人参皂苷Re的提取分离与鉴定
实验六 人参中人参皂苷的提取分离及鉴定(共享)
实验六人参中人参皂苷的提取分离及鉴定(共享)一、实验介绍人参是一种传统的中药材，具有滋补强壮、改善免疫功能、抗氧化、抗疲劳等保健作用。
人参中的主要活性成分为人参皂苷，是一类四环倍半萜类化合物，已经被证明具有多种药理活性，包括治疗心血管疾病、神经系统疾病、肿瘤等。
本实验将通过浸提、分离纯化和质谱鉴定等方法，提取并鉴定人参中的人参皂苷。
二、实验原理1、浸提法浸提法是将药材浸入某种合适的溶剂中，使药材中的有效成分与溶剂发生物理或化学变化，达到提取目的的一种分离方法。
2、硅胶柱层析法硅胶柱层析法是将样品溶液通过硅胶柱，利用在硅胶表面的物理吸附或化学吸附作用，将混杂在一起的化合物分离开的方法。
3、质谱鉴定质谱鉴定是一种能够确定样品化学结构和分子质量的分析技术。
常用的质谱仪有基质辅助激光解吸/电离质谱仪（MALDI-TOF MS）、毛细管电泳-电喷雾离子化质谱仪（CE-ESI-MS）、气相色谱-质谱联用仪（GC-MS）等。
三、实验步骤1、人参皂苷的浸提提取取50克粉碎后的人参，加入500 mL纯水，加热至60℃灌装入烧杯中，自然冷却至室温，用纱布过滤液体，重复浸提两次，将过滤液集合并浓缩至100 mL，抽取所有成分并将溶剂蒸干，得到人参的浸提液。
将人参浸提液溶于甲醇，用硅胶柱层析法进行分离。
在硅胶柱中注满硅胶，静置，再用甲醇将硅胶冲洗至洗液pH值小于7，并流至平衡，用稀甲酸使硅胶柱的pH值保持在4.5左右，注入30 ml的样品溶液后，按照乙醇-水（5:95）逐步更换溶剂进行洗提。
收集各部分2 mL溶液，检测其皂苷浓度。
将含有人参皂苷的溶液分别离子化并进入质谱仪，分别进行质谱分析，并比对和参考相关文献，确定人参皂苷的种类及分子质量。
四、实验结果浸提液得率为12.5%，色深浅不一，澄清程度良好。
利用硅胶柱进行层析分离，得到了包含人参皂苷的溶液。
收集了各部分的溶液，并测定了其皂苷浓度，得到各部分的含人参皂苷浓度、总皂苷脂含量和分离效果。
人参皂苷提取,纯化实验总结
以下是人参皂苷提取和纯化实验的总结：实验目的：本实验旨在提取和纯化人参皂苷，评估提取和纯化方法的有效性和效率。
实验步骤：1.人参饮片研磨：将人参饮片研磨成细粉末，增加其表面积，有利于提取。
2.提取溶剂选择：根据文献和先前研究的经验，选择适合的提取溶剂。
常用的溶剂包括水、乙醇和乙醚。
3.提取过程：将人参粉末与选择的溶剂进行浸泡或回流提取。
通过搅拌、温度控制和提取时间的调整，使人参皂苷溶解到溶剂中。
4.过滤和浓缩：将提取液过滤以去除悬浮物和杂质。
然后使用适当的浓缩技术（如真空浓缩或冷冻干燥）将提取液浓缩，得到浓缩的人参皂苷提取物。
5.纯化方法选择：根据实验要求和目标，选择合适的纯化方法。
常用的方法包括凝胶柱层析、高效液相色谱（HPLC）和溶剂萃取等。
6.纯化过程：根据选择的纯化方法进行操作，将提取物中的杂质和其他成分分离，得到纯化的人参皂苷。
7.纯化产物分析：使用适当的分析技术（如质谱、紫外-可见光谱、高效液相色谱等）对纯化产物进行分析和定量，以确保其纯度和含量。
实验结果与总结：根据实验结果，成功提取和纯化了人参皂苷。
通过测定纯化产物的含量和纯度，可以评估提取和纯化方法的有效性和效率。
此外，对提取过程中的各个步骤进行优化和调整，可以进一步改进提取和纯化的效果。
总结来说，人参皂苷提取和纯化的实验是一个复杂的过程，需要选择合适的溶剂、调整提取条件，并根据实验目标选择合适的纯化方法。
通过实验，可以得到纯度较高的人参皂苷提取物，为进一步的研究和应用提供了基础。
然而，对于特定的提取和纯化过程，仍需要根据具体情况进行调整和改进，以提高纯化产物的纯度和产量。
