微生物限度检查方法验证方案

微生物限度检查方法验证方案
微生物限度检查方法验证方案
编码：表 一、验证方案的起草与批准
1.验证方案起草 起草人：
2.验证小组成员：
起草时期： 年 月 日
3.验证方案审核
部门 生产部 生产车间
QC QA 4.验证方案批准
审核人
日期
批准人：
批准日期：
二、验证方案
1.验证目的和原理
1.1验证目的
为确认所采用的方法适合于该药品的细菌、霉菌、酵母菌数的测
5.1产品试验组微生物生长检查情况： 批号： 菌种名称 产品试验组计数结果（cfu/皿）
大肠埃希菌
金黄色葡萄 球菌
枯草芽孢杆 菌
白色念珠菌
黑曲霉
5.2供试品对照组微生物生长检查情况： 批号：
பைடு நூலகம்
菌种名称
供试品对照组计数结果（cfu/ 皿）
大肠埃希菌
金黄色葡萄 球菌
枯草芽孢杆 菌
白色念珠菌
黑曲霉
5.3稀释剂对照组微生物生长检查情况： 批号：
%。
7.2稀释剂回收率为 %、 %、 %、 %、 %。
以上验证结果证明，本品
采用上述方法进行微生物限度检
查。
检验人：
复核人：
8.验证结果评价分析
质控部负责各项验证、试验结果记录，验证小组根据验证、试验结
果进行评价，起草验证报告，报验证委员会。
验证委员会负责对验证结果进行综合评审，做出验证结论，发放验 证证书。对验证结果的评审应包括：
定，特制定本方案。验证过程应严格按照本方案规定的内容进行，若因
特殊原因确需要变更时，应报验证委员会批准。
1.2原理
通过比较试验4组中试验菌的恢复生长结果来评价整个检验方法的准
确性、有效性和重现性。
2.验证方法步骤
2.1验证前的准备：进行微生物限度检查方法验证前，所有的平皿和稀
释剂都应该严格按照相关的灭菌程序消毒，以确保其对试验的结果没有
年 月 日至 年 月 日，验证小组根据批准的微 生物限度检查方法验证文件对微生物限度检查法进行了相关的 一系列验证工作，达到了预期效果，滋将有关事项说明如下：
1、 验证方案在实施过程中未做修改。 2、 验证方案各项性能指标在验证中未作变动，误差在
允许范围内。 3、 验证过程中结果符合规定要求，记录完整属实。 4、 验证结果符合设计要求和GMP原则要求，可以投入
组
大肠埃希 菌
平均值
金黄色葡 萄球菌
平均值
枯草芽孢 杆菌
平均值
白色念珠 菌
平均值
黑曲霉 平均值
表中：回收率=（试验组的平均菌落数－供试品对照组的平均菌落数）÷
菌液组的平均菌落数×100%。
7.结论：
7.1经过验证，大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、
黑曲霉的回收率分别为 %、 %、 %、 %、
（1） 验证试验是否有遗漏； （2） 验证实施过程中对验证方案有无修改，修改原因、依据
以及是否经过批准； （3） 验证记录是否完整； （4） 验证试验结果是否符合标准要求，偏差及对偏差的说明
是否合理，是否需进一步补充试验。
9.最终审批
验证报告由验证组长审核后，报验证总负责人批准，并签发验证证 书。
验证报告
3.1.6验证用微生物名称及其编号 实验菌株的来源：
菌株名称
内控编号
大肠埃希菌CMCC(B) 44102
Ec-
金黄色葡萄球菌 CMCC(B) 26003
Sa-
枯草芽孢杆菌CMCC(B) 63501
Bs-
白色念珠球菌CMCC(F) 98001
Ca-
黑曲霉CMCC(F) 98003
An-
编号由菌名首字母—传代代数—制备日期组成。 3.1.7器具：无菌薄膜过滤器：（孔径0.45um直径50mm）、无菌移液管 （5ml）4.验证方法 4.1菌液的制备
使用。 5、 片组分或检验条件改变时须重新验证。
以上情况，请验证委员会审批！
验证小组： 年
月日
试验报告审批表
验证名称
微生物限度检查 方法验证
编号
SOP-V-028
验证内容
审 质
阅 量
会 部
签 审核人：
验证委员会意见：
年月日
批准人：
年
月日
验证证书
验证证书编号：
验 证 名 称：
有 效 期：
上述方法已按验证方案进行验证，各项验证结果 符合标准要求，批准按此方法进行本品的控制菌检查。 特发此证。
释剂对照组的菌回收率应不小于70%，试验组回收率也不低于70%。
3.试验实施
3.1试验前的准备
