超过1个。
无菌室操作台或净化工作台要定期
检测其洁净度，应达到A级。净化工 作台中的高效及中效过滤器应根据 检测情况，必要时予以更换处理。
1.6消毒处理
无菌室应在每次操作
前、后均用消毒液擦拭操作台及
可能污染的死角。开动层流净化
4.1.4 乳酸、15%过氧乙酸（交替用于对洁净 室熏蒸消毒）
稀释剂和试剂 4.2.1 0.9%无菌氯化钠溶液 4.2.2 无菌聚山梨酯 -80（对含油性 供试品具有助溶作用） 4.2.4 pH7.0无菌氯化钠蛋白胨缓冲 液 4.2.5 pH6.8磷酸盐缓冲液 4.2.6 pH7.6磷酸盐缓冲液等
保存 供试品在检验之前，应保存在阴 凉干燥处，勿冷藏或冷冻，以防供 试品内污染菌因保存条件不妥引起 致死、损伤或繁殖。
2
2.1
2.2
供试品在检验之前，应保持原包 装状态，严禁开启。包装已开启的 样品不得作为供试品。
3检验量 即一次试验所用的供试品量（g、ml
或
c㎡）。 除另有规定外，一般供试品的检验量为 10g 或10ml；膜剂为100c㎡；贵重药 品、微量包装药品的检验量可以酌减。 要求检查沙门菌的供试品，其检验量应 增加20g 或20ml（其中10g或者10ml 用于阳性对照试验）。
2
开启无菌室紫外杀菌灯和空气过 滤装置，并使其工作不低于30min。 操作人员用肥皂洗手，关闭紫外 杀菌灯，进入缓冲间，换工作鞋。 再用消毒液洗手或用乙醇棉擦手， 穿戴无菌衣、帽、口罩、手套。
3
4
操作前先用乙醇棉球擦手，再用 碘伏棉球（也可用乙醇棉球）擦 拭供试品瓶、盒、袋等的开口处 周围，待干后用灭菌的手术镊或 剪刀将供试品启封。
微生物限度检验记录
微生物限度检验记录一、检验目的：确认产品是否满足微生物限度要求，保证产品的安全性和质量。
二、检验项目：1.总大肠菌群：用于评估产品是否受到粪便污染。
2.霉菌和酵母菌：用于评估产品是否受到霉菌和酵母菌的污染。
3.沙门氏菌：用于评估产品是否受到沙门氏菌的污染，沙门氏菌是一种常见的食源性病原菌。
4.铜绿假单胞菌：用于评估产品是否受到铜绿假单胞菌的污染，铜绿假单胞菌是一种常见的致病菌。
5.谷氨酰胺酶阳性菌：用于评估产品是否受到谷氨酰胺酶阳性菌的污染，谷氨酰胺酶阳性菌是一种常见的致病菌。
三、检验步骤：1.样品准备：从产品中取得一定量的样品，确保样品的代表性。
2.样品处理：根据产品的不同特性，选择适当的方法进行样品处理，如水解、稀释等。
3.培养基制备：根据所需的检验项目，制备相应的培养基。
4.培养基接种：将处理后的样品接种到相应的培养基中，利用无菌技术确保操作的无菌。
5.培养：将接种过的培养基培养在适宜的温度和湿度条件下，培养一定的时间，一般为24-72小时。
6.检查结果：观察培养基上是否有菌落形成，记录菌落的数量和形态特征。
7.鉴定：对培养出的菌落进行进一步的鉴定，如形态学观察、生理生化特性测试等。
8.统计和分析：根据检查结果，统计并分析微生物的数量，计算出产品的微生物限度。
四、检验结果：1.总大肠菌群：每克不超过100个。
2.霉菌和酵母菌：每克不超过10个。
3.沙门氏菌：每克不得检出。
4.铜绿假单胞菌：每克不得检出。
5.谷氨酰胺酶阳性菌：每克不得检出。
五、检验记录样例：日期：2024年4月1日样品名称：XXX产品检验员：XXX检验项目：1.总大肠菌群结果：每克10个，符合微生物限度要求。
2.霉菌和酵母菌结果：每克2个，符合微生物限度要求。
3.沙门氏菌结果：未检出，符合微生物限度要求。
4.铜绿假单胞菌结果：未检出，符合微生物限度要求。
5.谷氨酰胺酶阳性菌结果：未检出，符合微生物限度要求。
六、结论：根据检验结果，XXX产品符合微生物限度要求，产品安全可靠。
微生物限度检查
、微生物限度检查1、供试液的制备：（1）固体供试品固体供试品包括片剂、丸剂、胶囊剂。