人参皂苷实验报告
一、实验目的本研究旨在通过实验方法提取人参皂苷，并对其活性进行初步探究，以期为人参皂苷的应用提供科学依据。
二、实验材料与仪器1. 实验材料：（1）人参：新鲜五加科植物人参根，产地吉林。
（2）试剂：甲醇、氯仿、氢氧化钠、盐酸、蒸馏水等。
（3）仪器：超声波清洗器、旋转蒸发仪、高效液相色谱仪、紫外分光光度计、分析天平等。
2. 实验方法：（1）人参皂苷的提取：将人参根洗净、切片，用甲醇超声提取，提取液经旋转蒸发仪浓缩，得到人参皂苷粗提物。
（2）人参皂苷的鉴定：采用高效液相色谱法对人参皂苷进行鉴定。
（3）人参皂苷的活性研究：①抗氧化活性：采用DPPH自由基清除法检测人参皂苷的抗氧化活性。
②抗炎活性：采用小鼠耳肿胀法检测人参皂苷的抗炎活性。
③抗肿瘤活性：采用MTT法检测人参皂苷的抗肿瘤活性。
三、实验结果与分析1. 人参皂苷的提取通过超声波辅助提取法，从人参根中成功提取出人参皂苷粗提物。
经过旋转蒸发仪浓缩，得到人参皂苷的纯度较高。
2. 人参皂苷的鉴定采用高效液相色谱法对人参皂苷进行鉴定，结果显示，提取物中主要含有人参皂苷Rg1、Rb1、Rd、Rc等单体皂苷。
3. 人参皂苷的活性研究（1）抗氧化活性：采用DPPH自由基清除法检测人参皂苷的抗氧化活性，结果显示，人参皂苷具有显著的自由基清除作用，IC50值为（0.6±0.1）mg/mL。
（2）抗炎活性：采用小鼠耳肿胀法检测人参皂苷的抗炎活性，结果显示，人参皂苷具有显著的抗炎作用，耳肿胀抑制率为（75.3±2.5）%。
（3）抗肿瘤活性：采用MTT法检测人参皂苷的抗肿瘤活性，结果显示，人参皂苷对肝癌细胞HepG2和肺癌细胞A549具有显著的抑制作用，IC50值分别为（10.5±0.8）μg/mL和（15.2±1.0）μg/mL。
四、结论1. 本研究采用超声波辅助提取法成功从人参根中提取出人参皂苷，并对其进行了鉴定。
2. 人参皂苷具有显著的抗氧化、抗炎和抗肿瘤活性，为人参皂苷的应用提供了科学依据。
人参皂苷Re的分离提纯
人参皂苷一.人参皂苷的背景及药理作用人参是一味被广泛用于养身治病的传统中药,与貂皮、鹿茸并称为中国东北三宝。
而人参皂苷又是人参的主要有效成分,其药理作用表现多样。
人参皂苷虽然在人参的药理作用上起了关键性的作用，但其含量很少,只约占4 %。
根据皂苷元的不同,人参皂苷被分为原人参二醇类皂苷、原人参三醇类皂苷及齐墩果酸类皂苷。
现在我们对于单个人参皂苷的药理作用研究已非常深入, 像其在神经系统、小肠传送功能、内分泌系统、免疫系统、信号传导、抗衰老、溶血、烧伤创面愈合、抗肿瘤增效、人的精子活力、药物代谢酶、降血糖方面的影响机理都有相关的新研究成果，人参皂苷Re也已被证实具有抑制中枢神经，促进DNA、RNA合成，促进血清蛋白质合成，促进蛋白质分解酵素活性化，促进刺激副肾皮质荷尔蒙分泌等作用。
人参皂苷作为人参的主要有效成分之一,其药效作用表现的多样性在一定程度上揭开了人参具有奇特功效的神秘面纱。
作为皂苷类成分,其口服直接经肠道吸收是比较差的,大多需要经肠道菌群代谢后,其代谢产物才能被较好地吸收入体内。
从这一点来讲,人参皂苷的药效作用与肠菌代谢的关系是密不可分的,因此,今后需进一步加强人参皂苷肠菌代谢这一关键上游环节的研究,这对于进一步认识人参皂苷起效的物质基础及体内过程是相当重要的,而且有利于判断体外实验结果的价值。
但是,对于人参皂苷在成分及剂量上的配伍研究还显得较为薄弱,这需要在今后的研究中予以加强。
再者,人参皂苷具有典型的双向调节作用,如何通过控制相关条件及合理的配伍来达到治疗目的也是今后值得研究的一个方面。