3.1.1主要仪器设备：恒温培养箱、生化培养箱、电子天平、高压蒸汽灭
菌器、净化工作台。
3.1.2操作环境：操作间应该安装空气除菌过滤层装置。环境洁净度不应
低于10000级，局部洁净度为100级（或放置同等级净化工作台）。操作
间或净化工作台的洁净空气应该保持对环境形成正压，不低于4.9pa。
3.1.3试验样品：
批号：
批号：
批号：
3.1.4培养基：
培养基名称 培养基批号 配制日期
有效期至
改良马丁琼脂培 养基
玫瑰红钠琼脂培 养基
胆盐乳糖增菌培 养基
营养琼脂培养基
3.1.5稀释液：PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液 以上经115℃高压蒸汽灭菌30min。
将大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌接种至10ml的无菌 营养肉汤中在30～35℃下培养18～24小时，将白色念珠菌接种至改良马 丁液体培养基中，在23～28℃下培养24～48小时。将黑曲霉接种至改良 马丁液体培养基中，在23～28℃下培养5～7天。将上述培养物用0.9%的 无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌落数为50～100cfu的菌悬液。 4.2实验方法
菌种名称
批号
稀释剂对照 组
菌液组
平均值 回收率
大肠埃希菌 平均值
金黄色葡萄 球菌 平均值
枯草芽孢杆 菌 平均值
白色念珠菌 平均值
黑曲霉 平均值
表中：回收率=稀释剂对照组的平均菌落数÷菌液组的平均菌落数 ×100%。
6.2试验组菌回收率 菌种名称 批号
菌落计数（cfu/皿）
回收率
供试品对照
试验组
菌液组
菌种名称
稀释剂对照组计数结果（cfu/ 皿）
平均值 平均值 平均值
大肠埃希菌
金黄色葡萄 球菌
枯草芽孢杆 菌
白色念珠菌
黑曲霉
5.4菌液组微生物生长检查情况： 批号：
菌种名称
菌液组计数结果（cfu/皿）
大肠埃希菌
金黄色葡萄 球菌
枯草芽孢杆 菌
白色念珠菌
黑曲霉
6.回收率计算 6.1稀释剂对照组菌回收率
菌落计数（cfu/皿）
年
月日
备注：
验证总负责人：
影响。试验菌应包括G—、G+、酵母菌和霉菌类微生物以基本覆盖样品
中可能存在的微生物。
2.2验证试验的操作计划：用3个不同批号产品微生物限度检测方法进行
平行试验，通过计算回收率来判断限度检查方法是否对产品有影响。
2.3试验结果可接受标准：用标准菌株评价方法“ ”的微生物限度检查
对检品中微生物的抑制性，试验结果应显示3次独立的平行试验中，稀
供试液的制备：取样品10g（ml）加入无菌PH7.0氯化钠-蛋白胨缓 冲液100ml，振摇使分散均匀□，或用匀浆仪混匀□，制成1：10均匀的 供试液。
A样品试验组 取1：10供试品（相当于1g或1ml供试品）1ml，及各50～100cfu的 试验菌，分别注入平皿中，立即倾注琼脂培养基。大肠埃希菌、金黄色 葡萄球菌、枯草芽孢杆菌倾注肉汤琼脂培养基；白色念珠菌、黑曲霉倾 注玫瑰红钠琼脂培养基。 B菌液组 取上述制备菌液各1ml注入平皿中，金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、 枯草杆菌加入肉汤琼脂培养基，白色念珠菌、黑曲霉加入玫瑰红钠琼脂 培养基。 C供试品对照组 取上述1：10供试液1ml注入平皿中，分别倾注肉汤琼脂培养基和玫 瑰红钠琼脂培养基。 D稀释剂对照组 取PH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液各1ml及各50～100cfu的试验菌，分别 注入平皿中，立即倾注琼脂培养基。大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯 草芽孢杆菌倾注肉汤琼脂培养基；白色念珠菌、黑曲霉倾注玫瑰红钠琼 脂培养基。 4.3培养 将大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌在30～35℃下培养 48小时，将白色念珠菌、黑曲霉在23～28℃下培养72小时，点计菌落 数。 5.试验结果