微生物限度方法学验证
微生物限度方法学验证方案
微生物限度方法学验证方案1.实验目的：本实验的目的是确定产品中大肠杆菌的数量，以评估其微生物污染程度，并验证产品是否符合相关规定的微生物限度标准。
2.实验材料和仪器：-试样：待测试的产品样品（如药品、食品等）-培养基：亚洲太平洋社会协调委员会（APHA）液体培养基或平板培养基-培养器具和耗材：试管、平板、无菌纱布、无菌拔火棉、无菌吸管、无菌移液器、无菌塑料培养瓶等-仪器设备：恒温箱、培养箱、显微镜等3.实验步骤：3.1样品制备：将待测试产品样品均匀涂布于无菌培养基平板上，根据需要，将不同稀释度的样品分别涂布于多个平板上。
3.2培养：将涂布好样品的平板放入恒温箱或培养箱中，在适当的温度（通常为37°C）下培养一定时间（通常为24小时）。
在培养的过程中注意保持无菌环境。
3.3平板计数：在培养完成后，检查每个平板上的菌落形成情况。
根据实验需要，可以选择不同的方法进行菌落计数。
常见的方法有手工计数和自动计数仪器。
例如，使用显微镜进行手工计数，或使用自动计数仪器进行电子计数。
3.4数据处理：根据菌落计数结果计算大肠杆菌的数量，并将结果与相关的微生物限度标准进行比较。
如果实验结果符合标准，则产品可被视为合格；如果结果不符合标准，需要采取相应的控制措施，如重新调整产品配方、改变生产工艺等。
4.实验注意事项：-所有试验操作都必须在无菌环境中进行，以避免结果被外源性微生物污染。
-使用符合相关质量标准的试剂和培养基。
-实验前应进行适当的预试验，以确定最佳的稀释度和培养条件。
-大肠杆菌计数要根据不同的产品、数量和国家的相关标准来确定。
-实验结果的准确性和可靠性需要重复试验和验证。
通过以上实验步骤和注意事项，可以进行微生物限度方法学验证，确定产品中大肠杆菌的数量，并评估其微生物污染情况。
这个验证方案可以用于药品、食品和其他产品的质量控制和安全评估。
微生物限度方法学验证
微生物限度方法学验证
微生物限度方法学验证是一种用于确定化妆品和药品中微生物污染水平的方法。
这种验证方法用于确定产品是否符合微生物限度规定，并确保产品的安全性和质量。
微生物限度方法学验证的步骤包括：
1. 根据相关规定选择适当的微生物限度测试项目。
常见的微生物测试项目包括总生菌数、霉菌和酵母菌、大肠菌群等。
2. 准备适当的培养基和培养条件，以促使微生物在培养基上生长。
3. 从样品中获取适当的微生物培养物。
样品可以是产品中的一部分或整个产品。
4. 在适当的培养基上接种微生物培养物。
5. 在适当的环境条件下孵育培养基，以促进微生物生长。
6. 定期检查培养基的生长情况，包括观察菌落形态和计数菌落数量。
7. 将菌落转移到适当的检测方法中，如涂抹法、膜过滤法等。
8. 使用适当的培养基和培养条件，在适当的温度和pH条件下，观察和计算培养基上的微生物生长数量。
9. 比较结果与规定的微生物限度标准，确定产品是否符合要求。
微生物限度方法学验证可以帮助制药和化妆品行业确保产品的微生物质量，并确保产品在使用过程中不会对消费者的健康有害。
这种验证方法需要严格的实验室操作和合理的测试标准，以确保结果的准确性和可靠性。
微生物限度检查方法验证方案
微生物实验室检测设备配置方案微生物限度检查方法验证方案1.目的：为确认所采用的方法适合于该药品的微生物限度检查，包括细菌、霉菌及酵母菌计数和控制菌检查，特制定本验证方案，通过比较试验菌的恢复生长结果，来评价整个检验方法的准确性、有效性和重现性，以确认供试品在该实验条件下无抑菌活性或其抑菌活性可忽略不计，所采用的方法适用于该品种的微生物限度检查。
验证过程应严格按照本方案规定的内容进行，若因特殊原因确需变更时，应填写验证方案修改申请并报验证领导小组批准2.范围：本验证方案适用于微生物限度检查方法的验证。
3.规范性引用文件：根据《中国药典》2010年版二部附录XI J微生物限度检查法的要求，由于某些供试品具有抗菌活性，在建立微生物检查方法或产品的组分发生改变或原检查法的检验条件发生改变时，可能影响检验结果的准确性，必须对供试品的抑菌活性及测定方法的可靠性进行验证。
