HPLC法测定跌打巴布剂中三七皂苷R1和人参皂苷Rg1含量
高效液相色谱法测定三七片中三七皂苷R1和人参皂苷Rg1的含量
俞 坚1, 刘 杭 1, 王京霞2
( 1. 杭州市第六人民医院, 浙江 杭 州 310014; 2. 浙江省中医院, 浙江 杭州 310006)
摘 要: 目 的: 用 R P - H PLC 法测 定 三七 片 中三 七 皂 苷 R1 和 人 参皂 苷 R g1 的 含量。 方 法: 以 ZORBAX
2. 3 对照品溶液的制备 精 密称取 80 干燥至恒 重的三 七皂苷 R 1 2. 55mg、人参皂苷 R g1 13. 1mg 对照品, 置 50mL 量瓶中, 加甲醇溶解并稀释至 刻度, 使成每毫升含有三七皂 苷 R 1 0. 051mg、人参 皂 苷 R g1 0. 262m g 的 混 合对 照 品溶 液。
V o.l 26 N o. 2 Feb. 2 0 0 8
表 1 系统适 应性试验结果
1. 32% , 人参皂苷 R g1 R SD = 0. 93% 。 ( n = 5)。
被测组分 保留时间 ( m in) 理论塔板数 相邻两峰分离度
三七皂苷 R1
4. 068
5861. 7
人参皂苷 R g1
5. 237
关键词: 三 七片; 三七皂苷 R 1; 人参皂苷 Rg1; R P- HPLC; 含量测定
中图分类号: R284. 1
文献标识码: A 文章编号: 1673- 7717( 2008) 02- 0421- 02
Determ ination o f No tog insenoside R1 and G insenoside Rg1 in Sanq i T ab le ts by RP - H PLC
中
效以三七皂苷 R1计, 理 论塔 板数不 应低 于 5000。结 果被 华
测组分可 在 6m in内出完, 二元等度洗脱全程为 0 ~ 15m in。
HPLC测定三七粉及三七片中人参皂苷Rg1_三七皂苷R1的含量
100. 75 (RSD = 1. 20 , n = 6) ; 99. 29 (RSD = 2. 33 , n = 6) (见表 1) 。三七片中人参皂苷 Rg1 和三七皂苷 R1 的平 均回收率 分 别 为 98. 85 ( RSD = 1. 36 , n = 5 ) ; 102. 19 (RSD = 1. 31 , n = 5) (见表 2) 。
三七 ,又名田七 、参七 ,属五加科人参属植物 [1 ] ,被历代 医学家誉为“止血之神药 ,补血之妙品 ”,是名贵的中药材 。 有散瘀止血 ,消肿定痛的功能 。主要用于治疗冠心病 、心绞 痛等心脑血管系统疾病 [2 ] 。三七含有皂苷 、黄酮 、多糖等多 种有效成分 , 其中皂苷含量最高 。经药理证明 , 人参皂苷 Rg1和三七皂苷 R1为其活性成分 。作为一种天然产物 ,受 其产地 、采收季节 、炮制方法和实验条件等方面的差异的影 响 ,再加上其本身成分复杂 ,提取制备方法和实验条件的不 同 ,三七产品质量往往不稳定 。而质量稳定是用药安全有效 的关键 。所以找出一种有效测定三七及其制剂中有效成分 人参皂苷 Rg1和三七皂苷 R1 含量的方法尤为重要 。经过 研究我们发现采用 HPLC法简便易行 ,准确有效 。 1 仪器与试剂 1. 1 仪器 JASCO 高效液相色谱仪 (日本分光株式会社 ) ; PU 22089p lus四 元 泵 ; AS22055p lus自 动 进 样 器 ; JASCO UV 2 1575紫外检测器 ; JASCO Chrompass Chromatography Data Sys2 tem 数据处理软件 ; BRNASON5200超声仪器 ;分析天平 ; 1. 2 试剂 乙腈 HPLC级 ;甲醇 、乙醚均为分析纯 ;水为去 离子水 ;人参皂苷 Rg1 标准品 、人参皂苷 Rb1 标准品 、三七 皂苷 R1标准品 (均由中国药品生物制品检定所购买 ) 。三 七粉 (购自云南 ) ;三七片 (国药准字 z21020423 ) (丹东药业 有限公司出品 ,产品批号 , 040101) 。 2 实验方法及结果 2. 1 对照品溶液的制备 分别精确称取人参皂苷 Rg1标准 品 、三七皂苷 R1标准品 0. 6 mg,用甲醇分别配制成 1 mg/mL Rg1标准品 、0. 8 mg/mL R1标准品溶液 。 2. 2 供试品溶液的制备 精确称取三七粉 0. 831 8 g,加入 与粉末等体积的乙醚萃取 ,静置一天 ,去除脂溶性物质后 ,将 乙醚挥干 ,加入与乙醚等量的甲醇萃取 ,静置一天 ,定容到 7 mL ,配成 118. 8 mg /mL 的三七粉溶液 。精确称取一片三七 片 ,用研钵研成粉末状 ,转移到 5 mL量瓶中 ,加入甲醇定容 , 超声提取 30 m in,静置 ,取上层清液 ,为三七片溶液 。 2. 3 色谱条件 分析柱 :依利特 Hypersil C18柱 ( 150 mm × 4. 6 mm , 5μm ) ;流动相 :乙腈 2水 ( 20 ∶80, V ∶V ) ,等度洗