二．人参皂苷的分离提取人参皂苷在人参中的含量很低，在人参的各个组织器官中的含量都有所不同，这无形中又增加了我们对人参皂苷的分离提取的难度。
在实际生产中，我们一方面要保证皂苷的产率，另一方面又要保证它的生物活性。
下面我就以人参皂苷Re的提取为例，通过硅胶柱层析技术从人参叶三醇皂苷中分离制备较纯人参皂苷Re，采用重结晶技术将分离后较纯Re精制并通过HPLC检测其纯度：（一）材料人参皂苷标准品Re、Rg ，精致人参叶三醇皂苷，薄层层析板Silica Gel 6O—F254，AB-8大孔吸附树脂，硅胶G。
人参皂苷的提取与分离 汇报材料
人参皂苷的提取与分离学生姓名专业班级学院摘要首先认识人参和人参皂苷，了解人参皂苷的详细作用和功效，接着研究了人参茎叶总皂苷含量提取方法，用详细的工艺提取人参皂苷，并且用对显色反应和薄层层析对提取物进行鉴定，为以后的人参茎叶的开发利用奠定基础。
关键词：皂苷；人参茎叶；鉴定。
Abstract.The first ginseng and ginseng saponin, understanding the role and efficacy of ginseng saponin in detail, then study the effect of ginseng stem leaf total saponin extraction method, with the detailed process ofextraction of ginseng saponin, and used for color reaction and thin-layer chromatography to extract were identified, for the future of ginseng stem and leaf development lays a foundation.key words: saponin; ginseng stems and leaves; appraisal;目录摘要 (1)Abstract ............................................... 错误!未定义书签。
1绪论 (3)1.1 ................................................................ 人参概述错误!未定义书签。
1.2 ......................................................... 人参的化学成分11.2.1人参皂苷 (1)1.2.2 人参蛋白 (1)1.2.3 人参多糖 (1)1.2.4 无机元素 (2)1.2.5 其他成分 (2)1.3 .............................................. 人参的生理功能及药理活性21.3.1增强免疫功能 (2)1.3.2抗衰老 (2)1.3.3抗肿瘤 (3)1.3.4增强学习和记忆能力 (3)1.3.5保护心血管系统 (3)2实验部分 (5)2.1 ............................................................... 实验材料52.2人参皂苷的提取分离 (5)2.2.1人参皂苷的提取分离原理 (5)2.2.2人参皂苷提取和苷元分离工艺流程 (5)2.3 .......................................................... 人参皂苷的检识72.3.1显色反应 (7)2.3.2薄层层析 (7)3讨论 (9)4结论 (10)参考文献 (11)1 绪论1.1 人参概述人参系五加科植物人参(Panax ginseng C．A．Mey．)的干燥根，人类对人参的利用在《神农本草经》中已有记载，据今已有2000多年的历史，但人们偏向于对人参根的利用，而对人参茎叶的开发从近几年才开始。
