RNA的细胞化学——Brachet反应
动物细胞的基本形态观察和显微测量
同意
签字
年月日
本单元教学总结（教学的主要经验、效果、存在问题、改进措施等）
吸取小鼠股骨骨髓时，要事先吸取少量生理盐水或PBS润湿注射器；介绍复染的概念和作用。
思考题
1.用彩色笔绘出Brachet反应及PAS反应的镜下所见。
2.说明着色的碱性蛋白可能是什么物质?
细胞核与线粒体的分级分离
（3）了解细胞松弛素B对微丝的作用及原理。
（4）了解考马斯亮蓝染料在细胞生物技术中的应用。
教学内容提要及时间分配
1.教师：
（1）讲述和提问微丝的作用及组装，细胞松弛素B的作用（15分钟）。
（2）讲解实验的具体操作和注意事项，正常对照在实验中的作用及Triton，M-缓冲液，戊二醛的作用（15分钟）。
教学手段（挂图、幻灯、多媒体……等）
板书
使用的教材及参考资料
a)医学细胞生物学实验（第四版）
b)细胞生物学（主编：凌治萍，七年制教材）
教研室主任意见：
同意
签字
年月日
本单元教学总结（教学的主要经验、效果、存在问题、改进措施等）
强调台盼兰在细胞活细胞计数中的染色原理与本实验中的的染色原理的区别，避免学生理解混淆。
2.熟悉小鼠腹腔注射和颈椎脱位处死方法。
3.进一步掌握临时装片技术和显微镜的使用方法。
教学内容提要及时间分配
内容提要：1.小白鼠腹腔巨噬细胞吞噬活动的观察；
2.暗视野显微镜观察细胞的纤毛和鞭毛运动。
时间分配：1.讲解细胞吞噬运动的基本原理和鞭毛、纤毛
运动的基本机制。（30分钟）
2.同学亲手做实验，期间讲解或提问实验操作
d)蟾蜍血涂片及人血涂片的制备与观察
e)人口腔上皮细胞观察
验证性实验中的探索性教学——以RNA的细胞化学—Brachet反应为例
验证性实验中的探索性教学——以RNA的细胞化学—Brachet反应为例庞敏胡凯熊廷蓉（重庆文理学院林学与生命科学学院，重庆永川402160）摘要：细胞生物学实验是学生了解细胞相关的知识和技能最直接有效的手段。
该文以RNA的细胞化学—Brachet反应的原理为基础，在验证性实验教学的基础上，经过内容的处理和过程的改进后增加了验证性实验的探究趣味，对帮助学生提高创新思维能力、语言表达能力、问题解决能力都起到了非常积极的作用。
在此基础上总结出：验证性实验与探究性实验两者各有优势，对学生教学中有着各自不可替代的作用。
关键词：RNA；验证性实验；探索性实验中图分类号G642.0文献标识码A文章编号1007-7731（2017）05-0135-02How to Turn Verification Test into Exploratory Experiment during the Cell Chemistry——Taking RNA Brachet Reaction as an ExamplePang Min1et al.（College of Forestry and Life Science，Chongqing University of Arts and Sciences，Chongqing402160，China）Abstract：Experiment is a direct and efficient way for student to understand and grasp cell biology knowledge.This paper is based on the principle of cell chemistry RNA——Brachet reaction.On the basis of experiment teaching，af⁃ter improving treatment and process content