乳腺癌基因治疗的研究进展
乳腺癌的诊治新进展
乳腺癌的诊治新进展乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一，其发病率逐年上升，但随着医学技术的不断进步，乳腺癌的诊断和治疗也取得了许多新的进展。
一、诊断技术的进步1、影像学检查：随着乳腺成像技术的不断发展，如乳腺X线摄影、超声、MRI等，乳腺癌的检出率得到了显著提高。
其中，MRI能够提供乳腺组织的冠状面和矢状面图像，有助于发现多灶性乳腺癌，对于常规影像学检查难以发现的乳腺癌具有很好的补充作用。
2、病理学检查：免疫组织化学方法、原位杂交技术、基因测序等新技术的应用，使得病理诊断更加准确和精细。
例如，通过检测ER、PR、HER2等基因的表达水平，可以指导医生选择更为有效的治疗药物。
3、液体活检：这是一种新型的检测方法，通过检测血液中的肿瘤标志物或循环肿瘤细胞等，可以实现对乳腺癌的早期诊断和病情监测。
二、治疗方法的进步1、个体化治疗：随着基因测序技术的不断发展，针对不同患者的基因突变，制定个体化的治疗方案已成为可能。
例如，针对HER2阳性患者，可以选择针对HER2的靶向药物；针对BRCA1/2基因突变的患者，可以选择PARP抑制剂等。
2、免疫治疗：免疫治疗是近年来肿瘤治疗的重要进展之一。
在乳腺癌治疗中，免疫治疗药物如PD-1/PD-L1抑制剂等的应用，能够激活患者自身的免疫系统来攻击肿瘤，提高治疗效果并改善患者的生活质量。
3、精准手术：随着手术技术的不断进步，如乳房保留手术（保乳手术）和乳房重建手术等的应用，使得乳腺癌手术更加精准和微创。
同时，通过术前新辅助化疗等方法，可以缩小肿瘤体积，提高手术切除的成功率和患者的生存率。
4、综合治疗：乳腺癌的治疗已经从单一的手术切除发展到了综合治疗。
在综合治疗中，医生会根据患者的病情、身体状况、分子分型等因素，制定包括手术、放疗、化疗、内分泌治疗和靶向治疗在内的综合治疗方案。
这种综合治疗方案的应用，使得乳腺癌的治疗效果得到了显著提高。
三、预防和筛查1、健康生活方式：保持健康的生活方式，如均衡饮食、适量运动、避免肥胖等，可以降低乳腺癌的发病率。
乳腺癌的基因治疗前景
乳腺癌的基因治疗前景乳腺癌，作为女性最常见的恶性肿瘤之一，已成为全球范围内严重威胁女性健康的疾病。
尽管已有多种传统治疗方法，如手术、化疗和放疗，取得了不俗的效果，但由于乳腺癌的异质性和遗传多样性，传统治疗仍存在一定的局限性。
然而，随着基因治疗技术的不断发展，乳腺癌的基因治疗前景正变得越来越可观。
基因治疗是一种利用基因工程技术向患者体内导入载有特定基因的载体，从而实现对癌症相关基因的调控和修复的方法。
对于乳腺癌患者而言，基因治疗具有巨大的潜力，不仅可以有效抑制肿瘤的生长和扩散，还可以增加化疗和放疗的敏感性，提高疗效和生存率。
乳腺癌的基因治疗主要包括三个方面：基因靶点的发现、基因载体的选择和基因递送系统的建立。
首先，通过对乳腺癌基因组学的研究，科学家们已经发现了大量的与乳腺癌发生发展密切相关的基因靶点。
这些基因靶点包括激素受体、HER2和细胞凋亡相关基因等。
其次，针对这些基因靶点，科研人员选择了不同的基因载体来进行治疗。