4.验证实施：4.1.1试验前的准备：4.1.1.1试验用具的准备：将试验需用的试管、刻度吸管、薄膜过滤器、滤膜（孔径0.22um、直径50mm）、平皿、空三角瓶、称量纸等，用牛皮纸包扎好后，放于湿热灭菌器中，在121℃,灭菌30 min,在3天内使用。
4.1.1.2试验用培养基的制备：取适用性检查合格的营养琼脂培养基、玫瑰红钠琼脂培养基、营养肉汤培养基、胆盐乳糖培养基（BL）、改良马丁琼脂培养基、4-甲基伞形酮葡糖甘酸培养基（MUG）等脱水培养基，按照相应的配制微生物实验室检测设备配置方案说明，用纯化水配制、分装后，在2小时内，放于湿热灭菌器中，在121℃, 灭菌15 min，在3周内使用。
4.1.1.3试验用稀释剂/缓冲液、冲洗液的制备：取在有效期内的试剂，按照相应的配制方法，配制pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液、0.9%无菌氯化钠溶液、0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液等，用纯化水配制，加热使溶，过滤，分装，在121℃，灭菌15 min，在3周内使用。
中国药典无菌、微生物限度与细菌内毒素检查方法学验证内容详解
国家药典委员会
中国药品生物制品检定所
二00五年十月十一日
● 验证的目的: 验证所采用的方法和条件是否适合 于供试品的无菌检查。 即确认供试品在该检验量、该检验条件下无抑菌 活性或其抑菌活性以被充分消除到可以忽略不计。 ● 验证的意义：保证检验结果的准确、可靠及检 验方法的完整性。
二、无菌检查验证的关键点
中检所和药典会多次召开会议肯定工作的成绩、 研讨存在的问题，希望各级领导能给予高度重 视，从各方面支持这项工作长期持续发展。 实际工作中，药品生产、研发企业和各级药检 所在工作中都存在很多困难和问题。
关于执行《中国药典》2005年版微生物限度 检查法和无菌检查法有关问题的说明
国药典发[2005]98号
验证的目的是为了确认试验中供试品应选择药 典中所收载的何种供试液制备方法、何种测定
方法及确定的检测系统是否适用于该供 试品的检验，即只有通过方法验证，才 能确定供试品的检验条件和方法，保证 “微生物限度检查”或“无菌检查”方法的 科学性和检验结果的准确性。
2．不同企业生产的相同品种，特别是中 成药，因原料来源、工艺、辅料的不同， 药品可能表现出不同的抑菌特性；同一个 企业生产的相同品种，因原料来源不同、 工艺改变或不同实验室等原因，也可能导 致检测结果的差异。因此，不同企业生产 的相同品种进行“微生物限度检查”或“无菌 检查”时，其具体试验方法如冲洗量等不 能简单照搬，需通过验证试验核实该试验 方法和检测系统是否适宜。
生孢梭菌 (Clostridium sporogenes) [CMCC(B) 64 941]
白色念珠菌 (Candida albicans) [CMCC(F) 98 001]
黑曲霉 (Asperglllus niger) [CMCC(F) 98 003]
微生物方法学验证
速效心痛滴丸2.微生物限度检查参照中国药典2005年版一部要求，对微生物限度检查作验证试验如下：2．1微生物限度检查法验证实验2.1.1.验证用菌种：金黄色葡萄球菌CMCC（B）26 003、枯草杆菌CMCC （B）63 501、大肠埃希菌CMCC（B）44 102、白色念珠菌CMCC（F）98 001、黑曲霉CMCC（F）98 0032.1.2方法：中国药典2005年版附录一部XIII C 微生物限度检查方法验证试验。
2.1.3操作方法：（1）菌液制备：a. 取经37℃培养24h金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草杆菌的肉汤培养物1ml+9ml生理盐水10倍稀释至10-5（细菌数约为50~100cfu/ml）做活菌计数备用。