to increase the exploratory interests of verification experiment.It plays a positive role in helping to innovative students'thinking ability，language expression ability and problem solving abili⁃ty.On the basis of summing up：verification experiment and exploratory experiment both have their own advantages and have irreplaceable role for the teaching of students.Key words：RNA；Verification experiment；Exploratory experiment目前大学实验课以验证性实验最为常见，教材中已经设计好实验课题、实验目的、原理、药品、仪器及具体操作过程，这些实验在巩固理论知识、训练学生基本技能方面起到了重要作用。
细胞生物学实验教程中山大学生命科学学院.pdf
前言细胞生物学是高校生命科学的主干课程之一，是一门实验性很强的学科。
生命科学的许多重大发现与细胞生物学实验技术的不断创新、发展是分不开的。
因此，学习和掌握细胞生物学最基本的技术和最新的实验方法，对于从事生命科学研究工作者来说是非常重要和完全必要的。
目前，适用于高等院校不同层次使用的细胞生物学实验教材不多。
由于细胞生物学已成为重要的前沿生物学科，其发展速度之快可谓日新月异，突飞猛进，异常迅速。
各种研究新方法、新技术如雨后春笋层出不穷。
各学科之间的相互渗透，相互依存紧密相联。
如细胞生物学与分子生物学、分子遗传学等实验技术之间就具有很强的依存性和相融性。
细胞生物学实验技术的巨大变化，将推动细胞生物学向着更深的层次发展。
我们为了紧跟学科发展的趋势，把握学科前进的方向，适应学科发展的要求，将多年来在教学和科研实践中积累及编写的细胞生物学技术编写成《细胞生物学实验》一书。
旨在让学生能掌握细胞生物学研究的基本操作技能和新的实验技术，从细胞生物学的角度分析生物学中的问题，为独立进行研究打下基础。
本书是王金发教授主编的《细胞生物学》的配套教材之一。
全书共有64个实验，内容较丰富，知识面广，既包括常规的经典实验，又新增了不少与现代细胞生物学和分子生物学相关的新技术，如电穿孔和电融合技术、反转录病毒载体介导的基因转导技术、胚胎干细胞的培养和体外分化技术、流式细胞技术、细胞显微注射、共聚焦显微技术、细胞凋亡检测技术等。
这些实验内容新颖、技术先进，可操作性强，对培养学生的动手能力、分析问题和解决问题的能力很有帮助。
本书第1～4章由戚康标编写；第5～7章由何炎明编写；第8章由何炎明、张利红编写；第9、12章及附录由刘兵编写，并对全书进行文字编辑和校对；第10、11章由张利红、张为民编写；冯冬茹参加了部分实验的初稿编写工作。
本书在编写过程中得到王金发教授的亲自指导和中山大学生命科学院的大力支持，在此表示感谢。
由于编者的水平有限，难免出现错误，恳请广大读者给予批评指正。
实验3+RNA的细胞化学-Brachet反应
作业
绘图示细胞中DNA和RNA的分布。
参考：另外一种实验方法
3mL 3mL 3mL
3mL
2-4滴
2mL
丙酮是固定剂，也是脱水剂，蛋白质与 水结合形成水化是 浑浊的，丙酮与蛋 白质争水，减低蛋白质水化层的厚度， 使片子更清晰）。
实验步骤
1. 撕取洋葱内表皮3块，分别进行下面操作：
– 1小块， 用70％