HPLC-ELSD 法测定三七总皂苷中三七皂苷R1 、人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1的含量
HPLC-ELSD 法测定三七总皂苷中三七皂苷R1 、人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1的含量【摘要】目的：采用高效液相-蒸发光散射检测器法（HPLC-ELSD ）测定免疫佐剂—三七总皂苷中三七皂苷R 1、人参皂苷Rg 1、人参皂苷Rb 1的含量。
方法：色谱柱DiscoveryC 18，(250mm ×4.6mm, 5μm)；采用梯度洗脱，流动相为水-乙腈；流速：1.0mL/min ；柱温30℃；结果: 三七皂苷R 1 5.19％，人参皂苷Rg 132.19％，人参皂苷Rg 141.28％，三种皂苷含量之和为75.77% 结论：该方法简便、快速、重现性好，可用于三七总皂苷的质量控制。
【关键词】高效液相色谱-蒸发光散射检测器，三七总皂苷，三七皂苷R1 、人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1Determination of Notoginsenoside R1，Ginsenoside Rg1 and Ginsenoside Rb1 in PNS by HPLC-ELSDAbstract：Objective: To develop an HPLC-ELSD method for the content determination of notoginsenosideR1，ginsenoside Rg1 and ginsenoside Rb1 in PNS. Method: The analysis was carried out on a Discovery C18column (250mm×4.6mm, 5μm) with the mobile phase consisting of acetonitrile-water by gradient elution. The detector drift tube temperature was set at 30℃ and the flow rate was 1.0mL/min. Results: The recoveries for notoginsenoside R1，ginsenoside Rg1 and ginsenosideRb1 were 5.19% ，32.19% and 41.28%，The total content of three saponins in PNS by the HPLC-ELSD is 75.77%. Conclusion:The developed method is simple，rapid，replicable，and can be used for the quality control of PNS.Key words：HPLC-ELSD; PNS Notoginsenoside R1 Ginsenoside Rg1 Ginsenoside Rb1三七总皂苷( Panax notoginseng saponins，PNS)是中药三七的主要成分，具有扩张血管、降低心肌耗氧量和抑制血小板凝集等药理作用，目前主要应用于心脑血管系统疾病[1]。
采用HPLC法测定三七中3种皂苷的含量
采用HPLC法测定三七中3种皂苷的含量目的研究探讨采用高效液相色谱仪测定复三七中三种皂苷含量的临床应用价值。
方法以三七总皂苷分散片为研究对象，对其中的人参皂苷Rb1、人参皂苷Rg1、三七皂苷R1含量进行检测。
结果不同批次三七总皂苷分散片中，人参皂苷Rb1含量在17.91 mg/片～18.23 mg/片，人参皂苷Rg1含量在17.12 mg/片～17.65 mg/片，三七皂苷R1含量在4.73 mg/片～4.82 mg/片。
结论通过高效液相色谱仪（HPLC）可以同时对三七中不同皂苷的含量进行准确定量，且具有操作简单、快捷的优点，重复性好，稳定性强，可以用于三七相关药物质量控制的过程中，值得推广应用。