常见的基因载体包括质粒、病毒和纳米颗粒等。
最后，为了保证基因的有效递送到肿瘤细胞内，在基因治疗过程中建立了多种基因递送系统，如基因转染和基因克隆等。
基因治疗的一个突破性进展是针对乳腺癌的基因编辑技术。
基因编辑技术，如CRISPR-Cas9系统，可以精确地选择和编辑患者体内的基因序列，从而改变细胞的功能和行为。
这为乳腺癌的个体化治疗提供了新的可能性。
患者的个体化基因编辑可以根据乳腺癌的突变特点进行精确靶向，进而提高治疗效果和降低副作用。
然而，乳腺癌的基因治疗仍然面临一些挑战和问题。
首先，基因治疗的安全性和有效性仍需进一步验证。
尽管基因治疗已在临床试验中取得了一些成功，但仍有一些患者对基因治疗不敏感或存在严重的副作用。
另外，基因治疗的高昂费用也限制了其广泛应用。
目前，科学家们正在努力寻找更安全、有效且经济的基因治疗方法，以提高乳腺癌患者的生存率和生活质量。
综上所述，乳腺癌的基因治疗前景广阔且充满希望。
乳腺癌的基因治疗研究
Ｋｅ ｙ ｗｏｒ ｄｓ： ｅ ｓ ａ ｃ ｒ； ｎ ｈ ｒ ｐ Ｂｒ ａ ｔｃ ｎ ｅ Ｇｅ ｅ ｔ ｅ ａ ｙ
摘要： 乳腺癌 的发生 、 发展是一个复杂 的过程 ， 涉及多种基 因的改 变。随着越来 越多的乳腺癌相关基 因被确 认 ， 因治疗 基 成为乳腺癌治疗 的一个新途径 和研究 热点。乳腺癌基因治疗 的方 法主要有 癌基 因治疗 、 抑癌基 因治疗 、 免疫 基因治疗 、
三阴型乳腺癌的治疗进展
三阴型乳腺癌的治疗进展三阴型乳腺癌是一种特殊类型的乳腺癌，其雌激素受体（ER）、孕激素受体（PR）和人表皮生长因子受体-2（HER-2）均表达阴性，具有较高的侵袭性和恶性程度。
过去的治疗方法主要以手术和化疗为主，但随着科学技术的不断进步，针对三阴型乳腺癌的治疗方法也得到了不断的探索和改进。
手术治疗：传统上，三阴型乳腺癌的手术治疗以根治性手术为主。
然而，随着医学技术的进步，手术方式也在不断改进。
例如，保乳手术和乳房重建手术的应用，可以在保证治疗效果的同时，提高患者的生活质量。
化疗：化疗是三阴型乳腺癌的主要治疗方式之一。
近年来，新药研发和化疗方案的优化使得化疗效果得到了显著提升。
例如，添加新型靶向药物和免疫药物，以及根据个体差异制定个性化化疗方案等。
靶向治疗：针对三阴型乳腺癌的特定基因突变和分子靶点，开发出了一系列靶向药物，如抗HER-2药物、EGFR抑制剂、BRCA1/2抑制剂等。
这些药物可以通过抑制肿瘤细胞的增殖和转移，提高患者的生存率。
免疫治疗：免疫治疗是近年来肿瘤治疗的重要突破之一。
通过激活患者自身的免疫系统来攻击肿瘤细胞，可以达到长期控制肿瘤的目的。
在三阴型乳腺癌中，免疫治疗也取得了一定的进展，如免疫检查点抑制剂、CAR-T细胞疗法等。
联合治疗：随着多种治疗方法的不断发展，联合治疗成为了三阴型乳腺癌治疗的新趋势。
例如，手术联合化疗、放疗联合靶向治疗、免疫治疗联合靶向治疗等，可以综合发挥各种治疗手段的优势，提高治疗效果。
由于三阴型乳腺癌具有较高的异质性和个体差异，因此制定个体化的治疗策略至关重要。
通过基因检测、分子分型等手段，可以更准确地了解患者的病情和预测治疗效果，从而制定出最合适的治疗方案。