乙醇洗片刻，平铺于载波片上。 – 1块放于1mL 0.1%RNA酶中处理10～15min，水洗，
吸干，平铺于载波片上。(今天暂不作) 2. 滴一滴Unna染液，染色30min。 3. 蒸馏水洗2次，用吸水纸吸去多余的水分。 4. 盖上盖波片，镜检。细胞质被染成浅红色，细胞核染成蓝
实验三 RNA的细胞化学－ Brachet反应
实验原理
细胞经甲基绿一派洛宁混合液处理后， 其中的DNA和RNA出现不同的呈色反应， 一般认为这是由于带有负电荷的核酸对 碱性染料派洛宁和甲基绿具有亲和力， 且这两种染料的作用有选择性，甲基绿 染高聚分子的DNA呈蓝绿色，派洛宁染 低聚分子的RNA呈红色。由此对细胞中 的DNA和RNA进行定位、定性、和定量 分析。
brachet反应实验报告
brachet反应实验报告Brachet反应实验报告引言：Brachet反应是一种有机合成中常用的重要反应，它能够将醛或酮与亚硫酸氢钠反应，生成相应的亚砜化合物。
这种反应具有高效、选择性好的特点，因此在药物合成和有机合成中得到广泛应用。
本实验旨在通过Brachet反应的实验操作，探究其机理和反应条件对反应效果的影响。
实验部分：1. 实验材料和仪器本实验所需材料包括醛或酮底物、亚硫酸氢钠、溶剂等。
仪器设备包括反应瓶、磁力搅拌器、温度控制装置等。
2. 实验操作步骤(1) 准备底物溶液：将所需的醛或酮底物溶解在适量的溶剂中，使其浓度达到实验要求。
(2) 加入亚硫酸氢钠：将适量的亚硫酸氢钠固体加入到底物溶液中，并进行充分搅拌。
(3) 控制反应条件：根据实验要求，控制反应的温度和时间。
(4) 反应结束：反应一定时间后，停止搅拌，并将反应液进行适当处理。
(5) 产物提取：通过适当的提取方法，将产物从反应液中分离出来。
(6) 产物纯化和鉴定：对分离得到的产物进行纯化和鉴定，可以使用色谱法、质谱法等手段。
结果与讨论：通过本实验，我们成功地合成了目标化合物，并对其进行了鉴定。
在实验中，我们发现反应温度和时间对反应效果有着重要的影响。
较高的反应温度和较长的反应时间通常能够提高产物收率和选择性，但也容易导致副反应的发生。
因此，在实际应用中需要根据具体情况进行反应条件的选择。
此外，我们还发现底物的结构对反应的影响也是十分重要的。
不同的醛或酮底物在反应中表现出不同的反应活性和选择性。
这一点在药物合成中尤为重要，因为底物的结构不仅会影响反应的效果，还会对产物的活性和毒性产生重要影响。
总结：通过本次Brachet反应实验，我们了解了该反应的基本原理和操作方法，并对其反应条件和底物结构对反应效果的影响进行了探究。
这对于有机合成和药物合成领域的研究具有重要的意义。
通过进一步的研究和实践，我们可以进一步优化反应条件，提高反应效果，并在实际应用中发挥更大的作用。
RNA的细胞化学
RNA的细胞化学高熹1120152430(李安一)（北京理工大学生命学院16121501班）摘要：甲基绿、派洛宁为两种碱性染料。
甲基绿分子有两个正电荷，易与双链DNA结合，使DNA显示绿色，派洛宁分子有一个正电荷，易与RNA结合，使RNA 显示红色。
该实验利用了甲基绿-派洛宁染料，对洋葱鳞茎内表皮进行染色，通过颜色的分布，观察洋葱鳞茎内表皮中的RNA和DNA的分布情况，得出二者的分布规律。
关键词：实验；甲基绿-派洛宁；DNA；RNA；分布1 引言甲基绿—派洛宁（methyl green-pyronin）为碱性染料，它分别能与细胞内的DNA、RNA结合呈现不同颜色。
当甲基绿与派洛宁作为混合染料时，甲基绿与染色质中DNA选择性结合显示绿色或蓝色；派洛宁与核仁、细胞质中的RNA选择性结合显示红色。
其原因可能是两种染料的混合染液中有竞争作用，同时两种核酸分子都是多聚体，而其聚合程度有所不同。