称取供试品10g放入灭菌好的匀浆杯中，加稀释剂100ml，启动匀浆仪,以每分钟3000转，旋转3分钟，使供试液均匀，制成1：10供试液。
（2）液体供试品取供试品10ml放入已灭菌锥形瓶中，加入90ml稀释剂，使均匀，制成1：10供试液。
（3）非水溶性供试液制备称供试品5g，加入装有已灭菌融化的温度约45℃的司盘-80 5g，单硬脂酸甘油3g和聚山梨酸10g混合物锥形瓶中,摇匀，加0.9%灭菌氯化钠溶液80ml使供试品充分乳化，制成1：20供试液。
2、细菌霉菌（酵母菌）计数：以固体供试液为例，供试液以10倍递增稀释，将匀浆杯中内容物摇匀，取2-3支灭菌中试管，分别加入9ml 灭菌稀释剂。
另取一支1ml灭菌吸管，吸取供试液1ml，加入第一支试管中，混匀，制成1：100的供试液，以此类推，作10倍递增稀释。
根据供试品污染的程度可稀释至10-3或10-4，一般取连续三级稀释液检验。
取吸管分别吸取1ml 10-1供试液加入4平皿中。
再取另一支吸管分别取第二级稀释液1ml加入4个平皿中，第三级稀释液同样操作。
将45℃左右的营养琼脂培养基按每一级稀释液倒入2个平皿，每个平皿15-20ml，立即摇匀。
再取玫瑰红钠琼脂培养基按每一级稀释液倒入2个平皿，同样操作。
细菌数和灭菌数的阴性对照试验：分别吸取稀释剂各1ml加入到4个平皿中，再分别加入营养琼脂培养基和玫瑰红钠琼脂培养基各制成2个平板。
检查细菌的平板倒置于30-35℃培养箱中，培养2天。
检查霉菌的平板倒置于25-28℃培养箱中，培养3天。
逐日观察并记录结果。
阴性对照的平板培养后均不得长菌。
3、大肠杆菌检查：取胆盐乳糖培养基3份，每份100ml，两份分别加入规定量的供试液，其中一份加对照菌50-100个作阳性对照。
第三份加入与供试液等量的稀释液作阴性对照，培养18-24小时。
阴性对照应无菌生长。
复方黄连素片微生物限度检查法的建立及检验结果分析_刘广桢
（ Shandong Institute for Food and Drug Control，Jinan 250101，China）
Abstract Objective： To establish the method of microbial limit test of Fufang Huangliansu tablets，and analyze the test results of 198 batches from 26 manufacturers． Methods： The membrane filtration method was used for bacteria counting． The medium dilution method was used for counting total combined molds and yeasts． The direct inoculation method was used for the detection of Escherichia coli and coliform bacteria． Ｒesults： The validation of method tests of 26 batches from 26 manufacturers was conducted． The recoveries of five validation strains for the count of bacterium，total combined molds and yeasts were more than 70% ． In validation of method tests on Escherichia coli and coliform bacteria，validation