b. 取经25℃培养24h的白色念珠菌肉汤培养物1ml+9ml生理盐水10倍稀释至10-5（细菌数约为50~100cfu/ml）做活菌计数备用。
c. 取经25℃培养1周的黑曲霉斜面培养物，用5ml生理盐水洗下霉菌孢子，吸取菌液，用标准比浊管比浊，然后取1ml+9ml生理盐水10倍稀释至10-4（细菌数约为50~100cfu/ml）做活菌计数备用。
（2）供试液制备：称取供试品10g，研细，加pH7.0的无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml，用匀浆仪，混匀，作为1:10的供试液，分别人工污染上述5种代表实验菌株。
（3）回收率测定a. 实验组：取1:10供试液1ml和1ml实验菌液同时加入平皿中，立即倾注琼脂培养基，待凝固后，置规定温度培养24~72小时，观察计数。
b. 活菌组：照上述方法测定每1菌株的实验菌数。
c. 供试液对照：测定供试品本底菌数。
d. 稀释剂对照组，取稀释液同法操作，测定，应无菌生长。
4.结果：菌落计数结果，回收率实验结果，见表2、表3：表2 菌落计数（cfu/ml）从表3可知，玉屏风泡腾颗粒样品处理后，按常规法进行微生物限度检查，供试品对5种菌株的回收率试验均高于70%可采用此法检验。
药品微生物限度方法学验证
药品微生物限度方法学验证一、目的：建立外用药类微生物限度检查，细菌、霉菌及酵母菌的计数方法及控制菌：金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌的检验方法。
二、范围：三、引用标准：四、内容：4.1、仪器及设备：干燥箱、生化培养箱、超净工作台、培养皿。
4.2、试剂：4.3、验证所用菌种：大肠埃希菌CMCC(B) 44102黄金色葡萄球菌CMCC(B) 26003枯草芽孢杆菌CMCC(B) 63501白色念珠菌CMCC(F)98001黑曲霉CMCC(F) 98003铜绿假单胞菌CMCC(B) 10104此上菌种均为中国生物制品检定所购买，且传代次数未超过五代4.4、验证所用样品：五、试验过程5.1菌液制备：分别取经35°的制培养24小时的金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌的营养肉汤培养物1ml，加至9ml生理盐水中，逐管10倍量稀释制成每1ml含菌量在50-100cfu。
取经25°培养24小时白色念珠菌的改良马丁培养物1ml，逐管10倍量稀释制成每1ml含菌量在50-100cfu。
取经25°培养1周的黑曲霉的改良马丁琼脂斜面培养物，加0.9%无菌氯化钠溶液5ml 洗脱孢子，取1ml孢子液用0.9%无菌氯化钠溶液，逐管10倍量稀释至每1ml含孢子数为50-100cfu的孢子悬液。
5.2．供试品溶液的制备：称取林旦乳膏10g，加PH7.0无菌氯化钠－蛋白胨缓冲液100ml，混匀。
5.3．回收率测定5.3.1．细菌数测定（1）、试验组：培养基稀释法取供试液0.1ml及每1ml中含5－100CFU的枯草芽孢杆菌菌悬液1ml，分别注入营养琼脂培养基，平行制备10个平皿，培养，计数。
（2）、菌液组：测定所加的试验菌数。
（3）、供试品对照组：测定样品的本底菌数。
（4）回收率计算试验组菌回收率= 试验组平均菌落数－供试品对照组平均菌落数×100%菌液组平均菌落数5.3.2、霉菌及酵母菌计数法（1）、试验组：培养基稀释法称取林旦乳膏10g，加PH7.0无菌氯化钠－蛋白胨缓冲液100ml、取供试液0.1ml 及每1ml中含50－100CFU的黑曲霉菌菌悬液1ml，分别注入玫瑰红钠琼脂培养基，平行制备10个平皿，培养，并测定其菌落数。
微生物限度方法学验证
微生物限度方法学验证微生物限度方法学验证是指通过一系列的实验和分析，确定某一产品或样品中所含微生物的数量和种类。