实验五 人参皂甙的提取及甙元的分离鉴定
实验五 人参皂甙的提取及甙元的分离鉴定人参为五加科（Araliaceae ）人参属植物人参（Panax gin-seng C.A.Meyer ）的干燥根，为我国特产名贵中药。
具有大补元气、补脾益肺、固脱生津、安神益智的功效。
主治虚咳喘促、食少倦怠、惊悸健忘、久虚不复等症，疗效显著。
有关人参化学成分的研究已有很多报道，近年来取得了较大进展。
日本学者Shibata 等从人参根中分离出10多种皂甙，命名为人参甙皂（gensenoside ）R 。
Ra,2120321,,,,,,,,,g g f ghcu f e d c b b b R R R R R R R R R R --和h R 等，并测定了这些皂甙得化学结构。
近年来对人参地上部分也进行了研究，叶、花、总皂甙中除了含有皂甙类成分外，还有黄酮类成分，主要为山奈酚（Kampferol ）、三叶甙（Trifelin ）和人参黄酮甙（Pana-senoside ）药量及生化实验证明，人参皂甙有人参相同的药理作用，目前认为人参皂甙是人参中主要有效成分。
人参中除含有多种人参皂甙外，还含有少量挥发油、脂肪油、胆碱、β谷甾醇、多种氨基酸和多种维生素等。
人参皂甙的皂甙元有三种，即原人参二醇（Protopanaxaiol ）、原人参三醇（Protoanaxtriol ）及齐墩果酸（Oieanolicacid ）。
前两种皂甙元在水解过程中侧链环合，故水解后实际得到的是人参二醇（Panaxdiol ）及人参三醇（Panaxtriol ）。
一、目的要求①通过实验掌握人参皂甙的提取、精制方法，进一步巩固和熟悉人参皂甙的性质。
②熟悉和掌握人参皂甙的水解条件和方法。
③熟悉和掌握柱层析分离人参皂甙元的原理方法及基本操作技术。
二、人参中已知主要成分的理化性质人参皂甙：多数为白色无定形粉末或无色针状结晶，味微甘苦，具有较强引湿性。
易溶于水、甲醇、乙醇；可溶于正定醇和乙酸乙脂，不溶于乙醚、苯中。
人参中人参皂苷的提取、分离和测定
人参中人参皂苷的提取、分离和测定一、本文概述二、人参皂苷的提取方法人参皂苷的提取是从人参原材料中分离和纯化目标化合物的重要步骤。
提取方法的选择直接影响皂苷的得率和纯度。
常用的提取方法包括溶剂提取法、微波辅助提取法、超声波辅助提取法以及超临界流体提取法等。
溶剂提取法：这是最常见且相对简单的方法，主要利用人参皂苷在不同溶剂中的溶解度差异进行提取。
常用的溶剂包括甲醇、乙醇、丙酮等。
通过浸泡、回流或渗漉等方式，使人参皂苷从原材料中溶解到溶剂中，再通过蒸发溶剂得到粗提物。
微波辅助提取法：微波提取是利用微波对溶剂和原材料的加热作用，提高提取效率和速度。
微波产生的热能可以使细胞壁破裂，加速溶剂对人参皂苷的渗透和溶解，从而缩短提取时间。
超声波辅助提取法：超声波提取是通过超声波产生的空化效应、机械效应和热效应等作用，增加溶剂对原材料的穿透力，提高人参皂苷的提取率。
同时，超声波还可以破坏细胞结构，使皂苷更容易释放到溶剂中。
超临界流体提取法：超临界流体提取是利用超临界状态下的流体（如二氧化碳）作为溶剂，通过调节压力和温度来控制流体的溶解能力，从而实现对人参皂苷的高效提取。
这种方法具有提取效率高、操作温度低、对原料破坏小等优点。
在实际应用中，可以根据人参原材料的性质、目标皂苷的特点以及实验条件等因素，选择最合适的提取方法。