strains were detected． Conclusion： It is satisfactory that the results of microbial limit tests of 198 batches of Fufang Huangliansu tablets from 26 manufacturers meet test requirements． Key words： Fufang Huangliansu tablets； microbial limit test； validation of method； routine method； medium dilution method； membrane filtration method； direct inoculation method； quality analysis
微生物限度检验
2007.4
1
微生物限度检查 (Microbial Limits Test) ：
是指非无菌制剂及原，辅料受到微生物污染程度的检查。 包括：
1）细菌计数； 2）霉菌及酵母菌计数； 3）控制菌检查：大肠杆菌，沙门菌，铜绿假单胞菌，金黄色葡 萄球菌，大肠菌群
2
细菌、霉菌及酵母菌计数
大肠杆菌 1g (1ml)样品 样 100ml 胆盐乳糖 培养基 35-37 ℃,18-24h 大肠菌群 1g (1ml)样品 样 3X10ml 胆盐乳 糖发酵管 35-37 ℃,18-24h 沙门菌 10g (10ml)样品 样 200ml 营养肉汤 营养肉 铜绿假 铜绿假单胞菌 1g (1ml)样品 样 100ml 胆盐乳糖 培养基 35-37 ℃,18-24h 金黄色葡萄球菌 1g (1ml)样品 样 100ml 亚碲酸钾 碲酸钾 肉汤 (或营养肉汤) 或营养肉 35-37 ℃,18-24h 梭菌 1g (1ml)样品X2 样 (其中一份样品80 其中一份样 其中一份 ℃,10分钟) 分 100ml 新鲜庖肉 培养基 厌氧, 35-37 ℃,72-96h
8
验证目的
确认一种检验方法。 验证实验 检验条件 检验方法
检验规程
样品量 稀释液种类 稀释液体积 中和剂 培养基 培养时间 培养温度 ……
SOP
9
影响微生物检验的因素
- 样品/药品自身的特殊性 - 样品/药品中添加的防腐剂/抑菌剂 - 培养基的特性 - 培养条件 - 人员因素 - 实验器材的选择
甘露醇氯 甘露醇氯化钠琼 脂 (或卵黄氯化钠琼 或卵黄氯 或卵黄 脂) 35-37 ℃,18-72h
0.2ml 涂抹于 含庆大霉素的哥 亚琼脂 伦比亚琼脂 厌氧, 35-37 ℃,48-72h
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微生物限度检查
检验任务:金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌、沙门菌的检测
一、实验目的
1.熟悉药品中金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、沙门氏菌的检验原理。
2.熟悉检验金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、沙门氏菌的程序与方法。
二、实验材料
1、培养基和稀释液：亚碲酸钠肉汤（或亚碲酸钠北沙参胨水培养基）、卵黄高盐琼脂（或血平板或TMP高盐琼脂）、营养琼脂斜面培养基、甘露醇发酵管、胆盐乳糖增菌液、十六烷三甲基溴化铵培养基、绿脓色素测定用培养基（PDP琼脂）、硝酸盐胨水平板（DHL）、明胶液化培养基，营养琼脂培养基、四六磺酸钠绿亮培养基（TYB増菌液）、胆盐硫乳琼脂、沙门、志贺菌属培养基（SS）、曙红亚甲蓝琼脂（EMB）、麦康凯琼脂（MacC）、三糖铁琼脂培养（TSI培养基）、脲琼脂培养基、半固体营养琼脂培养基、0.9%无菌氯化钠溶液-蛋白胨缓冲液。