它是一种质量控制的重要手段，用于评估产品的微生物污染情况，确保产品符合安全要求。
微生物限度方法学验证通常包括以下几个步骤：1. 确定样品的限度：首先，需要确定限度的范围。
在国家标准和相关规范中，通常会对不同产品的微生物限度进行规定，根据产品的特性和用途，设定了不同的限度要求。
因此，在进行验证之前，需要先明确所要验证的产品的限度。
2. 提取样品：根据所要验证的产品特性，选择适当的方法提取样品。
提取样品的目的是将样品中的微生物完全释放出来，以便后续的实验分析。
3. 预培养或净化：在某些情况下，样品中的微生物数量非常少，无法直接进行分析。
此时，需要进行预培养或净化操作，增加微生物数量或减少其他杂质的干扰。
预培养可以使用适当的培养基，为微生物提供生长所需的营养物质和条件。
净化操作可以通过滤膜、离心等方法，将大部分的杂质去除。
4. 微生物分离和鉴定：将样品进行稀释处理，并分别均匀涂布在适当的培养基上。
在一定的时间和温度条件下，培养基上会出现不同形状和颜色的菌落。
通过观察菌落的特征、形态学和生理学测试，可以大致判断出菌落所属的微生物种类。
5. 统计分析：通过对微生物菌落进行计数，并根据所设定的限度要求进行统计分析。
常用的统计方法包括平板计数法、薄膜过滤法和浸入法等。
统计分析的结果可以得知样品中微生物的数量和种类，进而判断样品是否符合限度要求。
6. 结果判定：根据统计分析的结果，结合所设定的限度要求，判断样品是否合格。
如果样品中的微生物数量和种类在限度范围内，并且符合相关标准要求，那么样品可以被认为是合格的。
微生物限度方法学验证具有一定的复杂性和技术难度，需要操作人员具备一定的实验室技术和知识。
同时，验证过程中要严格控制实验条件，确保实验结果的准确性和可靠性。
此外，验证结果需要及时记录和整理，以便对产品质量的稳定性进行评估和改进。
微生物限度检验方法验证报告
微生物限度检查检验方法验证报告
方案编制年月日方案审核年月日方案批准年月日
上海美宝生命科技有限公司
7
7.1试验样品
确认人：日期：
7.2 产品试验组微生物生长情况：批号：
检验人：日期：复核人：日期：7.3 供试品对照组微生物生长检查情况：批号：
检验人：日期：复核人：日期：
7.4 稀释剂对照组微生物生长检查情况：批号：
检验人：日期：复核人：日期：7.5 菌液组微生物生长检查情况：批号：
检验人：日期：复核人：日期：
7.6稀释剂对照组菌回收率计算
检验人：日期：复核人：日期：7.7 试验组菌回收率计算
检验人：日期：复核人：日期：
7.8 结果说明
经过验证，大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉的回收率分别为： %、 %、 %、 %、 %。
稀释剂回收率为： %、 %、 %、 %、 %。
7.9 结论
以上验证结果证明，本品（适合/不适合）采用上述方法进行微生物限度检查。
附录。
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微生物限度检查
方法学验证
一、检验方法
依据微生物计数法（中国药典2015年版四部1105）；控制菌检查法（中国药典2015年版四部1106）；非无菌药品微生物限度标准（中国药典2015年版四部1107）；抑菌效力检查法（中国药典2015年版四部1121）检查。
二、菌种、培养基及稀释液
表2培养基
表3对照用培养基
表4试剂
稀释液：
（1）pH6.8缓冲液
取0.2mol/L磷酸二氢钾溶液250ml,加0.2mol/L氢氧化钠溶液118ml,用水稀释至1000ml，摇匀，既得。
（2）0.9%无菌氯化钠溶液
取氯化钠9.0g，加水溶解使成1000ml，过滤，分装、灭菌。
（3）0.05％（ml/ml）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液