甲基绿易与聚合程度高的DNA结合呈现绿色。
而派洛宁则与聚合程度较低的RNA结合呈现红色（但解聚的DNA也能和派洛宁结合呈现红色）。
即RNA对派洛宁亲和力大，被染成红色，而DNA对甲基绿亲和力大，被染成绿色。
洋葱鳞茎的外表皮中色素含量较高，呈现出了紫颜色，如果对其进行染色会对结果造成一定程度上的干扰，而洋葱鳞茎的内表皮中色素较少，颜色基本上是无色的，进行染色可以清晰地看到染色的结果，减少了其他的干扰。
同时，洋葱鳞茎内表皮是单层的，平整地铺在载玻片上，无需做其他处理就可以用光镜进行观察。
DNA分子在90摄氏度的时候会发生解螺旋，成为DNA单链，而三氯乙酸对DNA有沉淀作用，使染色剂无法与其有效结合，无法对DNA有效染色。
2 实验材料2.1 实验仪器显微镜、镊子、载玻片、盖玻片、吸水纸。
2.2 实验材料洋葱鳞茎内表皮。
2.3 实验试剂2.3.1 Unna试剂：甲基绿－派洛宁染色液甲液：5％派洛宁水溶液6ml2％甲基绿水溶液6ml蒸馏水16ml乙液：1mol/L乙酸缓冲液（pH4.8）16ml甲液与乙液分别置于4冰箱备用，使用时两溶液混匀即可。
细胞生物学发展简史
细胞生物学发展简史人类第一次发现细胞到现在已有三百多年的历史。
随着科学技术和实验手段的进步，人们对细胞的认识由浅入深、由表及里，导致了当今细胞生物学的兴起与发展。
根据其发展过程，可分为四个时期，即细胞学说的创立、细胞学的经典时期、实验细胞学的发展和细胞生物学的兴起。
(一) 细胞学说的创立1665 年，英国的物理学家胡克(R. Hooke) 用自制的显微镜观察了软木( 栎树皮) 和其他植物组织，发表了《显微图谱》(micrographia) 一书，描述了软木是由许多小室组成，状如蜂窝，称之为“细胞” (cell 原意为小室) 。
实际上，胡克在软木组织中所看到的仅是植物死细胞的细胞壁。
这是人类第一次看到细胞轮廓，人们对生物体形态的认识首次进入了细胞这个微观世界。
1675 年列文虎克(A.V.Leeuwenhoekia) 用自制的用自制的显微镜第一次观察发现了活细胞，先后观察了池塘水中的原生动物、动物的精子，在蛙鱼的血液中发现了红细胞；1683 年，他又在牙垢中看到了细菌。
1831 年，布朗(R. Brown) 在兰科植物的叶片表皮细胞中发现了细胞核。
1836 年，瓦朗丁(Valentin) 在结缔组织细胞核内发现了核仁。
至此，细胞的基本结构都被发现了。
1835年杜雅丁（E.Dujardin）在低等动物根足虫和多孔虫的细胞内首次发现了透明的胶状物质的内含物，称之为“肉样质”。
1839年，捷克生理学家普金耶（J.E.Purkinje）把填满动物细胞的胶状液体定名为原生质（生命的原始物质）。
1846法国植物学家冯·默尔用原生质概括细胞中的所有内含物（包括细胞质和细胞核）。
十九世纪末，英国博物学家托马斯·亨利·赫胥黎（ThomaHenryHuxley，1825—1895）给原生质下了一个定义：原生质是生命的物质基础。
1861年德国解剖学家舒尔策(Max Schultze)认为有机体的组织单位是一小团原生质，这种物质在一般有机体中是相似的，并把细胞明确地定义为：“细胞是赋有生命特征的一团原生质，其中有一个核”。
细胞组分的化学反应
细胞组分的化学反应一、实验目的了解核酸、蛋白质、糖及酶的细胞化学反应原理，掌握Brachet反应及碱性蛋白、酸性蛋白、糖原和过氧化物酶的细胞化学染色方法。
二、实验用品1.材料和标本蟾蜍、小白鼠各一只、肝脏石腊切片、培养的Hela细胞。
2. 器材和仪器光学显微镜、解剖器材、蜡盘、载玻片、吸水纸、染色缸、盖玻片、水浴箱。