为了提高提取效果，还可以结合使用多种提取方法，如先用溶剂提取法得到粗提物，再用超声波或微波辅助提取法进行进一步的纯化。
三、人参皂苷的分离技术人参皂苷的分离是提取过程后的关键步骤，其主要目标是从复杂的混合物中分离出单一或特定类型的人参皂苷。
这通常涉及到一系列的色谱技术，包括液-液分配色谱、固相萃取、柱色谱、薄层色谱以及高效液相色谱（HPLC）等。
液-液分配色谱，也称为液-液萃取，是基于不同物质在两种不相溶溶剂中的溶解度差异进行分离的。
这种方法对于初步分离人参皂苷和其他杂质非常有效。
固相萃取是一种基于吸附和解吸原理的分离技术。
HSCCC法分离制备人参果中人参皂苷Re_孙成贺
酯-正丁醇-水 ( 1B6B7) 为最佳溶剂系统。详见表 1。
表1
H SCCC 溶剂系统筛选
溶剂系统
固定相保留率 分配系数
(% )
( k)
氯仿-甲醇-正丁醇-水 ( 5B6B1B4)
101 5
01 22
氯仿-甲醇-正丁醇-水 ( 6B6B2B4)
261 7
01 34
氯仿-甲醇-正丁醇-水 ( 6B6B3B4)
参考 文献
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பைடு நூலகம்
厂 ) ; 大型旋转蒸发仪 ( 德国 H e idolph); 小型旋转蒸 发仪 ( 瑞士 BUCH I) ; 抽 滤装置; 薄 层观察 分析仪
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天然药物化学教研室
1
要求提取分离人参皂苷Re；
一、实验目的
2
掌握大孔树脂法提取人参皂苷的操作程序；
3
学习薄层层析在皂苷检识中的应用。
二、实验原理
果汁中含脂溶性杂质，用乙醚脱脂后，利于水溶 性皂苷在树脂上的吸附，籍此提取皂苷，且利用Re 溶于热乙醇，在冷乙醇溶解度小的特点析出 Re，与 其它成分分离。Biblioteka 四、鉴定1．泡沫实验
2．显色反应
3．薄层层析
取果汁1~2ml于试 管内，激烈振摇， 如产生多量蜂窝状 泡沫，放置10分钟 以上，泡沫不明显 减少，示有皂苷成 分。
LiebermannBurchard反应： 取果汁1ml，加等 量乙酸酐，滴加1 滴浓硫酸,变成紫红 色。
1)展开剂：1°氯仿：甲醇：乙酸 乙酯：水（2：2：4：1，下层） 2°氯仿：甲醇：水（65：35： 10，下层） 2)显色剂：5%硫酸乙醇溶液 （110℃以上加热5分钟）显红色、 紫红色斑点 。
2．人参皂苷Re的制备
取4/5量的乙醇提取物
少量展开剂2°溶解； 上样于硅胶H（40g）柱 展开剂1洗脱，每30ml为一流份收集
Fr3 ……
Fr1
Fr2
Fr13
TLC检测，合并Re单一斑点的流份 回收洗脱液至小体积（约20—30ml） 放置、析晶 Re粗晶B 95%乙醇重结晶 Re纯品C
注：①树脂柱用前需经无水乙醇处理； ②可用α—萘酚糖反应检测，实际中可目测，至 水洗液颜色变浅至清即可； ③洗脱时，自紫色带即将流出时，开始收集洗脱 液。收集1200~1500ml ④需半周时间； ⑤可用回流装置中脱色半小时。
五、思考题
1
1. 层析结果如何？ 若想进一步得到 Re纯品应怎样程 序处理？
2
2. 根据皂苷性质、 自行设计一种自人 参根中提取总苷及 皂苷单体分离的方 案。
三、实验方法
1．人参果汁总皂苷的提取
人参果肉50g
150ml水温浸（70℃，1hr），抽滤
滤液1 果肉 100ml水温浸（70℃，30′），抽滤 滤液2 果肉
合并，通过大孔吸附树脂D4020柱① ； 水洗至无糖反应② ； 90%乙醇（800~1000ml）洗脱③ 。 乙醇洗脱液
回收乙醇
乙醇提取物（人参粗总苷A）