取聚山梨酯80 0.5ml，用0.9％无菌氯化钠溶液溶解并稀释至1000ml，滤过，分装，灭菌，备用。
（4）靛基质试液
取对二甲氨基苯甲醛1.0g，加入95%乙醇95ml，充分振摇，使完全溶解后，取盐酸20ml徐徐滴入。
三、菌液的制备
1细菌、霉菌、酵母菌
接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基中，培养24小时；接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养基上，培养48小时。
上述培养物用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数为50～100cfu的菌悬液备用。
接种黑曲霉的新鲜培养物至改良马丁琼脂斜面培养基上，培养7天，加入
5ml含0.05％（ml/ml）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液,将孢子洗脱，然后吸出孢子悬液（用带有无菌棉花的能过滤菌丝的无菌毛细吸管）用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含孢子数50～100cfu的孢子悬液。
菌液制备后若在室温下放置，应在2小时内使用，若保存在2～8℃可在24小时内使用。
2控制菌
接种大肠埃希菌、乙型副伤寒沙门菌、金黄色葡萄球菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基中，培养24小时。
用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数为10～100cfu 的菌悬液。
菌悬液在室温下放置应在2小时内使用，若保存在2～8℃可在24小时内使用。
四、验证内容
1、计数方法验证
将制备好的菌悬液用0.9%无菌氯化钠溶液以每10倍体积分别稀释成一系列浓度菌悬液，利用血球计数板计数，确定具体菌悬液浓度，取接近于10cfu-100cfu的稀释浓度，选取各项试验项下的规定浓度进行实验。
稀释及观察均应在阳性室内完成。
经过验证当原液稀释至10-6时，菌液浓度接近100cfu/ml。
2、适用性检查
2.1细菌、霉菌、酵母菌
取大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌各1ml(内含菌约50～100cfu)，分别注入无菌平皿中，立即倾注营养琼脂培养基，每株试验菌平行制备2个平皿，混匀，凝固，置30～35℃培养48小时，计数；取白色念珠菌、黑曲霉1ml(内含菌约50～100cfu)，注入无菌平皿中（取用黑曲霉时应注意自身安全），立即倾注玫瑰红钠琼脂培养基，每株试验菌平行制备2个平皿，混匀，凝固，置23～28℃培养72
小时，计数。
同时，用相应的对照培养基替代被检培养基进行上述试验，作为对照。
其大小、形态应与对照培养基一致，且数量应不小于对照培养基的70%。
细菌、霉菌及酵母菌培养基适用性检查
培养基中细菌、霉菌、酵母菌的生长情况良好，回收率在80%，且与对照培养基状态一致，证明此批次培养基可以准确的检测出相应微生物情况。
2.2控制菌
2.2.1促生长能力
取大肠埃希菌菌悬液0.1ml（内含菌约10～100cfu），分别置于胆盐乳糖培养基、MUG培养基、营养肉汤培养基中；取乙型副伤寒沙门菌0.1ml（内含菌约10～
100cfu），分别接种于营养肉汤培养基、四硫磺酸钠亮绿培养基，取乙型副伤寒沙门菌0.1ml（内含菌约10～100cfu）涂布于胆盐硫乳琼脂培养基、曙红亚甲蓝琼脂培养基中；于35℃培养18小时，同时，用相应的对照培养基替代被检培养基进行上述试验，作为对照，每个培养基平行制备2个平皿。
胆盐乳糖培养基、营养肉汤培养基、MUG培养基与对照管比较，被检培养基管试验菌应生长良好；胆盐硫乳琼脂培养基、曙红亚甲蓝琼脂培养基与对照培养基上生长的菌落大小、形态特征应一致。