针对患者的具体情况，还可以开展临床试验和其他研究项目，探索新的治疗方法。
三阴型乳腺癌的治疗方法在不断发展和改进中。
传统治疗方法的改进和新治疗方法的探索为患者提供了更多的选择和希望。
通过个体化治疗策略的制定和综合运用各种治疗手段，可以进一步提高患者的生存率和改善生活质量。
乳腺癌基因治疗进展
乳腺癌基因治疗进展【摘要】基因治疗的方式有两类：（1）基因矫正和置换；（2）基因增补。
目前研究的基因治疗方法主要有免疫基因治疗、癌基因拮抗治疗、化学基因治疗（多药耐药基因治疗和自杀基因治疗）、抗肿瘤血管形成基因治疗、使用溶瘤病毒的治疗等措施。
目前还没有一种基因治疗可代替常规疗法, 基因治疗与常规疗法相结合, 是乳腺癌治疗的发展趋势。
随着乳腺癌发病机制的深入研究, 乳腺癌相关基因的不断发现, 乳腺癌基因治疗将取得更多突破, 为临床治疗提供新的途径。
【关键词】乳腺癌;免疫基因治疗；癌基因拮抗治疗；化学基因治疗；抗肿瘤血管生成基因治疗乳腺癌是女性常见的恶性肿瘤之一。
目前乳腺癌的常用治疗手段主要是以传统的手术治疗为主，术后辅以局部或全身的放疗、化疗及内分泌治疗。
这些手段虽然可以使患者获得较高的生存率甚至治愈，但术后复发及远处转移的问题仍然是困扰医学界的一大难题。
随着分子生物学技术及免疫学技术的迅猛发展和人类对乳腺癌发病机制认识的不断深入，基因治疗逐渐成为肿瘤生物学治疗中的重要组成部分。
基因治疗在乳腺癌的治疗中显示出良好的应用价值，并且取得了一定的效果，将日渐成为一项有前景的治疗选择。
1 免疫基因治疗1.1 细胞因子治疗细胞因子调节多种细胞生理功能，是机体防御和清除肿瘤的重要因子。
肿瘤的发生与肿瘤患者的细胞因子表达有关，因此, 通过细胞因子网络增强机体抗肿瘤免疫达到清除肿瘤的目的，一直是该领域研究的一个热点。
（1）将细胞因子基因导入肿瘤细胞。
Pastorakova 等[1] 将表达人源性肿瘤坏死因子α（hTNF-α）基因的质粒体外转染不同的乳腺癌细胞株（MDA-MB-361、HCT116、8-M G-BA）。
检测结果表明hTNF-α在3种细胞株中均有表达, 可显著诱导MDA-MB-361 凋亡、坏死，对HCT116 作用则较弱，而对8-M G-BA 几乎无作用。
动物实验表明hTNF-α可在裸鼠体内引起MDA-MB-361 坏死。
RNAi技术在乳腺癌基因治疗中的研究进展
的 研 究 提供 了强 大 的 武 器 ，也 为 乳 腺 癌 基 因 治 疗 增 添 了 新 的 活 力 。 现对 Ｒ ｉ 乳 腺 癌 基 因治 疗 中 的 研 究 现 状 与 进 展 方 ＮＡ 在
面 作一 综述 。
１ ＲＮＡｊ 述 概
１１ ａ ｉ 机 制 ． ＮＡ 的 ｌ 目前 对 于 Ｒ ｑ ｉ 生 的 可 能 机 制 初步 达 成 共识 ，认 为病 ＺＡ 发 毒 基 因 、 工转 入 基 因 、 座子 等 外 源 性 基 因随 机 整 合 到 宿主 人 转
细胞 基 因 组 内 并 利 用 宿 主 细 胞进 行 转 录 时 ， 产 生 双 链 ＲＮＡ 常 （ｓ ＮＡ） ｄＲ 。宿 主 细 胞 对 这 些 ｄＲＮＡ会 产生 反 应 ，即 ｄＲ ｓ ｓ ＮＡ