3.试剂PBS缓冲液(pH7.2)、甲基绿一呱咯宁醋酸缓冲液、纯丙酮、l/2丙酮+1/2二甲苯、纯二甲苯、70％乙醇、5％三氯醋酸、0.1％碱性固绿、0.1％酸性固绿、0.5％硫酸铜、联苯胺混合液、1％番红、无水乙醇、过碘酸酒精液、Schiff氏酒精液、亚硫酸水、Ehrlieh苏木精、95％乙醇、Carnoy固定液(甲醇：冰醋酸=3:1，体积比)三、实验内容细胞的组织化学方法，是研究细胞成分常用的方法之一。
它是利用化学试剂与细胞内的某些物质进行化学反应，从而在细胞局部形成有色沉淀物，再通过显微镜对组织内的生物化学成分进行定性、定位、定量研究。
1.细胞内碱性蛋白和酸性蛋白的显示（1）原理由于不同的蛋白质分子所带的碱性和酸性基团的数目不同，在pH值不同的溶液中，蛋白质分子所带的净电荷多少不同。
如在生理条件下，整个蛋白质所带负电荷多，则为酸性蛋白质；带正电荷多，则为碱性蛋白质。
据此，可将标本经三氯醋酸处理提出核酸后，用不同pH值的固绿染液分别染色，细胞内的酸性蛋白和碱性蛋白质显示出来。
（2）方法① 以破坏脊髓法处死蟾蜍，将其腹面向上放人蜡盘中，剪开胸腔，打开心包。
小心将心脏剪一小口，取心脏血一滴滴在干净载玻片一端，推片，按此法制备二张血涂片，室温晾干。
② 将涂片作好标记放在70％乙醇中固定5分钟，室温晾干。
③ 放入5％三氯醋酸中60℃30分钟，抽提出核酸。
④ 清水冲洗多次（3分钟以上），以冲去痕迹的三氯醋酸。
⑤ 滤纸吸干玻片上水分。
⑥ 一张片放入0.1％碱性固绿(pH8.0～8.5)中染色10～15分钟,另一张片放入0.1％酸性固绿(pH2.0～2.5)染色5～10分钟。
细胞生物学实验④染色法观察DNA、RNA及多糖的分布.
Feuglen 反应、 Brachet 反应和 PAS 反应显示 DNA 、 RNA 及多糖物质生物122 祝洪晨 1202040220 实验目的:掌握 Feuglen 反应和 Brachet 反应的原理及关键步骤,观察 DNA 、 RNA 在细胞中的分布;了解 PAS 反应的原理并掌握其方法步骤,观察 PAS 反应的染色结果。
实验原理:Feuglen 反应:经弱酸水解后, DNA 上的嘌呤和脱氧核糖之间的键打开, 使脱氧核糖的一端形成游离的的醛基在原位与 Schiff 试剂 (无色品红亚硫酸溶液反应, 形成紫红色化合物, 使细胞中含有 DNA 的部位呈紫红色阳性反应。
Brachet 反应:DNA 与 RNA 结构上有较多相似之处,但在聚合程度上有显著差异。
在 Brachet 反应中,采用两种碱性染色——甲基绿和派洛宁对标本进行染色处理。
在染色过程中甲基绿对高聚合的 DNA 分子有亲合力, DNA 被染成绿色; 而派洛宁对聚合度较低的 RNA 有亲合力, RNA 被染成红色。
PAS 反应:在细胞中的多糖分子中存在自由的醛基, 但不能采用醛基反应试出。
多糖中的醛基必须在某些氧化剂和水解剂的作用下才能露出。
过碘酸是把多糖氧化成高分子醛化物的氧化剂,可将多糖的 CHOH-CHOH 氧化为 CHO-CHO ,这种高分子醛化物可被 Schiff 试剂染色并呈现为紫红色。
Feuglen 反应和 Brachet 反应操作中需要对照组实验。
实验步骤:Feuglen 反应:①取出固定好的材料,用 50%酒精、 30%酒精、蒸馏水各冲洗 5分钟, 除去材料上的醋酸。
②水解:用 1mol/L的冷 HCl 冲洗材料一次,然后放入 60℃的 1mol/L的 HCl 中,水解 10分钟,取出材料后再用 1mol/L的冷 HCl 冲洗一次。
③染色:将水解后的材料放入 Schiff 试剂中染色 30分钟, 根尖部分会出现紫红色。
03观察DNA和RNA在细胞中的分布
方法步骤及结果的比较