标签：高效液相色谱；三七；皂苷；含量三七是我国传统医学中最珍贵的药材之一，具有止血、补血、活血、抗血栓等多种功效[1]。
本文以三七总皂苷分散片为研究对象，通过高效液相色谱法对三七皂苷R1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rg1等三种皂苷含量进行测定，并对其具体操作方法及检测结果进行分析。
具体报告如下。
1资料与方法1.1一般资料仪器：选择日本岛津仪器生产的LC-10A高效液相色谱仪（组成部分有微体积串联双柱塞、柱温箱、紫外可见双波长检测器、超声波提取器HS 3120、中文化LC工作站）。
试剂：对照品人参皂苷Rb1（批号：110703-201420）、对照品人参皂苷Rg1 （批号：110703-201421）、对照品三七皂苷R1 （批号：110703-201423）；三七总皂苷分散片（三七总皂苷含量为50 mg/片）；洗脱剂乙腈（色谱纯）、甲醇（分析纯）、水（超纯水）。
其中，对照品皂苷购自中国食品药品检定研究院，三七总皂苷分散片为自制，洗脱剂购自津市科密欧化学试剂开发中心。
1.2方法分别取人参皂苷Rb1、人参皂苷Rg1、三七皂苷R1对照品进行精密称定，并使用浓度为20%的乙腈水溶液对其进行溶解，并制成1 ml的混合溶液（其中人参皂苷Rb1含量为0.5 mg、人参皂苷Rg1含量为0.4 mg、三七皂苷R1含量为0.12 m）。
三七不同药用部位有效成分含量测定
三七不同药用部位有效成分含量测定崔翰明林海路文龙程慧平张春光王阶*中国中医科学院广安门医院（北京市宣武区北线阁5号，100053）摘要：目的建立三七不同药用部位中三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、Re和Rb1的HPLC含量测定方法，比较三七不同药用部位中上述4种皂苷的含量。
方法三七不同药用部位（主根、筋条、剪口、叶、花）甲醇提取，RP-HPLC/UV法测定，Kromasil C18（250×4.6mm，5μm）色谱柱；以不同比例乙腈和水（v/v）线性梯度洗脱；流速：1mL·min-1；柱温：30℃；检测波长：203nm；进样量：10μL。
结果三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、Re 和Rb1可达到基线分离，其中人参皂苷Rg1和Re的分离度大于1.5；三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、Re和Rb1的线性范围分别为：4.4-440μg·mL-1，4.32-1080μg·mL-1，4.24-212μg·mL-1和4.48-1120μg·mL-1；4种皂苷的精密度和日间差RSD（n＝5）分别为0.46％，0.24％，0.77％，0.68％和1.64％，0.69％，0.52％，0.65％；加样回收率分别为103.26±1.22％，103.18±0.49％，103.20±1.58％，103.86±0.39％；三七不同药用部位含上述4种皂苷总量的顺序为剪口＞主根＞筋条＞叶＞花；而三七主根含上述4种皂苷总量的顺序为60头＞80头＞40头＞20头＞100头。
结论本方法简便、灵敏、准确，重现性良好，可用于准确分析三七不同药用部位中上述4种皂苷的含量。
关键词：三七；三七皂苷；高效液相色谱；含量测定Abstract: Objective: A quantitative method was developed by gradient elution for the determination of notoginsenoside R1, ginsenoside Rg1, ginsenoside Re and ginsenoside Rb1 in different position of Radix Notoginseng by HPLC. The content of 4 kinds saponins in different position of Radix Notoginseng was compared. Method: The different position of Radix Notoginseng(including root, rhizome, branch root, leaf, flower) were extracted with methanol. The HPLC conditions include Kromasil C18column (250×4.6mm，5μm), different proportion