乳 腺 癌 是 当前 发 病 率 较 高 的女 性 恶性 肿瘤 ，严 重 威 胁女 性 的身 体 健 康 。 传统 治 疗 以手 术 治 疗为 主 ， 以化 疗 、 疗 。 辅 放 而 化 疗 和 放 疗 对 肿 瘤 非特 异 性 、 感性 差 ， 作 用 大 。 因 此乳 腺 敏 副
癌 的 基 因 治 疗 受 到 充分 重 视 。 １９ ９ ８年 ＫＮＡ 干 扰 （ ＲＮＡｎｅ— ｉｔｒ ｆ ｅｃ ， ｅ ｎｅＲＮＡ ） 发 现 Ｉ， 别 是 在 哺 乳 动 物 细 胞 应 用 小 干 扰 ｒ ｉ的 ”特
２１ ． ＲＮＡ 在 抑 制 乳 腺 癌 细 胞 端 粒 酶 活 性 研 究 中 的 应用 ｉ
端 粒酶 的活 化 使 细 胞 具 有 无 限 增 生 的能 力 是 恶 性 肿 瘤 的 普 遍 现 象 。端 粒 酶 的 异 常 表达 与 恶性 肿瘤 的 发 生 、 展 、 后 发 预 密 切相 关 ，其催 化亚 基 ｈ Ｅ Ｔ ＲＴ 基 因是 合成 端 粒 酶 全 酶 的 限 速 因素 。Ｈｏｉ ｗ 等 建 了端 粒酶 逆转 录酶 （Ｔ ＲＴ） 端 ｒａ ａ ｋ 构 ｈＥ 和
乳腺癌的新药研发和临床试验进展
乳腺癌的新药研发和临床试验进展随着科学技术的不断发展，乳腺癌的治疗手段也在不断进步。
新药的研发和临床试验成为激动人心的话题，下面将介绍乳腺癌新药研发的现状和临床试验的进展。
一、乳腺癌的新药研发进展乳腺癌的新药研发一直是医学研究的重点之一。
目前，针对乳腺癌的新药种类众多，包括靶向药物、免疫疗法和基因治疗等。
这些新药的研发旨在提高治疗效果、减轻副作用，同时也为那些不能耐受传统治疗或难以治愈的患者提供新的希望。
1. 靶向药物的应用靶向药物是指通过特异性作用于癌细胞的分子靶点，从而达到抑制癌细胞生长和扩散的目的。
乳腺癌的靶向药物主要包括激素治疗、HER-2抑制剂和CDK4/6抑制剂等。
对于激素受体阳性的乳腺癌患者，内分泌治疗是常用的治疗方法之一。
目前，一些新药正在研发中，旨在改善激素治疗的疗效和耐药性。
例如，新型的雌激素受体调节剂可减少雌激素受体的活性，提高抗雌激素药物的疗效。
HER-2抑制剂是用于HER-2阳性乳腺癌的一类药物。
近年来，新型HER-2抑制剂的出现使得HER-2阳性乳腺癌的治疗效果有了明显的提高。
例如，帕珠单抗是一种新型HER-2抑制剂，已经在乳腺癌的治疗中取得了重大突破。
CDK4/6抑制剂是一类抑制细胞周期蛋白依赖激酶4/6的药物，它们可以阻断癌细胞的增殖。
这类药物在乳腺癌的治疗中取得了很好的效果，且副作用较小。
2. 免疫疗法的突破免疫疗法是近年来乳腺癌治疗的新方向。
它通过激活患者自身的免疫系统，来识别和攻击癌细胞。
乳腺癌免疫疗法主要包括PD-1/PD-L1抑制剂和CAR-T细胞疗法等。
PD-1/PD-L1抑制剂可以通过抑制PD-1/PD-L1通路，激活患者的免疫系统，增强抗肿瘤效应。
临床研究已经证实，PD-1/PD-L1抑制剂在治疗乳腺癌中有很好的疗效，尤其是在高PD-L1表达的患者中。
CAR-T细胞疗法是通过改造患者的T细胞，使其能够识别和攻击癌细胞。