一.核心步骤： Unna试剂染色5～30′染色前不做盐酸 处理也可观察到正确的染色结果. 二.辅助性步骤: (一).盐酸处理
此步骤需处理得当才有高中教材中所述作用效果。若 浓度过高、处理温度过高、时间过长，结果核不是呈蓝绿色， 而是与细胞质一样呈红色。 关于盐酸浓度：质量分数8%盐酸处理所得结果 体积分数8%盐酸处理所得结果
方法与步骤实例 (人口腔上皮细胞)
实验片： 在洁净载玻片上滴一滴生理盐 水，漱口, 用消毒牙签刮取口腔上皮 细胞, 将附有材料的一端放在载片液 滴中涂抹几下 → 点燃酒精灯，烘干。 ↓ 滴1~2滴95%酒精处理10分钟。 ↓ 滴1滴Unna试剂，染色10分钟 ↓ 吸去多余染液，用清水洗净。 ↓ 盖上盖玻片，镜检。
（上述配法参考汪德耀主编《细胞生物学实验指导》 1981 高教版 其它配法可参考芮菊生等编著《组织切片技术》 1980 高教版）
配制注意事项：①吡罗红（Pyronin）可加热助 溶。②甲基绿(Methyl green)批号不同，染色 效果差别很大。商品甲基绿常混有甲基紫，影 响染色效果，应先把药品放在分液漏斗中，加 入足量的氯仿，用力振荡，然后静置，直到洗 脱甲基紫为止，最后干燥备用。
派若宁
有Pyronin Y、B等，Y是四甲基 化合物，B是四乙基化合物。 有学者认为Y适用于该反应，B 会使胞浆产生非特异性染色。
染色液（Unna试剂）的配制
甲液：5%Pyronin水溶液 （可加热助溶） 6ml 2%甲基绿水溶液 6ml 蒸馏水 16ml 乙液：1M醋酸盐缓冲液（pH=4.8） 16ml （配方：A液：冰醋酸6ml加蒸馏水至100ml B液：醋酸钠13.6克加蒸馏水至100ml 取A液40ml＋B液60ml混匀即为pH=4.8的缓冲液 一周内有效，用前现配） 甲乙两液分别置4℃冰箱备用，用时混匀。
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RNA的细胞化学——Brachet反应
1实验目的了解Brachet反应的原理，掌握有关的操作方法。
2实验原理甲基绿—派洛宁（Methyl green-Pyronin）为碱性染料，它能分别与细胞内的DNA、RNA结合而呈现不同颜色。
当甲基绿与派洛宁作为混合染料时，甲基绿和染色质中DNA选择性结合显示绿色或蓝色；派洛宁与核仁、细胞质中的RNA选择结合显示红色。
其原因可能是两种染料的混合染液中有竞争作用，同时两种核酸分子都是多聚体，而其聚合程度有所不同。
甲基绿易与聚合程度高的DNA结合呈现绿色。
而派洛宁则与聚合程度较低的RNA结合呈现红色，但解聚的DNA也能和派洛宁结合呈现红色。
即RNA对派洛宁亲和力大，被染成红色，而DNA对甲基绿亲和力大，被染成蓝绿色。
3材料与试剂
3.1仪器：显微镜、镊子、载玻片、盖玻片、吸水纸
3.2材料：洋葱鳞茎表皮
4方法与步骤
4.1用镊子撕取洋葱鳞茎内表皮一小块，置于载玻片上；
4.2滴一滴Unna试剂，染色30min；
4.3蒸馏水洗两次，吸水纸吸去多余的水分；
4.4盖上盖玻片，镜检；
4.5对照片：撕取洋葱鳞茎内表皮，经5%三氯醋酸中90℃水浴处理15min 。
再经70%乙醇
洗片刻，然后按步骤1-4制片观察。
5实验结果
5.1 绘图示细胞中RNA和DNA的分布。
5.1.1 对照组 5.1.2 实验组
5.2 结果分析：
甲基绿和染色质中DNA选择性结合显示绿色或蓝色，派洛宁与核仁、细胞质中的RNA 选择结合显示红色，正如图 5.1.2 所示，染色之后的洋葱内表皮细胞，细胞质呈现红色，细胞核呈现蓝色；
相反，由于对照组经过三氯醋酸、乙醇及水浴处理，其细胞核的DNA已经被破坏，所以，
正如图5.1.1所示，其染色之后的细胞质和细胞核均呈现红色。