acetonitrile and water linearity gradient elution, flow rate at 1.0mL·min-1, column temperature at 30℃, wavelength 203nm.Result: The linear ranges of notoginsenoside R1, ginsenoside Rg1, ginsenoside Re and ginsenoside Rb1 were 4.4-440μg·mL-1, 4.32-1080μg·mL-1, 4.24-212μg·mL-1 and 4.48-1120μg·mL-1, respectively. 4种皂苷的精密度和日间差RSD（n＝5）分别为0.46％，0.24％，0.77％，0.68％和1.64％，0.69％，0.52％，0.65％；加样回收率分别为103.26±1.22％，103.18±0.49％，103.20±1.58％，103.86±0.39％；三七不同药用部位含上述4种皂苷总量的顺序为剪口＞主根＞筋条＞叶＞花；而三七主根含上述4种皂苷总量的顺序为80头＞60头＞20头＞40头＞100头。
HPLC法测定活血止痛片中三七皂苷R_1_人参皂苷Rg_1_Re_Rb_1含量
根据上述考察结果 ,样品制备的方法确定为 :取 本品 5片 ,除去包衣 ,研细混匀 ,取约 115 g,精密称 定 ,置索氏提取器中 ,加甲醇 100 m l,加热回流 4 h, 用 30 m l甲醇分多次洗涤药渣及圆底烧瓶 ,合并提 取液 ,置蒸发皿中蒸干 ,残渣以水 30 m l少量多次使 溶解 ,上 D101 型大孔吸附树脂柱 ,以水 150 m l洗 脱 ,弃去水液 ,再用 011%氢氧化钠溶液 150 m l洗 脱 ,弃去洗脱液 ,继用蒸馏水 150 m l洗至中性 ,最后 用 90%乙醇 100 m l洗脱 ,收集乙醇洗脱液 ,蒸干 ,残 渣加甲醇溶解并转移至 10 m l量瓶中 ,加甲醇至刻 度 ,摇匀 ,即得 。 215 精密度试验 精密吸取供试品溶液 10 μl重 复进样 6 次 ,测得三七皂苷 R1 、人参皂苷 Rg1、Re 、 Rb1 峰面积 RSD 值分别为 0197%、1128%、1103%、 0187%。表明仪器精密度良好 。 216 稳定性试验 取上述供试品溶液 10μl,按上 述色谱条件 ,于 0、2、4、6、8、12h进样测定 。测得三 七皂苷 R1 、人参皂苷 Rg1 、Re 、Rb1 峰面积 RSD 值 分别为 1102%、0184%、1134%、0193%。表明样品 在 12 h内稳定 。 217 重复性试验 按拟定的含量测定方法 ,对同 一批样品 ( 20061220 )制备供试液 ,平行做 6 份 ,测 定三七皂苷 R1 、人参皂苷 Rg1 、Re、Rb1 的含量 ,结果 RSD 值分别为 1153%、1146%、1171%、1168%。 218 加样回收率试验 精密称取已知含量的同一 批样品 ( 20061220 ) 0175g,分别精密加入一定量上 述四种对照品 ,按供试品溶液制备项下操作 ,按上述 色谱条件测定含量 ,计算回收率 ,结果三七皂苷 R1 、 人 参 皂 苷 Rg1 、Re、Rb1 的 平 均 回 收 率 分 别 为 98189% 、97173% 、99158%、99118% , RSD 分别为 1142% 、1102%、1151%、1132% 。 219 样品测定 按上述方法测定三批活血止痛片 样品 。结果见表 5。
高效液相色谱法测定三七伤药片中人参皂苷Rg1的含量
高效液相色谱法测定三七伤药片中人参皂苷Rg1的含量摘要】目的：利用高效液相色谱法测定三七伤药片中人参皂苷Rg1的含量。
方法：分别制备对照品溶液、供试品溶液和阴性样品溶液用于研究分析。
其中对照品溶液为人参皂苷Rg1的甲醇溶液，供试品溶液为三七伤药片去糖衣后的甲醇溶液，阴性样品溶液为不含三七的阴性样品制备的溶液，运用高效液相色谱法测定三七伤药片中的人参皂苷Rg1含量，并对该方法的精确度和回收率进行测定。
结果：经测定，供试品溶液中的人参皂苷Rg1含量约为每片1.68毫克，回收率高达97.8%。
结论：使用高效液相色谱法测定三七伤药片中的人参皂苷Rg1含量具有很高的准确率，较《中华药典》有一定的先进性。