这种疗法在乳腺癌治疗中也显示出了良好的前景，尽管目前仍处于研究阶段。
基因疗法治疗乳腺癌研究近况
基 因疗 法治疗 乳 腺癌 研 究近 况
李 艳
（ 重庆医科大学中医药学院， 重庆 ４ １３ ） ０３１ 【 中图分类号】 ７ ７９ ［ Ｒ ３． 文献标识码 ］ ［ Ｂ 文章编号］０４— ８４ ２ １ ）７ ５０— ２ １０ ２ １ （００ ０ — １ ０
肿瘤是一种多基 因参与 的分子疾病 ， 因治疗 逐渐成为 基 肿瘤生物学治疗中的重要组成部分 。基 因治疗 乳腺癌取得一
组织坏死 ， 伴有巨噬细胞 和 Ｎ Ｋ细胞 的浸润。 将癌特异抗原基 因导入 抗原 提呈 细胞治疗 。Ｂ ４ Ａ ６是乳 腺癌相关抗原 ， 存在 于多数乳腺癌细胞膜表 面， 但造血细胞表 面无此抗 原 。 自身抗 原 不能 刺 激 机 体产 生 Ｃ Ｌ反 应。“ｕ Ｔ
癌药物产生耐药同时也对其 他结构和作用机 制不同的药物获
定 效果 ， 日渐 成 为 一项 有 前 景 的治 疗 选 择 。 现 综 述如 下 。 且
１ 化 学基 因治 疗
一
ｈ ＭＣ Ｆ 在 ４ １中可有 效抑制肿 瘤生 长， Ｇ Ｓ、 Ｔ 与化疗 药物联合
使用时效果不受影 响。将细胞 因子受体基 因导入肿瘤 细胞 ， 可使肿瘤细胞 表面棍应 的细胞 因子 受体表达增多 ， 而大大 从 增强细胞 因子的抗肿瘤效果 。乳腺癌细胞 表面表达 Ｉ ３受 Ｌ一１
外周干细胞 ， 而后再 用多西他 奇化 疗 ， 能明显 抑制肿瘤 生长、
等” 将载有 Ｂ ４ Ａ ６基 因的重组腺 相关病毒载体转染树 突状 细 胞， 结果树突状细胞 可表达 Ｂ ４ Ａ ６抗原 ， 树突状细胞基 因组整 合 Ａ Ｖ Ｂ ４／ ｅ 载 体 ， Ａ ／ Ａ ６Ｎ ｏ 可刺激机体产生 强烈 、 迅速 的 Ｂ ４ Ａ６ 抗原特异性 、 Ｈ Ｍ Ｃ—Ｉ 限制性 Ｃ Ｌ反应 ， Ｔ 但仅持续 １ 周的时间。
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乳腺癌自杀基因治疗的研究进展摘要：乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤。
近年来，随着对肿瘤分子病理学认识的不断深入，乳腺癌的基因治疗研究快速发展，某些靶向药物已成功应用于临床并取得了良好的效果。
自杀基因疗法的出现，为乳腺癌的治疗提供了一种较为有效和具有临床应用潜力的治疗策略。
关键词: 乳腺癌自杀基因基因疗法乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤。
基因治疗是继手术、放化疗以及内分泌治疗之后的一种新兴治疗手段，与传统的治疗模式相比，有更好的靶向性、针对性，更适于对乳癌患者实施个体化治疗。
近年来，随着对肿瘤分子病理学认识的不断深入，乳腺癌的基因治疗研究快速发展，某些靶向药物已成功应用于临床并取得了良好的效果。
自杀基因（suicide gene）疗法的出现，为乳腺癌的治疗提供了一种较为有效和具有临床应用潜力的治疗策略，本文就自杀基因治疗乳腺癌的研究进展作一综述。
1.自杀基因的基本概念自杀基因是指能将无毒的药物前体转化为细胞毒性物质的基因。