2、器皿
灭菌锥形瓶（50ml）、灭菌培养皿、刻度吸管
试剂（已配好）：1%二甲基对苯二胺盐试液、氯仿、IN盐酸、NS
第一次培养基的配制
1.培养基及稀释液：
0.9%无菌氯化钠溶液-蛋白胨缓冲液
配方：氯化钠4.3g 蛋白胨1.0g 磷酸二氢钾3.5g 磷酸氢二钾7.23g 水1000ml
亚碲酸钠肉汤：90ml/瓶*3瓶
卵黄高盐琼脂培养基（或TMB培养基或血琼脂平板）：3个*20ml/个
营养琼脂斜面：3个平皿*约20ml/个
甘露醇发酵管：3支*5ml/支
TYB増菌液：90ml/瓶*3
胆盐硫乳琼脂培养基（或沙门氏、志贺菌属琼脂）：20ml/个*3个
麦康凯琼脂培养基（或曙红亚甲蓝琼脂培养基）：20ml/个*3
三糖铁琼脂斜面培养基：5ml/支*3支
脲琼脂培养基斜面：5ml/支*3支
半固体营养琼脂培养基：5ml/支*3支
胆盐乳糖增菌液（BL増菌液）：90ml/瓶*3瓶
十六烷三甲基溴化铵平板：6个*20ml/个
PDP琼脂斜面：3支*5ml/支
硝酸盐胨水培养基：3支*5ml/支
明胶培养基：5ml/支*3支
第二次供试液及増菌液的制备
供试液的制备
取供试液10ml，加入Ph7.0无菌氯化钠溶液-蛋白胨缓冲液90ml，混匀，制成1：10供试液。
稀释倾注培养基
将供试液倾注入已加稀释液的无菌平板，每个稀释度注2个平皿，每个平皿约15-20ml，将
供试液和培养基混匀，放置，待凝。
取亚碲酸钠肉汤（或亚碲酸钠北沙参胨水培养基）3份，每份100ml，分别加入10ml供试液，10ml供试液及0.2ml对照菌液做阳性对照，与加入供试液等量的稀释剂作阴性对照。
置于37℃环境下培养24-48h。
取四六磺酸钠绿亮培养基（TYB増菌液）3份，每份100ml，分别加入10ml供试液，10ml 供试液及0.2ml对照菌液做阳性对照，与加入供试液等量的稀释剂作阴性对照。
置于℃环境下培养
取胆盐硫乳琼脂培养基（或沙门氏、志贺菌属琼脂）3份，每份100ml，分别加入10ml供试液，10ml供试液及0.2ml对照菌液做阳性对照，与加入供试液等量的稀释剂作阴性对照。
置于37℃环境下培养18-24h
第三次分离培养
将上述各种供试品培养液轻轻摇动，以接种环沾取1~2环培养液划线至下类各种培养基培养基种类细菌种类
金黄色葡萄球菌
卵黄高盐琼脂培养基（或
TMB培养基或血琼脂平板）
十六烷三甲基溴化铵平板绿脓杆菌
胆盐硫乳琼脂培养基（或沙
沙门氏菌
门氏、志贺菌属琼脂）
沙门氏菌
麦康凯琼脂培养基（或曙红
亚甲蓝琼脂培养基）
置于37℃，培养18~24h
第四次
金黄色葡萄球菌：
取金黄色葡萄球菌纯培养物，接种于甘露醇发酵管中，置于37`C培养18~24h。
【金黄色葡萄球菌发酵甘露醇产酸使培养基变成黄色（溴麝香草酚蓝在酸性条件下呈黄色）】。
绿脓杆菌：
绿脓色素试验与硝酸盐还原试验
挑取分离的纯培养物分别接种于PDP琼脂斜面，硝酸盐胨水培养基中，置37℃培养24h。
明胶液化试验
用接种针取疑似绿脓杆菌菌落，穿刺接种于明胶培养基内，置37℃培养24h。
42℃生长试验
挑取纯培养物，接种在营养琼脂斜面培养基上，置42℃水浴中培养24～48h，
沙门氏菌：
脲酶试验：取菌种接种于脲琼脂培养基斜面，置于37℃培养18～24h
动力试验：穿刺接种于半固体营养琼脂培养基，置于37℃培养18～24h
第五次生化实验和镜检、表格填写
1.生化实验
金黄色葡萄球菌：
（1）.甘露醇发酵试验
若发酵甘露醇产酸使培养基变成黄色（溴麝香草酚蓝在酸性条件下呈黄色）。
则证明有金
黄色葡萄球菌
（2）.血浆凝固酶试验
①.玻片法取一洁净干燥的载玻片在两边分别滴加NS和血浆各一滴，用接种环取待检菌