2.2.2抑制能力
取金黄色葡萄球菌100 cfu左右，注入无菌平皿中，立即倾注胆盐乳糖培养基、四硫磺酸钠亮绿培养基，每个培养基平行制备2个平皿，混匀，凝固，置35℃培养18小时，应不得有菌生长。
2.2.3指示能力
取乙型副伤寒沙门菌10～100cfu，接种于三糖铁琼脂培养基中，每个培养基平行制备2个平皿，混匀，凝固，置30～35℃培养18小时；胆盐硫乳琼脂培养基、曙红亚甲蓝琼脂培养基指示能力见2.2.1中乙型副伤寒沙门菌测试结果，MUG培养基指示能力见2.2.1中大肠埃希菌测试结果。
与对照培养基管比较，被检培养基管试验菌生长的菌落大小、形态特征、指示剂反映情况等应与对照培养基一致。
控制菌培养基适用性检查
培养基的促生长性及指示性菌落生长状态一致，抑制性均无菌落生长，说明培养基适用性良好。
3、抑菌性：取连续生产的三批样品进行测定
3.1细菌、霉菌、酵母菌
3.1.1供试液的制备：称取本品10g，加pH6.8缓冲液100ml，混匀，制成1：10的供试液。
3.1.2试验组：取大肠埃希菌菌悬液、金黄色葡萄球菌菌悬液和枯草芽孢杆菌菌悬液各1ml，分别加上述供试液1ml，注入平皿中，立即倾注15～20ml温度不超过45℃
溶化的营养琼脂培养基培养，每株试验菌平行制备2个平皿，按平皿法测定其菌数。
31.3菌液组：取上述各试验菌液1ml，加入相应的培养基培养，每株试验菌平行制备2个平皿，按平皿法测定其菌数。
3.1.4供试品对照组：取供试液1ml，分别注入15～20ml温度不超过45℃溶化的营养琼脂培养基和玫瑰红钠琼脂培养基培养，每个培养基平行制备2个平皿。
3.1.5回收率标准
以供试品对照组为样品空白(C0)、以菌液组为对照(T)、以试验组为测试品(C)计：
(C-C0)/T≥70%
细菌、霉菌及酵母菌抑菌性检测结果统计
通过连续三批次不同种菌类的加样，回收率均在90%以上，说明本产品对于细菌、霉菌及酵母菌不具备抑菌性。
3.2控制菌
3.2.1大肠埃希菌
取10 ml供试液（制备方法同3.1.1）及大肠埃希菌菌悬液1ml(10～100cfu)加入胆盐乳糖培养基100ml，于35℃培养24小时。
取上述培养物0.2ml，接种至含5ml MUG培养基的试管内，培养，于5小时、24小时在366nm紫外灯下观察，同时用未接种的MUG培养基作本底对照。
观察后，沿培养管的管壁加入数滴靛基质试液。
紫外
灯照射时管内培养物呈现荧光，为MUG阳性；不呈现荧光，为MUG阴性；加入靛基质试液时液面呈玫瑰红色，为靛基质阳性；呈试剂本色，为靛基质阴性。
3.2.2沙门氏菌
取10 ml供试液（制备方法同3.1.1）及乙型副伤寒沙门菌1ml(10～100cfu)，直接接种至200ml的营养肉汤培养基中，混匀，于35℃培养培养24小时，取上述培养物1ml，接种于10ml四硫磺酸钠亮绿培养基中，35℃培养24小时后，分别划线接种于胆盐硫乳琼脂培养基和曙红亚甲蓝琼脂培养基的平板上，35℃培养24小时。
3.3合格标准
若上述试验检测出试验菌，则按此供试液制备方法和控制菌检查方法进行供试品的该控制菌检查。
控制菌抑菌性检查
法进行检验而不对检测结果造成假阴性的影响。
五、本品微生物限度检查方法的确定
综上所述，本品细菌、霉菌及酵母菌检查采用常规平皿法，取1：10稀释级供试液1ml置90mm的无菌平面皿中，注入15～20ml培养基进行培养；大肠埃希菌按常规法检验。
1ml供试品中，细菌数不得过1000cfu，霉菌和酵母菌数不得过100cfu，大肠埃希菌不得检出；每10ml不得检出沙门菌。
六、样品微生物限度检查结果
取3批样品，按验证过的方法进行微生物限度检查，结果如下。
微生物限度检查结果
批号细菌数
（cfu/ml）霉菌和酵母菌数
（cfu/ml）
大肠埃希
菌
沙门菌
生产验证150804 100 <10 未检出未检出150805 50 <10未检出未检出150806 60 <10未检出未检出
结果，三批样品的微生物限度均符合规定。