转入自杀基因的肿瘤细胞可以被前药的有毒代谢产物选择性破坏。
旁观者效应是另一作用机制，是指除了破坏这些整合了自杀基因的肿瘤细胞外，自杀基因对邻近的未被转染的肿瘤细胞也有破坏作用，从而大大提高了该治疗对肿瘤细胞的杀伤能力。
2.自杀基因疗法的机制直接杀伤作用即转染了前药转换酶基因的肿瘤细胞能将前药转变成细胞毒药物，从而直接杀伤肿瘤细胞。
1986年Moolten应用逆转录病毒将TK基因导入肿瘤细胞，被转导的肿瘤细胞（TK+）对丙氧鸟苷（GCV）高度敏感。
GCV是一种核苷酸类似物，在TK作用下形成一磷酸丙氧鸟苷，然后再转化为三磷酸丙氧鸟苷，作为链终止剂，干扰肿瘤细胞分裂时DNA的合成，最终导致细胞分裂阻抑或死亡。
因此，肿瘤细胞内前体药物产物的高浓度淤积，发挥了细胞毒杀伤作用。
旁观者效应（bystander effect）在Moolten还观察到，TK+与TK-肿瘤细胞以一定比例混合时，在GCV的作用下，TK-肿瘤细胞几乎全被杀死。
转染了自杀基因的肿瘤细胞被杀死，其周围大量未被转染的下拨也被杀死的现象称为旁观者效应。
旁观者效应明显扩大了自杀基因的杀伤作用。
由于基因载体系统在体内转染效率很低，自杀基因在体内对肿瘤直接杀伤作用比较小，因而旁观者效应起着十分重要的作用11。
关于旁观者效应的机制：有毒性代谢产物通过细胞间的间隙连接或直接弥散作用进入相邻细胞；另有研究认为，细胞凋亡之后产生的小泡可以包裹自杀基因产物，这些小泡被临近的细胞吞噬后就将自杀性蛋白质传递给与之接触的肿瘤细胞，导致其死亡自杀基因编码的酶是一种超抗原，能够刺激免疫系统产生各种细胞因子杀伤相邻细胞产生旁观者效应。
近年来还发现，相距甚远的两个肿瘤也可以发生旁观者效应，称之为远程旁观者效应。
3.自杀基因转染的载体基因转移的方法有病毒载体转移法和非病毒载体转移法长期以来，基因治疗的难点之一是如何使目的基因只转染靶细胞，并在靶细胞中稳定表达。
任何一种载体都有自身的优缺点，没有一个在安全高效的转导和稳定高效的表达方面是完美的。
相对而病言，病毒载体具有高效低毒、容量大、易于分离等优点而成为基因治疗中应用最为广泛的载体。
目前在乳腺癌基因治疗中应用的较多的是逆转录病毒与腺病毒载体，逆转录病毒是病毒性载体中应用最早，研究相当成熟，目前仍被广泛应用的载体。
3.1逆转录病毒载体逆转录病毒为单链病毒，进入细胞后逆转录为前病毒，它能有效地将小于目的基因整合进被感染细胞的基因组。
有利于治疗基因的长期表达，但存在诱导宿主基因突变产生新的肿瘤的潜在后果。
逆转录病毒载体的重要特征是靶细胞必须处于增殖状态才有可能完成基因转移，这一特征使选择性基因导向到肿瘤细胞成为可能。
但在体内应用时，基因不可能转染全部的肿瘤细胞因而又具有一定的局限性。
尽管如此临床实验中仍然常采用这个系统。
近年来研制出的慢病毒载体是一种新型的逆转录病毒载体，它来源于人类免疫缺陷病毒II型，具有同时感染非分化细胞和分化细胞的能力，已逐渐成为新一代的基因转染工具。
3.2腺病毒载体腺病毒载体是近年来常用的载体，重组腺病毒颗粒牢固不易突变、血清滴度高、靶细胞的范围广、装载容量大、可有效地将外源基因转移并表达于多种细胞中，既可转染分裂期细胞又可转染静止期细胞，这样可以提高载体的转染效率，又存在缺乏靶向性而导致副作用的可能。