分别在NS和血浆滴中充分研磨混合，观察反应现象。
凡在5min内混箘的血浆出现团块或颗粒状凝块，为血浆凝固酶试验阳性。
而混菌的生理盐水仍呈均匀浑浊状。
若混菌后的血浆和生理盐水仍都呈均匀浑浊状者，其结果为阴性。
②.试管法
取无菌小试管2支，用无菌吸管吸取血浆原液或1：1盐水血浆稀释液加入试管中，每管各0.5ml，然后用无菌吸管吸取待检肉汤培养物0.5ml,然后用无菌吸管吸取待检肉汤培养基0.5ml，或用接种环直接取斜面培养基上的菌苔，与其中一支血浆试管中的血浆充分混和，另一支试管不加菌作对照。
将2支小试管同时放在37`C温箱内保温3h后开始检查，若加菌的血浆试管中24h内出现凝固现象，不加菌的血浆试管血浆仍呈液体状，为血浆凝固酶试验阳性，若两者均无凝固现象，则为阴性。
绿脓杆菌：
（1）氧化酶试验
具有氧化酶的细菌能将二甲基对苯二胺氧化，使试剂中的氢脱出与氧结合，试剂则被氧化成红色的醌类化合物。
取一小块白色洁净的滤纸片放在平皿内，用无菌玻璃棒挑取疑似绿脓杆菌菌落涂在滤纸片上，再滴加新配制的1%二甲基对苯二胺盐酸盐试液一滴。
在30s之内，纸片上的待检物如出现粉红色，并逐渐变为紫红色，即为氧化酶试验阳性。
如待检物不变色，则为阴性。
注意事项：①铁等金属能催化二甲基对苯二胺液呈红色，故不宜用接种环取菌苔，可用玻璃棒或干净火柴杆取菌；②在滤纸上滴加试剂以刚湿润为宜，如太湿则阻碍空气与菌苔接触，使呈色时间延长，造成假阴性；③二甲基对苯二胺盐酸盐试液容易氧化，应装在棕色瓶中，置冰箱保存，如变红色则不宜使用。
（2）绿脓色素试验
在试管内加氯仿3-5ml，搅碎培养基并充分振摇，将琼脂斜面培养物产生的色素提取在氯仿中。
待氯仿提取液呈蓝绿色时，用滴管将其移至另一试管中，然后加入1ml1mol/L盐酸溶液，振摇后静置片刻，如在上层的盐酸溶液内出现粉红色，即为阳性，证明被检菌的培养物中有绿脓色素。
（3）硝酸盐还原试验
观察反应结果，如该菌还原硝酸盐，并将亚硝酸盐分解产生氮气，培养液中的杜氏小倒管内就会出现气泡，该实验结果为阳性。
（4）明胶液化试验
如穿刺局部呈液化状态，取出放冰箱内冷藏10～30min，仍呈溶液状，则明胶液化试验为阳性。
（5）42℃生长试验
观察生长状况，有菌苔生长者为阳性。
沙门氏菌：
靛基质试验：
脲酶试验：观察现象，加入酚红指示剂后呈红色为阳性
氰化钾试验：
赖氨酸脱羧酶试验：紫色或紫红色：阳性，黄色：阴性
动力试验：有鞭毛能运动：有沙门菌
血清凝集试验：用可疑菌作为抗原，沙门菌A~F“O”多价血清作为抗体进行玻片凝集反应，并以生理盐水做对照试验。
试验检测出凝集现象表明可能是沙门氏菌，若凝集试验为阴性，则可将菌液于100℃水浴保温30min后再做凝集试验
2.镜检
取纯培养物，涂片，革兰色染色，显微镜油镜下观察
结晶紫（1min）---碘液（1min）--酒精（30min）--复红
3.表格填写
药品微生物限度检查试验记录
检品编号：室温：湿度：
检品名称规格
批号包装效期
生产单位检品数量
供样单位収验日期
检验目的检验日期
检验依据报告日期
供试液制备：1.常规法供试品 g（ml）Ph7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液 ml
①匀浆仪挡 min ②研钵法保温振摇法
2.非水溶性供试品供试品 g/ml 加乳化剂（ g或ml）
3.抑菌性供试品处理方法供试品 g/ml Ph7.0无菌氯化钠-蛋白胨
缓冲液 ml
方法
细菌数30～35℃ 48h 霉菌（酵母菌）总数25～28℃ 72h
原液
1
10-1
10-1
10-阴性
对照
原液
1
10-1
10-1
10-
阴性
对照
1
2
3
平均
结果CFU/g或ml CFU/g或ml。