【关键词】高效液相色谱法；三七伤药片；人参皂苷Rg1 三七伤药片是专治跌打损伤的中成药，具有消肿化瘀、散瘀止痛的功效，其主要成分为中药材三七，辅以草乌、接骨木等，在现行的检验标准中，主要对其含有的柚皮苷含量进行了规定，而人参皂苷Rg1的含量的测定并没有说明，本次研究，拟用高效液相色谱法对三七伤药片中的人参皂苷Rg1含量进行测量，观察其测量效果，现做如下报道： 1 资料与方法 1.1一般资料本次实验中，需要用到的仪器、材料和药品如下：高校液相色谱仪一台，电子天平一台，超声波仪一台，人参皂苷Rg1纯乙腈、纯化水等。
在实验前，需要先制备实验所需的各种溶液，包括对照品溶液、供试品溶液和阴性样品溶液。
对照品溶液是纯人参皂苷Rg1的甲醇溶液，供试品溶液是去掉糖衣的三七伤药片研磨后的甲醇水溶液。
阴性样品溶液是去掉三七成分的三七伤药片研磨后的甲醇水溶液。
1.2试验方法 1.2.1专属性实验专属性的实验目的是为了验证三七伤药片中的其他中药成分是否对人参皂苷Rg1的含量测定具有干扰作用，具体方法是取对照品溶液、供试品溶液和阴性样品溶液各10微升，在一定的色谱条件下，借助高效液相色谱仪进行检定。
经过测定可知，高效液相色谱法测量三七伤药片中的人参皂苷Rg1含量不受其他成分的影响[1]。
HPLC_ELSD测定三七胶囊中人参皂苷Rg_1和Rb_1
HPLC 2EL SD 测定三七胶囊中人参皂苷Rg 1和Rb 1朱 洁1,2, 温 敏2, 张洪彬1,2(1.云南大学药学院,云南昆明650091;2.云大科技股份有限公司,云南昆明650118)收稿日期:2003201215作者简介:朱 洁(1973～),女,副研究员,硕士,研究方向:药物分析,电话:08712503569928814,E 2mail :zhujie @ 。
关键词:三七胶囊;质量标准;HPLC ;蒸发光散射检测器;人参皂苷Rg 1;人参皂苷Rb 1摘要:目的:研究三七胶囊的质量标准。
方法:应用HPLC 2EL SD 对三七胶囊中的活性成分人参皂苷Rg 1和Rb 1的含量进行测定。
结果:人参皂苷Rg 1在1.3μg ～6.5μg 范围内呈现良好的线性关系(r =0.9994),平均回收率为98.30%,RSD 为1.20%(n =5)。
人参皂苷Rb 1在1.0μg ～5.0μg 范围内呈现良好的线性关系(r =0.9996),平均回收率为97.12%,RSD 为1.17%(n =5)。
结论:该方法简便,快速,重现性好,可用于三七胶囊的质量控制方法。
中图分类号:R927.2 文献标识码:A 文章编号:100121528(2004)0120033203Q uality standard for Sanqi C apsuletesZHU Jie 1,2, WEN Min 2, ZHAN G Hong 2bin 1,2(1.School of Pharmacy ,Y unan U niversity ,Kunmi ng 650091,Chi na ; 2.U ni da Co.L t d.,Kunmi ng 650118,Chi na )KE Y WOR DS :Sanqi Capsule ;quality standard ;HPLC ;EL SD ;ginsenoside Rg 1;ginsenoside Rb 1ABSTRACT :AIM :To study the quality standard of Sanqi Capsules.METH ODS :The content of ginsenoside Rg 1and ginsenoside Rb 1were dertermined by HPLC 2EL SD.RESU LTS :G insenoside Rg 1showed a good linearrelationship at the range of 1.3μg ～6.5μg (r =0.9994).The average recovery of ginsenoside Rg 1was 98.30%,and RS D was 1.20%(n =5).G insenoside Rb 1showed a good linear relationship at the range of 1.0μg ～5.0μg (r =0.9996).The average recovery of ginsenoside Rb 1was 97.12%,and RS D was 1.17%(n =5).CONC L USION :The method is efficient and accurate with a good repeatability and can be used for the quality control of Sanqi Capsules. 三七属五加科人参属植物,又名田七、参七、与人参同科同属,被历代医学家誉为“止血之神药,补血之妙品”。