与逆转录病毒家族载体不同，腺病毒载体介导的基因转移是非整合型的，以附加体的形式存在不随宿主细胞分裂而复制，是典型的一过性表达载体因此它安全致瘤性低但同时也导致它的基因表达和转导受限。
3.3腺相关病毒腺相关病毒（AAV）是一种细小病毒，呈单链线状的DNA病毒,用它作为基因治疗载体具有无致病性、无免疫原性靶细胞范围广、热稳定性好、能介导外源基因稳定整合到宿主细胞基因组中等优点，所以被人们称为最有前途的基因治疗载体，这一病毒载体用于乳腺癌细胞基因治疗中的研究近年来陆续也有报道。
此外非病毒载体等其他类型载体在乳腺癌基因治疗中也有研究应用各有自身的优缺点因为每种载体都有其优势和局限未来基因治疗的发展方向将会是采取扬长避短或开发它们的联合载体（如杂合病毒载体）。
4相关实验设计4.1在Mc F一7裸鼠移植瘤模型中，治疗组裸鼠移植瘤的生长明显受到抑制，其余各组肿瘤生长情况无明显差别；在透射电镜下可见治疗组多量的凋亡细胞。
实验结论：体内外实验均表明v EGF启动子可调控双自杀基因体系靶向桩诱导人乳腺癌细胞Mc F一7细胞凋亡。
到目前为止，用于乳腺癌基因治疗的病毒载体主要有3类：腺病毒载体、反转录病毒载体和腺相关病毒载体。
腺病毒载体系统因其具无插人性突变、安全性高、感染能力强、蛋白表达量大等优点，目前已成为基因治疗领域常用的载体之一。
实验构建了含VEGFP驱动CD-Ⅸ自杀基因系统的重组腺病毒载体，用此重组腺病毒感染高表达VEGF的MCF一7细胞后，应用不同浓度的前药5一FC和GCV治疗后可抑制肿瘤细胞生长，证实MCF一7细胞中VEGFP启动子活性明显上调，此启动子可以驱动CD瓜自杀基因使之转录、翻译、编码产生具有生物活性的CD和胸苷激酶，催化各自前药5一FC和GCV转化成细胞毒物质，产生肿瘤杀伤效应。
以上的实验结果为进一步开展腺病毒介导CD胍双自杀基因靶向治疗乳腺癌的研究奠定了基础。
迄今研究最为深入的两大自杀基因系统是HSV一7Ⅸ／GCV和CD，5一FC，部分已进入临床试验阶段。
I型单纯疱疹病毒产生单纯疱疹病毒脱氧胸苷激酶(HSV-TK)，催化GCV转化为单磷酸GCV，继而在哺乳类细胞激酶的共同催化下转化成细胞毒物质三磷酸GCV，限速酶为HSV一7Ⅸ。
三磷酸GCv与N1P竞争DNA多聚酶的结合位点，阻止单链DNA延长，使细胞周期受阻，抑制细胞分裂，特别适用于杀灭分裂旺盛的恶性肿瘤细胞内。
胞嘧啶脱氨酶(CD)可使5一FC转化为5一FU，再经细胞内酶作用，生成氟尿嘧啶三磷酸盐和单磷酸5一氟脱氧尿苷，前者可整合人RNA，干扰RNA的合成；后者5一Fd UMP是一种不可逆的胸腺嘧啶核苷酸合成酶抑制剂，阻断脱氧尿嘧啶核苷酸转变为脱氧胸腺嘧啶核苷酸，从而抑制DNA的生物合成网。
由于不同类型肿瘤细胞对不同酶／前药体系的敏感性存在差异，而且肿瘤患者体内往往同时存在多种克隆肿瘤细胞，因此应用单一酶／前药体系难以达到根治肿瘤的目的，联合CD、TK自杀基因可利用不同的作用环节以提高疗效2。
4.2讨论应用单一酶／前药体系难以达到根治肿瘤的目的,联合多个自杀基因是提高疗效的途径之一，课题使用的是p Ad Easy系统,构建CD／TK融合双n杀基因的重组腺病毒。
在肿瘤基因治疗中，将目的基因置于此类肿瘤特异性调控序列之下。
可使目的基冈选择性地在相应的组织细胞中表达．而不影响其他组织细胞。
绝大多数乳腺癌细胞都高表达VEGF．而正常组织不表达或表达甚微。
因此VEGF可以作为肿瘤生物治疗的理想靶点。
该治疗体系的具体作用机制为TK基因通过编码产生胸苷激酶特异地将核苷类似药物前体(GCV)磷酸化进而在细胞内代谢成磷酸丙氧鸟苷．后者抑制细胞DNA聚合酶的功能或竞争性的渗入细胞DNA使其合成终止，导致细胞死亡。
在本实验中，将该自杀基因体系作用：高表达VEGF的乳腺癌细胞系MCF-7和不表达VEGF的乳腺上皮细胞。
结果发现：蓖组腺病毒对各细胞株具有较强的感染率．其感染牢随病毒MOI的递增而增高。
将转基因细胞给以不同浓度的前药GCV和／或5-FC．观察到前药GCV和5-FC能诱导体外培养的MCF一7细胞非坏死性损伤，MTT显示前药在一定搭配剂量范周内可以呈剂量依赖性抑制MCF一7细胞的生长：同时发现CD／TK融合基冈对乳腺癌的疗效优于任一单自杀基因，而乳腺上皮对前药不敏感，表明VEGF基因启动子调控的自杀基因体系的细胞特异性。
通过流式细胞仪检测发现转基因细胞被阻止于G旷G，期，提示细胞DNA的合成被抑制。
因此双自杀基因系统可以特异性抑制MCF-7细胞增殖，这与细胞周期阻滞有关。
动物实验表明Ej杀基因体系GCV+5一FC组，GCV组，5-FC组均能有效抑制乳腺癌裸鼠移植瘤生长，但联合用药组明显优于单自杀基因组，进一步说明证实了双自杀基因系统的有效性。
本研究构建的双自杀基因审组腺病毒口f高效感染并杀伤目的细胞。
CD／TK基因的应用避免了单自杀基因的不足：VEGF启动子的引入优化了该体系的疗效．使其选择性的作用于目的肿瘤细胞．而对正常乳腺上皮细胞无毒性作用。
该实验为该体系进一步研究及临床应用奠定了基础3。
4.3 BALB/c裸鼠移植瘤抑瘤实验及病理学检测实验结果说明Tet调控下逆转录病毒能有效介导HSVtK基因在BALB/c裸鼠体内的基因转移并诱导肿瘤细胞凋亡的发生。
有效地控制外源基因的表达是基因治疗应用于临床医疗工作面临的重大难题! Gossen等构建的TET基因表达调控系统,具有开/关功能严密、特异性强、诱导效率高、对细胞无毒性等特点。
在利用Tet-ON系统调控自杀基因作用方面，我们已进行了一些初步的研究，将质粒pRev TRE/HSVTK与pRevTet-ON共转染 MCF-7 细胞",并利用此稳定表达的细胞建立了人乳腺癌SCID小鼠模型",研究在GCV作用下自杀基因对乳腺癌是否有治疗作。
虽然取得了一定的效果"，但这种基因转移方式仍不适合于临床治疗。
本实验研究初步展示了TET-ON系统对自杀基因的调节以及在体内外诱导乳腺癌细胞发生凋亡的作用" 为肿瘤的基因治疗调控机理研究提供了新的思路。
4.4实验构建VEGF启动子调控的双自杀基因系统，观察其对乳腺癌细胞增殖的影响，探讨双自杀基因体系在乳腺癌治疗中的应用价值。
通过建立裸鼠移植瘤模型，讨论：应用单一酶／前药体系难以达到根治肿瘤的目的。